SOP高效液相色谱法检验操作规程
高效液相色谱仪验证
中心化验室型高效液相色谱仪验证（一）验证方案（二）验证报告药业有限公司中心化验室型高效液相色谱仪验证方案（SOP-YZ-???）方案制定人：制定日期：方案审查人：审查日期：方案审核人：审核日期：方案批准人：批准日期：药业有限公司目录1、概述2、验证目的3、验证实施小组成员及有关责任4、验证文件5、合格标准6、验证方法和步骤7、验证结果分析和综合评价8、最终评价9、验证周期10、验证记录1、概述高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种现代液相色谱法，其基本方法是用高压输液泵将流动相泵入到装有填充剂的色谱柱，注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后，各成分先后进入检测器，用记录仪或数据处理装置记录色谱图并进行数据处理，得到测定结果。
由于应用了各种特性的微粒填料和加压的液体流动相，本法具有分离性能高、分析速度快的特点。
高效液相色谱仪由输液泵、进样器、色谱柱、检测器和色谱数据处理系统组成。
其中LC-2010和Agilent1100型为单泵型，LC-20AB型为双泵型高效液相色谱仪。
2、验证目的检查并确认高效液相色谱仪运行性能符合要求。
3、验证实施小组成员及有关责任验证实施小组组长???负责协调及异常情况的处理；操作员??????负责验证的具体操作工作；QA???负责监督实施本方案。
4、主要验证文件高效液相色谱法（SOP-ZL-???）、中华人民共和国国家计量检定规程液相色谱仪（JJG705-2002）、UV-VIS检测器SPD-20A/SPD-20AV说明书、溶液传输单元LC-20AB说明书、中华人民共和国药典2005年版二部、LC-2010A/2010C操作说明书安装手册和维修手册。
5、合格标准6、验证方法和步骤6.1验证方法整个验证过程分为单个部件的验证和整机验证。
验证时一般先验证泵、柱温箱、自动进样器的性能，接着是检测器的性能，最后是整机的性能验证。
高效液相色谱法操作规程
标准操作规程目的：建立高效液相色谱法的标准操作规程，保证正确操作。
范围：本标准适用于高效液相色谱法的操作。
责任者：QC主任，设备使用人员。
规程：依据：《中华人民共和国药典》2000年版二部。
1.定义及概述：1.1.高效液相色谱法是一种现代液体色谱法，其基本方法是将具一定极性的单一溶剂或不同比例的混合溶液作为流动相，用高压输液泵将流动相注入装有填充剂的色谱柱，注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后，各成分先后进入检测器，用记录仪或数据处理装置记录色谱留或进行数据处理，得到测定结果。
由于应用各种性质的微粒填料和加压的液体流动相，本法具有分离性能高，分析速度快的特点。
1.2.高效液相色谱法适用于能在特定填充剂的色谱柱上进行分离的药品的分析测定，特别是多组分药品的测定、杂质检查和大分子物质的测定。
有的药品需要在色谱分离前或后经过衍生化反应，方能进行分离或检测。
常用的色谱柱填充剂有：硅胶用于正相色谱；化学键合固定相，根据键合的基团不同可用于反相或正相色谱，其中最常用的是十八烷基硅烷（又称ODS）键合硅胶，可用于反相色谱或离子对色谱离子交换填料，用于离子交换色谱，是有一定孔径的大孔填料，用于排阻色谱。
1.3.高效液相色谱仪基本由泵、进样器、色谱柱、检测器和色谱数据处理机组成。
检测器最常用的为可变波长紫外检测器或紫外一可见检测器。
色谱信息的收集和处理常用积分仪或数据工作站进行。
梯度洗脱，可用两台泵或单台泵加比例阀进行程控实现。
2.高效液相色谱仪的使用要求：2.1.按国家技术监督局国家计量检定规程汇编中“实验室液相色谱仪检定规程（JJG705－90）”的规定作定期检定，应符合规定。
2.2，仪器各部件应能正常工作，管路为无死体积连结，流路中无堵塞或漏液，在设定的检测器灵敏度条件下，色谱基线噪音和漂移应能满足分析要求。
2.3.具体仪器在使用前应详细参阅各操作说明书。
3.操作前的准备：3.1.流动相的制备：用高纯度的试剂配制流动相，必要时照紫外分光光度法进行溶剂检查，应符合要求；水应为新鲜制备的高纯水。
高效液相色谱测定法标准操作规程
