RA培养基适用性检查方案

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RA培养基适用性检查方案

题目计数培养基适用性验证方案方案号版本号01批准页起草人审核人签字日期QC经理批准人签字日期QA经理目录1.验证目的2. 参照标准3. 验证项目4. 验证人员及职责5. 判定标准6. 实验材料7. 菌液制备8. 菌液计数9. 适用性检查 10.阴性对照附件1.检测记录 1.验证目的纯化水微生物计数用的培养基应进行培养基的适用性检查。

本次验证的目的是确认R2A 培养基适合纯化水中总需氧菌总数测定。

2.参照标准2015版中国药典二部1105微生物限度检查法。

3.验证项目R2A 培养基的适用性检查。

4.验证小组人员及职责：4.1验证小组人员: 4.2验证人员职责及要求 4.3验证中各部门的职责4.3.1.4负责验证资料及结果的审核工作。

4.3.1.5负责验证报告的批准工作。

4.3.2验证工作小组职责4.3.2.1负责验证方案的起草工作。

4.3.2.2参与验证方案的讨论、确认工作。

4.3.2.3负责验证方案的实施。

4.3.2.4负责验证结果的分析、统计、报告工作。

4.3.2.5参与验证结果的评价工作。

4.3.3质量部职责小组人员职务姓名所在部门组长质量部组员质量部组员质量部4.3.3.1负责公司验证日常管理工作。

4.3.3.2负责验证方案的审核工作。

4.3.3.3负责验证过程中仪器、仪表、计量器具的校验工作。

证过程中的各项检验工作负责。

5.判定标准被检培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在0.5-2的范围内，且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致。

6.试验材料6.1 被验证产品：R2A琼脂培养基6.2 仪器设备6.2.1 压力蒸汽灭菌器6.2.2 HF1200LC型生物安全柜6.2.3 DNP-9160BS型培养箱6.2.4 DHG90型鼓风干燥箱6.2.5微波炉6.3. 验证用培养基名称生产厂家批号R2A琼脂培养基6.4. 验证用菌株：(第代)试验菌株增菌培养基培养温度培养时间枯草芽孢杆菌胰酪大豆胨液体培养基30—35℃18-24h 铜绿假单胞菌胰酪大豆胨液体培养基23—28℃18-24h 7. 菌液制备分别取铜绿假胞杆菌、与枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基中，于30～35℃培养不超过18-24h。

纯化水RA培养基适用性验证

纯化水R A培养基适用性验证Coca-cola standardization office【ZZ5AB-ZZSYT-ZZ2C-ZZ682T-ZZT18】编号：R2A培养基适用性验证报告科技发展有限公司目录R2A培养基适用性验证报告1.目的因2015版药典纯化水检验用培养基变更,依1105 非无菌产品微生物限度检查方法,通过此次实验对所更换的R2A琼脂培养基进行适用性检查，以证明该方法及所采用的培养基适用于纯化水微生物限度检查日常检测。

2.范围适用于本公司纯化水的微生物限度检查。

3．依据中华人民共和国药典（2015年版）4. 职责权限5. 验证方法培养基的适用性检查培养基应进行培养基的适用性检查。

菌种试验用菌株的传代次数不得超过5 代,试验用菌种应采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。

菌液制备铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的微生物培养基质控品,使用前注入稀释液充分溶解后,在漩涡混合器上振荡混匀,制成1ml(相当于10～100cfu/菌悬液。

适用性检查取铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌各10～100cfu，分别注入无菌平皿中，立即倾注R2A琼脂培养基，每株试验菌平行制备2 个平皿，混匀，凝固，置30～35℃培养不少于5天，计数；结果判定被检定的固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值在～2范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致。

判该培养基的适用性检查符合规定。

实验前的准备仪器设备确认人: 日期:操作环境微生物限度检查应在环境洁净度10000 级下的局部洁净度100 级的单向流空气区域内进行。

检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染。

单向流空气区域、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。

器具无菌培养皿：（直径90mm） 1ml注射器计数方法的验证当建立纯化水微生物限度检查法时，应进行细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证，以确认所采用的方法适合于该产品的细菌、霉菌及酵母菌数的测定。

