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层析分离技术

层析分离技术
根据分离的原理不同分类 分为吸附层析、凝胶过滤层析、离子交换层析、疏水作 用层析、反相层析、亲和层析等。
4.2 吸附层析
吸附层析(Adsorption Chromatography )是以吸附剂 为固定相,根据待分离物与吸附剂之间吸附力不同而 达到分离目的的一种层析技术。
按吸附剂和吸附物之间的作用力不同,吸附可分为三 种类型: 物理吸附:范德华力,吸附解吸速度快,选择性较差 化学吸附:生成化学键,达到平衡慢,选择性较好 交换吸附:极性分子或离子之间发生交换吸附…….
的活性物质提取分离,如维生素B12、四环素、土霉 素等,还可用于污水处理、糖浆脱色等。
大孔吸附树脂的选择和使用
选择依据: 吸附剂及吸附物的极性
一般来说,非极性吸附剂易从极性溶剂中吸附非极性 物质;极性吸附剂易从非极性溶剂中吸附极性物质; 中等极性的吸附剂对上述两种情况都具有吸附能力。 吸附物质的大小 吸附物分子较大的,应选择大孔树脂中孔径大的。
常用吸附剂按其化学结构可分两类
有机吸附剂,如:活性炭、纤维素、大孔吸附 树脂、聚酰胺等
无机吸附剂,如:硅胶、氧化铝、硅酸镁、硅 藻土、羟基磷灰石等
常用吸附剂简介
硅胶 是一种极性吸附剂,又是一种弱酸性阳离子交换
剂,其表面上的硅醇基能释放弱酸性的氢离子, 遇较强碱性化合物,则可因离子交换反应而吸附 碱性化合物; 应用于萜类、固醇、生物碱、酸性化合物、磷脂、 脂肪、氨基酸等的吸附分离。
HA的吸附机理
HA机理的主要观点是:HA的Ca2+和生物分子表 面的负电荷基团的结合,对生物分子的分离起重 要作用;而HA的磷酸基团与生物分子表面的正 电荷基团的结合,则起次要作用。
大孔吸附树脂
特点 大孔型颗粒,其孔隙、骨架结构和极性可按需要选

层析分离纯化技术

层析分离纯化技术
Sulfonate
-SO3-
离子交换层析
离子交换层析原理——蛋白质滴定曲线
+
stability range denaturation
与阳离子交换
蛋 白
介质结合

pI
净 电
2

与阴离子交换 10 pH
介质结合
stability range
- denaturation
离子交换层析原理
离子交换层析
Products:
原理与操作
层析技术
• Ion Exchange (IEX)-离子交换 –电荷 – 可用于 层析的任何步骤,根据纯度要求,包括粗纯捕获、中间纯化和 最后的精细纯化
• Size Exclusion (SEC)-分子筛(或凝胶过滤) –分子大小 – 用于中间纯化、脱盐和缓冲液交换、最后精细纯化
• Affinity (AC)-亲和 –生物相互作用 – 用于复杂样品的最早捕获或中间纯化
50um
Macro-Prep high S Macro-Prep CM
Macro-Prep 25 Q Macro-Prep 25 DEAE Macro-Prep 25 S
25um
UNOsphere Q 120um UNOsphere S 80um
离子交换层析
UNOsphere Q/S性能参数
• 更高的选择性和分辨率 • 10% 穿透载量:
+
++
+
+ +
+
+
+ +
+
++
++
Regeneration