标准操作规程1目的：建立高效液相色谱测定法操作规程，以使检验操作规化。
2适用围：适用于高效液相色谱测定法检验操作全过程。
3责任：QC人员对本SOP实施负责。
4容高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。
注入的供试品，由流动相带入色谱柱，各组分在柱被分离，并进入检测器检测，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。
4.1.对仪器的一般要求和色谱条件高效液相色谱仪由高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器、积分仪或数据处理系统组成。
色谱柱径一般为3.9~4.6mm，填充剂粒径为3~10μm。
超高效液相色谱仪是适应小粒径（约2μm）填充剂的耐超高压、小进样量、低死体积、高灵敏度检测的高效液相色谱仪。
4.1.1.色谱柱反相色谱柱：以键合非极性基团的载体为填充剂填充而成的色谱柱。
常见的载体有硅胶、聚合物复合硅胶和聚合物等；常用的填充剂有十八烷基硅烷键合硅胶、辛基硅烷键合硅胶和苯基键合硅胶等。
正相色谱柱：用硅胶填充剂，或键合极性基团的硅胶填充而成的色谱柱。
常用的填充剂有硅胶、氨基键合硅胶和氰基键合硅胶等。
氨基键合硅胶和氰基键合硅胶也可用作反相色谱。
离子交换色谱柱：用离子交换填充剂填充而成的色谱柱。
有阳离子交换色谱柱和阴离子交换色谱柱。
手性分离色谱柱：用手性填充剂填充而成的色谱柱。
色谱柱的径与长度，填充剂的形状、粒径与粒径分布、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、载体表面基团残留量，填充的致密与均匀程度等均影响色谱柱的性能，应根据被分离物质的性质来选择合适的色谱柱。
温度会影响分离效果，品种正文中未指明色谱柱温度时系指室温，应注意室温变化的影响。
为改善分离效果可适当提高色谱柱的温度，但一般不宜超过60℃。
残余硅羟基未封闭的硅胶色谱柱，流动相pH值一般应在 2〜8之间。
残余硅羟基已封闭的硅胶、聚合物复合硅胶或聚合物色谱柱可耐受更广泛pH值的流动相，适合于pH 值小于2或大于8 的流动相。
GMP认证全套文件资料37-高效液相色谱法标准操作规程
高效液相色谱法标准操作规程目的：建立高效液相色谱法标准操作规程。
适用范围：高效液相色谱法。
责任：质检员实施本操作规程，检验室主任负责监督本规程正确执行。
程序：高效液相色谱法是用高压输液泵将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，经进样阀注入供试品，由流动相带入柱内，在柱内各成分被分离后，依次进入检测器，色谱信号由记录仪或积分仪记录。
1.对仪器的一般要求所用的仪器为高效液相色谱仪。
色谱柱的填充剂和流动相的组分应按各品种项下的规定。
常用的色谱柱填充剂有硅胶和化学键合硅胶，后者以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛基硅烷键合硅胶次之，氰基或氨基键合硅胶也有使用。
离子交换填充剂用于离子交换色谱；凝胶或玻璃微球等填充剂用于分子排阻色谱等。
除另有规定外，柱温为室温，检测器为紫外吸收检测器。
在用紫外吸收检测器时，所用流动相应符合紫外分光光度法（附录ⅣA）项下对溶剂的要求。
正文中各品种项下规定的条件除固定相种类、流动相组分、检测器类型不得任意改变外，其余如色谱柱内径、长度、固定相牌号、载体粒度、流动相流速、混合流动相各组分的比例、柱温、进样量、检测器的灵敏度等，均可适当改变，以适应具体品种并达到系统适用性试验的要求。
一般色谱图约于20分钟内记录完毕。
2.系统适用性试验按各品种项下要求对仪器进行适用性试验，即用规定的对照品对仪器进行试验和调整。
应达到规定的要求；或规定分析状态下色谱柱的最小理论板数、分离度、重复性和拖尾因子。
(1) 色谱柱的理论板数（n ） 在选定的条件下；注入供试品对仪器或各品种项下规定的内标物质溶液，记录色谱图，量出供试品主成分或内标物质峰的保留时间t R （以分钟或长度计，下同，但应取相同单位）和半峰高宽（W h/2），按n=5.54(t R /（W h/2）计算色谱柱的理论板数。
如果测得理论板数低于各品种项下规定的最小理论板数，应改普通色谱柱的某些条件（如柱长、载体性能、色谱柱充填的优劣等），使理论板数达到要求。
