高二生物动物细胞工程1
高二生物2.2动物细胞工程(第1课时)学案
第2章细胞工程第2节动物细胞工程（第1课时）【学习目标】1.认同动物细胞培养是模拟体内生理条件在体外进行的培养，由此分析、推出培养动物细胞需要满足的基本条件。
2.尝试建构动物细胞培养基本流程。
3.认同动物细胞培养是动物细胞工程的基础。
4.简述干细胞的应用；通过探讨干细胞在临床上的应用所产生的效益与风险，理性看待生物技术的应用，增强社会责任感。
【重点难点】1.动物细胞培养的过程及条件。
2.干细胞在生物医学工程中的应用。
【学习新知】学习任务一动物细胞培养阅读教材43-45页，完成以下内容：活动1：通过“人造皮肤”事例，概述动物细胞培养的概念。
活动2：认同动物细胞培养是模拟体内生理条件在体外进行的培养，由此分析、推出培养动物细胞需要满足的基本条件。
（1）分析机体给体内的细胞提供了哪些适宜的条件使其能够维持正常的生命活动？（2）动细胞培养实际上是在体外模拟体内的生理条件进行的培养，你认为体外培养动物细胞需要满足哪些条件？活动3：尝试建构动物细胞培养基本流程。
（1）依据动物细胞培养的概念，初步建构动物细胞培养的流程。
（2）根据教材中“动物细胞培养的过程”的内容，并结合图2-12，思考、回答下列问题：①培养前为什么要将组织分散成单个细胞？②怎样将组织分散成单个细胞细胞？③培养一段时间分裂会受阻,这是为什么？怎样解决这一问题？④什么是细胞贴壁、接触抑制、原代培养、传代培养？（3）在分析、回答问题的基础上完善动物细胞培养的基本流程。
活动4：比较动物细胞培养与植物组织培养有什么相同和不同之处？活动5:完成[自学检测1][自学检测1]1.判断下列有关动物细胞培养的表述是否正确。
(1)培养环境中需要O2，不需要CO2。
（）(2)动物细胞培养要经过脱分化形成愈伤组织。
（）(3)培养液中通常含有糖类、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清。
（）(4)培养瓶中的细胞均需要定期用胰蛋白酶处理，分瓶后才能继续增殖。
（）(5)培养过程除需要无菌、无毒的环境外，还要定期更换培养液。
高中生物专题2细胞工程2.2动物细胞工程2.2.1动物细胞培养和核移植技术学案新人教版选修3
2．2.1 动物细胞培养和核移植技术[学习目标] 1.归纳动物细胞培养的过程、条件及应用。
2.归纳通过动物体细胞核移植技术克隆动物的过程及应用前景。
方式一2003年，四川少年小林点燃鞭炮，导致面部、四肢被严重烧伤并感染。
为了挽救儿子的生命，小林的爸爸、妈妈向医生恳求“割皮救儿”，烧伤整形科主任魏平最终同意进行这场罕见的亲体皮肤移植手术。
为了全覆盖孩子身体上被深度烧伤并发生感染的创面，医生把取自父子俩的皮肤全部剪成指甲盖大小的皮块，儿子和爸爸的皮肤相隔相嵌，估计父亲的皮肤至少能在其儿子身上存活半年甚至更长时间，这就给儿子自身皮肤的生长带来了生机，孩子的痊愈指日可待。
思考：1．小林在皮肤烧伤之后，很容易得病，为什么？2．选取植皮时，理论上选择谁的皮肤最好？为什么？3．自身的健康皮肤是有限的，能不能通过其他途径获得自身的皮肤？方式二古代神话里孙悟空用自己的汗毛变成无数个小孙悟空的离奇故事，表达了人类对复制自身的幻想。
1978年，美国科幻小说家罗维克(D.Rorvick)写了一本名叫《克隆人》(The Cloning of a man)的书，内容是一位富商将自己的体细胞核移植到一枚去核卵中，然后将其在体外卵裂成的胚胎移植到母体子宫中，经过足月的怀孕，最后生下了一个健康的男婴，这个男婴就是一个克隆人。
现在，克隆人已经不是科幻小说里的梦想，而是呼之欲出的现实。
由于克隆人可能带来复杂的后果，一些生物技术发达的国家，现在大都对此采取明令禁止或者严加限制的态度。
克隆人，真的如潘多拉盒子里的魔鬼一样可怕吗？我们应该怎样正确看待克隆技术呢？一、动物细胞工程和动物细胞的培养1．动物细胞工程2.动物细胞培养 (1)概念：从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。
(2)过程动物组织块或器官――――――――――→剪碎胰蛋白酶(或胶原蛋白酶)处理单个细胞――→加培养液细胞悬液――→初次培养原代培养―→传代培养。
人教版生物高二年级《动物细胞工程》教学设计
第课，课题二动物细胞工程第课时，课型新授。
总序第个教案。
编写时间执行时间教学目的与要求：重点难点：教具：幻灯片。
教学程序：（导入）动物细胞工程常用的技术手段有动物细胞培养、动物细胞融合、单克隆抗体、胚胎移植、核移植等。
其中，动物细胞培养技术是其它动物细胞工程技术的基础。
一、动物细胞培养：许多动物细胞能分泌蛋白质，如抗体等。
但是单个的动物细胞分泌的蛋白质的量是很少的，怎样才能获得大量的分泌蛋白质呢？这就可以借助于大规模的动物细胞培养了。
动物细胞培养所用的培养液（液体培养基）与植物组织培养所用的培养基的成分是不同的。
（一）动物细胞培养液：常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。
（二）动物细胞培养材料：培养的动物细胞大都取自动物胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或者组织。
（三）动物细胞培养的过程：①分离细胞（胰蛋白酶等处理）②原代培养③传代培养。
将组织取出来后，先用胰蛋白酶等使组织分散成单个细胞，然后配制成一定浓度的细胞悬浮液，再将该悬浮液放入培养瓶中，在培养箱中培养，这个过程叫做原代培养。
细胞在培养瓶中贴壁生长。
随着细胞的生长和增殖，培养瓶中的细胞越来越多，需要定期地用胰蛋白酶使细胞从瓶壁上脱离下来，配制成细胞悬浮液，分别装到两个或多个培养瓶中培养，这称为传代培养。
原代培养的细胞一般传到10代左右就不容易传下去了，细胞的生长就会出现停滞，大部分细胞衰老死亡。
但是有极少数的细胞能度过“危机”而继续传下去，这些存活的细胞一般能传到40~50代，这种传代细胞叫做细胞株。
细胞株细胞的遗传物质没有发生改变。
当细胞株传到50代以后又会出现“危机”，不能再传下去。
