ABO血型基因分型及应用_兰炯采
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作者简介: 兰炯采, 男, 56 岁, 研究员, 博士生 导师, 从事临床 输血、血 型研究; 孟庆宝, 男, 32 岁, 临床输血硕士研究生。
原减弱, 1 例法医亲子鉴定。从中国生物医学期刊 数据查得有关 ABO 亚型的个例报告, 向作者函索标 本, 血清学表型分别报道为 Bx、AB2 、A2 B。 112 试剂与方法 11211 EDTA 抗凝的外周血 DNA 提取采用快速盐 析法[ 1] , 羊水 DNA 用经 典的酚- 氯 仿法提 取。DNA 终浓度调节至 100~ 300 ngPLl。 11212 ABO 基 因分 型采 用美国 G&T 公 司的 试剂 盒, 内对照为扩增人类生长激素( Human Growth Hormone, HGH) 基因的引物对, 扩增产物为 429 bp。引 物设 计及 组成 ( Mix ) 参 考 Akane 等 报告 并适 当改 进[ 2] 。引物混合物( Mix ) 的组成、最佳反应浓度、产 物片段和检 测基因 见表 1。PCR 产物 以琼脂 糖电 泳, 紫外透射仪下判定结果。
表 2 ABO 血型基因分布
Tab. 2 Distribution of ABO genotypes in Han population
Geno typing
O 1PO1 A 1PO1 A 2PO1 A 1PA2 A 1PA1 A 2PA2 A2PB A1PB
BPB BPO1 T otal
Observ ation
2 结果
211 ABO 血型及亚型基因分型结果判断: 核酸标准 品 Marker 为 100 bp Landder, 每管含 429 bp 内对照。 Mix- 1 至 Mix- 7 用于检测 ABO 基因型, 相应基因型样
兰炯采等 ABO 血型基因分型及应用 第 6 期
# 431 #
表 1 引物混合物的组成、最佳反应浓度及 PCR 产物片段大小
胞不凝集。基因分型及家系调查: 患者及其母亲均 为 BPO1 型。术中给病人输 3 个单位配合的 B 型红 细胞, 未见输血反应。
例 2: 男, 62 岁, 有 30 余年左肾结石史, 就诊前 一日出现无诱 因的头晕伴左侧肢体发 抖和高血压
( 180P100 mmHg) , 意识不清, 呕吐, 入南方医院治疗, 门诊血压为 72P32 mmHg。入院后诊断 为慢性肾功 能不全、尿毒症、代谢性酸中毒、上消化道出血和肺
( Protortion) 33( 01317 3) 11( 01105 8) 7( 01 067 3) 3( 01 028 8) 4( 01 038 5) 3( 01 028 8) 4( 01 038 5) 10( 01096 2) 8( 01 079 6) 21( 01201 9) 104( 11000 0)
例 3: 女, 47 岁, 诊断为尿素症, 欲施肾移植, 术 前申请血型鉴定和配血。正定型: 患者红细胞与抗 血清反应为抗- A( 4+ ) , 抗-A1( 4+ ) , 抗- B( - ) , 抗- D ( 4+ ) , 定 A1 型和 RhD( + ) , 反定型: 患者血清与试 剂红细胞反应, Alc( 3+ ) , Bc( 4+ ) , Oc( 2+ ) , 与自身 红细胞无反应性。血型不能确定。用抗体筛选细胞
Product ( bp)
1 790 253 252 586 1 298 587 614 530 532 223
Test mut ation
G261deletion( A262) G802A G803C C467 G261、G526 G467T( A0102 and A0201) delet io( A 0201) G447 G447A G757A
Βιβλιοθήκη Baidu
Gene specificity
O1 O2 B O1, O2 , A 1, B A1 , A 2 A2 , A1 2) A2 Se Se Se
Sense primer
Ant-i sense primer
No. Concentrat ion, LmolPL No. Concent ration( LmolPL)
Expectat ion
( Protort ion) 26150( 01 254 8) 16115( 01 155 3) 10110( 01 097 1) 3108( 01 029 6) 2146( 01 023 7) 0197( 01 009 3) 4191( 01 047 2) 7184( 01 075 4) 6125( 01 060 1) 25175( 01 247 6) 1041 01( 11000 1)
并用 ABO 基因分型技术解决临床输血 前血型鉴定、产前胎儿血 型鉴定、亲权试验 及血清学 亚型的 正确性验 证。结论: ABO 血