高效液相色谱仪验证方案
*******药业有限责任公司质检室高效液相色谱仪的验证方案编号：SMP-HP -001-04起草人：姓名：部门：日期：审核人：姓名：部门：日期：批准人：姓名：部门：日期：目录1.概述1.1.高效液相色谱仪简介．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．2 1.2.高效液相色谱仪基本情况．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．2 1.3.验证目的．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．21.4.验证人员．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．22.安装确认2.1.目的．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．2 2.2.安装确认．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．33.运行确认3.1.目的．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．33.2.测试项目的认可标准及实测结果．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．34.性能确认4.1.泵流量设定值误差SS，流量稳定性误差SR的检定．．．．．．．．．．3 4.2.定性、定量测量重复性的检定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．44.3.基线漂移和基线噪声的检定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．45.校正与系统适应性实验5.1.5.1流动相流量校正．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5 5.2.5.2系统适用性试验．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．65.3.5.3适用性预试验．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．66.验证结果评定与结论．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．77.验证结论批准、会签及日期．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．71.概述1.1.高效液相色谱仪简介本仪器由日本岛津公司生产，由LC-10ATVP泵、SPD-10AVP检测器、LC-SCL 控制器,Class-vp控制程序及电脑积分仪组成。
高效液相色谱法标准操作规程
范围：原料、产品职责：检验室对本规程的实施负责正文：1.原理——高效液相色谱法是将具一定性的单一溶剂或不同比例的混合溶液，作为流动相，用泵将流动相注入装有填充剂的色谱柱，注入的供试品被流动相带入柱内分离后，各成分先后进入检测器，用记录仪或数据处理装置记录色谱图或进行数据处理，得到测定结果。
——高效液相色谱仪基本由泵、进样器、色谱柱、检测器和色谱数据处理系统组成。
2.操作前的准备2.1流动相的制备用高纯度的试剂配制流动相，必要时照紫外分光光度法进行溶剂检查，应符合要求；水应为新鲜制备的高纯水。
凡规定PH值的流动相、应使用精密PH计进行调节。
配制好流动相应通过适宜的0.45µm滤膜滤过，用前脱气，应配制足量的流动相及时待用。
2.2供试溶液的配制供试品用规定溶剂配制成供试溶液定量测定时，对照品溶液和样品供试溶液均应分别配制2份。
供试溶液在注入色谱仪前，一般应经适宜的0.45µm滤膜滤过。
必要时在配制供试溶液前，样品需经提取净化。
以免对色谱系统产生污染或对色谱干扰。
3.系统适用性试验——按各品种项下要指法训练对仪器进行适用性试验，即用规定的对照品对仪器进行试验和调整，应达到规定的要求；或规定分析状态下色谱柱的最小理论板数、分离度、重复性和拖尾因子。
