Bcl-2

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EPO对大鼠急性脊髓损伤后pCREB及Bcl-2表达的影响的开题报告

EPO对大鼠急性脊髓损伤后pCREB及Bcl-2表达
的影响的开题报告
一、研究背景与意义：
急性脊髓损伤在全球范围内是一项公共卫生问题。

脊髓损伤会导致神经功能障碍、肌肉瘫痪或者失禁等症状，给病人带来极大的痛苦。

因此，探究治疗急性脊髓损伤的新方法有很高的临床应用价值。

目前，越来越多的研究表明，EPO具有对神经保护和组织修复的作用。

pCREB是cAMP反应元素结合蛋白的激酶反应元素，可以参与急性脊髓损伤后的神经细胞形成。

Bcl-2是促进生存和细胞凋亡抑制的关键蛋白。

因此，本研究旨在探究EPO对大鼠急性脊髓损伤后pCREB及Bcl-2表达的影响，阐明EPO对急性脊髓损伤后神经细胞生长与细胞存活的影响机制。

二、研究内容和方法：
1. 实验动物的制备：选取成年雄性SD大鼠60只，随机分为实验组和对照组，实验组注射EPO，对照组注射生理盐水。

2. 急性脊髓损伤的建立：麻醉大鼠，取出脊髓，用植物毒素导致急性脊髓损伤模型。

3. 表达测定：用免疫印迹法检测大鼠脊髓中pCREB与Bcl-2的表达水平。

4. 数据处理和统计分析：用SPSS 13.0对数据进行分析，采用t检验分析不同组之间的差异。

p<0.05为统计学意义。

三、预期结果及意义：
通过本次研究可以得到预期结果：EPO可以促进大鼠急性脊髓损伤后pCREB和Bcl-2的表达，对神经生长和细胞存活有保护作用。

结果将为研究急性脊髓损伤的治疗提供新的证据，并为EPO的临床应用提供理论依据。

Bcl-2与细胞凋亡

Bcl-2与细胞凋亡摘要Bcl-2基因是一原癌基因，能抑制细胞凋亡。

但近年研究发现，存在有Bcl-2敏感和不敏感的细胞凋亡现象。

Bcl-2抑制细胞调亡的机制目前仍然不清，大多认为与Bcl-2的细胞内抗氧化作用及抑制钙离子的跨膜运动有关。

最近，Reed提出Bcl-2具有离子通道蛋白和吸附/锚定蛋白的双重特性，并阐述了Bcl-2抑制细胞凋亡的某些机制。

关键词：Bcl-2；细胞凋亡自从1972年Kerr提出细胞凋亡（aoptosis）的概念至今，人们对细胞凋亡现象进行了广泛、深入的研究。

但是，凋亡的分子和生化机制迄今尚未彻底明了；而已形成的初步认识大多源于对Bcl-2基因家族的研究。

已知，调亡进程可分为三个时相：诱导期，效应期和降解期。

在诱导期，细胞接受各种信号从而引发各种不同的效应：进入效应期后，经过一些决定细胞命运（存活/死亡）的分子调控点，细胞进入不可逆的程序化死亡，这些调控分子包括一系列原癌基因和抑制癌基因的产生，其中Bcl-2家族起着决定性的作用；降解期则产生可见的凋亡现象[1]。

Bcl-2基因（即B细胞淋巴瘤/白血病-2基因）是一种原癌基因，它具有抑制凋亡的作用，并用近年来的一些研究已开始揭示这一作用的机制。

目前已经发现的Bcl-2蛋白家族按功能可分为两类，一类是象Bcl-2一样具有抑制凋亡作用，如哺乳动物的Bcl-X1、Bcl-W、Mcl-1、A1、线虫Ced-9、牛痘病毒E1B119kD等，而另一类具有促进凋亡作用，如Bax、Bcl-Xs、Bad、Bak、Bik/k、Bid和Harakiri[2]。