型基因分型技术可以正确判定 ABO 血 型疑难样本。
关键词 ABO 血型 聚合酶链反应- 序列特异性引物( PCR- SSP) 基因分型
Genotyping of ABO blood group and its application
LAN Jiong-Cai , MENG Qing-Bao , ZHANG Yin-Ze et al . Nanf ang Hospital , First Military University , Guangzhou 510515
Abstract Objective: To study on significance of ABO genotyping . Methods:To use the methods of polymerase chain reaction- sequence specific primers( PCR- SSP) for genotyping of ABO blood group and observation ABO gene polymorphism as well as identification of doubt sample. Results: The reliability of the genotyping for ABO blood group was proved by testing DNA samples previously known genotypes.The results of genotyping for 104 healthy and unrelated HAN individuals were correspond with serological phenotypes.T he method of ABO genotyping was applied for clinical pre- transfusion ABO typing, pre- delivery fetal ABO typing, parenting test and subgrouptyping. Conclusion: The method of ABO genotyping may correct typing for doubt sample of ABO serolog ical typing.
摘 要 目的: 研究 ABO 血 型基因 分型的 意义。方法: 采 用聚合 酶链反 应- 序列特 异性引物 ( PCR-SSP) 基因定型 方法 对
ABO 血型基因定型并观察其基因多态性分布特征和 疑难血型 检定。结 果: 对 已知 ABO 基因 的 DNA 标 本进行 基因定 型, 证 实
文中的 ABO 基因定型方法可靠; 对 104 例健康、无血源关系的汉族个体 ABO 血型基因定型, 结果 与血清学所定表型完全符合;
本在该管 PCR 产物中出现相应 bp 的特异性片段。 212 用本文的方法对 7 份已知血型基因型的标本 定型获得准确结果 基因型分虽为: A1PA1 2 份, A 1P O1 1 份, A1PA2 1 份, A1PB 1 份, BPO1 1 份, A 1PO21 份。 213 104 例非亲属个体的外周血标本进行 ABO 血 型及其亚型基因定型, 同时用血清学卡式定型技术 ( DiaMed Typing System) 鉴定表型。基因型与表型一 致率 100% ( 血 清学只鉴定 A、B、AB、O 4 种 表型) 。 104 份血标本的 ABO 血型及其亚型定型结果 见表 2。 214 ABO 基因定型的应用 21411 ABO 基因定型在疑难血型鉴定中的应用 例 1: 女, 10 岁, 因双 侧臀 肌挛缩 入院 手术。术 前 ABO 血型血清 学方法正、反定型不符。正定型: 患 者红细胞加抗-A 不凝集, 加抗- B 后镜下见数个红细 胞凝集; 反定型: 患者血清与 B 型和 O 型试剂红细
1 材料与方法
111 标本 104 例随机非亲属汉族个体, 其中男 55 人, 女 49 人, 年龄 18~ 48 岁, 7 份已知 ABO 基因型 的 DNA 由 NIH 提供, 基因型分别为: A1PA1 2 份, A 1P O1 1 份 A1PA2 1 份, A1 B 1 份, BPO11 份, A1PO2 1 份。疑 难血型鉴定 例, 其中: 3 例 血清学技术 正反定型 不 符, 1 例产前胎儿血型鉴定, 2 例白血病化疗引起抗
Tab. 1 Primer mix composition, optimum reaction concentration, PCR products( bp) and testing mutation gene
Primer mixture
Mix- 1 Mix- 2 Mix- 3 Mix- 4 Mix- 5 Mix- 6 Mix- 7 Mix- 8 Mix- 9 M ix-10
