(2)蛋白质含量的测定意义
蛋白质的鉴定原理
蛋白质的鉴定原理蛋白质的鉴定原理可以通过多种方法进行，其中包括物理方法、化学方法和生物学方法。
下面将详细介绍蛋白质鉴定的各种方法及其原理。
1. 物理方法：物理方法主要是通过蛋白质的物理特性进行鉴定。
包括分子量的测定、蛋白质的电泳、质谱等方法。
(1) 分子量的测定：分子量是蛋白质的一个重要特性，可以通过凝胶过滤、凝胶电泳、超高速离心等方法来测定。
其中，凝胶电泳是一种常用的分析方法，通过将蛋白质样品加入聚丙烯酰胺凝胶中，经过电泳后蛋白质在凝胶上的迁移距离与分子量呈正相关，可根据分子量标准曲线来确定待测蛋白质的分子量。
(2) 蛋白质的电泳：电泳是通过蛋白质在电场中的迁移来进行分离和鉴定的方法。
主要有聚丙烯酰胺凝胶电泳、聚丙烯酰胺SDS凝胶电泳以及等电点电泳等。
其中，SDS-PAGE是最为常用的蛋白质电泳方法，它通过在样品中加入吸附剂SDS 来赋予蛋白质带电性，使得蛋白质在电场中按照大小分子量移动，从而实现分离和鉴定。
(3) 质谱法：质谱法是利用蛋白质的质量-电荷比进行分析的方法。
常用的质谱方法有飞行时间质谱、质量分析检测和质谱成像等。
质谱法可以测定分子量、氨基酸序列、修饰位点等信息，是蛋白质结构鉴定的重要手段。
2. 化学方法：化学方法主要是通过蛋白质的化学性质进行鉴定。
包括氨基酸分析、肽链测序等方法。
(1) 氨基酸分析：氨基酸分析是确定蛋白质的氨基酸组成和含量的方法。
常用的方法包括离子交换色谱、氨基酸自动分析仪等。
通过将蛋白质样品水解，分离出各种氨基酸，再经过定量分析得到各个氨基酸的含量，从而鉴定蛋白质的氨基酸组成。
(2) 肽链测序：肽链测序是通过逐步水解肽链中的氨基酸，利用一系列化学反应和质谱分析方法来确定蛋白质的氨基酸序列。
常用的方法包括肽质谱法、域内肽定位法等。
通过测定每个氨基酸的位置和序列，可以确定蛋白质的完整序列，从而进行鉴定。
3. 生物学方法：生物学方法主要是通过蛋白质的生物学特性进行鉴定。
蛋白质测定的临床意义
蛋白质测定的临床意义蛋白质是构成人体细胞的基本结构成分之一，它在机体内发挥着多种重要功能，包括维持细胞结构稳定、参与代谢过程、调节生理功能、传递信号以及免疫防御等。
因此，蛋白质的测定对于临床诊断和治疗具有重要的意义。
首先，蛋白质测定可以帮助医生了解患者的营养状况。
蛋白质是组织和器官构建的重要成分，它不仅提供能量，还供给身体的合成修复过程中所需的氨基酸。
正常情况下，人体通常能够从摄入的食物中获得足够的蛋白质来满足需求。
然而，当营养不良或消化吸收障碍时，蛋白质的摄入和利用可能会受到影响，从而导致蛋白质缺乏。
通过测定患者的血浆或尿液中的蛋白质水平，医生可以评估患者的蛋白质供应情况，帮助判断患者是否存在营养不良的情况并采取相应的治疗措施。
其次，蛋白质测定还可用于评估肾功能。
肾脏是体内重要的排泄器官，通过滤过、重吸收和排泄的过程来维持体内的水盐平衡和酸碱平衡。
肾小球滤过膜能够对蛋白质进行选择性过滤，正常情况下只有极少量的蛋白质溢出至尿液中。
然而，在肾小球滤过膜受损或肾小管功能紊乱时，蛋白质的滤过和重吸收过程可能受到影响，导致尿液中的蛋白质排出量增加。
通过测定尿液中的蛋白质含量，可以帮助医生评估肾脏功能的损伤程度，并及时采取相应的治疗措施。
此外，蛋白质测定还可以用于诊断和监测某些疾病。
许多疾病在发生和发展过程中都会导致蛋白质代谢的异常，从而引起血浆或尿液中蛋白质水平的改变。
例如，骨髓瘤等恶性血液肿瘤常伴随高浓度的单克隆免疫球蛋白的产生，肝脏疾病可导致血浆中白蛋白的合成减少，炎症和感染可导致血浆中C反应蛋白和纤维蛋白原等炎症标志物的升高。
通过测定这些蛋白质的水平，可以帮助医生对这些疾病进行早期诊断、评估疾病的严重程度以及监测治疗效果。
最后，蛋白质测定还可用于判断营养支持治疗的有效性。
在某些疾病或手术后，患者可能会出现不良的营养状态。
此时，通过适当的营养支持治疗可以帮助改善患者的营养状况，并提高康复效果。
蛋白质代谢的测定可以帮助医生评估营养支持治疗的效果，例如测定血浆中白蛋白、前白蛋白或深度肌肉蛋白的水平等，通过比较治疗前后的差异，可以评估患者的营养状态是否有所改善。
基础生物化学习题及答案
《基础生物化学》习题练习（一）蛋白质一、填空1．蛋白质具有的生物学功能是 、 、 、 、、 、 和 等。
2．蛋白质的平均含氮量为 ，这是蛋白质元素组成的重要特点。
3．某一食品的含氮量为1.97%，该食品的蛋白质含量为 %。
4．组成蛋白质的氨基酸有 种，它们的结构通式为 ，结构上彼此不同的部分是 。
5．当氨基酸处于等电点时，它以 离子形式存在，这时它的溶解度 ，当pH>pI 时，氨基酸以 离子形式存在。
6．丙氨酸的等电点为6.02，它在pH8的溶液中带 电荷，在电场中向极移动。
7．赖氨酸的pk 1(-COOH)为2.18，pk 2(3H N +-)为8.95，pk R (εH N +-)为10.53，其等电点应是 。
8．天冬氨酸的pk 1(-COOH)为2.09，pk 2(3H N +-)为9.82，pk R (β-COOH)为3.86，其等电点应是 。
9．桑格反应（Sanger ）所用的试剂是 ，艾德曼（Edman ）反应所用的试剂是 。
10．谷胱甘肽是由 个氨基酸组成的 肽，它含有 个肽键。
它的活性基团是 。
11．脯氨酸是 氨基酸，与茚三酮反应生成 色产物。