最初在血液淋巴细胞中发现Bcl-2能抑制细胞死亡，随后陆续在其它一些细胞中也发现Bcl-2的这种作用。

但近年来研究发现，除些之外尚存在Bcl-2不敏感的凋亡途径。

本文拟就凋亡与Bcl-2的关系及其研究进展作一综述。

1 Bcl-2敏感的凋亡途径Bcl-2可以抑制由多种细胞毒因素所引起的细胞死亡。

胃癌细胞凋亡相关基因

胃癌细胞凋亡基因西安国医肿瘤医院研究人员通过大量的研究分析发现，胃癌细胞凋亡是有相关基因控制的，目前发现的有以下三个基因：bcl-2基因、Bax和Fas/FasL。

下面来详细介绍：1.bcl-2基因bcl-2基因编码26kD的膜蛋白，是第一个被确认有抑制凋亡作用的基因。

bcl-2基因激活、过表达可抑制细胞凋亡，从而使细胞增殖和凋亡不平衡，而且会使具有遗传改变又得不到修复的细胞免于死亡而进入细胞循环，多种遗传成分改变可导致肿瘤的发生。

因此，bcl-2在肿瘤发生发展中起着重要的作用。

乳腺癌中，高表达的Bcl-2与乳腺癌细胞凋亡指数呈负相关，而且与有丝分裂指数呈正相关，提示在细胞增殖活跃期，Hcl-2阳性细胞凋亡减少，即Bcl-2过表达影响了细胞凋亡。

Nakamum检测了肠型胃癌、胃腺瘤、肠化生及非化生胃黏膜，发现在肠化生中Bcl-2蛋白表达量最高(77.1%)，胃腺瘤(37.5%)和肠型胃癌(10.8%)中较低。

因而认为，Bcl-2蛋白的过表达主要是在胃癌的早期阶段起作用，使转化细胞逃避凋亡，以进一步积累其他基因的异常。

Lauwers采用单克隆抗体124检测正常、伴有肠化生的萎缩性胃炎及异型增生胃黏膜，发现正常胃黏膜仅在胃小凹与腺体交接处增生的干细胞中有Bcl-2蛋白的微表达，而在肠化生黏膜的过增生区域及胃小凹表面分化不良的细胞中均可检测到Bcl-2，这些分化不良的细胞正是胃癌癌前病变的一个特征。

因此推测，胃黏膜受损后增生加快，导致一些分化不良的细胞出现，这些分化不良的细胞又因Bcl-2蛋白的过表达而逃避凋亡，呈现生长优势，细胞寿命延长，基因变异积累的机会增加，为进一步向恶性细胞转化提供了条件。

2.BaxBax是第一个被分离到的Bcl-2家族成员之一，与Bcl-2的同源区主要集中在BH1和BH2区。

Bax的功能与Bcl-2相对，可促进细胞的凋亡。

Bax与Bcl-2在体内的表达呈部位互补形式。

Bcl-2倾向于分布在生长细胞、增殖细胞，而Bax倾向于分布在终末分化细胞、退化细胞，在凋亡旺盛的细胞中表达更强。

诱导细胞凋亡的相关基因

诱导细胞凋亡的相关基因
1. P53基因：作为肿瘤抑制基因的重要代表之一，P53可以诱导细胞凋亡，并调节DNA修复、细胞周期和细胞老化等生物学过程。

2. BCL-2家族基因：BCL-2家族基因包括促凋亡成员和抑制凋亡成员，其中促凋亡成员如BAX、BAK等可促进细胞凋亡，抑制凋亡成员如BCL-2、BCL-XL等则可以抑制细胞凋亡。

3. CASPASE基因：CASPASE基因编码半胱氨酸蛋白酶，可以参与细胞凋亡的信号转导和执行阶段。

4. TNF家族基因：TNF家族基因包括TNF-α、FasL等，其编码的蛋白质可以引发细胞凋亡信号，因此常用于肿瘤治疗。

5. PI3K/Akt/mTOR信号通路基因：该信号通路在多种肿瘤中异常活化，与凋亡抵抗相关，因此相关基因可作为肿瘤治疗靶点。

Caspase和BCL-2两大家族介绍汇总最新+最全,总有一天会用到

Caspase和BCL-2两大家族介绍汇总|最新+最全，总有一天会用到原创2018-06-21 订阅号APExBIO看到“caspase”和“BCL-2”这两个词是不是觉得很眼熟？这两个家族的研究历史悠久，有的人即使不研究这个也或多或少听说过它们；有的人虽然不了解，但是知道它们跟凋亡相关。