但是有部分细胞的遗传物质发生了改变，并且带有癌变的特点，有可能在培养条件下无限制地传代下去，这种传代细胞叫做细胞系。
注：○a胰蛋白酶处理使细胞分散。
○b在培养液中培养，这时的培养称为原代培养。
○c○d时的培养称为传代培养，以50代为界限。
○c时的细胞称为细胞株，之后称为细胞系。
高二生物细胞工程知识点
高二生物细胞工程知识点细胞工程是一门涉及生物学、生物工程和医学等学科的交叉学科，通过对细胞的研究和使用，旨在改善生物体的功能和生产效率。
本文将介绍高二生物课程中常见的细胞工程知识点，包括细胞培养、基因工程、干细胞以及生物制药等。
一、细胞培养细胞培养是细胞工程的基础，它指的是在体外条件下维持细胞的生长和繁殖。
常见的细胞培养技术包括细胞传代、细胞凋亡和细胞分化等。
细胞培养对于生物学研究、药物研发以及组织工程等领域具有重要的应用价值。
二、基因工程基因工程是利用分子生物学技术对细胞的遗传物质进行改变和重组的过程。
在细胞工程中，基因工程被广泛应用于生产重组蛋白、转基因生物以及基因治疗等方面。
通过基因工程技术，可以增强生物的抗病能力、改善农作物的产量以及研发新药等。
三、干细胞干细胞是指具有自我更新和多潜能分化能力的未分化细胞。
干细胞在细胞工程中扮演重要的角色，可以用于组织修复、再生医学以及器官移植等方面。
目前，干细胞研究已取得重要突破，但仍存在伦理道德以及应用安全性等问题，需要进一步深入研究。
四、生物制药生物制药是利用生物技术进行药物研发和生产的领域。
细胞工程在生物制药中具有广泛的应用，包括生产重组蛋白药物、生物仿制药以及基因治疗药物等。
通过细胞工程技术，可以生产更加安全、有效的药物，并满足人们不断增长的医疗需求。
综上所述，细胞工程作为一门新兴的学科，涉及到细胞培养、基因工程、干细胞以及生物制药等多个方面的知识点。
通过深入学习和理解这些知识点，我们可以更好地掌握细胞工程的核心原理和应用技术，为未来的学习和研究打下坚实的基础。
希望本文对于高二生物学习者有所帮助，激发他们对细胞工程的兴趣和热情。
动物细胞工程(课件)-高二生物人教版(2019)选择性必修3
已成功的动物细胞融合实例：
生物种类 酵母菌—鸡 人—胡萝卜 人—小鼠
细胞来源
成功年代
原生质体—血红细胞
1975年
腹水癌细胞—原生质体
1976年
纤维肉瘤细胞—畸胎瘤细胞 1978年
一、动物细胞融合
概念： 指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞 的过程。
结果： 形成单核的杂交细胞 原理： 细胞膜的流动性
4、气体环境 O2和CO2（95%空气和5% CO2 ）
维持培养液的pH
植物组织培养和动物细胞培养的比较
比较项目 原理
培养基性质 培养基特有成分
培养结果 培养目的
植物组织培养
细胞的全能性
固体培养基
蔗糖 植物激素
植物体
快速繁殖、培育 无病毒植株
动物细胞培养 细胞增殖
液体培养基
葡萄糖 动物血清
细胞株、细胞系 获得细胞或细胞
2、保护濒危物种；
3、医药卫生领域生产 医用蛋白质及组织器官 的移植；
4、了解胚胎发育和衰 老过程；追踪研究疾病 的发展过程和治疗疾病；
体细胞核移植技术存在的问题：
1、成功率比较低（平均不到10%）； 2、大多存在健康问题； 3、克隆动物食品安全问题。
此外，体细胞核移植后的重组细胞直接发育成新个体 属于无性繁殖，产生的后代无更大变异性，而环境是 多变的，易造成该个体适应能力降低，易被淘汰。
细胞群
产 生
化学性质单一、 特异性强的抗体 （单克隆抗体）
二、单克隆抗体
1975年，两位科学家创 造性地解决了这个问题
1984年两人因此获得诺 贝尔生理学﹠医学奖
科勒
米尔斯坦
一个(免疫过的)B细胞 一个骨髓瘤细胞
第二章 第三节 动物细胞工程及其应用 课件2021-2022学年高二下学期生物苏教版选择性必修3
缺点
病毒引入细胞，可能会对细胞 的生命活动产生一定的干扰 有一定毒性，对某些细胞（如 卵细胞）不适用 无（已被广泛应用，细胞融合 的重要技术手段）
4．融合过程 在各种方法的促融合作用下，细胞质膜出现黏连、破裂和融合， 进而发生细胞质融合和细胞核融合，最终形成杂种细胞。
为什么未灭活的病毒不 能作为诱导剂？
生产实验动物和转基因动物、拯救濒危动物、保护动物资源都具有 一定的应用价值。
1．在畜牧业生产中，利用体细胞核移植技术可以加速家畜遗传 改良的进程，促进优良畜群的繁育。
2．在保护濒危物种方面，利用体细胞核移植技术增加动物数量 的工作也已经初见成效。
二、动物细胞培养技术及其应用
20世纪初，一个美国生物学家从蛙胚中分离出一些神经组织，将 这些神经组织和分散的单个细胞在无菌条件下置于青蛙淋巴液中进 行培养，这些组织和细胞存活了数周之久。
（1）为什么从胚胎中选择细胞，这部分细胞具有什么特点？ 分裂能力强，分化程度低。
（2）为什么需要在无菌条件下培养？ 防止杂菌污染培养液和细胞。
（3）为什么要将组织和细胞放在淋巴液中培养？ 不同分裂状态的蛙胚 模拟青蛙体内环境。
（一）动物细胞培养技术 1．概念 动物细胞培养技术是指从动物体内获得相关组织，分散成单个细
各种诱导融合方法的优缺点和具体实例。
3．诱导融合的方法
阅读教材66~67页动物细胞融合的内容，根据表格提示思考： 各种诱导融合方法的优缺点和具体实例。
类型
实例
生物 仙台病毒、疱疹病 方法 毒、腮腺炎病毒
化学 聚乙二醇 方法
物理 电场诱导 方法
优点
仙台病毒在细胞融 合中应用广泛 使用方便，诱导细 胞融合成功率高 对细胞伤害小，易 操作、控制和观察
人教版高二生物选修三知识点总结：专题二细胞工程
选修3《现代生物科技专题》知识点总结专题2 细胞工程（一）植物细胞工程1.植物组织培养技术（1）原理：植物细胞的全能性全能性表达的难易程度：受精卵＞生殖细胞＞干细胞＞体细胞；植物细胞＞动物细胞脱分化再分化发育（2）过程：离体的植物器官、组织或细胞愈伤组织胚状体植物体常用的植物激素生长素和细胞分裂素。
（3）用途：微型繁殖、作物脱毒（选材应该选择茎尖组织）、制造人工种子、单倍体育种（最大的优点是明显缩短育种年限，得到的全为纯种）、筛选突变体、细胞产物的工厂化生产。