部感染, 贫血( Hb 70 gPL) 。临床血液透析并申请输 血。患者 ABO 血型正反定型结果不符。正定型: 患 者红细胞与抗- A 反应呈 4+ , 与 抗- B 反应呈阴 性, 定为 A 型。患者红细胞经 3 次洗 涤后, 结果同 前。反定型: 病人血清与 A1 试剂红细胞反应呈 1+ ~ 2+ , 与 B 试剂细胞反应呈 4+ 。患者红细胞加抗 - A1, 无反应性。抗体筛选阴性。RhD 阴性。表型 定为 A2 型。基 因定型 为 A2 O1 。选相 合的血 液输 注, 无反应。
Key words ABO blood group Polymerase chain reaction- sequecific primer( PCR- SSP) Genotyping
ABO 血型是目前最具临床意义的血型系统, 常 规采用血清学技术定型, 发现一些疑难标本不易准 确判定血型, 产前胎儿血型检定因取血样困难或胎 儿红细胞抗原发育不成熟而受限制, 亲权鉴定时因 只能确定表型而不能确定其基因型使一些表型相同 而基因型不合遗传规律的案例不能排除。为此, 我 们采用了 ABO 血型基因分析技术并试用于临床, 现 将结果报道如下。
V2 11594 3 11642 3 01951 5
01582 9
01595 1 01490 0 01875 2 61732 3
Not e: V 2 = 6. 732 3, P > 01 25( when observation< 5, V 2 was calculated together v= 5) . Gene frequency, A1= 0. 015 38, A2= 0. 962, B= 0. 245 2, O1= 0. 504 8, O 2= nt .
# 430 #
#实用临床免疫学#
中国免疫学杂志 2002 年第 18 卷
ABO 血型基因分型及应用
兰炯采 孟庆宝 张印则 周华发 王从容 曹 琼 ( 第一军医大学南方医院输血科, 广州 510515) 刘 忠 ( 合肥血液中心, 合肥 230022)
中国图书分类号 R45711+
文献标识码 A 文章编号 1000-484X( 2002) 06- 0430-04
469#
11 4
474#
114
470#
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474#
114
484#
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01 7
474#
017
479#
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724#
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634#
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原减弱, 1 例法医亲子鉴定。从中国生物医学期刊 数据查得有关 ABO 亚型的个例报告, 向作者函索标 本, 血清学表型分别报道为 Bx、AB2 、A2 B。 112 试剂与方法 11211 EDTA 抗凝的外周血 DNA 提取采用快速盐 析法[ 1] , 羊水 DNA 用经 典的酚- 氯 仿法提 取。DNA 终浓度调节至 100~ 300 ngPLl。 11212 ABO 基 因分 型采 用美国 G&T 公 司的 试剂 盒, 内对照为扩增人类生长激素( Human Growth Hormone, HGH) 基因的引物对, 扩增产物为 429 bp。引 物设 计及 组成 ( Mix ) 参 考 Akane 等 报告 并适 当改 进[ 2] 。引物混合物( Mix ) 的组成、最佳反应浓度、产 物片段和检 测基因 见表 1。PCR 产物 以琼脂 糖电 泳, 紫外透射仪下判定结果。
表 2 ABO 血型基因分布
Tab. 2 Distribution of ABO genotypes in Han population
Geno typing
O 1PO1 A 1PO1 A 2PO1 A 1PA2 A 1PA1 A 2PA2 A2PB A1PB
BPB BPO1 T otal
Observ ation
2 结果
211 ABO 血型及亚型基因分型结果判断: 核酸标准 品 Marker 为 100 bp Landder, 每管含 429 bp 内对照。 Mix- 1 至 Mix- 7 用于检测 ABO 基因型, 相应基因型样
兰炯采等 ABO 血型基因分型及应用 第 6 期
# 431 #
表 1 引物混合物的组成、最佳反应浓度及 PCR 产物片段大小
胞不凝集。基因分型及家系调查: 患者及其母亲均 为 BPO1 型。术中给病人输 3 个单位配合的 B 型红 细胞, 未见输血反应。
例 2: 男, 62 岁, 有 30 余年左肾结石史, 就诊前 一日出现无诱 因的头晕伴左侧肢体发 抖和高血压