这两大家族的成员有很多，搞不清楚的可以了解一下。

（一）Caspases家族Caspase，这是个缩写，英文全称是cysteine-dependent aspartate-specifc proteases，中文名称称为胱天蛋白酶或半胱天冬酶。

Caspases家族成员是一组存在于胞质溶胶中的半胱氨酸蛋白酶。

利用半胱氨酸（Cys）侧链切割含有天冬氨酸（Asp）的多肽底物，caspases可以选择性地对多种信号转导途径中的蛋白质进行高效切割。

Caspases调节多种生物过程，如程序性细胞死亡，炎症，细胞分化、增殖和运动。

启动者和效应者的激活Caspases的功能基于结构和功能，哺乳动物caspases可以分为三大类：（1）促凋亡caspases。

包括caspase-2，8，9，10，3，6，7。

它们以级联的方式切割一系列胞内蛋白，最终导致细胞凋亡。

它们被分为两派，启动者（initiators）和效应者（effectors）。

启动者参与细胞内在（caspase-9）或细胞外在（caspase -8和-10）凋亡途径。

效应者切割数百种细胞蛋白质。

然而，一些促凋亡caspases在诸如淋巴细胞增殖、细胞运动和组织入侵的过程中也具有非凋亡作用。

（2）促炎性caspases。

包括caspase-1，4，5，11，12，13。

在先天性免疫应答激活期间，促炎性caspases介导特异性细胞因子（cytokines）的成熟，但也可能参与一种称为pyroptosis（焦亡）的细胞死亡形式。

（3）角化细胞分化。

Caspase-14参与角化细胞的分化，但不会在炎症或细胞凋亡中发挥重要作用。

BCL-2原位杂交检测试剂盒说明书

BCL-2ISH Detection KitBCL-2原位杂交检测试剂盒使用说明书产品编号：MK1050保存：置４℃。

工作量：100张切片。

有效期：一年。

BCL-2是主要的抗凋亡基因。

本试剂盒采用针对人、大鼠、小鼠的BCL-2特异性的寡核苷酸探针，经地高辛标记。

由于采用多相寡核苷酸探针和高敏感标记技术，并配合使用敏感性加强型的原位检测方法，具有敏感性特别高，背景清晰，结果准确可靠的优点。

可以检测出常规福尔马林固定，石蜡包埋标本的BCL-2mRNA序列。

针对大鼠、小鼠BCL-2靶基因的mRNA序列为：（1）5’——GATGA AGTAC ATCCA TTATA AGCTG TCACA——3’；（2）5’——GCGCT CAGCC CTGTG CCACC TGTGG TCCAC——3’；（3）5’——GGGAG ATGTC ACCCC TGGTG GACAA CATCG——3’；大鼠、小鼠和人的序列仅3bp/90bp不同。

兔和人序列基本相同。

适用种属：人、大鼠、兔、小鼠组织。

试剂盒中内容1.胃蛋白酶（×10;Pepsin）2ml；2.预杂交液2ml；3.B cl-2寡核苷酸探针杂交液2ml；4.封闭液5ml;5.生物素化鼠抗地高辛5ml;6.SABC-POD5ml；7.生物素化过氧化物酶5ml。

`用户自备试剂：原位杂交专用盖玻片（博士德有售）；POLY-L-LYSINE；DEPC；20%甘油缓冲液（3%柠檬酸,2×SSC，0.5×SSC，0.2×SSC，原位杂交用PBS）一．培养细胞和冰冻切片准备工作：固定液：4%多聚甲醛/0.1M PBS（PH7.2-7.6）；1%多聚甲醛/0.1M PBS（PH7.2-7.6）3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸（C6H8O7·H2O）3g,PH2.0左右。