3.1色谱柱理论板数（n）在选定的条件下，注入供试品溶液或各品种项下规定的内标物质溶液，记录色谱图，量出供试品主成分或内标物质峰的保留时间tR（以分钟或长度计，下同，但应取相同单位）和半峰高宽（Wh/2），按n=5.54(tR/ Wh/2)2计算色谱柱的理论板数。
如果测得理论板数低于各品种项下规定的最小理论板数，应改变色谱柱的某些条件（如柱长、载体性能、色谱柱充填的优劣等），使理论板数达到要求。
3.2分离度定量分析时，为便于准确测量，要求定量峰与其他峰或内标峰之间有较好的分离度。
分离度（R）的计算公式为：2（tR2- tR1）R=W1+W2式中tR2为相邻两峰中后一峰的保留时间；tR1为相邻两峰中前一峰的保留时间；W 1及W2为此相邻两峰的峰宽。
液相色谱仪(UV)检定操作规程
制备60ug/ml基准重铬酸钾的0.005mol/l硫酸溶液，按紫外分光光度法，用1cm石英比色皿分别在235nm±5nm、257nm±5nm、313nm±5nm、350nm±5nm四个波段处，以0.005mol/L硫酸为空白，测定各波长处60ug/ml基准重铬酸钾的0.005mol/l硫酸溶液的吸收度，各波长重复测量三次。
3.5.2.色谱条件：
色谱柱：C18
流动相：甲醇
流速：1ml/min
波长：254nm
进样量：20ul（定量环）
3.5.3.操作步骤：将仪器各部份联接好，以甲醇为流动相，开机，待基线稳定后，将上述配制好的对照品溶液进样，记录色谱图。
3.5.4.按下式计算最小检测浓度：
Cl=2·Nd·C/H
式中：Cl：最小检测浓度（g/ml）；
10min
1ml/min
50%
50%
13min
1ml/min
50%
50%
15min
1ml/min
25%
75%
18min
1ml/min
25%
75%
20min
1ml/min
0
100%
23min
1ml/min
0
100%
25min
1ml/min
100%
0
3.6.4.结果计算：
式中：
--第i段梯度误差（%）；
12个月
定性、定量测量重复性误差
12个月
Nd：基线噪声峰-峰高，mm；
C：对照品溶液浓度（g/ml）；
H：标准溶液的色谱峰高，mm。
3.5.5.结果判断：对照品溶液的峰高应大于或等于两倍基线噪声峰高，即最低检测浓度应低于4×10-8g/ml（萘的甲醇溶液）。
牛奶中阿维菌素类药物残留检测——高效液相色谱法(SOP)修改版-新
牛奶中阿维菌素类药物残留检测—高效液相色谱法1安全要求该检验的提取、净化步骤应在通风橱中进行，操作中需着工作服、戴口罩手套，避免溶剂气体吸入和皮肤接触；废弃的化学试剂收集到专用容器集中处理。
2急救措施皮肤触到有机溶剂或酸,用清水清洗，溅入眼中用纯水灌洗。
3 适用范围该操作规程适用于牛奶中阿维菌素、多拉菌素和伊维菌素残留量的制样及测定。
4 职责进行该项检验的检验员必须按该操作规程进行检验，质量监督员负责监督该操作规程的正确执行。
5 检测原理用乙腈提取试料中残留的阿维菌素类药物，加水稀释，加三乙胺使溶液呈弱碱性，C18固相萃取柱净化，加三氟乙酸酐和N-甲基咪唑衍生化。
高效液相色谱-荧光检测法测定，外标法定量。
6 方法灵敏度本方法在牛奶中阿维菌素、多拉菌素和伊维菌素的检测限均为1µg/kg，定量限均为2µg/kg。
7 注意事项7.1 整个净化步骤控制C18柱流速约在1～2 mL/min；7.2 C18柱使用过程中除特别说明外，应避免柱床干涸。
8 材料、仪器、试剂的准备及基本要求除特别注明外，以下所用试剂均为分析纯；水为超纯水。
8.1 阿维菌素标准品含量≥95.7%8.2 多拉菌素标准品含量≥92.6%8.3 伊维菌素标准品含量≥93.9%8.4 乙腈色谱纯8.5 甲醇色谱纯8.6 三氟乙酸酐8.7 三乙胺8.8 异辛烷8.9 N-甲基咪唑8.10 C18固相萃取柱500 mg/6 cc，或相当者8.11 固相萃取柱洗涤液；取乙腈30 mL、水70 mL和三乙胺20 µL，混匀。
8.12 衍生化试剂a) A液：N-甲基咪唑-乙腈（1+1，v/v）。
现用现配。
b) B液：三氟乙酸酐-乙腈（1+2，v/v）。
现用现配。