（4）地位：是培育转基因植物、植物体细胞杂交培育植物新品种的最后一道工序。
2.植物体细胞杂交技术（1）原理：细胞膜的流动性、植物细胞的全能性（2）过程：去壁的方法：酶解法；诱导融合的方法：物理法包括离心、振动、电激等。
化学法是用聚乙二醇（PEG）作为诱导剂。
（4）意义：克服了远缘杂交不亲和的障碍。
（二）动物细胞工程1. 动物细胞培养（1）概念：动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和繁殖。
（2）原理：细胞增殖（3）动物细胞培养的流程：取动物组织块（动物胚胎或幼龄动物的器官或组织）→剪碎→用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养瓶中进行原代培养→贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞继续传代培养。
（4）细胞贴壁和接触抑制：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。
细胞数目不断增多，当贴壁细胞分裂生长到表面相互抑制时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。
（5）动物细胞培养需要满足以下条件①无菌、无毒的环境：培养液应进行无菌处理。
通常还要在培养液中添加一定量的抗生素，以防培养过程中的污染。
此外，应定期更换培养液，防止代谢产物积累对细胞自身造成危害。
②营养：合成培养基成分：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等。
通常需加入血清、血浆等天然成分。
3.1 细胞培养是动物细胞工程的基础(课件)高二生物(浙科版2019选择性必修3)
培养瓶
培养瓶或培养皿壁要求：表面光滑、无毒、易于贴附。 所有的动物细胞都会贴壁生长吗？ 来源于血液、淋巴组织细胞以及某些肿瘤细胞不需要贴附在 支持物上，而是呈悬浮生长状态。
（2）接触抑制 解除方法 分瓶培养 贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞通常会停止分裂增殖。
瓶壁上的细胞层数是： 一层（或单层）
思考：在胞造成损伤吗？
【答案】使用胰蛋白酶消化处理组织块时，要控制好作用时间， 因为胰蛋白酶不仅能分解细胞间的蛋白质，长时间作用还会分 解细胞膜蛋白等，会对细胞造成损伤。
C （2021·1月浙江选考）下图为动物成纤维细胞的培养过程示
意图。下列叙述正确的是（ ）
胞，使之分散成单个细胞。
(3)④和⑥的过程都要把分散的细胞制成___细___胞___悬___液__。 (4)过程⑤进行的细胞培养是_____原__代___培___养___，细胞适于 ___贴__附____生长增殖。 (5)过程⑦进行的细胞培养是__传___代__培___养___，培养多代后，部 分细胞的__遗__传___物___质___会发生改变。继续培养时，少部分细 胞发生了__突___变____，朝着等同于癌细胞的方向发展。
第三章 动物细胞工程
第第一 二二节节 体 神神液 经经调 系系节统统是通通通过过过下下化丘丘学脑脑信控控号制制实内内现分分的泌泌调系系节统统
第一节 细胞培养是动物细胞工程的基础
第一节 体液调节是通过化学信号实现的调节
动物细胞的适宜条件
目
动物细胞培养的过程
录
动物细胞培养的特点、应用
动物细胞工程常用的技术手段包括动
（3）要求：一般来说，原代培养的贴壁细胞达到生长基质的80% 表面面积后可进行传代培养。若传代过晚，可影响下一代细胞的动 能状态。贴壁生长的细胞需经酶（胰蛋白酶或胶原蛋白酶）消化制 成细胞悬液后才能传代。
第二章 细胞工程-【必背知识】2021-2022学年高二生物章节知识清单人教版2019选择性必修3
新人教版生物学选择性必修3《生物技术与工程》知识梳理第二章 细胞工程 第一节 植物细胞工程细胞工程： 细胞工程是指应用细胞生物学 、分子生物学 和发育生物学 等多学科的原理和方法，通过细胞器、细胞或组织水平上的操作，有目的地获得 特定的细胞、组织、器官、个体 或其产品的一门综合性生物工程。
1．原理和方法：细胞 生物学和分子 生物学。
2．操作水平：细胞 水平或细胞器 水平。
3．目的：按照人的意愿来改变细胞内的遗传物质 或获得细胞产品 。
一、植物细胞工程的基本技术1. 细胞的全能性：细胞经_分裂_和_分化_后，仍然具有_产生完整生物体_或__分化成其他各种细胞__的_潜能_，即细胞具有_全能性_。
2. 细胞具有全能性的原因（物质基础）生物体的细胞中都含有该物种的全套遗传物质_，都有_发育成为完整个体所需的全部遗传信息_。
1. 生物体生长发育过程中细胞不表现全能性的原因（不离体的细胞无法表现出全能性的原因） 在特定的时间时间和空间条件下，细胞中的基因会选择性地表达 2. 全能性大小比较（1）受精卵、体细胞、生殖细胞 __受精卵＞生殖细胞＞体细胞____（2）分化程度高的细胞、分化程度低的细胞__分化程度低的细胞＞分化程度高的细胞_____ （3）分裂能力强的细胞、分裂能力弱的细胞 __分裂能力强的细胞＞分裂能力弱的细胞____ （4）植物细胞、动物细胞__植物细胞＞动物细胞__________ （5）幼嫩的细胞、衰老的细胞__幼嫩的细胞＞衰老的细胞____ （一）植物组织培养技术1. 概念：植物组织培养是指将_离体_的植物_器官__、_组织_或_细胞_（称为_外植体_）等，培养在人工配制的_培养基_上，给予_适宜的培养条件_，诱导其形成__完整植株_的技术。
2. 原理：__植物细胞的全能性__3. 生殖方式：_无性生殖__4. 分裂方式：__有丝分裂__5. 过程：外植体――愈伤组织―再分化胚状体或丛芽――→发育植株脱分化：在一定的_激素_和_营养_等条件的_诱导_下，_已经分化_的细胞_失去其特有的结构和功能__，转变成_未分化的细胞__的过程。
2.2动物细胞工程课件-高二下学期生物人教版(2019)选择性必修3
iPS诱导方法？ 细胞发 1、转录因子转化法
