牛卵母细胞冷冻保存研究进展

在不 孕症 治疗 方面 发挥 重 要 作用 ． 克服 ＾ 肛胎 冷 冻
保 存 带 来 的伦 理 、 德 和 法 律 上 的 争 议 和 限 制 。 道 １ 牛 卵 母 细 胞 冷 冻 保 存 方 法 １１ 慢 速 冷 冻 、 速 解 冻 法 ． 快 卵 母 细 胞 用 冷 冻 保 护 剂 平 衡 处 理 ． １ ｒｉ 以 【／ ｎ ａ
１ ２ 玻 璃 化 法 ．
体都 没 有恢复 到正 常形状 。由于正 常纺锤 体 的构建 既需要 染 色体 激 括微 管 蛋 白 聚合 反应 ， 又需 要 中心 粒物质 （ Ｃ ） Ｐ Ｍ 击组织 它 。 Ａｍａ ｎ等认 为 ， 牛卵母 细胞 微 管 大 部分 限 于减 数 分 裂 纺 锤 体 ， 构 成 Ｐ 而 ＣＭ 的 很少 。牛卵母 细胞经 冷却 和 复温后恢 复正常 纺锤体
在 细 胞 质 中 ， 管 是 由 与 自 由 微 管 池 平 衡 的 聚 微
合 微管 蛋 白组成 的 。 卵 母细胞 中 ， 在 微管 主要 组成纺 锤体 。 微管 是 正在发育 的 卵母 细胞 成熟 所必需 的 ， 将 引导决 定染 色体 如坷分 布 。微管骨 架具有 对环 境 条 件及 理化 因子作 出反应 而迅速 集合 和解 聚 的惊 人 能 力， 温度是微 管 动力学 中最敏 感 的因子之 一 。 由冷 冻 伤 害而引起 的任 何细胞 骨架 畸 型都将对 解冻 后 卵母 细 胞 的进一 步发育 造成 影 响 Ａｍａ ｎ等 （９ ４ 研究 了冷 却 及复 温对 牛体 外 成 １ ９） 熟 卵母 细胞 纺锤 体 的影 响 ， 结果表 明 ， 卵母 细胞 置 将
的能 力 ， 到 Ｐ Ｍ 量 的限制 。 受 Ｃ ２２ 婶透 明带 的影 响 ，
ＲａＩ Ｆ ｈ （ ９ ５ 首次 用 玻 璃 化 法 成 功 地 冷 和 ａ ｙ １８ ） Ｌ
冻 ８细胞小 鼠胚 胎 。此后 人们 又建 立 １许多玻 璃化 ｒ
溶 液 对 玻 璃 化 方 法 进 行 改 进 ， 得 目前 牛 卵 母 细 并 取 胞 冷 冻 保 存 的最 好 效 果
维普资讯
动 物 斟 学 功 物 医 学
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第 １ ９营第 ｌ Ｌ 第 ？ 期 ０期 ）
牛 卵 母 细 胞 冷 冻 保 存 研 究 进 展
刘海 军 ． 薛 俊＝ 钱 菊 汾 。
【 １天 津 市 畜牧 兽 医研 究 所 ￣（ １ 天津 市农 业生 物 工 程 研 究 中心 ０ｉ ： ｌ２ ３ 北 农 林科 技 太学 畜牧 兽 医学 院 ， 西 扬 凌 ７２ ０ ） ． 陕 １ １ ０ ３ ０ ０ １２ ９
因 动 物 研 制 等 胚 胎 工 程 技 术 提 供 更 方 便 和 更 多 的 材
料 来源 ： 卵Biblioteka 细 胞 冷 冻保 存 与 精 子和胚 胎 冷冻 保 存
一
起， 可建立种 质 库 ， 为地方 优 秀家畜保 种和珍 稀 濒