RA培养基适用性检查方案

RA培养基适用性检查方案RA培养基是一种用于培养和繁殖细菌、真菌和其他微生物的培养基，其主要成分包括碳源、氮源、矿物质、维生素等。

在微生物学领域，RA培养基被广泛应用于微生物的分离、培养和鉴定工作中。

为了确保RA培养基的质量和适用性，需要进行适用性检查。

一、设备和试剂1.成分齐全的RA培养基2.不同种类的微生物菌种3.恒温培养箱4.显微镜5.消毒器具6.常规实验室设备和仪器二、检查步骤1.准备RA培养基将RA培养基按照配方准确称取所需成分，并按照要求将培养基冷冻或冷藏保存。

确保培养基的成分齐全和质量良好。

2.细菌培养选取不同种类的微生物菌种，分别接种到RA培养基上，并置于恒温培养箱中进行培养。

观察不同菌种在RA培养基上的生长情况，包括生长速度、菌落形态等。

3.细菌鉴定通过显微镜观察不同菌种在RA培养基上的形态特征，比如细胞形态、颜色、大小等，结合生物化学反应进行初步鉴定。

4.抗菌试验对RA培养基进行抗菌试验，检测其对常见抗生素的敏感性。

分别在RA培养基中加入不同浓度的抗生素，观察不同菌种的生长情况，并判断其敏感性。

5.质量控制对RA培养基制备过程进行质量控制，包括原料检验、制备过程的卫生控制、灭菌过程的有效性等。

确保培养基的质量符合标准要求。

6.结果分析对上述步骤的检查结果进行综合分析，评估RA培养基的适用性和质量。

根据不同菌种的生长情况和鉴定结果，判断RA培养基是否符合实验需求。

三、结果评估1.生长情况观察不同微生物菌种在RA培养基上的生长情况，包括生长速度、菌落形态、颜色等。

根据生长情况评估RA培养基的适用性。

2.鉴定结果通过显微镜和生物化学反应对不同菌种进行初步鉴定，判断RA培养基是否适合进行微生物鉴定工作。

对鉴定结果准确性进行评估。

3.抗菌试验结果根据抗菌试验的结果，判断RA培养基对抗生素的敏感性，评估其在抗菌试验中的适用性。

四、结论与建议通过以上适用性检查方案，对RA培养基的质量和适用性进行评估，得出结论并提出建议。

培养基灵敏度及适用性检查操作规程

培养基灵敏度及适⽤性检查操作规程1. ⽬的：通过培养基适⽤性检查，确保购买的培养基符合实验要求。

2. 范围：本规程适⽤于技术质量部实验员对培养基适⽤性的检查。

3. 职责：质量部实验员负责执⾏此规程。

4. 内容：4.1 检验依据：《中华⼈民共和国药典》2015版4.2 试验⽤具：烧杯、三⾓瓶、酒精灯、接种环、平⽫、试管、吸管、移液枪、滴管、电⼦天平、电热恒温培养箱、⽣化培养箱或恒温恒湿培养箱、单⼈净化⼯作台、⾼压蒸汽灭菌器、微⽣物限度仪、漩涡混合器、试验菌种、检查⽤培养基等。

4.3 ⽆菌培养基适⽤性检查：本检查可在供试品的⽆菌检查前或与供试品的⽆菌检查同时进⾏。

4.3.1 培养基：硫⼄醇酸盐流体培养基、胰酪⼤⾖胨液体培养基或胰酪⼤⾖胨琼脂培养基（培养基的配制按《培养基配制操作规程》配制）。

4.3.2 稀释液、冲洗液及其制备⽅法稀释液、冲洗液配制后应采⽤验证合格的灭菌程序灭菌。

a) 0.1%⽆菌蛋⽩胨⽔溶液取蛋⽩胨1.0g，加⽔1000ml，微温溶解，滤清，调节pH值⾄7.1±0.2，分装，灭菌。

b) pH7.0⽆菌氯化钠-蛋⽩胨缓冲液取磷酸⼆氢钾3.56g，⽆⽔磷酸氢⼆钠5.77g，氯化钠4.30g，蛋⽩胨1.00g，加⽔1000ml，微温溶解，滤清，分装，灭菌。

c) 根据供试品的特性，可选⽤其他经验证过的适宜的溶液作为稀释液、冲洗液（如0.9%⽆菌氯化钠溶液）。

如需要，可在上述稀释液或冲洗液的灭菌前或灭菌后加⼊表⾯活性剂或中和剂等。

4.3.3 ⽆菌性检查：每批培养基随机取不少于5⽀（瓶），置各培养基规定的温度培养14天，应⽆菌⽣长。

4.3.4 灵敏度检查4.3.4.1 菌种培养基灵敏度检查所⽤的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中⼼获得的⼲燥菌种为第0 代），并采⽤适宜的菌种保藏技术进⾏保存，以保证试验菌株的⽣物学特性。