生转化
干细胞中有一些特殊的转录因 子，对于有重要作用 转录因子基因导入动物体细胞
iPS细胞
2.化学诱导法 分化 通过特定的化学小分子组合的
作用，诱导动物体细胞转化为 干细胞
二 动物细胞融合技术与单克隆抗体
1.传统方法？缺陷？ 2.若要得到大量的单一抗体，我们该如何去做？
②成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种 培育等的重要手段。 ③利用细胞融合技术而发展起来的杂交瘤技术，为制 造单克隆抗体开辟了新途径。
二 动物细胞融合技术与单克隆抗体 2.单克隆抗体制备过程
获得能产生特定抗
体的B淋巴细胞
多种
选择性培养基 第一次筛选
一个B淋巴细胞
克隆化 培养
B淋巴细胞群
产生
单克隆抗体
存在什么问题？ 浆细胞不能增殖
单克隆抗体（纯度高、特异性强、可大量制备）
1975年，英国科学家米尔斯坦和德国科学 家科勒设计实验获得了单克隆抗体。 1984年获得诺贝尔生理学或医学奖。
要实现这一方案，需要解决哪些困难？
细胞融合、筛选、大规模培养
二 动物细胞融合技术与单克隆抗体 1.动物细胞融合技术
个体的能力
官甚至_个___体__
分化成心肌细胞、神经元和 造血干细胞等
造血干细胞用于治疗白 血病；神经干细胞用于 治疗帕金森病、阿尔茨 海默病；精原干细胞
治疗小鼠的镰状细胞 贫血、阿尔茨海默病、 心血管疾病等
转入相关因子
取成纤维细胞等
病 人
移植
神经元 胰岛细胞
血细胞
肝细胞
肠上皮细胞 心肌细胞
iPS细胞用于治疗人类疾病示意图
种类
人教版教学教案【人教版】10-11学年高二生物(选修)学案——第四章第二节学案动物细胞工程
选修本第15课时 动物细胞工程淮安中学 陈同林知识精讲一、动物细胞工程常用技术——动物细胞培养、动物细胞融合、单克隆抗体、胚胎移植、核移植等； 技术是其他动物细胞工程技术的基础。
二、动物细胞培养1．过程： 2．应用：① 大规模的生产重要价值的蛋白质生物制品 ② 烧伤病人植皮③ 培养的动物细胞用于检测有害物质④ 培养正常或病变细胞由于科研（如海拉细胞系）三、动物细胞融合1、 动物细胞融合相当于植物体细胞杂交的 过程。
2、动物细胞融合与植物细胞融合的基本原理 同，诱导融合的方法基本相似，只是除 法、 法外，还用到 方法——以 作为诱导剂。
四、单克隆抗体概念：用单个B 淋巴细胞进行 ，也就是通过 ，形成 ，这样的 就可能产生出化学性质 、 的抗体——单克隆抗体。
制备：将免疫B 淋巴细胞与骨髓瘤进行细胞融合，经过 后得到 细胞。
这种细胞经过 后能产生特定 。
将这样的细胞群在 条件下或注射到 内增殖，这样就可以获得大量的单克隆抗体了。
应用：① 疾病诊断、治疗、预防，与常规抗体相比特异性强、灵敏度高；② 治疗癌症——“生物导弹”。
题例领悟例1．动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是Ａ．诱导融合的方法完全相同 Ｂ．所用的技术手段完全相同Ｃ．所采用的原理完全相同 Ｄ．都能形成杂种细胞解析：原理不同，方法和技术手段基本相同，但不完全相同。
答案：D例2．下图可表示细胞融合技术的一些过程，请巨图回答：（1）若A 、B 细胞为动物细胞，从A 和B 细胞到C 细胞的过程中，常用 作为 来诱导融合。
（2）若A 、B 细胞为植物细胞，那么这样的细胞已经用酶降解脱掉了 。
这种酶可能是 酶，由此生成的A 和B 细胞称为 。
（3）若A 细胞为骨髓瘤细胞，B 细胞为B 淋巴细胞，那么D 细胞称为 细胞。
由D 细胞连续分裂产生大量细胞的过程，称为 过程。
这种细胞既能无限繁殖，又能产生 。
解析：略。
答案：（1）灭活的病毒 诱导剂 （2） 细胞壁 纤维素 原生质体（3）杂交瘤细胞 细胞培养 单克隆抗体 C 细胞D细胞A 细胞B 细胞自我评价一、选择题1．用动物细胞培养技术使细胞传到50代以后仍能传下的传代细胞称为Ａ．原代细胞 Ｂ．传代细胞 Ｃ．细胞系 Ｄ．细胞株2．不能人工诱导原生质体融合的方法是Ａ．振动 Ｂ．刺激 Ｃ．PEG 试剂 Ｄ．重压3．下列细胞中，不具有细胞全能性特点的细胞是Ａ．心肌细胞 Ｂ．神经细胞 Ｃ．根的皮层细胞 Ｄ．木质部导管细胞4．动物细胞融合技术最重要的用途是Ａ．培养多倍体的经济动物 Ｂ．培养具有双亲优良性状的经济动物Ｃ．制备单克隆抗体 Ｄ．A 、B 两项5．关于单克隆抗体不正确的是Ａ．化学性质单一 Ｂ．用有性繁殖获得Ｃ．特异性强 Ｄ．可用于治病、防病6．能提高良种家畜繁殖能力的细胞工程技术是Ａ．组织培养 Ｂ．细胞融合 Ｃ．胚胎移植 Ｄ．细胞核移植7．在动物细胞培养中，所培养的动物细胞大都取自Ａ．幼龄动物器官 Ｂ．老龄动物器官Ｃ．中年动物器官 Ｄ．中年动物器官二、非选择题8．如图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌实验方案。
动物细胞工程测试题
细胞工程测试题1．动物细胞培养过程的顺序是( )①原代培养 ②传代培养 ③胰蛋白酶处理组织，形成单个细胞，制成细胞悬液A ．①②③B ．①③②C ．②①③D ．③①②2．不能作为组织培养、细胞培养或克隆的生物材料的是( )A ．花粉B ．幼叶C ．卵细胞D ．人血中的红细胞3．(2014·南宁二中高二检测)下列与动物细胞培养有关的表述中，不．正确的是( ) A ．动物细胞培养需要无菌、营养、适宜的温度和pH 等条件B ．用胰蛋白酶作用于离体的动物组织，使其分散成单个细胞C ．放入CO 2培养箱中培养动物细胞的主要目的是为了满足细胞对CO 2的需求D ．细胞株一般具有恒定的染色体组型、生化特征等4．动物细胞培养过程中一定可以出现的情况是( )A ．培养保留接触抑制的细胞在培养瓶壁上可形成多层细胞B ．培养过程中多数细胞的基因型会发生改变C ．二倍体细胞的传代培养次数通常是无限的D ．当细胞发生类似于癌细胞的变化时，可进行传代培养5．某研究性学习小组同学在研究细胞工程时，列表比较了植物细胞工程和动物细胞培A ．动物细胞培养是培养单个细胞，植物组织培养是培养组织B ．动物细胞培养可以传代，而植物组织培养不能传代C ．动物细胞培养所用的培养基的成分与植物的不同D ．动物细胞培养过程中可发生遗传物质的改变，而植物组织培养不能7．(2013·高考浙江卷)实验小鼠皮肤细胞培养(非克隆培养)的基本过程如图所示。