12．具有紫外吸收能力的氨基酸有 、 和 。
一般最大光吸收在 nm 波长处。
13．组成蛋白质的20种氨基酸中，含硫的氨基酸有 和 两种。
能形成二硫键的氨基酸是 ，由于它含有 基团。
14．凯氏定氮法测定蛋白质含量时，蛋白质的含量应等于测得的氨素含量乘以 。
二、是非1．天氨氨基酸都具有一个不对称性的α-碳原子。
（ ）2．蛋白质分子中因含有酪氨酸，色氨酸和苯丙氨酸，所以在260nm 处有最大吸收峰。
（ ）3．自然界中的氨基酸都能组成蛋白质。
（ ）4．蛋白质在280nm 处有紫外吸收是因为其中含有—SH —的氨基酸所致。
（ ）三、名词解释1．氨在酸的等电点2．蛋白质的一级结构四、写出结构式及三字母符号1．色氨酸2．半胱氨酸3．谷氨酰胺4．天冬氨酸5．组氨酸五、问答题1．什么是肽键？肽的书写与方向是什么？2．为什么可以利用紫外吸收法来测定蛋白质含量？3．计算半胱氨酸、酪氨酸、谷氨酸、精氨酸和组氨酸的等电点分别是多少？在pH7的溶液中各带何种电荷？在电场中向哪个方向移动？练习（二）蛋白质一、填空1．蛋白质的二级结构主要有、和三种形式。
实验二 可溶性蛋白质含量的测定(考马斯亮蓝G-250法)
表-1 配制0～100µg/ml血清白蛋白液
管 号 100µg/ml牛血清蛋白量(ml) 蒸馏水量(ml) 蛋白质含量(mg) 1 0 1.0 0 2 0.2 0.8 0.02 3 0.4 0.6 0.04 4 0.6 0.4 0.06 5 0.8 0.2 0.08 6 1.0 0 0.10
实验步骤
实验步骤
2.样品提取液中蛋白质浓度的测定
取植物叶片0.1-0.2剪碎，用磷酸缓冲液研磨，倒入 10ml 离心管中，定容到10 ml，10000 pm离心， 20min 得上清液作为待测样品。 取0.5 ml提取液于试管中，加入0.5ml蒸馏水后摇匀， 再加上3 ml考马斯亮兰试剂并充分摇匀，在30摄氏度 水浴 20min ，于595nm处测得OD值。
实验二 植物组织中可溶性蛋白的测定
实验目的
植物体内的可溶性蛋白质大多数是参与各种代谢的酶类， 植物体内的可溶性蛋白质大多数是参与各种代谢的酶类， 测其含量是了解植物体总代谢的一个重要指标。 测其含量是了解植物体总代谢的一个重要指标。在研究每 一种酶的作用时，常以比活（酶活力单位／ 蛋白 蛋白） 一种酶的作用时，常以比活（酶活力单位／mg蛋白）表 示酶活力大小及酶制剂纯度。因此， 示酶活力大小及酶制剂纯度。因此，测定植物体内可溶性 蛋白质是研究酶活的一个重要项目。 蛋白质是研究酶活的一个重要项目。
实验原理
考马斯亮蓝G-250测定蛋白质含量属于染料结合法的 一种。考马斯亮蓝G-250在游离态下呈红色，当它与 蛋白质的疏水区结合后变为青色，前者最大光吸收在 465nm，后者在595nm。在一定蛋白质浓度范围内 （0～100µg/ml），蛋白质与色素结合物在595nm波 长下的光吸收与蛋白质含量成正比，故可用于蛋白质 的定量测定。 蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内 达到平衡，完成反应十分迅速，其结合物在室温下1h 内保持稳定。该反应非常灵敏，可测微克级蛋白质含 量，所以是一种比较好的蛋白质定量法。
蛋白质含量测定方法的研究_2
实验一蛋白质含量测定方法的研究一、研究背景蛋白质是生物的重要组成部分，在人类发现蛋白质后一直没有停下过研究得脚步。
在实验室提取蛋白质的过程中，目标蛋白质的来源是广泛的，而不同的样品中目标蛋白质的含量是不同的，为了得到更多的目标蛋白，就需要了解样品中蛋白质的含量。
在实际的生活中也需要运用蛋白质含量的测定，例如牛奶、奶粉中蛋白质含量。
记得前几年轰动一时三聚氰胺事件，国家的标准蛋白质检测方法被不法分子所利用，通过蛋白质检测方法的缺陷来谋取暴利。
目前常用的蛋白质检测方法有五种：凯式定氮法、Folin-酚法、考马斯亮蓝法、紫外法、双缩脲法。
不同的方法有不同的优缺点。
二、研究目标通过四种不同的蛋白质测定方法了解各种方法的优缺点。
在不同的条件下，能选择正确的测定方法，从而获得正确的数据。
三、研究策略根据资料可以知道四种方法的局限性，针对这一个单一的变量设计五组实验。
一个是标准对照组，其他四组分别在标准组的基础上引入一种变量。
用四种方法分别测定五种溶液。
在对同一种溶液的测定结果中，必有一种方法的结果和其他的结果有显著差异，同时与标准液的结果也有显著的差异。
我们就认为这组溶液中的变量对于该蛋白质测定的方法影响较大。
四、研究方案及可行性分析研究方案：1、配置一组浓度梯度的标准液，分别用四种方法测定，并建立标准曲线。
2、配置五种等浓度的样品蛋白质溶液并编号ABCDE。
在配置过程中，A组加10毫升蒸馏水；B组加10毫升嘌呤溶液；C组加入10毫升EDTA溶液；D组加入10毫升双氧水溶液；E组加入10毫升盐酸溶液。
3、分别用四种方法测定五种蛋白质溶液。
4、分析结果可行性分析：更具已有资料设计了四个单一的变量，分别针对四种实验的缺点，同时保证没有其他的变量。
预期结果：在每组实验的结果中分别有一个数据是在横向和纵向上都有显著差异的。
我们可以确定这个变量对该实验有很大的影响。
五、具体实验设计1.建立标准曲线紫外法a.仪器：紫外分光光度仪、移液管、试管和试管架试剂：标准牛血清蛋白溶液b.280nm下测其光密度值。
蛋白质含量的测定方法及原理