8.13 1 mg/mL 阿维菌素类药物混合标准贮备液：分别称取阿维菌素、多拉菌素和伊维菌素标准品10 mg，精密称定，于10 mL量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度。
Waters高效液相色谱仪
海德氨基酸工业有限公司标准操作规程1 目的规范Waters高效液相色谱仪使用操作。
2 适用范围 Waters高效液相色谱仪的使用操作。
3 责任者质管部QC检验人员。
4 内容4.1 系统进入4.1.1 依次开UPS电源、检测器、泵、打印机、电脑主机电源。
4.1.2 电脑进入自检，自检完成后，进入“Program Manager”窗口。
4.1.3 在“Program Manager”窗口，双击“Millennium”图标，进入相应窗口。
4.1.4 在“Millennium”窗口，双击“Session Manager”图标，进入“Millennium V2.10”窗口，进行内存自检。
4.1.5 内存自检完成后，进入“Millennium Login－Version2.10”窗口，在“User Name”输入“system”，在“Password”输入“manager”，按“Login”进入“Millinniam Version2.10－Session Manager－User System”窗口，双击所选“Project”图标，即进入“Project”窗口。
4.2 进样4.2.1 在“Project”窗口下，按“Tools”图标群中“Quickset”图标进入“System-open”窗口，选择“PCM－410”。
4.2.2 按“OK”加以确认，该窗口自动退出，进入自检。
4.2.3 自检完毕，进入“Quick Set”窗口，按“Mode”选择“Quick Start”进入“Method Set”窗口，选择“Using Exiting Method”自动进入“Quick Set Acquisition”窗口，按“Set Up Instrument”，进入仪器安装状态。
4.2.4 安装完毕，按“Cancel”，退出“Quick Set Acquisition”窗口，在样品登药业有限公司标准操作规程题目Waters高效液相色谱仪操作规程编号版本号共 6 页SOP-EM-319A第 2 页记表上填写样品名、类别、进样体积、运行时间。
SOP高效液相色谱法检验操作规程
4.1 所用的仪器为高效液相色谱仪。仪器应定期检定并符合有关规定
4.2 色谱柱
4.2.1反相色谱系统使用非极性填充剂，常用的色谱柱填充剂为化学键合硅胶，以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛基硅烷键合硅胶和其他类型的硅烷键合硅胶（如氰基键合硅烷和氨基键合硅烷相等）也有使用。正相色谱系统使用极性填充剂，常用的填充剂有硅胶等。离子交换色谱系统使用离子交换填充剂；分子排阻色谱系统使用凝胶或高分子多孔微球等填充剂；对映异构体的分离通常使用手性填充剂。
4.4.2各品种项下规定的条件除固定相种类、流动相组分、检测器类型不得改变外，其余如色谱柱内径、长度、载体粒度、流动相流速、混合流动相各组分的比例、柱温、进样量、检测器的灵敏度等，均可适当改变，以适应供试品并达到系统适用性试验的要求。其中，调整流动相组分比例时，以组分比例较低者（小于或等于50%）相对于自身的改变量不超过±30%且相对于总量的改变量不超过±10%为限，如30%相对改变量的数值超过总量的10%时，则改变量以总量的±10%为限。
流动相一般贮存于玻璃、聚四氟乙烯等容器内，不能贮存在塑料容器中。因许多有机溶剂如甲醇、乙腈等可浸出塑料表面的增塑剂，导致流动相受污染。贮存容器一定要盖严，以防止溶剂挥发引起组成变化，也防止氧和二氧化碳溶入流动相引起pH值变化，对分离或分析结果带来误差。磷酸盐、醋酸盐缓冲液容易发霉变质，应尽量新鲜配制使用。如确需贮存，可在冰箱内冷藏，并在3天内使用，用前应重新滤过。
面积的百分率。
用于杂质检查时，由于峰面积归一化法测定误差大，因此，通常只能用于粗略考察供试品中的杂质含量。除另有规定外，一般不宜用于微量杂质的检查。
5.3注意事项
5.3.1流动相的制备与保存用高纯度的试剂配制流动相，必要时照紫外-可见分光光度法进行溶剂检查，应符合要求；不应为新鲜制备的高纯水，可用超纯水器制得或用重蒸馏水。凡规定pH值的流动相，应使用精密pH计进行调节，除另有规定外，偏差一般不超过±0.2pH单位。配制好的流动相应通过适宜的0.45um（或0.22um）滤膜滤过，以除去杂质微粒。流动相用前必须脱气，否则容易在系统内逸出气泡，影响泵的工作、色谱柱的分离效率、检测器的灵敏度以及基线稳定性等。