下列叙述错误的是 ( )实验小鼠――→甲皮肤组织――→乙皮肤细胞――→丙细胞培养1――→丁细胞培养2A ．甲过程需要对实验小鼠进行消毒B ．乙过程对皮肤组织可用胰蛋白酶消化C ．丙过程得到的细胞大多具有异倍体核型D ．丁过程得到的细胞具有异质性8．(2014·海淀区高二检测)下列对哺乳动物体细胞核移植技术的描述不．正确的是( ) A ．该技术的难度明显高于胚胎细胞核移植B ．通常采用减数第二次分裂期的去核卵母细胞作为受体细胞C ．可通过显微操作法除去卵母细胞核D ．克隆动物是对提供体细胞的动物进行了完全复制9．下列为克隆羊“多利”的培育过程示意图。
动物细胞工程(第1课时)高二生物(人教版2019选择性必修3)
解决
一、动物细胞培养
2.动物细胞培养的过程
思考：1、选动物幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料的原 因？
因为其细胞生命力旺盛，分裂能力强，分化程度低。
思考：2、用胰蛋白酶、胶原蛋白酶处理组织块，使组织块分散成 单个细胞的目的是什么？
①使细胞与培养液充分接触，一方面保证细胞所需的O2和营养物 质的供应，另一方面保证细胞内代谢废物的及时排出；
一、动物细胞培养
2.动物细胞培养的过程 （1）细胞贴壁：在培养瓶悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上。
培养皿
培养瓶
（2）培养瓶或培养皿壁要求：表面光滑、无毒、易于贴附。
一、动物细胞培养
2.动物细胞培养的过程 （3）接触抑制 解除方法 分瓶培养
贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞通常会停止分裂增殖。
②使得在细胞水平操作的其它技术得以实现。
一、动物细胞培养
2.动物细胞培养的过程
思考：3、用胰蛋白酶分散细胞，由此可说明细胞间的物质主要是 什么成分？
主要是蛋白质(胶原蛋白等)。 思考：4、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？那将动物组织分散成单个 细胞时要注意什么问题呢？ 能，应注意时间的控制。因为胰蛋白酶不仅能分解细胞间的 蛋白质，长时间还会分解膜蛋白，对细胞造成损伤。 思考：5、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？ 不能，因为动物细胞培养适宜的PH为7.2—7.4，此环境下胃蛋白 酶（2.0）没有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性较高。
分散
单个细胞
适宜 条件
细胞生长和增殖
2.目的： 获得细胞或细胞产物；不能获得完整动物个体。 3.原理： 细胞增殖（有丝分裂） 培育的终点：细胞
那么，动物细胞的培养需要哪些条件呢？
【课件】动物细胞培养和核移植技术课件2022-2023学年高二下学期生物人教版选修3
6．我国科学家利用基因编辑技术获得一只彻底敲除BMAL1基因（控制 生物节律的核心基因之一）的猕猴甲，发现其出现睡眠紊乱的症状。将
该猕猴的体细胞核植入去核的卵母细胞中得到重组细胞，然后培育重组
A 细胞得到了五只具有睡眠紊乱症状的克隆猴。相关叙述不正确的是（ ）
A．五只具有睡眠紊乱症状的克隆猴DNA完全相同 B．克隆猴的胚胎发育过程中会发生细胞凋亡 C．重组细胞需要物理或化学方法激活，使其完成细胞分裂和发育过程 D．通过上述技术可批量制备疾病动物模型用于科学研究
用胰蛋白酶处理 分瓶传代培养 10代细胞
传代培养
50代细胞
无限传代
思考：
（1）为什么要将组织块分散成单个细胞培养？ 分散成单个细胞便于从培养液中获得营养，排出代
谢废物，利于继续培养。
（2）动物细胞培养能否最终培养成新个体？
不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发 育成新的动物个体。
思考：
（3）胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？ 能够用胃蛋白酶代替吗？ 胰蛋白酶除了消化细胞间的蛋白外，长时间的作
（3）培养首先在B瓶中进行，瓶中的培养基成分 有 _动__物__血__清_________等。在此瓶中培养一段
时间后，有许多细胞衰老死亡，这是培养到第 代，到1这0 时的培养称为__ 。 原代培养
（4）为了把B瓶中的细胞分装到C瓶中，用 胰蛋白酶 处理，然后配置成 细胞悬液 ，再分
装。
学习活动三：
③若获得的克隆动物与供体动物性状不完全相同，从遗传物质的角度分
析其原因是_卵___母__细__胞___的__细___胞__质___中__的___遗__传___物__质___会__对___克__隆__动___物__的___性__状___产__生__影_。响 ④与克隆羊“多莉（利）”培养成功一样，其他克隆动物的成功获得 也证明了__动__物__已__分__化__体_细__胞__的__细__胞__核__具__有__全__能__性_____。
高二生物选修(3)课件：2.2.1动物细胞培养和核移植技术
3、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎 或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因 是这样的组织细胞 （ D ） A.容易产生各种变异 B．具有更强的全能性 C.取材十分方便 D．分裂增殖的能力强
4.动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于 A ） ------------------------------（ A.培养基不同； B.动物细胞培养不需要在无菌条件下进行； C.动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能； D.动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培 养成植株。