蛋白质含量的测定方法及原理一、紫外吸收法。
紫外吸收法是一种常用的蛋白质含量测定方法，其原理是根据蛋白质在280nm波长处的特征吸收峰来进行测定。
在实验中，首先将待测样品溶解于适量的缓冲液中，然后使用紫外可见分光光度计测定样品在280nm处的吸光值，通过标准曲线的对照，可以计算出样品中蛋白质的含量。
二、比色法。
比色法是另一种常用的蛋白质含量测定方法，其原理是利用蛋白质与某些特定试剂发生化学反应后产生显色物质，通过测定显色物质的吸光值来计算样品中蛋白质的含量。
常用的试剂包括布拉德福试剂、伯杰试剂等，不同试剂适用于不同类型的蛋白质测定。
三、BCA法。
BCA法是一种基于铜离子与蛋白质中的蛋白质酰基发生还原反应的测定方法。
其原理是将待测样品与BCA试剂混合后在60℃条件下反应，然后使用分光光度计测定产生的显色物质的吸光值，通过标准曲线计算出样品中蛋白质的含量。
四、Lowry法。
Lowry法是一种以菁蓝G与蛋白质发生化学反应产生显色物质的测定方法。
其原理是将待测样品与碱液、菁蓝G和还原剂混合后在室温下反应，然后使用分光光度计测定产生的显色物质的吸光值，通过标准曲线计算出样品中蛋白质的含量。
五、总蛋白法。
总蛋白法是一种直接测定样品中总蛋白含量的方法，其原理是将待测样品与总蛋白试剂混合后在室温下反应，然后使用分光光度计测定产生的显色物质的吸光值，通过标准曲线计算出样品中蛋白质的含量。
总结，蛋白质含量的测定方法及原理有多种，每种方法都有其适用的样品类型和测定条件，研究人员可以根据自己的实验需要选择合适的方法进行蛋白质含量的测定工作。
希望本文所介绍的内容能为相关领域的研究工作提供一定的参考价值。
nanoorange检测蛋白质含量原理
nanoorange检测蛋白质含量原理一、引言蛋白质是生命体系中最重要的基础性物质之一，其在细胞代谢、结构、功能等方面都发挥着重要作用。
因此，准确测定蛋白质含量对于生命科学研究和临床诊断都具有重要意义。
nanoorange检测蛋白质含量是一种高灵敏度、高精确度的方法，本文将详细介绍其原理。
二、nanoorange检测蛋白质含量原理1. 背景介绍nanoorange是一种新型的荧光染料，其分子结构为双氧环己基羧酸酯（DOC）。
这种染料与蛋白质结合后会发生荧光增强效应，从而可以用于检测蛋白质含量。
2. 原理介绍nanoorange检测蛋白质含量的原理基于荧光增强效应。
当DOC与蛋白质结合时，DOC分子中的苯环靠近了蛋白质分子中的芳香族氨基酸残基（如色氨酸和酪氨酸），从而使荧光强度增加。
这种荧光增强效应与蛋白质的含量成正比，因此可以通过测量荧光强度来确定蛋白质的含量。
3. 操作步骤（1）制备标准曲线：首先需要制备一系列已知浓度的蛋白质标准溶液，然后将这些溶液加入DOC染料中，使其与DOC结合。
接着，使用荧光分光光度计测定每个标准溶液的荧光强度，并绘制出荧光强度与蛋白质浓度之间的标准曲线。
（2）检测待测样品：将待测样品加入DOC染料中，使其与DOC结合。
然后使用荧光分光光度计测定样品的荧光强度，并根据标准曲线计算出样品中蛋白质的含量。
三、优缺点分析1. 优点（1）高灵敏度：nanoorange检测蛋白质含量的灵敏度很高，可以检测到极低浓度的蛋白质。
（2）高精确度：该方法具有较高的精确性和重复性，可以得到准确的结果。
（3）简便易行：操作简单，不需要复杂的仪器和试剂。
2. 缺点（1）受样品影响：样品中其他成分可能会对荧光强度产生干扰，从而影响蛋白质含量的测定。
（2）有选择性：该方法只能检测具有芳香族氨基酸残基（如色氨酸和酪氨酸）的蛋白质。
四、应用领域nanoorange检测蛋白质含量广泛应用于生命科学研究和临床诊断中。
蛋白质含量的测定实验报告
蛋白质含量的测定实验报告一、实验目的。
本实验旨在通过测定食品中蛋白质含量的方法，掌握蛋白质含量的测定原理和操作技能，为食品质量的检验提供科学依据。
二、实验原理。
蛋白质含量的测定方法有多种，本实验采用的是经典的凯氏试剂法。
该方法是利用碱性铜溶液与蛋白质中的蛋白质结合成紫色沉淀，通过比色计算出蛋白质含量。
三、实验仪器和试剂。
1. 仪器，量筒、烧杯、比色皿、分析天平等。
2. 试剂，凯氏试剂、蛋白质标准品、硫酸铜溶液、碱液等。
四、实验步骤。
1. 样品制备，将待测样品称取适量，加入适量的硫酸铜溶液，摇匀后放置一段时间。
2. 沉淀分离，将沉淀转移到预先称量的滤纸上，用水洗涤至无碱性铜试剂残留。
3. 沉淀溶解，将沉淀与少量硫酸铜溶液混合，加入碱液溶解。
4. 比色计算，用比色皿盛放试液，通过比色计算出蛋白质含量。
五、实验结果。
通过实验测得样品的蛋白质含量为XXg/100g。
六、实验分析。
根据实验结果，可以初步判断样品的蛋白质含量符合标准要求。
但需要注意的是，蛋白质含量的测定结果受到多种因素的影响，如样品制备不均匀、操作不规范等，因此在实际应用中还需要结合其他分析方法进行综合判断。
七、实验结论。
本实验通过凯氏试剂法测定了样品的蛋白质含量，结果表明样品的蛋白质含量符合标准要求。
但仍需注意实验操作的规范性，以确保结果的准确性和可靠性。
八、实验总结。
通过本次实验，我们掌握了蛋白质含量的测定方法和操作技能，提高了对食品质量检验的能力，为今后的实验和工作积累了经验。
以上就是本次蛋白质含量的测定实验报告，希望对大家有所帮助。
11级植物生理实验讲解内容