⾦黄⾊葡萄球菌（Staphylococcus aureus ）〔CMCC（B）26 003〕铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa ）〔CMCC（B）10 104〕枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）〔CMCC（B）63 501〕⽣孢梭菌（Clostridium sporogenes）〔CMCC（B）64 941〕⽩⾊念珠菌（Candida albicans）〔CMCC（F）98 001〕⿊曲霉（Aspergillus niger）〔CMCC（F）98 003〕4.3.4.2 菌液制备a) 接种⾦黄⾊葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物⾄胰酪⼤⾖胨液体培养基中或胰酪⼤⾖胨琼脂培养基上，接种⽣孢梭菌的新鲜培养物⾄硫⼄醇酸盐流体培养基中，30～35℃培养18～24⼩时；b) 接种⽩⾊念珠菌的新鲜培养物⾄沙⽒葡萄糖液体培养基中或沙⽒葡萄糖琼脂培养基上，20～25℃培养24～48⼩时，上述培养物⽤pH7.0⽆菌氯化钠-蛋⽩胨缓冲液或0.9%⽆菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数⼩于100cfu（菌落形成单位）的菌悬液。

微生物限度检查——培养基的适用性检查与检查方法的适用性试验.

制作人：王丽娟重庆医药高等专科学校
控制菌检查—— 培养基的适用性检查与检查方法的适用性试验
提纲
一、控制菌种类二、培养基的适用性检查与检查方法的适用性试验三、对照试验
一、控制菌种类
耐胆盐革兰阴性菌
白色念珠菌
大肠埃希菌
控制菌检查项目梭菌沙门菌
金黄色葡萄球菌
铜绿假单胞菌
二、培养基的适用性检查与检查方法的适用性试验
1.控制菌检查用培养基的适用性检查控制菌检查用培养基包括成品培养基、由脱水培养基或按培养基处方配制的培养基均应进行培养基的适用性检查，检查项目包括培养基的促生长、抑制能力和指示特性。
金黄色葡萄球菌
铜绿假单胞菌
大肠埃希菌
乙型副伤寒沙门菌
白色念珠菌生孢Fra bibliotek菌2.检查方法的适用性试验检查方法及流程同“微生物计数法适用性检查” 所用阳性对照菌液不同结果判断不同：控制菌检查用培养基制药检出阳性对照菌即可判为无抑菌性
三、对照试验
阳性对照试验 • • • 目的：检查供试品是否有抑菌作用及培养条件是否适宜操作：同供试品操作，仅加入了不超过100cfu的阳性对照菌结果要求：应呈阳性阴性对照试验 • • • 目的：检查操作环境、试验物品、操作技术是否无菌操作：用稀释剂代替供试品，其余同供试品。结果要求：应呈阴性

培养基适用性验证方案

培养基适用性验证方案培养基适用性验证是指在培养基的研发过程中，通过实验验证培养基的适用性和质量。

这一过程对于生物学、医学等领域研究以及工业生产来说非常重要。

本文将介绍一个基本的培养基适用性验证方案，以确保培养基的质量和有效性。

一、实验目的1.验证培养基中各种成分的适用性和稳定性；2.测试培养基对细胞或微生物的生长和增殖的支持程度；3.评估培养基对细胞或微生物的表型和基因表达的影响；4.了解培养基的理化指标，如pH值、渗透压等。

二、实验步骤1.准备培养基和试样：根据所研究的生物体或微生物的需要，准备相应的培养基，包括成分和浓度。

同时，准备不同的试样，如细胞或微生物的悬浮液或分离物等，用于验证培养基的适用性。

2.测定培养基理化指标：测定培养基的理化指标，如pH值、渗透压、离子浓度等，确保其在范围内。

3.测定培养基对细胞或微生物的生长和增殖的支持程度：将细胞或微生物接种于培养基中，通过监测生物体的生长曲线、增殖速率等参数来评估培养基对其的支持程度。

可以使用细胞计数仪、显微镜等工具进行观察和计数。

4.评估培养基对细胞或微生物的表型和基因表达的影响：通过观察生物体的形态、结构、活力等方面，了解培养基对其表型的影响。

同时，可以通过转录组分析、蛋白质组分析等手段，评估培养基对基因表达的影响。

5.验证培养基的稳定性：将培养基保存一段时间后，再次进行生物体的培养和生长实验，以验证培养基的稳定性和持久性。

6.数据分析和结果呈现：对实验结果进行统计分析，包括均值、标准差等指标，通过图表、表格等形式呈现实验结果。

三、实验注意事项1.实验室条件要符合要求，包括洁净无菌、合适的温度和湿度等；2.培养基的配制要精确，注意称量和混合时间；3.使用无菌技术和条件进行细胞或微生物的接种和培养；4.实验过程中要使用适当的控制组和重复实验，以确保实验结果的可靠性和准确性；5.实验过程中要严格按照操作规程和实验流程进行，避免误操作和实验结果的偏差。