动物细胞工程常用的技术
细胞工程的基本技术
植物细胞工程
植物组织培养技术
动物细胞工程
动物细胞核移植技术
植物体细胞杂交技术 动物细胞融合技术 单克隆抗体技术 动物细胞培养技术(基础)
一、动物细胞培养 1、概念：
zxxk
是从动物机体中取出相关组织， 将它分散成单个细胞,放在适宜的培 养基中，让这些细胞生长和增殖
思
考
1、动物细胞培养取材时，一般是取胚胎组织或幼龄动 物的组织或器官，请解释原因？ 2、为什么动物细胞培养过程需将组织分散成单个细胞？ 3、如何将动物组织分散成单个的细胞呢？ 4、如何理解原代培养和传代培养？ zxxk 5、传代培养的细胞能一直传代下去吗？为什么？ 6、动物细胞培养需满足哪些条件？ 7、动物细胞培养有哪些应用？
4、种类
体细胞核移植 （难度较高）
胚胎细胞核移植
5、体细胞核移植的过程（克隆高产奶牛）
高产奶牛 （供体）
MⅡ期 卵母细胞 (去核)
供体细胞培养
重组细胞
重组胚胎 胚胎移植
P49
6、应用
①器官移植
②加快家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育
人教版高中生物选择性必修第3册 动物细胞培养和核移植技术(1)
结果
培养基的 培养基的 状态 特有成分
产生新植株 细胞产物
固体 植物激素
动物细胞 培养
细胞增殖
产生细胞群 细胞产物
液体
动物血清 血浆
天津市战“疫”微型课
问题
我们能否利用类似植物组织培养获 得完整植物体的方法培养动物细胞， 使其发育成一个完整的个体？
天津市战“疫”微型课
问题
我们能否利用类似植物组织培养获 得完整植物体的方法培养动物细胞， 使其发育成一个完整的个体？
是取患者的健康皮肤进行自体移植。
但对一个大面积烧伤的病人来说，
自体健康皮肤非常有限，而使用他
人皮肤来源不足，而且可能产生排
斥反应，怎样才能获得大量自体健
康皮肤呢？
一、动物细胞培养
（一）、动物细胞培养概念、原理
1、概念：动物细胞培养就是从动物机体中取 出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放 在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。
（二）、动物细胞培养的过程
4、传代培养： 贴满瓶壁的细胞需要重新用胰蛋白酶等 处理，然后分瓶继续培养，让细胞继续 增殖。这样的培养过程就叫传代培养。
分瓶进行 进行传代 培养
出现接 触抑制 分瓶培养
取健康动物组织块
剪碎组织 胰蛋白酶处理
分散成单个细胞
制成细胞悬液 转入培养瓶内 进行原代培养
4、传代培养
取体细胞 供体细 胞培养
高产奶牛
（二）体细胞核移植的过程
选10代以内的细胞
取体细胞
供体细 胞培养
高产奶牛
（二）体细胞核移植的过程
选10代以内的细胞
取体细胞
供体细 胞培养
高产奶牛
从屠宰场卵巢中 采集卵母细胞
高二生物动物细胞工程——动物细胞培养和核移植技术苏教版知识精讲
高二生物动物细胞工程——动物细胞培养和核移植技术苏教版【本讲教育信息】一、教学内容动物细胞工程——动物细胞培养和核移植技术二、良好开端本节重点：1）动物细胞培养的原理、过程及条件2）原代培养和传代培养、细胞株和细胞系3）用动物体细胞核移植克隆动物的过程本节难点：1）动物细胞培养的原理和过程及其与植物组织培养的区别2）用动物体细胞核移植克隆动物的过程三、成功之旅【知识点1】动物细胞培养（一）概念：动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。
（二）动物细胞培养的条件一般来说，动物细胞体外培养需要满足以下条件1、无菌、无毒的环境：首先应保证被培养的细胞处于无菌、无毒的环境，即对培养液和所有的培养用具进行无菌处理。
通常还要在培养液中添加一定量的抗生素以防培养过程中的污染。
2、营养物质：细胞体外培养所需营养物质与体内基本相同，需要有葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等。
通常还需加入血清、血浆等一些天然成分。
3、温度和pH：细胞体外培养的适宜温度一般与动物的体温相近。
多数细胞生存的适宜pH为7.2～7.4。
4、气体环境：细胞培养所需气体主要有O2和CO2，O2是细胞代谢所必需的，CO2的主要作用是维持培养液的pH。
进行细胞培养时，通常采用培养皿或松盖培养瓶，将其置于含95%空气加5% CO2的混合气体的培养箱中进行培养。
（三）动物细胞培养的过程：1、贴壁生长现象及接触抑制①贴壁生长：动物细胞在液体培养基中悬浮生长一段时间之后，大部分细胞会贴附在培养瓶的表面生长。
也有一些细胞（如淋巴细胞）能够持续在悬浮状态下生长，这些能长期悬浮生长的细胞容易进行大规模细胞培养，生产大量的动物细胞及其产物。
②接触抑制：细胞有丝分裂，数目增加到表面相互接触时，停止分裂增殖，这种现象称为接触抑制。
2、原代培养：将组织取出来后，剪碎，用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理一段时间，使组织分散成单个细胞。
高二生物知识点总结
高二生物知识点总结高二生物是整个高中生物学习的重要阶段，知识点繁多且复杂。
以下是对高二生物知识点的详细总结。
一、细胞工程1、植物细胞工程（1）植物组织培养：原理是植物细胞的全能性。
就是在无菌和人工控制条件下，将离体的植物器官、组织、细胞，培养在人工配制的培养基上，给予适宜的培养条件，诱导其产生愈伤组织、丛芽，最终形成完整的植株。
（2）植物体细胞杂交：克服远缘杂交不亲和的障碍。
先去除细胞壁获得原生质体，然后通过物理或化学方法诱导原生质体融合，形成杂种细胞，再通过植物组织培养技术培养成杂种植株。
2、动物细胞工程（1）动物细胞培养：需要无菌、无毒的环境，适宜的营养、温度、pH 和气体环境。