2×SSC——1000ml蒸馏水中加氯化钠17.6g，柠檬酸三钠（C6H5O7Na3·2H2O，分子量294）8.8g。

Bcl—2蛋白在调控细胞凋亡与自噬中的作用

Bcl—2蛋白在调控细胞凋亡与自噬中的作用标签：Bcl_2；细胞凋亡；自噬细胞凋亡与自噬均属于细胞死亡的形式。

程序性细胞死亡的细胞凋亡，主要依赖一系列蛋白水解，而细胞的残余部分最终被巨噬细胞清除。

自噬被称为Ⅱ型程序性细胞死亡，与凋亡方式不同的是不依附于蛋白的水解，而是以独特的自噬体的结构出现为其特征，此独特结构和其细胞内的成分最终将通过自身溶酶体系统而被消除。

两者紧密联系在哺乳动物发育，维持组织动态平衡中且起着核心作用，并与疾病的发生、发展密切相关。

通过对Bcl_2蛋白构象与功能的不断研究，意识到Bcl_2蛋白不仅具有抗凋亡的功能，也可通过与其他蛋白的相互作用介导细胞自噬，提示其有助于维持细胞的存活，而不单单是促进细胞死亡的双重作用。

新近研究发现，Bcl_2蛋白在脑缺血后的病理机制中起着关键性的作用，但其具体机理还有待进一步研究。

1Bcl_2蛋白及其定位1.1Bcl_2蛋白：是Bcl_2原癌基因的编码产生，是一个促进因素对细胞的存活，为膜整合蛋白，分子质量为26kDa，早期是在人类的滤泡样细胞淋巴瘤中t （14；18）染色易位的断裂点被克隆挖掘出来[1]。

主要定位在线粒体、部分内质网及核周膜，与膜的结合的功能堪为重要的。

在正常的细胞活化、成长过程中可有表达，Bcl_2蛋白可在成熟的组织中表达，并在逐步凋亡的细胞中呈低表达或不表达。

Bcl_2蛋白可存在于正常组织中，然后逐渐发现在免疫Bcl_2蛋白中的表达，也在人体多种形态的肿瘤组织内分泌系统以及神经系统中存在。

Bcl_2蛋白的分子构像变化多端，已知的Bcl_2家族蛋白结构中，其多肽链里含有多个Bcl_2同源保守的螺旋结构域（即：BH1、BH2、BH3、BH4），并且绝大部分含所有其中4个结构域；而促凋亡蛋白中基本上都含有促凋亡作用BH3结构域。