危 野 生 动 物 保 护 提 供 新 途 径 ； 母细 胞 冷 冻 保 存 ， 卵 ｒ
体 形 态均 明 显 变 化 ， 纺 锤 体 退 化 ， 完 全 缺 乏 ； 或 或
２ ０ｍｉ 后 ， 有 ７ 的 卵 母 细 胞 台 有 正 常 的 ５ ３ ｎ Ｃ 只
纺 锤 体 。将 卵母 细胞 置 于 ４Ｃ和 ２ ０ ｎ， 于 ５ ３ ｍｉ 再 Ｃ
３ ９Ｃ孵 育 ３ ｎ后 ， 对 照 组 卵 母 细 胞 相 比 ． 锤 ０ｍｉ 与 纺
ｉ７ ， ｈｔｉｇ ａ 首 次 报 道 来 自玲 冻 解 冻 ９ ７年 Ｗ ｉ ｎ ｈ ｍ ｔ 的 小 鼠 卵 母 细 胞 的 活 仔 ， 后 研 究 者 对 家 畜 主 要 是 此 牛 的 卵母 细 胞 冷 冻 保 存 进 行 了 探 索 ． 获 得 为 数 很 并
１ １ 婶 微 管 的 影 响 ．
的速 度降 温 至 一５ 一７ 植 冰 ， （～ Ｃ， 然后 以 ０ １ ． （～
１ ｒｉ 的 速 度 降 温 至 一３ （一 ａｎ Ｃ／ ０ ４ 、投 入 液 氮 。 ０【， ２ 、ｍｉ 以 上 的 速 度 解 冻 ． 冻 一 般 在 室 温 或 ５［ ／ ｎ 解
３ ７Ｃ进 行 。
师 母 细 胞 净 本 恽 存方 法厦 净 ． 存蔚 阜 郎母 细 胞 结 均 和 发 育 能 由曲 影 响 。 末怿
关键词 ： ｝ 二 ｌ 卵母 细胞 ； 珠 方 涪 ； 啕 ； 育 电 力 结 发 中 图 分 类 号 ： ８ ｓ １ ４ 文献 标识 码 ： Ａ
文 覃 塥 号 ；ｏ ８ ０ ８ （ ０ ２ Ｉ ０ １ ０ Ｉ ０ ● １ ２ ０ ）１ １ ０ ９ ４
１ ３ 超 快 速 冷 冻 法
透明 带 和 质膜 下面的皮 质颗 粒 ， 涉 及控 制 正 是 常受 精的结 构 ． 者 在受精地 点 释放酶 ， 后 改变 了透 明
带 上 的 搪 蛋 白 （ 透 明 带 反 应 ）从 而 防 止 多 精 受 精 称 ， 如 果 这 一 系 统 在 冷 冻 保 存 过 程 中 被 提 前 激 活 ， 然 显 卵母 细胞 的正 常受精将 会 受到影 响 。 冯 怀 亮 等 （ ５ 用 玻 璃 化 方 法 冷 冻 牛 体 外 成 熟 １９ ） ９
摘 要 ： 过 随 时 嗵 旭 提 供吴 有 发 育 能 方 日 母 蛔 抱 ， 通 ｊ 祁母 蜘 胞 垮 彝 琢存 赋 予体 外 受 精 、 移植 、 檀 转 基匿 等珏 胎 工 程 技 术 曲 槛 夏活 陛 ｆ 辟 释 氟 危 野 生 动 钧 的 傈砷 提 供 技 求 参考 综 述 了牛 却
于 ４０ １ ６ ～ ０ｍｉ ． ｎ 与置 于 ３ 对 照 组 相 比 ｔ 锤 ９ Ｃ的 纺
少 的 来 自冷冻 的牛体 外 成熟 和 未成 熟 卵母细 胞 的 牛犊 卵母 细胞 冷冻 方 法借鉴 ｒ胚胎 冷冻 方法 ． 麒 但
效 果 远 不 及 胚 胎 冷 冻 水 平
卵母 细胞 冷冻保 存 可 为体外受 精 、 梭移植 、 基 转