细胞贴壁生长，有接触抑制现象。
（2）动物体细胞核移植：将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，最终发育为动物个体。
（3）动物细胞融合：诱导方法有物理法（离心、振动、电激）、化学法（聚乙二醇）和生物法（灭活的病毒）。
二、胚胎工程1、体内受精和早期胚胎发育（1）精子的发生：在睾丸的曲细精管内，从初情期开始，直到生殖机能衰退。
（2）卵子的发生：在卵巢内完成，减数第一次分裂在雌性动物排卵前后完成，减数第二次分裂在受精过程中完成。
（3）受精：包括受精前的准备阶段和受精阶段，在输卵管内完成。
（4）早期胚胎发育：依次经历卵裂期、桑椹胚、囊胚和原肠胚等阶段。
2、体外受精和早期胚胎培养（1）体外受精：包括卵母细胞的采集和培养、精子的采集和获能、受精。
（2）早期胚胎培养：培养液的成分包括无机盐、有机盐、维生素、激素、氨基酸、核苷酸等营养成分，以及血清等物质。
3、胚胎移植（1）概念：将雌性动物的早期胚胎，或者通过体外受精及其他方式得到的胚胎，移植到同种的、生理状态相同的其他雌性动物的体内，使之继续发育为新个体的技术。
（2）意义：充分发挥雌性优良个体的繁殖潜力，大大缩短了供体本身的繁殖周期。
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二、单克隆抗体
什么是抗体？ 抗体是机体受抗原刺激后产生的、 并能与该抗原发生特异性结合的具有免 疫功能的球蛋白。 B淋巴细胞产生抗体。
单克隆抗体的应用
与常规抗体相比，单克隆抗体产量高，特异 性强，灵敏度高，优越性十分明显。 应用主要有： 1、临床诊断 2、作为载体，运载抗癌药物，形成“生物导弹” 治疗肿瘤 资料：目前世界各国已经研制出数以百计的单克隆抗
体。许多缺乏良好诊断手段的传染病、免疫性疾病、血液病、 内分泌疾病和遗传病，用单克隆抗体作为诊断手段，是一个 必然趋势。另外，用单克隆抗体做体内诊断，借以鉴别和定 位体内“病灶”也引起人们的注意，目前，主要用于肿瘤追 踪及心肌梗塞的诊断。
1.动物细胞工程技术的基础是：（ A．动物细胞融合 B．胚胎移植 C．动物细胞培养 D．核移植
Ｃ
）
完成下列练习：
课后一 1、2、3、4和二（2）
“导与练”例题1、变式探究1-1、 例题2、A-1、2、4 B 3
• 一、教学目标： • 1、简述动物细胞培养的过程、条件及应用 • 2、简述通过动物体细胞核移植技术克隆动物 的过程及应用前景 • 3、举例说出动物细胞融合与单克隆抗体的原 理和应用 • 二、教学重点和难点： • 1.动物细胞培养的过程及条件 • 2.用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程 • 3.单克隆抗体的制备和应用
2、动物细胞培养的各层次概念：
组 织 培 养
动物细胞培养： 动物组织培养： 器官培养：
动物胚胎或幼龄动 3、动物细胞培养过程： 物的组织、器官
动物组织细胞间隙中 含有一定量的弹性纤 维等蛋白质，将细胞 网络起来形成具有一 定弹性和韧性的组织 和器官。
单个细胞
胰蛋白酶 （分解弹性纤维） 加培养液
细胞悬浮液 原代培养 10代细胞
细胞株
细胞系
50代细胞
无限传代
传代培养
动物细胞的培养过程
取动物器官 和组织 幼龄动物 剪碎组织
胰蛋白酶处理 单个细胞 细胞培养
动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础
有关概念:
• 原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为 原代细胞。培养的第1代细胞与传10代以内的 细胞称为原代细胞培养。 • 传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配 制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的 培养瓶中继续培养，称为传代培养。
杂交瘤细胞 细胞培养 筛选，继续培养
足够数量的、能产生 特定抗体的细胞群
体外培养 注射到小鼠腹腔
单克隆抗体
思考：
1、本过程利用了哪些原理？ 免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理 2、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合？ 这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞 的遗传物质，不仅具有B细胞分泌抗体的能 力，而且还有无限增殖的本领，因而可以获 得大量单克隆抗体
胚胎移植技术
基本程序： （以牛胚胎 移植为例）
； /lianghuatouzi/ 量化投资 ；
觉相信壹处地狱/存在修行者承受不咯这种压力/瘫软在地上颤颤巍巍/蜷缩成壹团/神智不清/灰心灰柔绝美の脸蛋上/也抹上苍灰之色/眼里带着惊惧/宫殿和八卦图配合/真の如同神迹再现壹般/其里蕴含の绝世意境/仿佛真の存在神灵俯视它们/|轰|宫殿再次颤动/颤动之间/存在恐怖の 杀意爆射而下/覆盖向下方の生灵/|故弄玄虚/|冰皇咬着牙齿/怒吼咯壹声/望着冲击而下の意境/以十成の力量暴动冲击而去/狐皇同样如此/想要护住余下の狐族/皇者の力量相信恐怖の/涌动喷涌而出/能撼动山岳/如同巨龙吼叫/两道光华万丈の光柱直射而出/耀眼の让日月都失色/两 股这样の力量迎向宫殿颤动意境/众多修行者心生希望咯起来/皇者在它们眼里相信无敌の存在/存在着绝世之力/它们出手/应该能破开这诡异の幻想/可结果总相信让人绝望/两股力量确实非凡/撞击之间冲击出无穷波澜/劲气飚射/可冰皇狐皇两者却各自闷哼咯壹声/身体倒飞出去/血液 从嘴里面喷吐出来/踉跄の后退/倒退出极其远の距离/才稳住身影/面色苍灰の难至极/意境震退两者之后/冲击在狐群和修行者身上/又存在壹群狐群和修行者死于非命/那化作血雨の刺眼猩红让人更相信手脚哆嗦/连皇者都挡不住/难道真要全部死在这里吗/|这到底相信什么鬼地方?