植物生理实验讲解内容实验一植物组织水势的测定（小液流法）1、原理（1）水分移动的总原则：从高水势到低水势。
当把植物组织分别放在一系列浓度递增的溶液中，水势越大，越易失水；水势越小，越易得水；因此，会出现三种情况：植物组织的水势v外液的水势，组织吸水，外液（a）浓度变大植物组织的水势〉外液的水势，组织失水，外液（b）浓度变小植物组织的水势=外液的水势，组织既吸水又失水，外液（c）水分保持动态平衡（2 ）据比重大小判断小液流的移动方向：为判断以上三种情况，把侵有组织的溶液进行着色，当把着色的a、b、c三种外液用针管以小液流法放回对应的原溶液中，也出现三种情况：当浓度变大的外液（a）放入原溶液中说明植物组织的水势v外液的水势当浓度变小的外液（b）放入原溶液中f,说明植物组织的水势〉外液的水势当水分保持动态平衡的外液（c）放入原溶液中~ （不动），说明植物组织的水势=外液的水势2、材料：毛果含笑叶；梧桐树叶；丁香花或牵牛花4、方法（选用CaCb溶液为外液）思考题1、试述小液流法测定植物组织水势的原理。
测定中应注意什么？（1）遵照两个原理：①水分移动的总原则一从高水势到低水势。
②根据比重大小判断小液流的移动方向。
（2）测定中应注意：①取材时尽量避开叶脉和伤口、部位要一致、要迅速（以免失水），材料要混匀；②母液要均匀，不能颠倒顺序；③放小液流时不能用力过大；④观察液流方向要细心等］。
2、某组实验出现了小液流法J f f J f的情况，请分析出现错误的可能原因。
最有可能出错的应是第四支试管。
出错的原因有以下可能：（1）在配制甲组试管溶液时，试管没有充分的摇匀；（2）在配制甲组浓度梯度溶液时，第四支试管溶液不准确，浓度过低；（3）用注射器在甲组试管中挤出小液滴时，用力过猛。
3、测定水势的方法有：小液流法；电导仪法；折射仪法。
实验二植物组织中游离氨基酸总量的测定——茚三酮显色法（1■原理氨基酸（蛋白质）的游离-NH3可与水合茚三酮反应，生成蓝紫色的化合物；在一定范围内，颜色的深浅与游离氨基的含量成正比，因此，可用分光光度法测定其含量。
脑脊液检查结果及临床意义
脑脊液检查结果及临床意义一、适应证和标本采集1．适应证①有脑脊膜刺激症状时可检查脑脊液协助诊断。
②疑有颅内出血时。
③有剧烈头痛、昏迷、抽搐或瘫痪等症状和体征而原因不明者。
④疑有脑膜白血病患者。
⑤中枢神经系统疾病进行椎管内给药治疗、手术前腰麻、造影等。
要严格掌握禁忌证、凡疑有颅内压升高者必须做眼底检查，如有明显视乳头水肿或有脑疝先兆者，禁忌穿刺。
凡病人处于休克、衰竭或濒危状态以及局部皮肤有炎症、颅后窝有占位性病变或伴有脑干症状者均禁忌穿刺。
2．标本采集脑脊液由临床医师进行腰椎穿刺采集，必要时可从小脑延脑池或侧脑室穿刺获得。
穿刺后应由医师用压力测定，正常人脑脊液压力卧位为0.78～1.76 kpa (80～180 mmH2O)，儿童为0.4～1.0 kpa (40～100 mmH2O)。
任何病变使脑组织体积或脑脊液量增加时，脑脊液压力均可升高。
待压力测定后将脑脊液分别收集于3个无菌试管中，第一管作细菌培养，第二管作化学分析和免疫学检查，第三管作一般性状及显微镜检查。
每管收集1～2毫升。
脑脊液标本必须立即送验及时检查，放置过外将影响检验结果，是细胞破坏、变性、或细胞包裹于纤维蛋白凝块中，导致细胞数降低、分类不准确等。
存放中的脑脊液葡萄糖会分解，使之含量降低；细菌自溶或残废可影响细菌检出率等。
二、检查内容1．一般性状检查（1）颜色：正常脑脊液是无色透明的液体。
在病理情况下，脑脊液可呈不同颜色改变。
①红色：常由于各种出血引起的，脑脊液中出现多量的红细胞，主要由于穿刺损伤出血、蛛网膜下腔或胺富强出血引起。
前者在留取三管标本时，第一管为血性，以后两管颜色逐渐变淡，红细胞计数结果也依次沽少，经离心后上清液呈无色透明。
当蛛网膜下腔或脑室出血时，三管呈无孔不入红色，离心后旧清液显淡红色或黄色。
红细胞在某些脑脊液中5 分钟后，即可出现皱缩现象，因此红细胞皱缩现象不能用以鉴别陈早性或新鲜出血。
②黄色：可因出血、梗阻、郁滞、黄疸等引起。
标准管法测定蛋白质含量
标准管法测定蛋白质含量
首先，准备样品。
样品的选择要代表性，需根据具体要求进行研磨或溶解处理，以保证后续测定的准确性。
接着，按照标准管法的要求，将样品进行酸水解或酶解处理，将蛋白质转化为氨基酸。
然后，利用氨基酸分析仪或其他适当的仪器，对氨基酸进行定量分析，得出样品中蛋白质的含量。
在进行标准管法测定蛋白质含量时，需要注意以下几点。
首先，操作人员需严
格按照操作规程进行操作，避免外界因素对实验结果的影响。
其次，仪器的选择和使用要符合标准要求，保证测定结果的准确性和可靠性。
此外，样品的处理和分析过程中，需注意实验条件的控制，避免温度、湿度等因素对实验结果造成影响。
最后，实验数据的处理和统计要准确可靠，确保结果的科学性和可信度。
总的来说，标准管法测定蛋白质含量是一种可靠、准确的方法，对于食品加工、医药研发等领域具有重要意义。
在实际操作中，操作人员需要严格按照标准要求进行操作，注意实验条件的控制，保证实验结果的准确性和可靠性。
希望本文的介绍能够对相关领域的研究人员有所帮助，促进相关工作的开展和发展。
血清蛋白含量实验报告
一、实验目的1. 了解血清蛋白的生理功能及临床意义；2. 掌握双缩脲试剂法测定血清蛋白含量的原理和方法；3. 学会使用分光光度计进行定量分析；4. 培养实验操作技能和数据分析能力。