因Bcl_2蛋白处在细胞的不同部位，故其分子构象在不同的因素作用下可发生改变。

而Szegezdi[2]等研究表明Bcl_2对自噬的调节具有细胞器特异性，对自噬起负调节作用。

Caspase ,BCL-2蛋白家族与细胞凋亡调控机制

Caspase ,BCL-2蛋白家族与细胞凋亡调控机制【摘要】细胞凋亡是一种重要的细胞死亡方式，由多种分子调控。

Caspase 和BCL-2蛋白家族在细胞凋亡中起关键作用。

Caspase是主要的凋亡调控蛋白酶，参与凋亡信号传导和执行。

BCL-2蛋白家族调节细胞生存和死亡，其中一些成员促进凋亡，而另一些抑制凋亡。

Caspase与BCL-2蛋白家族之间存在复杂的相互作用，调控细胞凋亡的进行。

研究进展显示，细胞凋亡在各种疾病中起着重要作用，如癌症和神经退行性疾病。

Caspase ,BCL-2蛋白家族与细胞凋亡调控机制对于疾病治疗具有重要意义。

未来的研究应该注重解析这些调控机制，探索潜在的临床应用，为疾病治疗提供新的方向和策略。

【关键词】关键词：Caspase、BCL-2蛋白家族、细胞凋亡、调控机制、相互作用、研究进展、疾病、重要性、未来研究方向、临床应用。

1. 引言1.1 细胞凋亡的定义细胞凋亡是一种程序性死亡形式，是生物体内一种重要的生理现象。

在细胞凋亡中，受到内外部环境刺激的细胞会按照一定的信号传导途径，通过活化特定的蛋白酶（Caspase）而发生程序性死亡。

与坏死不同，凋亡是一种高度有序、规范的细胞死亡过程，其过程可精确调控，不会引起身体的炎症反应。

细胞凋亡在生物体内担负着维持组织稳定、清除异常细胞、调控身体发育和免疫应答等重要功能。

细胞凋亡的过程往往伴随着细胞内外环境的变化，如DNA损伤、细胞内信号分子的改变等。

在接收到适当信号后，细胞会通过内在或外在通路触发凋亡程序。

通过对细胞凋亡调控机制的研究，人们可以深入了解细胞生命活动的调控规律，为疾病的治疗和预防提供新的思路。

细胞凋亡的定义不仅仅是细胞死亡的一种形式，更为我们揭示了生命活动中一种重要的规律和机制。

1.2 Caspase的作用Caspases是一类半胱氨酸蛋白酶，在细胞凋亡中扮演着至关重要的作用。

它们被称为“凋亡酶”，因为它们能够促进或执行细胞凋亡过程。

细胞凋亡相关蛋白研究进展

结语：
综上所述, 细胞凋亡发生的信号转导途径是多样的, 这些途径之间彼此间相互促进或制约, 形成了错综复杂的调控网络。目前, 细胞凋亡的发生机制尚不完全明确, 不同药物诱导细胞凋亡的途径不同,并且参与调节的蛋白也各不相同。因此, 深入研究细胞凋亡的发生机制及蛋白调节机制, 可以为相关疾病的治疗以及药物的开发提供新的思路。
5、其他相关蛋白简介
Apaf-1：被称为凋亡酶激活因子-1（apoptotic protease activating factor-1）ห้องสมุดไป่ตู้线粒体参与的凋亡途径中具有重要作用.
Fas:又称作APO-1/CD95，属TNF受体家族。Fas蛋白与 Fas配体结合后，会激活caspase，导致靶细胞走向凋亡。
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内容简介：
一、caspase家族蛋白二、bcl-2家族蛋白三、p53蛋白四、survivin蛋白五、其他相关蛋白简介
1、CASPASE家族蛋白
caspase是半胱氨酸基天冬氨酸一特异性蛋白酶(cystei-nyl aspartate specific proteinase)即半胱氨酸天冬氨酸酶的缩写。它们是一组存在于胞浆中的半胱氨酸蛋白酶, 其共同特点是特异性断开天冬氨酸残基后的肽键。
在线粒体损伤后，细胞色素C从构建的孔隙中进入细胞液，与抗恶性贫血因子1和caspase-9组成了凋亡复合体。在caspase-9被激活后，再作用于其下游的 caspase-3酶原，活化的caspase-3作为效应子，作用于不同的靶分子，经蛋白水解作用导致细胞凋亡。
3、P53蛋白

弥漫性大B细胞淋巴瘤中Bcl-6、Bcl-2和NF—kB的表达及临床意义

一
５１Ｏ一
ＣｈｉｎＪＬａｂＤｉａｇｎ，Ｍａｒｃｈ，２０１７，Ｖｏｌ２１，Ｎｏ．３
文章编号：１００７ —４２８７（２０１７）０３ —０５１０－０３
弥漫性大Ｂ细胞淋巴瘤中Ｂｃｌ一６、Ｂｃｌ一２和ＮＦ — ＫＢ的表达及临床意义
两组研究对象的组织切片均在显微镜（＊４００）下观察细胞形态及病理变化，结果显示Ｂｃｌ一２、Ｂｃｌ一６和ＮＦ — Ｂ水平淋巴瘤组均高表达，差异有统计学意
义（Ｐ＜０．０５），见表１。
孟亚红，孙丽华
（上海复旦大学附属中山医院青浦分院血液科，上海２０１７００）
淋巴瘤是淋巴造血系统中常见的恶性肿瘤，ｗＨｏ造血和淋巴组织肿瘤分类（２００８）将淋巴瘤分为霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤（ＮＨＬ）［１］。弥漫性大Ｂ细胞淋巴瘤（ＤＬＢＣＬ）是非霍奇金淋巴瘤中发病最多、恶性程度高的一个亚型，占非霍奇金淋巴瘤的３０－４０［２］。弥漫性大Ｂ淋巴瘤的生成与调控机制极其复杂，有多种信号通路参与，原癌基因Ｂｃｌ一６、凋亡抑制基因Ｂｃｌ一２与ＤＬＢＣＬ的发生、发展关系密切，ＮＦ－￣ｃＢ属于Ｒｅｌ基因，为多显性核转录因子，参与机体炎症、细胞增殖、细胞凋亡等基因的调节，具有调控肿瘤细胞凋亡和免疫活性的作用］。