2020版《中国药典》高效液相色谱法检验操作规程
一、目的：制订详尽的工作程序，规范检验操作，保证检验数据的准确性。
二、范围：本操作规程适用于高效液相色谱法的检验操作。
三、职责：1、检验员：严格按操作规程操作，认真、及时、准确地填写检验记录；2、化验室负责人：监督检查检验员执行本操作规程。
四、内容：简述：高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。
注入的供试品，由流动相带入色谱柱内，各组分在柱内被分离，并进入检测器检测，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。
1、对仪器的一般要求和色谱条件高效液相色谱仪由高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器、积分仪或数据处理系统组成。
色谱柱内径一般为2.1～4.6mm,填充剂粒径为2～10μm。
超高效液相色谱仪是耐超高压、小进样量、低死体积、高灵敏度检测的高效液相色谱仪。
1.1色谱柱1.1.1色谱柱的类型1.1.1.1反相色谱柱：以键合非极性基团的载体为填充剂填充而成的色谱柱。
常见的载体有硅胶、聚合物复合硅胶和聚合物等；常用的填充剂有十八烷基硅烷键合硅胶、辛基硅烷键合硅胶和苯基硅烷键合硅胶等。
1.1.1.2正相色谱柱：用硅胶填充剂，或键合极性基团的硅胶填充而成的色谱柱。
常见的填充剂有硅胶、氨基键合硅胶和氰基键合硅胶等。
氨基键合硅胶和氰基键合硅胶也可用作反相色谱。
1.1.1.3离子交换色谱柱：用离子交换填充剂填充而成的色谱柱。
有阳离子交换色谱柱和阴离子交换色谱柱。
1.1.1.4手性分离色谱柱：用手性填充剂填充而成的色谱柱。
1.1.2色谱柱的内径与长度，填充剂的形状、粒径与粒径分布、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、载体表面基团残留量，填充的致密与均匀程度等均影响色谱柱的性能，应根据被分离物质的性质来选择合适的色谱柱。
1.1.3温度会影响分离效果，品种正文中未指明色谱柱温度时系指室温，应注意室温变化的影响。
为改善分离效果可适当提高色谱柱的温度。
1.1.4残余硅羟基未封闭的硅胶色谱柱，流动相pH值一般应在2～8之间。
Waters高效液相的标准操作规程(SOP)
Waters高效液相的标准操作规程（SOP）一、操作前准备1. 流动相准备：流动相所用试剂必须是色谱纯。
必须经过滤，脱气。
2. 检查色谱柱的链接：色谱柱出入口不能颠倒，出口螺帽必须拧紧防漏液。
二、色谱仪的启动、设置和应用操作流程图图1.开机进入breeze系统：依次打开泵以及检测器、柱温箱的电源，等到检测器自检完毕后，打开计算机登录windows，并进入breeze软件。
2.选择系统:在“选择项目和系统”对话框中，选择所需的项目和色谱系统，然后单击“确定”。
（色谱系统2489为紫外检测器；2414为示差折光检测器）3.创建方法:(1):管理→项目→创建项目→defaults→输入自建的项目名称和注释名→确定→项目创建完毕(2):切换系统：在窗口下切换系统→系统名称空白→确定管理→切换系统→系统名称（选择要用的检测器）→确定。
（可通过节点属性来检查和确定目标检测器是否处于在线状态）(3):调用方法组编辑器→新建→单击PCM泵按钮→高压限制:4000→泵模式（等度/梯度）→（设置各流动相流速）（C18反相柱总流速限定在2mL/min以内）单击TCM柱温箱按钮→区域1：设定柱温单击W2489：→设定波长（紫外可见光波长）→模式（单/双波长）→采样速率（1-2）文件→另存为→名称→保存。
新方法组→请选择用使用该方法组的数据有关的仪器方法→自建方法→下一步→完成。
4.灌注、清洗泵、清除系统、平衡系统4.1灌注和清除泵：1.在灌注和清洗泵之前的准备工作•如果泵处于干燥状态，在继续操作前应进行干灌注。
•将泵的参比阀旋钮向右旋转 1/2 圈，确保洗脱液流（绕过泵下游的所有连接组件）引至废液。