二、实验原理血清蛋白是血液中的一种重要成分，主要包括白蛋白、球蛋白和纤维蛋白等。
白蛋白具有维持血浆渗透压、运输物质、调节pH等作用；球蛋白主要参与免疫反应；纤维蛋白则参与血液凝固过程。
双缩脲试剂法是一种常用的蛋白质定量方法，其原理是蛋白质分子中含有大量的肽键，在碱性条件下能与Cu2+发生双缩脲反应，生成紫红色络合物。
该络合物在特定波长（如540nm）下的吸光度与蛋白质含量成正比。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：血清样本、双缩脲试剂A液、双缩脲试剂B液、蒸馏水、分光光度计、移液器、试管等。
2. 实验仪器：分光光度计、恒温水浴锅、移液器、试管等。
四、实验方法1. 准备工作：将血清样本、双缩脲试剂A液、双缩脲试剂B液等实验材料准备好，将分光光度计预热至室温。
2. 标准曲线绘制：取不同浓度的蛋白质标准液，按照实验步骤进行测定，以蛋白质浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
3. 样品测定：取血清样本，按照实验步骤进行测定，根据标准曲线计算样品中蛋白质含量。
4. 数据处理：将实验数据进行分析，得出结论。
五、实验步骤1. 准备工作：将血清样本、双缩脲试剂A液、双缩脲试剂B液等实验材料准备好，将分光光度计预热至室温。
2. 标准曲线绘制：a. 取6支试管，分别加入不同浓度的蛋白质标准液，用蒸馏水定容至1ml；b. 每支试管加入1ml双缩脲试剂A液，混匀；c. 加入2ml双缩脲试剂B液，混匀；d. 在540nm波长下，用分光光度计测定吸光度；e. 以蛋白质浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
3. 样品测定：a. 取血清样本，按照上述步骤进行测定；b. 根据标准曲线计算样品中蛋白质含量。
4. 数据处理：将实验数据进行分析，得出结论。
蛋白质含量的测定
蛋白质含量测定法蛋白质含量测定法，是生物化学研究中最常用、最基本的分析方法之一。
目前常用的有四种古老的经典方法，即定氮法，双缩尿法（Biuret法）、Folin－酚试剂法（Lowry 法）和紫外吸收法。
另外还有一种近十年才普遍使用起来的新的测定法，即考马斯亮蓝法（Bradford法）。
其中Bradford法和Lowry法灵敏度最高，比紫外吸收法灵敏10～20倍，比Biuret法灵敏100倍以上。
定氮法虽然比较复杂，但较准确，往往以定氮法测定的蛋白质作为其他方法的标准蛋白质。
值得注意的是，这后四种方法并不能在任何条件下适用于任何形式的蛋白质，因为一种蛋白质溶液用这四种方法测定，有可能得出四种不同的结果。
每种测定法都不是完美无缺的，都有其优缺点。
在选择方法时应考虑：①实验对测定所要求的灵敏度和精确度；②蛋白质的性质；③溶液中存在的干扰物质；④测定所要花费的时间。
考马斯亮蓝法（Bradford法），由于其突出的优点，正得到越来越广泛的应用。
一、微量凯氏（Kjeldahl）定氮法样品与浓硫酸共热。
含氮有机物即分解产生氨（消化），氨又与硫酸作用，变成硫酸氨。
经强碱碱化使之分解放出氨，借蒸汽将氨蒸至酸液中，根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。
若以甘氨酸为例，其反应式如下：CH2COOH|+ 3H2SO4 →2CO2 + 3SO2 +4H2O +NH3 (1)NH21702NH3 + H2SO4→(NH4)2SO4(2)(NH4)2SO4 + 2NaOH →2H2O +Na2SO4 + 2NH3(3)反应（1）、(2)在凯氏瓶内完成，反应（3）在凯氏蒸馏装置中进行。
为了加速消化，可以加入CuSO4作催化剂，K2SO4以提高溶液的沸点。
收集氨可用硼酸溶液，滴定则用强酸。
实验和计算方法这里从略。
计算所得结果为样品总氮量，如欲求得样品中蛋白含量，应将总氮量减去非蛋白氮即得。
如欲进一步求得样品中蛋白质的含量，即用样品中蛋白氮乘以6．25即得。
蛋白质含量的测定方法及原理
蛋白质含量的测定方法及原理
1. 常用测定方法
（1）生物学试剂法：根据蛋白质与性质标志物比如二苯基胺（TCA）或三氯乙酸（TCA）反应，形成稳定的沉淀，然后用洗涤剂去除游离氨基酸，再用酸性和碱性溶液溶解沉淀，在280nm下用紫外光谱计测定。
（2）巴氏试剂法：利用相应的试剂在蛋白质中特异性反应，产生颜色变化和吸光度变化。
（3）比色法：根据TCA方法和小氨基酸测定法的原理，常用双位法、低丁二醛法和琼脂糖-蛋白质反应法测定蛋白质含量。
2. 测定原理
蛋白质测定方法基于蛋白质的一些化学或物理特性。
主要原理如下：
（1）巴氏试剂法：这种方法是通过确定蛋白质含量测定蛋白质含量的最常用的方式，它是根据蛋白质和优化试剂之间的识别反应而设计的。
传统的试剂处理方法包括用50%机载硝酸重铬酸钠或尿素钙反应试剂。
（2）生物素连锁酶循环放大：这种方法是一种全比色的方法，其基本原理是通
过单链DNA的末端标记生物素识别酶体系，所标记的DNA特意与多个基因探针组合，使样本分子在存在其基因的前提下连锁酶反应放大。
（3）薄层凝胶射流电泳：通过在多个独立的凝胶区域进行分离，同步并快速分析大量的样品，可以检测杂交DNA、RNA和蛋白质。
食品分析复习题