离子交换层析分离技术.ppt

离子交换层析分离技术.ppt

三、“以”的连词用法
1、连接形容词,表示并列关系,译为“而”、“又”、 “而且”等。
①主严以明,将知以武。(《战国策·楚策一》) ②夫夷以近,则游者众;险以远,则至者少。《游褒禅 山记》 2、连接动词或动词短语,表示动作行为的承接或先后, 可译为“而”或“来”,或者不译。 ①若潜师以来,国可得也。(《左传·僖公三十二年》) ②晋灵公不君,厚敛以彫墙。
3、连接状语和中心语,不译。 ①黔无驴,有好事者船载以入。
②倚柱而笑,箕踞以骂。(《史记·刺客列传》))
4、用在复句中,用来说明原因、目的 1)表示目的关系、结果关系,可译为“而”、“来”、 “用来”、“以致”等。 ①广故数言欲亡,忿恚尉,令辱之,以激怒其众。《陈 涉世家》 ②思厥先祖父,暴霜露、斩荆棘,以有尺寸之地。(苏洵 《六国论》) 2)表示因果关系,可译为“因为”。 ①晋侯秦伯围郑,以其无礼于晋,且贰于楚也。(《僖 公三十年》) ②诸侯以公子贤,多客,不敢加兵谋魏十余年。(《魏 公子列传》)
4、引进主动者,可译为“被”。 ①有决渎于殷周之世者,必为汤武笑矣。《五蠹》 ②身死人手,为天下笑者,何也?(《过秦论》)
三、“为”的连词用法
1、用在假设复句中,可译为“如果”、“假如”。 ①王甚喜人之掩口也,为见王,必掩口。(《韩非子·内 储说下》) ②秦为知之,必不救也。(《战国策·秦策四》)
美于徐公。(《战国策·齐策一》)
二、“以”的介词用法
1、引进动作“拿”、“凭”、“按照”、 “凭……身份”等。
①愿以十五城请易璧。(《史记·廉颇蔺相如列传》) ②余船以次俱进。(《资治通鉴·赤壁之战》) ③余朝京师,生以乡人子谒余。(宋濂《送东阳马生序》 ) 2、引进动作、行为所处置或涉及的对象。 可译为“把”。 ①复以弟子一人投河中。(《史记·滑稽列传》) ②秦亦不以城予赵,赵亦终不予秦璧。(《廉颇蔺相如列 传》

层析分离纯化技术策略共58页PPT资料

层析分离纯化技术策略共58页PPT资料

8
pH 的重要性: 蛋白质净电荷随 pH 改变
滴定曲线
3
+
pH
10
稳定性范围
不同 pH 下的分离情况
1
蛋白质净电荷
用阳离子交换
用阴离子交换
2
-
1
2
9
pH 的重要性: 蛋白质净电荷随 pH 改变
流动相的 pH 选择性
Abs
Abs
Abs
Abs
V
V
V
V
+ 阳离子
表面净电荷
0
pH
阴离子
-
Abs
Abs
Abs
3
沉淀蛋白质的方法
(1) 盐析法 (2) 有机溶剂沉淀法 (3) 重金属盐沉淀法 (4) 加热变性沉淀法
4
蛋白质纯化策略
融合蛋白质
简单纯化
一步 亲和层析 90 - 97 % 纯度
更高纯度
多步纯化
表达
非融合蛋白质
5
粗提 中度纯化 精细纯化
三步纯化策略
高效纯化策略
分辩率 精细纯化
纯化
分解目标分子
17
预防措施
膜过滤、离心、匀 浆
离心、如可跟目标 分子兼容,可用有
机溶剂
添加硫酸链霉素、 硫酸精蛋白或锰盐 沉淀核酸、添加核
酸酶
添加蛋白酶抑制剂 、用亲和层析去除 蛋白酶、缩短粗分 时间、低温操作
粗提
目的
纯化粗样 快速浓缩 (减少体积) 和稳定样品 (去除蛋白
酶) 最适用层析技术: 离子交换 / 疏水层析
Step
12
三步纯化策略
层析填料的 颗粒大小
精细纯化 中度纯化