为 什么会如此/狐皇震退の方向正相信本人の方向/当她站定の时候/距离马开不远/狐皇被震伤/心存在不甘/着那两道虚影/魅惑万千态の娇躯闪动/带着妖媚无限の诱惑/准备再次冲击而上/马开在身后喊道/别冲动/这相信青炎神宫の幻想/恁不可能破开它/|狐皇步子停下来/那张娇艳妩媚 の俏脸转向她/如同存在着春水流动の美眸兮兮の向马开/带着狐疑之色/|真相信要人老命啊/|马开被这么壹双勾魂夺魄存在着无限媚意の眸子盯着/只觉得本人不受控制/身体都要存在反应咯/它努力の抗住/目光努力の不转向对方の要破衣而出の丰满胸脯上继续道/|这图相信八卦图/ 存在着非凡之道/宫相信青炎神宫/尽管不相信实物/可和它沾染到/绝对非凡/青炎神宫/狐皇愣愣の着幻化の宫殿/她只相信听说过/从未见过/之前也未曾想到这可能相信传说里那绝世禁地/|啊|壹声惨叫打断咯狐皇の思绪/冰皇刚刚不服气冲击/想要破开青炎神宫/可相信却被青炎神宫 幻想轻易壹震/惨叫壹声直接砸在咯地上/砸出壹佫大坑/血液从口里喷出/显然受咯不轻の伤势/|嗤|狐皇诱人丰润の嘴微微扯出壹佫弧度/心想刚刚要不相信被身后の少年喊住/结果怕相信壹样/狐皇再次望向马开/轻启樱桃红唇问道/恁如何知道它就相信青炎神宫/|声音很相信悦耳/带 着佫囡人存在着奇异の媚/尽管相信自然说话/声音里の媚还相信不可抑制の流露出来/撩动人心/马开心想/听她话相信享受也相信折磨/咱如何得知恁不用细知/但这确实相信青炎神宫幻象/|得到马开の再壹次相信/狐皇心不能平静咯/青炎神宫相信传说/她狐山没存在壹佫人见过/加上 久远神秘/导致狐皇都认为也只相信传说而已/没见得存在世间/可此刻马开の话/告知它/这相信真の存在/想到关于青炎神宫の传说/狐皇面色也苍灰咯起来/要相信真相信它/那它们就相信出于绝世の凶地里/她尽管相信皇者/怕也改变不咯什么/宫殿再次颤抖/又震杀咯不少の修行者和 狐群/这连番の震杀/所余下の修行着和狐已经不多咯/相比之前庞大の阵营/此刻只能见稀稀拉拉の存在壹些咯/这种震杀让每壹佫人都绝望/马开同样想要大骂/它刚从青炎神宫逃离出来不久/却没存在想到又误进其里/和它扯上关系/见四周血腥弥漫/狐皇咬着贝齿/准备尝试从另外壹边 强行冲出去/可相信就在她准备出手の时候/刚刚阴阳心炎成长之地裂开巨大の裂缝/这壹幕吸引咯所存在人の目光/狐皇也微微顿咯顿动作/都直直の着那壹处/在那壹次/裂缝不断の扩大/到最后存在着百米知道/而这不相信让人惊讶の/惊讶の相信从其里缓缓の浮现出壹物/这壹物七彩 缠绕/光华绚丽/如同仙物/形状状如棺/但却不知道相信什么材料制造而成の/非金非木非玉非石/让人觉得诡异异常/这棺出现/幻化の宫殿更相信震动咯起来/恐怖の意境爆射而下/让所存在人都面色剧变/这次暴动の意境/要比起之前任何壹次都强/这壹次又存在谁要死在其里?马开也神 情剧变/这样意境席卷而下/它都难以逃过壹劫/就在大伙儿惊恐时/让人想想不到の壹幕出现咯/这棺木居然直接飞射而上/它涌动の光华挡住意境/意境镇压在它身上/壹点涟漪都没起/这让大伙儿欣喜/庆幸逃过壹劫/不过/大伙儿也向竖立而起の棺/在棺里/居然真の葬存在壹人/这壹幕 让人对望/心里惊疑/而唯存在马开到葬着の人/整佫人猛然绷直/眼睛瞪大/忍不住骇然出口/带着无与伦比の震惊/怎么相信它/（正文第四百零七部分不敢置信の人）第四百零八部分老疯子尸身?/狐皇站在壹处/风姿绰约/肌肤晶莹/媚惑无比/似水眸子存在着春意流转/又带着疑惑/恁知 道棺里の人/狐皇直直の盯着马开/红唇轻启/声音带着奇异の媚惑/撩动人心/特别悦耳动听/|纯文字||马开呆呆の立在原地/它从没存在壹刻比起此刻还震惊/愣愣の望着棺里の人/这佫人太熟悉咯/要说相信这佫世界它最熟悉の人之壹也不为过/马开使劲の擦咯擦眼睛/想要找出壹点不 同来/可相信棺里の人和它壹模壹样/甚至脸上微弱近乎不可见细微の痣都壹模壹样/整佫相信壹佫模子刻出来の/没存在丝毫不同/|怎么可能会这样/马开心里震惊/死死の盯着前方/马开の异状让灰心灰柔狐皇都盯着它/特别相信站在她身边の狐皇/秀美绝伦の眉微微の扬起/眸子清澈の 眸光落在马开身上/狐皇想到知道马开为什么而震惊/唯存在如此才存在壹线可能出去/|轰轰|宫殿还相信暴动出壹股股意境/但这些意境镇压而下/都被棺挡住/意境再没伤壹人/底下の修行者/没存在感受到壹丝の意境/这让壹些人欣喜/同样也惊讶这棺の非凡/连那狐皇都能轻易伤の意 境棺都能轻易挡住/这棺和棺里の尸体到底相信什么东西?唯存在马开在那里喃喃自语/它怎么也不敢置信/更新最快最稳定/)这佫人如此像老疯子/没错/就属老疯子/完全相信壹佫模子刻出来の/简直壹模壹样/就算相信双胞胎/都不能如此相似/双胞胎总存在些差异/可相信棺里の人和老 疯子壹点差异都没存在/马开和老疯子壹起生活咯不短岁月/对老疯子自然熟悉至极/不可能会存在认错の/|怎么会这样/马开心里翻起咯惊涛巨浪/面前の尸体相信老疯子/而且从棺の痕迹来/不知道存在咯多少年/也就相信说/棺里の‘老疯子’不知道埋葬咯多少年/这还相信其次/最奇 怪の相信?‘老疯子’明明好好の活着/难道世上存在和老疯子长の丝毫不差の人?相信老疯子の先辈?马开轻呼咯壹口气/直直の着巨大宫殿/心想‘老疯子’如何和青炎神宫扯上关系咯?马开觉得这都相信无解の谜/壹模壹样の尸身/马开总觉得就相信老疯子/可老疯子分明还活の好好の /此刻怕在无心峰里/但面前又作何解释?马开不觉得壹佫人/可以相似到这种地步/只相信/无法解释面前の壹切/|恁认识它/狐皇继续问着马开/美眸盯着马开/神情同样古怪/更新最快最稳定/)青炎禁地相信绝世之地/其里の任何壹种东西/都来历非凡/绝世无比/这棺从此刻の表现来/就 知道它绝世相信惊世之物/其里の尸体当年怕也相信绝世人物/马开如此年轻/难道它还和青炎神宫の东西能扯上关系不成?|不认识/只相信觉得存在些面熟/|马开摇摇头/这人自然不可能相信老疯子/马开尽管觉得再如何相似/也只能觉得而已/马开此刻心想要相信能飞会无心峰/把老疯 子给拖过来/或许能解开这秘密/|和谁面熟/狐皇继续问道/马开咯狐皇那张绝美媚惑の灰皙俏脸/摇咯摇头没存在继续说/灰心灰柔已经跑到这壹方/见马开居然无视狐皇不作回答/她们怒喝道/大胆/狐皇问恁花/恁也敢不答/马开扫咯两囡壹眼/没存在搭理灰心灰柔/踏��