食品分析基础一、问答1．食品分析的任务(重要性)（1）评价食品的营养价值，指导合理营养（2）为开发食品新产品提供依据（3）维护人体健康，保护消费者利益（4）对生产、加工、贮藏、销售环节进行监控（5）保证和监督食品的质量2．食品分析的内容（1）食品营养成分分析（2）食品添加剂的分析（3）食品中有害成分和污染物的分析3.食品分析的化学方法有哪些？举例说明其测定原理化学方法：重量法，如食品中水分的测定、容量法，如酸碱滴定、比色法，如微量元素测定二、填空1．食品分析对水与乙醇的要求是蒸馏水或去离子水、95%乙醇。
2．食品品质决定三个因素即感官风味、营养素含量、有害成分含量。
4．数字0.0160的有效数字是 3 位，可表示为2-6.1 。
106．样品分为检验、原始样品和平均样品三种。
7．有机物破坏法有两大类即干法灰化法和湿法消化法。
8．湿法消化常用的酸是浓硫酸、浓硝酸、过氧化氢使有机物分解。
9．样品预处理的方法包括蒸馏法、层析分离法、溶剂提取法、透析法、有机物破坏法。
10.采样记录的填写包括生产日期、包装情况、采样地点、采样数量、检验项目、采样人、供样人、采样时间等。
11.食品分析一般步骤：样品的采集、样品的制备、样品的预处理、定量测定、结果计算四、名词解释精密度：指多次平行测定结果相互接近的程度。
准确度：指测定值与真实值的接近程度。
反映测定结果的可靠性。
食品分析：食品分析是研究和评定食品品质并保障食品安全的科学。
按照技术标准，对各类食品组成成分进行测定，从而判定食品质量。
空白试验：除不加样品外,采用完全相同的分析步骤进行平行操作。
用于排除试剂及检验方法对结果的影响。
采样：在食品和食品原料中抽取一定量的具有代表性的样品供分析用，叫做采样。
检样：从整批食品的各部分采取的少量样品称为检样。
原始样品：把许多份检样合在一起称为原始样品。
平均样品：原始样品经过缩分成为可供分析用的样品叫做平均样品。
食品水分的测定一、问答1.测定水分的意义（具体阐述）（1）影响到食品的感官性状（2）关系到食品的稳定性（3）关系到食品腐败变质（4）增加其它测定项目的可比性2.试述食品中水分的存在形式，干燥过程主要除去的是哪一类水？食品中水分存在形式：束缚水(结合水)；自由水(游离水)可分为三类：①不可移动水(滞化水)②毛细管水③自由流动水。
蛋白粉检测方法
蛋白粉检测方法摘要：一、蛋白粉检测方法概述二、蛋白粉检测的具体方法1.蛋白质含量检测2.氨基酸组成分析3.生物活性检测4.安全性能检测三、蛋白粉检测的实用意义四、总结正文：【一、蛋白粉检测方法概述】蛋白粉是一种常见的营养补充剂，含有丰富的蛋白质和其他营养成分。
随着蛋白粉市场的不断扩大，确保产品的质量和安全性显得尤为重要。
本文将介绍蛋白粉的检测方法，以帮助消费者和生产厂家了解蛋白粉的质量。
【二、蛋白粉检测的具体方法】1.蛋白质含量检测：蛋白质含量是评价蛋白粉质量的重要指标。
常用的检测方法有凯氏定氮法、酚试剂法等。
通过这些方法可以准确测定蛋白粉中蛋白质的含量，从而评价产品的营养价值。
2.氨基酸组成分析：氨基酸是蛋白质的基本组成单位，其组成和比例对蛋白质的营养价值和生物活性具有重要影响。
通过氨基酸分析仪等设备，可以对蛋白粉中的氨基酸组成进行精确分析，评价产品的品质。
3.生物活性检测：生物活性是评价蛋白粉功能性的关键指标。
常见的生物活性检测方法包括酶活性测定、抗氧化活性测定等。
这些方法可以反映蛋白粉对人体健康的影响程度。
4.安全性能检测：蛋白粉的安全性能检测主要包括重金属含量、农药残留、微生物污染等方面。
通过原子吸收光谱、气相色谱、高效液相色谱等仪器分析方法，可以检测蛋白粉中潜在的安全风险。
【三、蛋白粉检测的实用意义】蛋白粉检测有助于确保产品的质量和安全性，为消费者提供健康、有益的食品。
同时，通过对蛋白粉进行检测，可以促进生产厂家不断提高生产工艺，生产出更优质的产品。
此外，检测结果还可以为政策制定者提供依据，加强对蛋白粉市场的监管。
【四、总结】蛋白粉检测方法涵盖了蛋白质含量、氨基酸组成、生物活性和安全性能等方面。
通过对蛋白粉进行检测，可以全面评价产品的质量，为消费者、生产厂家和监管部门提供重要参考。
蛋白质含量测定——双缩脲试剂法 实验报告
生物化学实验报告姓名：学号：专业年级：组别：生物化学与分子生物学实验教学中心实验名称蛋白质含量测定—-双缩脲试剂法实验日期实验地点合作者指导老师评分教师签名批改日期一、实验目的1。
1。
掌握双缩脲测定血清总蛋白的基本原理、操作；1。
2。
掌握双缩脲试剂的配制；1.3.熟悉血清总蛋白的临床意义;1。
4。
了解双缩脲法测定血清总蛋白的特点和注意事项。
二、实验原理2.1.两分子尿素加热脱氨缩合成的双缩脲（H2N—OC—NH—CO-NH2）,因分子内含有两个邻接的肽键，在碱性溶液中可与Cu2+发生双缩脲反应，生成紫红色络合物。
2.2.蛋白质分子含有大量彼此相连的肽键(-CO-NH—），同样能在碱性条件下与Cu2+发生双缩脲反应，生成的紫红色络合物，且在540nm处的吸光度与蛋白质的含量在10～120g/L范围内有良好的线性关系。
三、材料与方法：3。
1.实验材料：3。
1.1.实验试剂：①小牛血清;②6。
0mol/LNaOH溶液；③双缩脲试剂:硫酸酮、酒石酸钾钠、碘化钾；④蛋白质标准液（70g/L)；⑤0.9％NaCl;⑥蒸馏水。
3.1。
2。
实验器材：①试管；②烧杯；③容量瓶；④加样枪；⑤刻度吸管；⑥玻璃棒;⑥1100分光光度计；⑦电子天平；⑧水浴锅。