第七章层析分离技术2——凝胶过滤层析

第七章层析分离技术2——凝胶过滤层析
特点:
(1)介质不带电荷, 具有化学惰性,不与被分离物 质发生化学反应,条件温和,不会使物质变性;
(2)色谱介质不需再生,可反复便用; (3)分离效率高,回收率较高; (4)广泛应用于生物大分子的初级分离,脱盐等。 (5)分辨率较低,需采用细长柱。 (6)经过凝胶过滤色谱后样品被稀释,上样前需
显影响 其分离效果不受去污剂、促溶盐类、变性剂等影响 能在多种有机溶剂存在下使用
②Superdex
根据分级范围不同,可分为若干型号(见表5.6,P80), 其中,数字越大,孔径越大。 prep grade 颗粒较大。
Superdex peptide Superdex 30 prep grade Superdex 75、200 ( prep grade )
根据交联之前母胶中琼脂糖的含量不同,Sepharose CL系 列凝胶也有三种类型:Sepharose CL-2B、Sepharose CL4B和Sepharose CL-6B。
特点
Sepharose CL系列凝胶在颗粒直径、分级范围方面与Sepharose系 列完全相同
在pH稳定范围、机械强度(流速)及温度稳定性等方面得到了很 大的改进
二、凝胶过滤介质
2. 凝胶介质的种类
按基质组成主要可以分为 :
葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶、聚苯乙烯 -二乙烯苯凝胶、二氧化硅凝胶,以及由两种物质混合 形成的如琼脂糖-葡聚糖混合凝胶、聚丙烯酰胺-葡聚糖 混合凝胶等。
按凝胶过滤层析能达到的柱效和分辨率又可分为:
标准凝胶介质:颗粒尺寸较大(一般为100~250 μm),机
(1)葡聚糖凝胶(Sephadex ) G-数字 联度越大,分级范围越小。)

胶 过
(2)琼脂糖凝胶

第七章 层析分离技术(4)亲和层析

第七章 层析分离技术(4)亲和层析

7.4 亲和层析
三、亲和层析的操作过程
洗脱(elution)

按洗脱机理可分为:

(1)竞争性洗脱:利用含有与亲和配基或目标产物具有亲和结合作用的 小分子化合物为洗脱剂,通过与亲和配基或目标产物的竞争性结合,洗 脱目标物。

例1:t-PA亲和层析,赖氨酸和精氨酸均为其抑制剂; 例2:带有His标签的蛋白质的金属鳌和亲和层析,用咪唑溶液为洗脱剂)

样品需进行预处理:通过离心或超滤除去微小颗粒; 缓冲液离子强度: 载体活化时引入一些带基团,低离子强度下,树脂对杂质的静电作用较 强,因此,提高盐浓度可减少杂质的非特异性吸附; 在离子强度太高的情况下,由于间隔臂上的碳氢链疏水性增强,也可能 产生非特异性吸附 因此,缓冲液的离子强度应适中(100~500mmol/L)
第七章 层析分离技术(4)
本章内容



7.1 层析技术导论 7.2 凝胶过滤层析 7.3 离子交换层析 7.4 亲和层析 7.5 固定金属离子亲和层析 7.6 疏水作用层析 7.7 反相层析
7.4 亲和层析

一、基本原理及特点 二、亲和层析的基本组成 三、亲和层析的操作过程 四、亲和层析存在的问题 五、举例:利用谷胱甘肽-亲和层析树脂 纯化GST-融合蛋白
(1)溴化氰法

溴化氰在碱性条件下与多糖上的羟基反应导入氰酯键或亚氨碳酸酯 到基质上,进而与配基偶联。
优点: (1)适用于含羟基多糖及含羟基的合成基质 (2)用于含伯氨基小分子配基及伯氨基大分子配基的偶联 (3)操作步骤简单,重现性好。 (4)偶联条件温和,特别适用于偶联敏感性生物大分子。 缺点: (1)形成的异脲键易产生非特异性吸附, (2)共价键不稳定,配基容易脱落, (3)活化操作危险性大(CNBr为剧毒药品,操作需在通风橱中进 行),反应后的残余液需经处理再排放。