( 180P100 mmHg) , 意识不清, 呕吐, 入南方医院治疗, 门诊血压为 72P32 mmHg。入院后诊断 为慢性肾功 能不全、尿毒症、代谢性酸中毒、上消化道出血和肺
( Protortion) 33( 01317 3) 11( 01105 8) 7( 01 067 3) 3( 01 028 8) 4( 01 038 5) 3( 01 028 8) 4( 01 038 5) 10( 01096 2) 8( 01 079 6) 21( 01201 9) 104( 11000 0)
例 3: 女, 47 岁, 诊断为尿素症, 欲施肾移植, 术 前申请血型鉴定和配血。正定型: 患者红细胞与抗 血清反应为抗- A( 4+ ) , 抗-A1( 4+ ) , 抗- B( - ) , 抗- D ( 4+ ) , 定 A1 型和 RhD( + ) , 反定型: 患者血清与试 剂红细胞反应, Alc( 3+ ) , Bc( 4+ ) , Oc( 2+ ) , 与自身 红细胞无反应性。血型不能确定。用抗体筛选细胞
Product ( bp)
1 790 253 252 586 1 298 587 614 530 532 223
Test mut ation
G261deletion( A262) G802A G803C C467 G261、G526 G467T( A0102 and A0201) delet io( A 0201) G447 G447A G757A
Βιβλιοθήκη Baidu
Gene specificity
O1 O2 B O1, O2 , A 1, B A1 , A 2 A2 , A1 2) A2 Se Se Se
Sense primer
Ant-i sense primer
No. Concentrat ion, LmolPL No. Concent ration( LmolPL)
Expectat ion
( Protort ion) 26150( 01 254 8) 16115( 01 155 3) 10110( 01 097 1) 3108( 01 029 6) 2146( 01 023 7) 0197( 01 009 3) 4191( 01 047 2) 7184( 01 075 4) 6125( 01 060 1) 25175( 01 247 6) 1041 01( 11000 1)
并用 ABO 基因分型技术解决临床输血 前血型鉴定、产前胎儿血 型鉴定、亲权试验 及血清学 亚型的 正确性验 证。结论: ABO 血
型基因分型技术可以正确判定 ABO 血 型疑难样本。
关键词 ABO 血型 聚合酶链反应- 序列特异性引物( PCR- SSP) 基因分型
Genotyping of ABO blood group and its application
LAN Jiong-Cai , MENG Qing-Bao , ZHANG Yin-Ze et al . Nanf ang Hospital , First Military University , Guangzhou 510515
Abstract Objective: To study on significance of ABO genotyping . Methods:To use the methods of polymerase chain reaction- sequence specific primers( PCR- SSP) for genotyping of ABO blood group and observation ABO gene polymorphism as well as identification of doubt sample. Results: The reliability of the genotyping for ABO blood group was proved by testing DNA samples previously known genotypes.The results of genotyping for 104 healthy and unrelated HAN individuals were correspond with serological phenotypes.T he method of ABO genotyping was applied for clinical pre- transfusion ABO typing, pre- delivery fetal ABO typing, parenting test and subgrouptyping. Conclusion: The method of ABO genotyping may correct typing for doubt sample of ABO serolog ical typing.