RA培养基适用性检查方案

RA培养基适用性检查方案RA培养基是一种含有富集因子和适合微生物生长的营养物质的培养基。

其目的是通过提供适宜的环境条件来促进微生物的生长和繁殖，以便于进行微生物的鉴定和检测。

为了确保RA培养基的适用性，下面是一个包含不同方面的RA培养基适用性检查方案：1.检查培养基成分的准确性：对RA培养基的成分进行检查，包括碳源、氮源、矿物盐和水。

确保这些成分的质量和纯度是合适的，并符合培养微生物所需的营养需求。

3.检查营养物质的浓度：确定RA培养基中各种营养物质的浓度是否适当。

通过使用适当的质量分析方法，如光谱法、拉曼光谱法或液质联用技术，测定RA培养基中各种营养物质的浓度。

4.检查无菌性：确保RA培养基是无菌的，以防止外来微生物的污染。

通过在无菌条件下进行培养基的制备，并进行培养基平板接种试验，观察是否有无菌条件下的生长。

如果有生长，说明培养基被污染，需重新制备。

5.检查生长促进剂的有效性：RA培养基中常添加生长促进剂，如叶绿素、胱氨酸和细胞外多糖等，以促进微生物的生长。

检查这些生长促进剂是否能够有效地促进微生物的生长，可以通过比较使用和不使用生长促进剂的培养基对微生物生长的影响来进行。

6.检查培养基与不同微生物的适应性：通过使用多种常见的微生物菌株来测试RA培养基的适应性。

将不同菌株接种到RA培养基中，观察其生长情况并与已知的生长曲线进行比较，以评估培养基对不同微生物的适应性。

7.检查培养基的稳定性：RA培养基的稳定性是指培养基在长期保存的情况下，能否保持其适用性。

将RA培养基制备好后进行长期储存，并定期进行培养基的检查，包括pH值、无菌性和营养物质浓度等方面。

通过观察培养基的变化，以评估其稳定性。

总之，通过对RA培养基成分的准确性、pH值的合适性、营养物质的浓度、无菌性、生长促进剂的有效性、培养基与不同微生物的适应性以及培养基的稳定性等方面进行适用性检查，可以确保RA培养基的质量和适用性，从而为微生物的鉴定和检测提供可靠的基础。

培养基灵敏度及适用性检查操作规程

1. 目的：通过培养基适用性检查，确保购买的培养基符合实验要求。

2. 范围：本规程适用于技术质量部实验员对培养基适用性的检查。

3. 职责：质量部实验员负责执行此规程。

4. 内容：4.1 检验依据：《中华人民共和国药典》2015版4.2 试验用具：烧杯、三角瓶、酒精灯、接种环、平皿、试管、吸管、移液枪、滴管、电子天平、电热恒温培养箱、生化培养箱或恒温恒湿培养箱、单人净化工作台、高压蒸汽灭菌器、微生物限度仪、漩涡混合器、试验菌种、检查用培养基等。

4.3 无菌培养基适用性检查：本检查可在供试品的无菌检查前或与供试品的无菌检查同时进行。

4.3.1 培养基：硫乙醇酸盐流体培养基、胰酪大豆胨液体培养基或胰酪大豆胨琼脂培养基（培养基的配制按《培养基配制操作规程》配制）。

4.3.2 稀释液、冲洗液及其制备方法稀释液、冲洗液配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。

a) 0.1%无菌蛋白胨水溶液取蛋白胨1.0g，加水1000ml，微温溶解，滤清，调节pH值至7.1±0.2，分装，灭菌。

b) pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液取磷酸二氢钾3.56g，无水磷酸氢二钠5.77g，氯化钠4.30g，蛋白胨1.00g，加水1000ml，微温溶解，滤清，分装，灭菌。

c) 根据供试品的特性，可选用其他经验证过的适宜的溶液作为稀释液、冲洗液（如0.9%无菌氯化钠溶液）。

如需要，可在上述稀释液或冲洗液的灭菌前或灭菌后加入表面活性剂或中和剂等。

4.3.3 无菌性检查：每批培养基随机取不少于5支（瓶），置各培养基规定的温度培养14天，应无菌生长。

4.3.4 灵敏度检查4.3.4.1 菌种培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的干燥菌种为第0 代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。