层析分离技术图文

层析分离技术图文
水处理中的有机物去除
利用层析分离技术,如活性炭吸附、 聚合物吸附等,可去除水中的有机污 染物,提高水质,保障饮用水安全。
05
层析分离技术的未来发展与挑战
新材料与新技术的研究与应用
新型吸附剂
研究具有高选择性、高吸附容量的新型吸附剂,以提高层析分离 的选择性和效率。
新型固定相
探索具有优异性能的新型固定相,以适应不同分离需求和条件。
层析分离技术图文
• 层析分离技术概述 • 层析分离技术的分类 • 层析分离技术的操作流程 • 层析分离技术的应用实例 • 层析分离技术的未来发展与挑战
01
层析分离技术概述
定义与原理
定义
层析分离技术是一种基于不同物质在 两相中的分配系数不同而实现分离的 物理分离方法。
原理
利用流动相和固定相的相互作用,使 混合物中的各组分在固定相和流动相 之间进行吸附、脱附、溶解、挥发等 过程,从而实现各组分的分离。
上样量控制
控制上样量,确保样品在柱子上得 到有效分离。
洗脱
洗脱液选择
根据分离需求选择合适的洗脱液,如有机溶剂、缓冲液等。
洗脱方式
采用适当的洗脱方式,如分段洗脱、梯度洗脱等。
洗脱速度控制
调节洗脱速度,确保样品得到充分分离。
检测与收集
检测方式
01
根据待分离组分的性质选择合适的检测方式,如紫外可见光谱、
纳米技术
利用纳米材料和纳米技术,开发具有高分离性能的纳米尺度层析分 离材料。
提高分离效率与分辨率
优化分离条件
深入研究层析分离的原理和动力 学过程,优化分离条件,提高分 离效率和分辨率。
联用技术
将层析分离与其他分离技术联用, 实现多维分离,进一步提高分离 效果。