摘 要 目的: 研究 ABO 血 型基因 分型的 意义。方法: 采 用聚合 酶链反 应- 序列特 异性引物 ( PCR-SSP) 基因定型 方法 对
ABO 血型基因定型并观察其基因多态性分布特征和 疑难血型 检定。结 果: 对 已知 ABO 基因 的 DNA 标 本进行 基因定 型, 证 实
文中的 ABO 基因定型方法可靠; 对 104 例健康、无血源关系的汉族个体 ABO 血型基因定型, 结果 与血清学所定表型完全符合;
本在该管 PCR 产物中出现相应 bp 的特异性片段。 212 用本文的方法对 7 份已知血型基因型的标本 定型获得准确结果 基因型分虽为: A1PA1 2 份, A 1P O1 1 份, A1PA2 1 份, A1PB 1 份, BPO1 1 份, A 1PO21 份。 213 104 例非亲属个体的外周血标本进行 ABO 血 型及其亚型基因定型, 同时用血清学卡式定型技术 ( DiaMed Typing System) 鉴定表型。基因型与表型一 致率 100% ( 血 清学只鉴定 A、B、AB、O 4 种 表型) 。 104 份血标本的 ABO 血型及其亚型定型结果 见表 2。 214 ABO 基因定型的应用 21411 ABO 基因定型在疑难血型鉴定中的应用 例 1: 女, 10 岁, 因双 侧臀 肌挛缩 入院 手术。术 前 ABO 血型血清 学方法正、反定型不符。正定型: 患 者红细胞加抗-A 不凝集, 加抗- B 后镜下见数个红细 胞凝集; 反定型: 患者血清与 B 型和 O 型试剂红细
1 材料与方法
111 标本 104 例随机非亲属汉族个体, 其中男 55 人, 女 49 人, 年龄 18~ 48 岁, 7 份已知 ABO 基因型 的 DNA 由 NIH 提供, 基因型分别为: A1PA1 2 份, A 1P O1 1 份 A1PA2 1 份, A1 B 1 份, BPO11 份, A1PO2 1 份。疑 难血型鉴定 例, 其中: 3 例 血清学技术 正反定型 不 符, 1 例产前胎儿血型鉴定, 2 例白血病化疗引起抗
Tab. 1 Primer mix composition, optimum reaction concentration, PCR products( bp) and testing mutation gene
Primer mixture
Mix- 1 Mix- 2 Mix- 3 Mix- 4 Mix- 5 Mix- 6 Mix- 7 Mix- 8 Mix- 9 M ix-10
部感染, 贫血( Hb 70 gPL) 。临床血液透析并申请输 血。患者 ABO 血型正反定型结果不符。正定型: 患 者红细胞与抗- A 反应呈 4+ , 与 抗- B 反应呈阴 性, 定为 A 型。患者红细胞经 3 次洗 涤后, 结果同 前。反定型: 病人血清与 A1 试剂红细胞反应呈 1+ ~ 2+ , 与 B 试剂细胞反应呈 4+ 。患者红细胞加抗 - A1, 无反应性。抗体筛选阴性。RhD 阴性。表型 定为 A2 型。基 因定型 为 A2 O1 。选相 合的血 液输 注, 无反应。
Key words ABO blood group Polymerase chain reaction- sequecific primer( PCR- SSP) Genotyping
ABO 血型是目前最具临床意义的血型系统, 常 规采用血清学技术定型, 发现一些疑难标本不易准 确判定血型, 产前胎儿血型检定因取血样困难或胎 儿红细胞抗原发育不成熟而受限制, 亲权鉴定时因 只能确定表型而不能确定其基因型使一些表型相同 而基因型不合遗传规律的案例不能排除。为此, 我 们采用了 ABO 血型基因分析技术并试用于临床, 现 将结果报道如下。
V2 11594 3 11642 3 01951 5
01582 9
01595 1 01490 0 01875 2 61732 3
Not e: V 2 = 6. 732 3, P > 01 25( when observation< 5, V 2 was calculated together v= 5) . Gene frequency, A1= 0. 015 38, A2= 0. 962, B= 0. 245 2, O1= 0. 504 8, O 2= nt .
# 430 #
#实用临床免疫学#
中国免疫学杂志 2002 年第 18 卷
ABO 血型基因分型及应用
兰炯采 孟庆宝 张印则 周华发 王从容 曹 琼 ( 第一军医大学南方医院输血科, 广州 510515) 刘 忠 ( 合肥血液中心, 合肥 230022)
中国图书分类号 R45711+
文献标识码 A 文章编号 1000-484X( 2002) 06- 0430-04
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