2.在“选择项目和系统”对话框中，确认色谱系统已完成配置并在线。
•确保已在“节点属性”中正确配置泵。
•将系统设置为在线。
3.在“运行样品”窗口中，单击“开始流量”图标，然后为泵流量和梯度设置输入适当的值。
提示：要快速灌注和清除以下型号的泵•对于 1525 泵，将流量设置为 4.0 毫升/分，并将梯度设置为 50% A、 50% B。
高效液相色谱仪检验操作规程
⾼效液相⾊谱仪检验操作规程⽂件内容：1、⽬的 (2)2、范围 (2)3、职责 (2)4、正⽂ (2)5、相关⽂件与记录 (5)6、参考⽂献 (5)7、变更记载及原因 (5)发放范围：质保处、质控处⽂件复审：编审批过程：1、⽬的：建⽴⾼效液相⾊谱仪检验操作规程，以保证其检验⼯作完成。
2、范围：LC-20AT⾼效液相⾊谱仪。
3、职责：3.1化验员：负责按本操作规程使⽤该设备进⾏检验。
3.2化验设备员：按时维护设备，保证设备时刻处于完好状态。
3.3质控处处长：负责本规程的审核，及设备按时校验的⼯作。
4、正⽂：4.1泵流量准确度、流量稳定性检验4.1.1⽤纯⽔清洗各溶剂管路，以⽔为流动相，设定流量为0.5ml/min，启动泵。
4.1.2待压⼒稳定后，在流动相出⼝处⽤事先清洗称重的50ml容量瓶收集流动相，同时⽤秒表计时。
4.1.3收集10min后，称重。
同法重复三次。
4.1.4流速分别调⾄1.0ml/min和2.0ml/min，按2-3步骤操作。
4.1.5计算Ss=(Fm-Fs )/Fs*100%S R=（Fmax-Fmin）/Fm*100%Fi=( w2- w1)/（ρ*t）其中式中：Fi=( w2- w1)/（ρ*t）—，流量实测值，mL/minW2—容量瓶+流动相的质量，gW1—容量瓶的质量，gρ—实验室温度下流动相的密度，g/cm3t—收集流动相所⽤的时间，minFm—同⼀组测量的算数平均值，mL/minFs—流量设定值，mL/minFmin—同⼀组测量中流量最⼩值，mL/minFmax—同⼀组测量中流量最⼤值，mL/min标准:Ss≤±2.0% Sc≤±2.0%4.2柱温箱温度设定值误差△T s和控温稳定性T c的检定4.2.1将数字温度计探头固定在柱温箱内，选择25℃和45℃进⾏检定。
4.2.2按仪器SOP操作，通电升温，待温度稳定后，记下温度计读数并开始计时，以后每隔10min记录⼀次读数，共计7次，求出平均值。
SOP-苯山糖-内容
食品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠的测定1目的为规范食品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠的测定及测量结果的准确度，特制定本作业指导书。
2适用范围本法适用于食品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠的测定3 岗位要求和职责检验员经培训后持证上岗，能熟练操作该仪器。
4 依据文件GB/T 5009.28-2016 第一法液相色谱法5 方法概述称取2g样品于50mL具塞比色管中，加25mL水混匀后，50℃水浴超声20min，冷却至室温后加蛋白沉淀剂混匀，4000r/min离心10min，取上清液过水系0.45μm滤膜，上机。
通过具有紫外检测器的高效液相色谱仪进行测定。
以保留时间定性，外标法定量。
注：碳酸饮料、果酒、果汁、蒸馏酒等不加蛋白沉淀剂。
6 检测程序6.1方法原理样品经水提取，高蛋白样品经沉淀剂沉淀蛋白后，采用液相色谱分离，紫外检测器检测，外标法定量。
6.2 仪器和设备、试剂和材料、试样制备与保存6.2.1 仪器：高效液相色谱仪带可调波长紫外检测器。
（校准周期2年，校准周期内做期间核查）色谱柱：C18 250mm×4.6mm 粒径5μm离心机：转速＞8000r/min恒温水浴锅：水温≤100℃数控超声波清洗器：温度、功率及时间可调6.2.2所需化学试剂甲醇：HPLC级乙酸铵：分析纯乙酸锌：分析纯亚铁氰化钾：分析纯苯甲酸、山梨酸、糖精钠标准物质：市售有证标准溶液，避光4℃储存6.2.3玻璃器皿：250mL分液漏斗、旋转蒸发瓶及一般常用仪器清洗：首先用自来水冲洗玻璃器皿残留的溶剂。
然后用低泡洗涤剂洗刷玻璃器皿，用自来水冲洗三遍。
最后用纯水冲洗三遍、超纯水冲洗三遍。