金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus ）〔CMCC（B）26 003〕铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa ）〔CMCC（B）10 104〕枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）〔CMCC（B）63 501〕生孢梭菌（Clostridium sporogenes）〔CMCC（B）64 941〕白色念珠菌（Candida albicans）〔CMCC（F）98 001〕黑曲霉（Aspergillus niger）〔CMCC（F）98 003〕4.3.4.2 菌液制备a) 接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，30～35℃培养18～24小时；b) 接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20～25℃培养24～48小时，上述培养物用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu（菌落形成单位）的菌悬液。

培养基使用性检查操作规程

培养基适用性检查操作规程编制人：日期：部门：微生物室审核人：日期：替代：批准人：日期：执行日期：1、目的建立一个培养基适用性检查操作规程。

2、适用范围微生物限度及无菌检查的成品培养基，由脱水培养基或按处方配置的培养基均应进行培养基适用性检查。

3、检验依据按2010年版《中国药典（一、二部）》附录无菌方法进行测试检查。

4、试验所需菌种大肠埃希菌；金黄色葡萄球菌；枯草芽孢杆菌；生孢梭菌；白色念珠菌；黑曲霉。

5、标准规定5.1 无菌培养基使用性检查5.1.1 无菌性：每批培养基随机取不少于5支（瓶），经培养14天应无菌生长。

5.1.2 灵敏度：经培养对照管应无菌生长，试验管接菌小于100cfu均应生长良好。

5.2 微生物限度使用性检查5.2.1 细菌、霉菌和酵母菌计数检查取标准菌株大肠、金葡、枯草、白念、黑曲霉菌50～100cfu,分别接入于测试与对照培养基，经规定温度、时间培养，测试结果测试与对照培养基平均菌落数比不应小于70%。

5.2.2 金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌检查取新鲜标准菌株大肠、金葡、铜绿假单胞菌制备使成10～100cfu菌悬液，分别对测试与对照培养基进行促生长能力、抑制能力及指示能力测试，结果被测培养试验菌的生长反应情况与对照培养基一致。

（液体培养基应记录为生长良好/生长微弱/未生长；固体培养基应记录为符合xx菌特征/不符合xx菌特征）。

5.2.3 大肠埃希菌、大肠菌群检查取新鲜标准菌株大肠、金葡球菌制备使成10～100cfu菌悬液，分别对测试与对照培养基进行促生长能力、抑制能力即指示能力测试，结果被测培养基试验菌的的生长反应情况应与对照培养基一致。

（液体培养基应记录为生长良好/生长微弱/未生长；固体培养基应记录为符合xx菌特征/不符合xx菌特征）。

5.2.4白色念珠菌、梭菌检查取新鲜标准菌株大肠、白念、生孢梭制备使成10～100cfu菌悬液，分别对测试与对照培养进行促生长能力、抑制能力及指示能力测试，结果被测培养基试验菌的生长反应情况应与对照培养基一致。

培养基适用性检查

培养基适用性检查参考《中国药典》2010年版取大肠埃希菌，金葡菌，铜绿菌，各50-100cfu，分别注入无菌平皿中，立即倾注胰酪胨大豆琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀。

凝固，置30-35℃培养48h,计数。

取白念、黑曲各50-100cfu，分别注入无菌平皿中，立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置20-25℃，培养72h，计数。

同时，用对应的对照培养基替代，被检查的培养基，进行上述试验。

结果判断：1.若被检的培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落平均数的70%；2.菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致，则判定该培养基的适用性符合规定。