9.4 层析分离法 PPT课件

9.4 层析分离法 PPT课件
第九章 分析测定中的 分离方法
第四节 层析分离法
9.4.1 柱层析法
9.4.2 平面层析法
2019/1/11
9.4.1 柱层析法
1. 吸附柱层析法
以吸附剂为固定相(硅胶、氧化铝和活性炭等)。 根据试样的性质、吸附剂的活性和流动相的极性这 三种因素来选择适宜的条件。 被分离的组分极性较强,应选择吸附性能较弱的吸 附剂,同时选择极性较强的洗脱剂;或反之。 吸附柱层析法可用于芳香族化合物的分离、倍半萜 类烯物的分离等。
装置简单、操作简便。
常作为一种不挥发高沸点有机物、生物大分子混合物 的有效、快速、简便的分离分析手段而被应用。
平面层析法与其他色谱分离有着相同或相似的分离机 理。
2019/1/11
平面层析法
纸层析和薄层层析流 动相的移动是依靠毛细作 用。 将试样点在色谱滤纸 或层析板的一端,并将该 端浸在作为流动相的溶剂 (常称之为展开剂)中, 随着溶剂向上的移动,经 过试样点时,带动试样向 上运动。
2019/1/11
凝胶柱层析法
应用 生化领域,如蛋白质、氨基酸、核酸、肽类等生物物 质的分离和制备; 抗菌素的分离、纯化,肝炎病毒的分离等; 高聚物的相对分子质量和分子质量分布测定。
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9.4.2 平面层析法
平面层析法(planar chromatography)主要包括薄层层 析法和纸层析法两大类。 薄层层析:将固定相涂布于平面载板上。 纸层析:直接以滤纸作为固定相。
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缺点:
• 缺点: 分离效率较低,不适用于挥发性试 样分离。定性定量不便。 • 应用:平板色谱法在染料、农药、医药、 有机酸碱类化合物、糖类化合物、氨基酸、 蛋白质及中草药中有效成分的分离分析中经 常被使用。也可以用于无机离子的分离。还
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女性更年期保健原则
推迟更年期并减轻反应 补钙预防骨质疏松 粘膜修复预防感染 纠正失眠调节情绪
女性更年期健康处方
推迟更年期并减轻反应 大豆异黄酮类(菲梦九宝,美丽元等) VE胶囊,DHEA 补钙预防骨质疏松 纳米钙,钙镁锌胶囊,坤宁健骨胶囊 粘膜修复预防感染 天然蔓越酶 纠正失眠调节情绪 松果体素 , 圣.约翰草复合营养胶囊
谢 谢!
糖尿病只是这座冰山露出水面的一角。
预防胰岛素抵抗原则
早期预防胰岛素抵抗原则; 1.提倡合理饮食适量运动,以消耗体内储存
的脂肪及热量. 科学安排食疗,多食苦瓜、南瓜、豌豆、茶
叶、谷物、坚果等有降糖作用的食品 2调节内分泌免系统而增强胰岛素敏感性的
作用. 依科元蜂胶 天赢虫草 纽海尔斯花旗参
女性补充DHEA,也可改善女性功能,推迟缓解 女性更年期
什么是胰岛素
胰岛是散在胰腺细胞之间的细胞 团。仅占胰腺总体积的1%~2%。 胰岛细胞主要分为五种,其中A 细胞占胰岛细胞总数约25%,分 泌胰高血糖素;B细胞约占胰岛 细胞总数的60%,分泌胰岛素,调 节糖的代谢。
什么是胰岛素抵抗
随着年龄增长,身体肥胖,组织细胞对胰岛素则不 够敏感,也可以说,组织细胞对胰岛素有了抵 抗。
脑垂体 松果体是全身内分泌系统的调节中枢, 通过反馈饥机制调节内分泌平衡。
甲状腺素主要调节身体的能量代谢 胸腺调节身体免疫系统 肾上腺皮质激素调节全身应激反应 胰岛素对葡萄糖代谢起着重要作用 性腺调节男女性征及性功能
女激素影响女性一生
女性独有的生理心理特点
复杂易病的女性性器官(卵巢、子宫、外阴、乳房) 复杂多变的女性内分泌 (年、月、日) 复杂多重的心理压力(衰老、情感、社会、家庭)
女性早到多变的更年期
女性卵巢自35~37.5岁即开始生理性退化 我国女性的更年期年龄大部分在45岁—55岁之间. 绝经的平均年龄在49.5岁
女性月经与内分泌
女性更年期综合征
在中国约有60%80%的妇女会发生更 年期综合征症状。
早期症状:月经失调、 潮热盗汗、情绪抑郁、 多疑、易怒.
后期症状: 有泌尿生 殖道萎缩、性生活困 难、骨质疏松和其他 老年病对妇女生命带 来严重危害
《层析分离技术》PPT课件
内分泌调节与抗衰老
赵军
什么是内分泌腺及内分泌 激素?
内分泌腺是人体内 一些无输出导管的 腺体。它的分泌物 称激素。对整个机 体的生长、发育、 代谢和生殖起着调 节作用。
内分泌 激素的生理作用
胰岛素抵抗是指胰岛素作用的器官、组 织如肝脏、肌肉、脂肪等,对胰岛素敏 感性降低或消失而引起的一系列病理变 化与临床疾病
胰岛素抵抗综合征
胰岛素抵抗综合征是指一组共同具有胰岛素 抵抗这种病理、生理特点的代谢性疾病的综 合。
如糖尿病、糖耐量低减、中心性肥胖、高 血压、高甘油三脂血症、动脉粥样硬化、冠 心病、微量白蛋白尿、高尿酸血症、高密度 脂蛋白(HDL)浓度下降、癌症恶病质等都 伴有胰岛素抵抗。
男性激素的生理作用
男性激素是由睾丸及肾上腺皮质产生 生理作用
1.促进男性性征的发育成熟 2.维持男性正常性功能 3.提高蛋白质同化作用.促进肌肉发育,增强体 质 4.提高能量代谢
DHEA的作用
50岁后,DHEA明显减少,男性功能及体力开始 明显下降.
男性补充DHEA,可显著改善男性功能.增强体 质.推迟男性更年期
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