3.2.实验步骤四、结果与讨论：4。
1。
实验现象:①选取三支洁净无损的试管，从左往右依次加入0。
9％氯化钠溶液、蛋白质标准液、相应的小牛血清各0。
5ml，分别命名为B试管、S试管和U试管,再分别向三支试管内测定次数1 2 3 平均吸光度加入4ml的双缩脲试剂，溶液均成蓝色透明状.②将三支试管放入37℃水浴锅中加热20min,取出后，B试管呈淡蓝色，S试管和U 试管均成浅紫色，且S试管的颜色比U试管的颜色深.（如图一）图一水浴后三支试管颜色图二分光计读数4.2。
实验数据S 0。
185 0.184 0.185 0.1847U 0。
152 0.151 0.152 0.1517结果计算：代入公式：血清总蛋白（g/L）=（Au/As)X蛋白质标准液浓度（g/L），得出结果：血清总蛋白=57。
蛋白质含量的测定意义
准确度和精密度？
4.6.2.2 常量凯氏定氮法
步骤： ①消化：同“微量法” ②蒸馏、吸收： 与微量法有哪些 的不同？
③滴定：用0.1000mol/L盐酸标准溶液，其余同“微量 法”。
④.计算：与微量法的不同？
4.6.3 分光光度法测定蛋白质含量
（GB 5009.5-2010第二法）
原理：试样与硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白 质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后在 PH=4.8的乙酸-乙酸钠缓冲溶液中，铵与乙酰丙酮 和甲醛反应生成黄色的化合物。在波长400nm处测 定吸光度，与标准系列比较定量，结果乘以蛋白质 系数，即为蛋白质含量。 氨氮标准溶液（1.0g/L）：精密称取经105 ℃干燥 的硫酸铵0.4720g，用水溶解并定容至100mL ,临用 时用水稀释至0.1g/L
4.6.7染料结合法
原理：在特定的条件下，蛋白质可与某些染料 定量的反应生成沉淀，用分光光度计测定沉淀 反应完全后剩余的染料量可计算出反应消耗的 染料量，进而求得样品中蛋白质的含量。
适用于牛乳、冰淇淋、乳酪、巧克力饮料等食 品。
4.6.8其他方法
凯氏自动定氮仪法 考马斯亮蓝染料比色法
（5）蒸馏完毕后，应先将冷凝管下端提离液面， 再蒸1min，将附着在尖端的吸收液完全洗入吸收 瓶内，再将吸收瓶移开，最后关闭电源，绝不能 先关闭电源，否则吸收液将发生倒吸。 （6）在每次测定前及两次测定之间，均要洗涤反 应管。（倒吸法，在吸收瓶中加入蒸馏水，其余 同测定时的做法，在蒸汽发生器中水剧烈沸腾后， 立即移开电炉，水即从吸收瓶中倒吸入反应管， 再倒吸入汽水分离管或蒸汽发生器中，打开夹子， 即可放出废水。）
福林—酚比色法
与蛋白质有关的检测项目：
蛋白质含量的测定方法
蛋白质含量的测定方法蛋白质是生命体内重要的营养成分，对于维持生命活动和机体健康起着重要作用。
因此，准确测定食品、药品、化妆品等样品中的蛋白质含量，对于产品质量的评定和控制具有重要意义。
本文将介绍几种常用的蛋白质含量测定方法，希望能为相关领域的科研工作者和生产从业者提供参考。
首先，常用的蛋白质含量测定方法之一是比色法。
比色法是通过蛋白质与某些试剂发生化学反应，生成有色产物，然后利用光度计测定产物的吸光度，从而计算出蛋白质的含量。
比色法操作简单，结果准确可靠，被广泛应用于食品、饲料、药品等领域的蛋白质含量测定中。
其次，还有一种常用的蛋白质含量测定方法是BCA法。
BCA法是利用蛋白质与BCA试剂在碱性条件下发生还原反应，生成紫色络合物，然后利用光度计测定络合物的吸光度，从而计算出蛋白质的含量。
与传统的比色法相比，BCA法对于样品中存在的干扰物质的耐受性更强，因此在实际应用中更加稳定可靠。
另外，还有一种常用的蛋白质含量测定方法是Lowry法。
Lowry法是通过蛋白质与碱性铜离子和费林试剂发生还原反应，生成蓝色络合物，然后利用光度计测定络合物的吸光度，从而计算出蛋白质的含量。
Lowry法对于蛋白质的灵敏度更高，因此在一些含量较低的样品中应用更为广泛。
除了上述介绍的几种常用的蛋白质含量测定方法外，还有一些其他的方法，如紫外吸收法、荧光法、氨基酸分析法等。
这些方法各有优缺点，适用于不同类型的样品和实验要求。
因此，在实际应用中，需要根据具体情况选择合适的方法进行蛋白质含量的测定。
总的来说，蛋白质含量的测定方法多种多样，每种方法都有其独特的优势和适用范围。
在选择测定方法时，需要充分考虑样品的特点、实验条件和仪器设备的情况，以确保获得准确可靠的结果。
希望本文所介绍的内容能够对相关领域的科研工作者和生产从业者有所帮助。
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2004/4安徽阜
阳劣质奶粉致 大头娃娃 171,13人死
头脸胖大，
四肢细短，体 重比出生时还 轻
205个奶粉品
46个不合格生 产厂家的55种 奶粉。分布8 个省，其中蛋 白质含量低于 5%的有31种 ，最少的仅为 0.37%，
(3)蛋白质的组成及性质
蛋白质是复杂的含氮有机化合物，分子量很大。 组成：20种氨基酸通过酰胺键以一定的方式结合
4.6. 食品中蛋白质含量的测定
4.6.1 概述 4.6.2 凯氏定氮法测定蛋白质含量 4.6.3 蛋白质的快速测定法 4.6.4 氨基酸总量的测定 教学目标：掌握食品中蛋白质和氨基酸态氮测定 的操作技能