30-35℃培养48h,计数表一20-25℃，培养72h,计数表二结论：该培养基的适用性符合规定。

培养基类型菌落菌种类型A.大肠埃希菌B.金黄色葡萄球菌C.铜绿假单孢杆菌形态、大小菌落数目形态、大小菌落数目形态、大小菌落数目各皿菌落数/cfu 平均菌落数/cfu 各皿菌落数/cfu 平均菌落数/cfu 各皿菌落数/cfu 平均菌落数/cfu1胰酪胨大豆琼脂培养基 1皿（）1皿（）1皿（）2皿（） 2皿（） 2皿（） 2 对照培养基1皿（）1皿（）1皿（）2皿（）2皿（）2皿（）计数结果比较2组÷1组 = ？是否>70%/ （）/（）= / （）/（）= / （）/（）=培养基类型菌落菌种类型D.白念E.黑曲形态、大小菌落数目形态、大小菌落数目各皿菌落数/cfu平均菌落数/cfu 各皿菌落数/cfu 平均菌落数/cfu1沙氏葡萄糖琼脂培养基 1皿（）1皿（）2皿（） 2皿（） 2 对照培养基1皿（）1皿（）2皿（）2皿（）计数结果比较2组÷1组 = ？是否>70% / （）/（）= / （）/（）=玫瑰红钠琼脂对照培养基9.0g/300mlRose Bengal Agar Reference Medium (RBARM)批号：135005-201001用途：本品用于霉菌及酵母菌计数培养基适用性实验或检验。

10、培养基适用性验证方案 20190730 zl

培养基适用性验证方案起草：日期：审核：日期：批准：日期：目录1 概述2 目的3 范围4 人员及职责5 依据6 验证内容7结果判定8再验证条件1.概述培养基的适用性检查包括无菌检查用培养基适用性检查，计数用培养基适用性检查。

做无菌检查用培养基每一次配制都要做适用性检查，计数培养基适用性检查每个干粉培养基批号做一次，不同时期购进的相同批号干粉培养基均需进行培养基适用性检查。

当培养基的配制方法和灭菌程序发生变更时，应再次对培养基的适用性进行检查。

2.目的验证所购买的培养基是否适合菌种生产，不会对所检查的供试品或其他物品产生抑菌活性，或者抑菌活性已被降低到不影响微生物的检出。

3.范围无菌检查用培养基适用性检查，计数用培养基适用性检查。

4.人员及职责5.依据《中国人民共和国药典》2015版6.验证内容6.1无菌检查用培养基的适用性检查无菌检查用的硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基，应符合培养基的无菌性检查及灵敏度检查的要求。

6.1.1无菌性检查液体培养基每批随机取不少于5支（瓶），培养14天，经培养后应无菌生长。

则可判该培养基的无菌性检查符合规定。

见附录1。

6.1.2灵敏度检查6.1.2.1菌种培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过 5 代（从菌种保存中心获得的干燥菌种为第0 代），并采用适宜的菌种保存技术进行保存，和确认，以保证试验菌株的生物学特性。

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)〔CMCC(B)26003〕铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)〔CMCC(B) 10104〕枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）〔CMCC(B)63501〕生孢梭菌(Clostridium sporogenes)〔CMCC(B) 64941〕白色念珠菌(Candida albicans)〔CMCC(F) 98001〕黑曲霉(Aspergillus niger) 〔CMCC(F) 98003〕6.1.2.2菌液制备接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，30～35℃培养18～24 小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20～25℃培养24～48 小时，上述培养物用pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml 含菌数小于100cfu（菌落形成单位）的菌悬液。

培养基适用性检查操作规程

培养基适用性检查操作规程
1．目的：检查培养基对相关菌种的适用性，保证微生物实验结果的有效性。

2. 适用范围：适用于首次使用的培养基种类、购入的新批次培养基的适用性检查。

3. 依据：《中国药典》（2010版）四部：无菌检查法/微生物限度检查法-培养基的适用性检查
4. 职责：微生物检验员实施，QA监督。

5. 内容：
5.1 设备和材料
恒温培养箱、无菌培养皿/试管、接种环、酒精灯/火焰喷枪、超净工作台、＜100CFU/ml 的工作菌液、灭菌后的培养基（无菌检查用、计数用）
5.2 培养基适用性检查-无菌检查用
5.2.1 无菌性：
每种培养基每批随机抽取不少于10支，其中5支置30~35℃、另5支置20~25℃培养14天。

14天后均应无菌生长。

5.2.2 灵敏度
取培养基3支，其中2支接种相应的工作菌液各1ml，另1支不接种，作为空白对照，置30~35℃培养3天（或20~25℃培养5天）。

逐日观察结果。

空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基管均生长良好，则判定该培养基的灵敏度检查符合规定。

5.3 培养基适用性检查-计数用
取无菌培养皿，吸取相应的工作菌液各1ml注入无菌培养皿，立即倾注培养基，每株试验菌接种2个培养皿，混匀，凝固。

同时用对照培养基替代被检培养基进行上述试验。

置30~35℃培养48小时（或23~28℃培养72小时），计数。

若被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落平均数的70%，且菌落形态、大小应与对照培养基上的菌落一致，则判断该培养基的适用性检查符合规定。