bcl-2凋亡基因表达的检测原理和方法

bcl-2凋亡基因表达的检测原理和方法（一）原理：细胞凋亡是一个受基因调控的主动过程，bcl-2是抑制细胞凋亡的原癌基因，正常细胞的激活和发育过程中都有表达，但在发育成熟的细胞中，其表达降低，在低分化或癌变的细胞中，bcl-2高表达与肿瘤的发生、发展相关，bcl-2过量表达常导致对化疗药物的耐药性而阻止细胞凋亡，影响治疗效果，一旦细胞发生凋亡，其bcl-2表达降低，甚至完全消失。

bcl-2家族由bcl-2、bcl-X、bax、mcl-1和A1组成。

进行bcl-2基因表达的检测有两种，一种是用抗bcl-2蛋白抗体的流式细胞仪测定法，检测细胞浆中的bcl-2蛋白量，另一种是采用RT-PCR法测细胞中bcl-2 mRNA的表达。

（二）方法：1、bcl-2蛋白表达的检测：采用流式细胞仪和间接免疫荧光法测定细胞中bcl-2蛋白的量。

收集药物不同剂量、不同作用时间的凋亡肿瘤细胞，用含2%小牛血清的PBS洗2次。

加入2%多聚甲醛室温固定20min，再用PBS配制的Staing缓冲液洗涤。

1500r/min离心5min，弃上清，置-20℃存放过夜。

在冻存的细胞内加入1mlPBS配制的TB穿透液放置5min，用Staing缓冲液洗涤1次后，加2%灭活的人AB型血清1ml，37℃放10min。

加入bcl-2多抗工作液40ul，4℃孵育30min后，对照组不加多抗，随后用PBS洗3次，5 min 1次。

加入FITC荧光标记的二抗工作液40ml4℃孵育30min后，用PBS洗3次，用流式细胞仪检测荧光强度（MFI）的变化，计算bcl-2阳性细胞表达率和bcl-2蛋白表达的平均荧光强度。

2、RT-PCR法检测细胞bcl-2 mRNA的表达：（1）总RNA提取：为了获得高质量的真核细胞mRNA，必须使用RNA酶抑制剂。

操作过程中应避免RNA酶污染器材和试剂，因此所有剥离、塑料器材先用0.1%DEPC水溶液浸泡12h，然后用无菌的新鲜蒸馏水淋洗数次，塑料器材应采用高压蒸汽灭菌。

小鼠B细胞淋巴瘤因子2 (Bcl-2)-ELISA试剂盒说明书

小鼠B细胞淋巴瘤因子2 (Bcl-2)酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书产品编号：E-EL-M0175（本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断!）声明：尊敬的客户，感谢您选用本公司的产品。

本产品选用世界著名生产厂家的原料，采用专业ELISA kit生产技术制造。

适用于体外定量检测小鼠血清、血浆、组织匀浆或细胞培养上清液中天然和重组Bcl-2浓度。

使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分！如有疑问，请及时联系伊莱瑞特生物科技有限公司。

*: [96T/48T]（打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整）检测原理:本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。

用抗小鼠Bcl-2抗体包被于酶标板上，实验时标本或标准品中的Bc l-2会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。

依次加入生物素化的抗小鼠Bcl-2抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。

抗小鼠Bcl-2抗体与结合在包被抗体上的小鼠Bcl-2结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。

加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下现蓝色，加终止液后变黄。

用酶标仪在450nm波长处测OD值，Bcl-2浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线求出标本中Bc l-2的浓度。

标本收集:1.血清：全血标本于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。

2.血浆：抗凝剂推荐使用EDTA.Na2，标本采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可检测。

避免使用溶血，高血脂标本。

3.组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，以去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。

将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样本对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。