4.6.1 概述
(1)蛋白质的生理功能 (2)蛋白质含量的测定意义
(3)蛋白质的组成及性质
化学元素：C、H、O 、N（P、S、Cu、Fe、I）；
官能基团：肽键、氨基酸残基、酸碱基团、芳香基 团 结论：含氮则是蛋白质区别其他有机化合物的主要 标志。
(4)蛋白质的测定方法
一类是利用蛋白质的共性，如含氮、肽键、折射率等
另一类是利用蛋白质中特定氨基酸残基、酸性或碱性 基团以及芳香基团等测定蛋白质含量。
F---蛋白质系数。
讨论：
1.蛋白质系数是如何计算出来的？蛋白质的测定 结 果为什么要乘以蛋白质系数？ 2.蛋白质的测定方法有哪些？国家标准是哪一种方 法？
3.为什么说用凯氏定氮法测出的是粗蛋白的含量？ 4.通过学习凯氏定氮法的原理，我们可知道操作分 为哪几个大的步骤？
5.实验中用到哪些试剂？作用是什么？
不同种类的食品的蛋白质系数有所不同。
不同产品的蛋白质系数(F)
玉米、鸡蛋、青豆等：6.25
花生：5.46
大米：5.95
大豆及制品：5.71
小麦：5.70
牛乳及制品：6.38
4.6.2 凯氏定氮法 GB 5009.5-2010
以乳粉为样品进行讲解和演示
是通过测出样品中的总含氮量再乘以相应的蛋白质 系数而求出蛋白质的含量的方法。
粗蛋白：新鲜食品中含氮化合物大都以蛋白质为主 体，由于样品中含有少量非蛋白质含氮化合物，如 核酸、生物碱、含氮类脂、卟啉以及含氮色素等非 蛋白质的含氮化合物，所以结果为粗蛋白含量。 凯氏定氮法：常量法、微量法及自动定氮仪法等。
一、凯氏定氮法的原理
样品与浓硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，来自加入硫酸铜的作用
①催化作用：加速有机物的氧化分解
C+2CuSO4→Cu2SO4+SO2↑+CO2↑ Cu2SO4 ＋ 2H2SO4 → 2CuSO4 ＋ 2H2O ＋ SO2↑
随反应不断进行，待有机物被消化完后，不再有 硫酸亚铜(褐色）生成，溶液呈现清澈的蓝绿色。 ②消化完全的指示：蓝绿色，澄清，透明； ③ 蒸馏时碱性反应的指示：变深蓝色或产生黑色 沉淀
二、适用范围： 适用于各类食品中蛋白质含量测定
三、仪器、试剂:
500mL凯氏烧瓶、凯氏定氮装臵
消化用：①浓硫酸 ②硫酸钾 ③硫酸铜
蒸馏用：④40%氢氧化钠溶液 吸收用：⑤4%硼酸 滴定用：⑥HCl标准溶液 ⑦0.1%甲基红、溴甲酚绿混合指示剂
4.6.2.1微量凯氏定氮法操作步骤
（2） 蒸馏
氢氧化钠的作用：使消化液呈碱性，加热蒸馏， 即可释放出氨气。
(NH4)2SO4 + 2NaOH → 2NH3↑ + Na2SO4 + 2H2O
（3）吸收
硼酸溶液：吸收氨气，形成强碱弱酸盐
2NH3 + 4H3BO3=(NH4)2B4O7+5H2O
（4）滴定
待吸收完全后，再用盐酸标准溶液滴定, 溶液由蓝绿色→灰红色
目前蛋白质测定最常用的方法是凯氏定氮法，通过测 总氮量来确定蛋白质含量。
(5)蛋白质系数
蛋白质系数：每份氮素相当于的蛋白质的份数。一 般蛋白质含氮为 16% ，所以 1 份氮素相当于 6.25 份蛋 白质。此数值（6.25）称为蛋白质系数，用F表示。
不同的蛋白质由于氨基酸的构成比例及方式不同， 含氮量不同。
(NH4)2B4O7+2HCl+5H2O=2NH4Cl+4H3BO3
（5）结果计算
(V V0 ) c 14 1000 W 100 F m
式中：W---蛋白质的质量分数，%；
c---盐酸标准溶液的浓度，mol/L；
V0---空白滴定消耗标准液量，mL； V---试剂滴定消耗标准液量，mL； m---样品质量，g； 14---氮的摩尔质量，g/mol；
二氧化硫使氮还原为氨，本身则被氧化为三氧化硫， 氨随之与硫酸作用生成硫酸铵留在酸性消化液中。
硫酸钾的作用：
提高溶液沸点而加快有机物的分解
K2SO4+H2SO4=2KHSO4
2KHSO4=K2SO4+H2O↑+SO3
硫酸钾加入量不能太大，否则消化体系温度过高， 引起已生成的铵盐发生热分解而造成损失。 除硫酸钾外也可加入硫酸钠，氯化钾等盐类来提高 沸点，但效果不如硫酸钾。
步骤：消化、蒸馏、吸收、滴定、结果处理。
（1）样品消化
2 NH2-(CH2)2-COOH +13H2SO4→(NH4)2 SO4+6CO2+12SO2+16H2O
浓硫酸的作用： 脱水作用—使有机物脱水并碳化为C、H、N 氧化作用—将有机物炭化后的碳氧化为二氧化碳，硫 酸则被还原成二氧化硫
2H2SO4＋C ＝2SO2＋2H2O＋CO2
(4)蛋白质的测定方法
(5)蛋白质系数
4.6.1 概 述
（1）蛋白质的生理功能 蛋白质是生命的物质基础 维持人体的酸碱平衡、水平衡 遗传信息的传递 物质的代谢及运转都与蛋白质有关。
(2)蛋白质含量的测定意义
人体重要的营养物质,食品的营养指标。 合理开发利用食品资源、优化食品配方、控制生产 过程 、提高和监督产品质量。
其中碳和氢被氧化为二氧化碳和水逸出，而样品中的 有机氮转化为氨与硫酸结合成硫酸铵。然后加碱蒸馏， 使氨蒸出，用硼酸吸收后再以标准盐酸或硫酸溶液滴 定，根据标准酸消耗量可计算出蛋白质的含量。
样品（2N）
H BO 3 H 2SO 4 催化剂 NaOH 2HCL (NH4 ) 2 SO 4 2NH3 3 （ NH 4 ) 2 B 4 O 7 结果处理 消化 蒸馏 吸收 滴定