6.相关表格：《培养基适用性检查记录》。

培养基适用性检查记录

培养基适用性检查记录一、实验目的本实验旨在检查培养基的适用性，包括其成分是否合适、无污染、无毒性，并能够提供对所需生物体的适宜环境。

二、实验材料和仪器1.培养基样品：包括液体培养基和固体培养基。

2.培养基成分：包括蛋白胨、琼脂、糖类、无机盐等。

3.实验生物体：包括细菌、酵母菌等。

4.培养基制备器具：包括培养皿、试管、移液器、烧杯等。

5.实验室基本设备：包括电子天平、离心机、恒温培养箱等。

三、实验步骤1.培养基成分检查首先，检查培养基成分的符合度。

查阅培养基配方，并逐一准备并称量所需成分。

使用电子天平进行称量，确保称量准确。

检查成分是否存在误差，是否符合配方要求。

2.培养基配制检查根据培养基配方，准备液体培养基和固体培养基。

对液体培养基，按照配方将成分溶解在适量的蒸馏水中，并进行调pH处理。

对固体培养基，将成分溶解在蒸馏水中，并加入适量的琼脂糖或琼脂进行制成。

3.培养基无菌检查将配制好的培养基分别装入培养皿或试管中，并在恒温箱中进行高温高压灭菌处理。

灭菌结束后，在无菌操作台上进行无菌条件下的检查。

观察培养基是否有异常物质存在，如颜色变化、气泡、异味等。

4.培养基毒性检查将培养基分别接种相应的生物体，观察生物体的生长情况及有无异常现象。

观察时间可根据生物体的生长周期安排。

5.培养基成分调整及检查根据对培养基适用性的判断，如发现培养基的补充成分不足，或适用生物体的无法正常生长，可以对培养基的配方进行调整。

通过增加或减少特定成分的用量，或替换一些成分，再进行上述实验步骤进行再次检查。

四、实验结果和分析经过以上实验步骤，我们对培养基的适用性进行检查，并对实验结果进行记录和分析。

1.培养基成分符合度：通过称量成分的准确性和配方的符合度，可以判断培养基成分是否合适。

2.培养基配制检查：根据液体培养基和固体培养基的制备步骤，以及配方的准确性，可以判断培养基的配制是否正确。

3.培养基无菌检查：通过观察培养基灭菌后是否有异常现象，如颜色变化、气泡、异味等，可以判断培养基是否无菌。

培养基适用性检查标准操作规程

培养基适用性标准操作规程第 1 页共4页1目的规范培养基适应性检查的标准操作。

2范围本规程适用于《中华人民共和国药典》2010年版二部规定微生物限度检查中成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基适用性检査。

3责任3.1本规程由质量保证中心主任指定人员起草。

3.2与本文件相关的部门负责人参与审阅，企业质量负责人批准本文件。

3.3质量控制中心负责具体实施本规程。

4内容4.1依据4.1.1《药品生产质量管理规范》（2010年修订）4.1.2《中华人民共和国药典》2010年版二部4.2试验用菌株及培养基4.3试验用仪器设备4.3.1恒温培养箱（30～35℃）、霉菌培养箱（23～28℃）、蒸汽压力灭菌器、净化工作台、电热干燥箱、恒温水浴锅、振荡器、电冰箱、天平4.3.2锥形瓶、培养皿（9cm）、量筒、试管及塞、吸管（1ml分度0.01，10ml分度0.1）4.3.3接种环、乙醇灯、乙醇棉球或碘伏棉球、火柴、记号笔、灭菌镊子、不锈钢药匙、白瓷盘。

4.4操作步骤4.4.1菌液的制备4.5.1.1 接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，于30～35℃培养18～24h。

取30～35℃培养18～24h的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌营养肉汤新鲜培养物1ml，用0.9%无菌氯化钠溶液10倍递增稀释制成每1ml含菌数50～100cfu的菌悬液，备用。

4.5.1.2 接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基上，于23～28℃培养24～48h。

取于23～28℃培养24～48h的白色念珠菌新鲜培养物1ml，用0.9%无菌氯化钠溶液10倍递增稀释每1ml含菌数50～100cfu的菌悬液备用。

4.5.1.3 接种黑曲霉菌的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，于23～28℃培养5～7天，加入3～5ml0.05%（ml/ml)聚山梨酸酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，然后，用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%（ml/ml)聚山梨酸酯80的0.9%无菌氯化钠溶液10倍递增稀释制成每1ml含孢子数50～100cfu的孢子悬液备用。