Bcl2与细胞凋亡

Bcl-2与细胞凋亡摘要 Bcl-2基因是一原癌基因，能抑制细胞凋亡。

但近年研究发现，存在有Bcl-2敏感和不敏感的细胞凋亡现象。

Bcl-2抑制细胞调亡的机制目前仍然不清，大多认为与Bcl-2的细胞内抗氧化作用及抑制钙离子的跨膜运动有关。

最近，Reed提出Bcl-2具有离子通道蛋白和吸附/锚定蛋白的双重特性，并阐述了Bcl-2抑制细胞凋亡的某些机制。

关键词：Bcl-2；细胞凋亡自从1972年Kerr提出细胞凋亡（appoptosis）的概念至今，人们对细胞凋亡现象进行了广泛、深入的研究。

但是，凋亡的分子和生化机制迄今尚未彻底明了；而已形成的初步认识大多源于对Bcl-2基因家族的研究。

已知，调亡进程可分为三个时相：诱导期，效应期和降解期。

Bcl-2基因（即B细胞淋巴瘤/白血病-2基因）是一种原癌基因，它具有抑制凋亡的作用，并用近年来的一些研究已开始揭示这一作用的机制。

目前已经发现的Bcl-2蛋白家族按功能可分为两类，一类是象Bcl-2一样具有抑制凋亡作用，如哺乳动物的Bcl-X1、Bcl-W、Mcl-1、A1、线虫Ced-9、牛痘病毒E1B119kD等，而另一类具有促进凋亡作用，如Bax、Bcl-Xs、Bad、Bak、Bik/Nbk、Bid和Harakiri[2]。

最初在血液淋巴细胞中发现Bcl-2能抑制细胞死亡，随后陆续在其它一些细胞中也发现Bcl-2的这种作用。

但近年来研究发现，除些之外尚存在Bcl-2不敏感的凋亡途径。

本文拟就凋亡与Bcl-2的关系及其研究进展作一综述。

1 Bcl-2敏感的凋亡途径Bcl-2可以抑制由多种细胞毒因素所引起的细胞死亡。

bcl 2

促进凋亡作用的：
促凋亡蛋白，又称为凋亡前体蛋白（proapoptotic proteins）Bax、Bcl-Xs、Bad、Bak、Bik/Nbk、Bid和 Harakiri。这些又可以分为两类
敏感凋亡
Bcl-2可以抑制由多种细胞毒因素所引起的细胞死亡。Bcl-2的过度表达能增强所观察细胞对大多数细胞毒素的抵抗性。这一发现使人们认识到凋亡的各种信号转导途径有一个共同的通路或交汇点，而该通路或交汇点受 Bcl-2调节。实验表明，Bcl-2可增强细胞对大多数DNA损伤因子的抵抗性，抑制大多数化疗药物所引起的靶细胞凋亡，但其本身并不能抑制这些因素对细胞的损伤；同样地，它也不能促进DNA修复。p53蛋白是DNA损伤的一个分子传感器，已证实Bcl-2能抑制p53介导的凋亡，但不能抑制p53向核内转位或者p53介导的生长停滞，可能 Bcl-2的作用是在DNA损伤后，阻止激活凋亡机制的信号到达其靶分子；在细胞毒性T细胞中，由颗粒酶B激活 Caspases家族的一个或多个半胱氨酸蛋白酶所诱导的凋亡不依赖于Bcl-2，颗粒酶B可能仅作用于凋亡路径中 Bcl-2调节位点的下游。以上结果表明在凋亡途径中Bcl-2的作用位点是在信号分子和效应蛋白酶之间的位置。
分类
研究发现很多与Bcl-2同源性较高的基因，他们共同组成了庞大的Bcl-2家族。其中有的可以抑制凋亡，有的可以促进细胞凋亡。
抑制凋亡的：
又称为抗凋亡蛋白（antiapoptotic proteins）有哺乳动物的Bcl-2，Bcl-XL、Bcl-W、Mcl-1、A1；线虫 Ced-9；牛痘病毒E1B119kD等
关于Bcl-2家族调控线粒体外膜通透性的机制，假说之一是，细胞接受凋亡信号后促凋亡因子Bax和Bak发生寡聚化，从细胞质中转移到线粒体外膜上，并与膜上的电压依赖阴离子通道相互作用，使通道开放到足以使线粒体内的凋亡因子如细胞色素c等释放到细胞质基质中，引起细胞死亡。