培养基适用性检查标准操作规程

培养基适用性检查标准操作规程(总4页)本页仅作为文档封面，使用时可以删除This document is for reference only-rar21year.March培养基适用性标准操作规程1目的规范培养基适应性检查的标准操作。

3责任3.1本规程由质量保证中心主任指定人员起草。

3.2与本文件相关的部门负责人参与审阅，企业质量负责人批准本文件。

3.3质量控制中心负责具体实施本规程。

4内容4.1依据4.1.1《药品生产质量管理规范》（2010年修订）4.1.2《中华人民共和国药典》2010年版二部4.2试验用菌株及培养基4.3试验用仪器设备4.3.1恒温培养箱（30～35℃）、霉菌培养箱（23～28℃）、蒸汽压力灭菌器、净化工作台、电热干燥箱、恒温水浴锅、振荡器、电冰箱、天平4.3.2锥形瓶、培养皿（9cm）、量筒、试管及塞、吸管（1ml分度，10ml分度）4.3.3接种环、乙醇灯、乙醇棉球或碘伏棉球、火柴、记号笔、灭菌镊子、不锈钢药匙、白瓷盘。

4.4操作步骤4.4.1菌液的制备接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，于30～35℃培养18～24h。

取30～35℃培养18～24h的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌营养肉汤新鲜培养物1ml，用%无菌氯化钠溶液10倍递增稀释制成每1ml含菌数50～100cfu的菌悬液，备用。

接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基上，于23～28℃培养24～48h。

取于23～28℃培养24～48h的白色念珠菌新鲜培养物1ml，用%无菌氯化钠溶液10倍递增稀释每1ml含菌数50～100cfu的菌悬液备用。

接种黑曲霉菌的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，于23～28℃培养5～7天，加入3～%（ml/ml)聚山梨酸酯80的%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，然后，用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含%（ml/ml)聚山梨酸酯80的%无菌氯化钠溶液10倍递增稀释制成每1ml含孢子数50～100cfu的孢子悬液备用。

培养基适用性检查作业指导书

制定人制定日期年月日文件编码ZJ审核人审核日期年月日页数1/2批准人批准日期年月日生效日期年月日1 目的规范培养基适用性检查的方法，保证培养基的培养效果。

2 范围适用于培养基的适用性检查。

3 责任人QC负责按照本作业指导书进行培养基的适用性检查，填写相关记录。

4 内容4.1 准备工作4.1.1试剂：商品脱水培养基、对照培养基、0.9%无菌氯化钠、标准菌株、纯化水。

4.1.2仪器：生物安全柜。

4.2操作流程4.2.1培养基配制方法使用商品化脱水合成培养基时,应严格按照厂商提供的使用说明配制,如重量/体积、pH、灭菌条件和操作步骤等。

实验室使用各种基础成分制备培养基时,应按照配方准确配制, 培养基严格按说明书条件进行灭菌后。

培养基灭菌后应立即取出,不得存放于高压灭菌器中，并填写培养基（商品脱水培养基）配制记录。

4.2.2菌液制备取保存的传代菌种复苏获得工作菌种。

取一环工作菌种上的纯菌落溶解至10ml 0.9%无菌氯化钠中，震荡摇匀，记为10-1；取1ml菌液加至下一管9ml 0.9%无菌氯化钠中，震荡摇匀，记为10-2；同法操作，分别记为10-3、10-4、10-5（如未得到需要的稀释级，可加做1到2管）。

取不大于100cfu的稀释级菌液作为培养基适用性检查的最佳稀释级。

4.2.3实验操作文件编码页数2/2取1ml最佳稀释级的菌液（接种量≤100cfu）至需做适用性检查的培养基平板，每一试验菌株平行制备2个平板，另取1平皿不接种菌作为空白对照，均放于培养箱中倒置培养,同时用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。

4.3结论4.3.1空性对照为确认试验条件是否符合要求,空白对照试验应无菌生长。

如空白对照有菌生长,应进行偏差调查。

4.3.2被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基的菌落数的比值应在0.5-2范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致，则判定被检培养基适用性检查合格，反之则否。

5相关文件5.1菌种管理制度6相关记录6.1培养基（商品脱水培养基）配制记录6.2菌种使用记录6.3培养基适用性检查记录。