（冲洗规则遵循少量多次）6.2.4环境条件：实验前对实验室通风6.2.5试样制备：液体：取多个预包装饮料直接混匀，试样于4℃保存。
非均匀的液态，半固态：组织均浆机均浆，-18℃保存。
固态：研磨机充分粉碎并搅拌均匀，-18℃保存。
6.2.6仪器所配备计算机需满足仪器对软件/硬件的要求6.2.7结果计算6.2.7.1按以下公式计算试样中苯甲酸、山梨酸、糖精钠的含量X=ρ×V m×1000式中：X——试样中待测组分含量(g/kg)ρ——试样中待测组分的质量浓度 (mg/L)V——试样定容体积(mL)m——试样质量(g)1000——换算因子6.2.7.2检测过程中及时填写使用记录及维护保养记录。
SOP-多环芳烃-内容
水中多环芳烃的测定1目的为规范水中多环芳烃的测定及测量结果的准确度，特制定本作业指导书。
2适用范围本法适用于饮用水、地下水、地表水、海水、工业废水及生活污水中5种多环芳烃的测定。
3 岗位要求和职责检验员经培训后持证上岗，能熟练操作该仪器。
4 依据文件HJ 478-2009 水质多环芳烃的测定液液萃取和固相萃取高效液相色谱法5 方法概述用取水样1000mL，加入30g氯化钠，加入25mL二氯甲烷，萃取5分钟，静置分层后，收集有机相。
再加入25mL二氯甲烷，萃取静置，合并有机相，过无水硫酸钠脱水，KD浓缩至尽干，甲醇定容至1.0mL，混匀，过0.45μm有机滤膜，上机。
6 检测程序6.1方法原理用二氯甲烷萃取水中多环芳烃，萃取液经净化浓缩后，用具有二极管阵列检测器的高效液相色谱仪分离检测。
保留时间定性，外标法定量。
6.2 仪器和设备、试剂和材料、样品采集与保存6.2.1 仪器：高效液相色谱仪带二极管阵列检测器和梯度洗脱功能。
（校准周期2年，校准周期内做期间核查）色谱柱：C18 250mm×4.6mm 粒径5μm。
分液漏斗振荡器旋转蒸发装仪6.2.2所需化学试剂乙腈：HPLC级甲醇：HPLC级二氯甲烷：HPLC级无水硫酸钠：分析纯，400℃灼烧2h，冷却后玻璃瓶密封储存。
氯化钠：分析纯，400℃灼烧2h，冷却后玻璃瓶密封储存。
脱脂棉：医用6.2.3玻璃器皿：2000mL分液漏斗、旋转蒸发瓶及一般常用仪器清洗：首先用自来水冲洗玻璃器皿残留的溶剂。
然后用低泡洗涤剂洗刷玻璃器皿，用自来水冲洗三遍。
最后用纯水冲洗三遍、超纯水冲洗三遍。
（冲洗规则遵循少量多次）6.2.4环境条件：实验前对实验室通风6.2.5样品采集与保存：样品采集于棕色硬质玻璃中，水样充满样品瓶，加盖密封，4℃避光保存，7天内萃取。
6.2.6 每分析一批（20个）样品有一个空白加标，组分回收率70%-120%。
6.2.7仪器所配备计算机需满足仪器对软件/硬件的要求6.2.8结果计算6.2.8.1按以下公式计算水样中多环芳烃质量浓度(mg/L)ρ=ρ1×V1V×1000式中：ρ1——水样中多环芳烃的质量浓度 (mg/L)V1——萃取液浓缩后体积(mL)V——水样体积(mL)1000——换算系数6.2.8.2检测过程中及时填写使用记录及维护保养记录。
高效液相色谱法操作规程
1.目的建立高效液相色谱法检测操作规程。
2.适用范围本规程适用于高效液相色谱法试验。
3.编制依据《药品生产质量管理规范（1998年修订）》国家药品监督管理局（1999）4.责任4.1 QC质检员对本规程的实施负责。
4.2 QC主管对本规程的有效执行承担监督检查责任。
5.正文5.1简述5.1.1高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography,HPLC）是一种现代液相色谱法，其基本方法是用高压输液泵将具流动相泵入装有填充剂的色谱柱，注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后，各成分先后进入检测器，用记录仪或数据处理装置记录色谱图并进行数据处理，得到测定结果。
5.1.2检测器5.1.2.1紫外检测器（Ultraviolet detector,UV）紫外检测器是液相色谱中使用最广泛的检测器，几乎所有的液相色谱仪都配此类检测器，是一种选择性检测器。
5.1.2.2优点：灵敏度高、噪声低、线性范围宽、对流速和温度的波动不灵敏，适用于梯度洗脱及制备色谱。
5.1.2.3缺点：只能检测有紫外吸收的物质，流动相的选择有一定限制，流动相的截止波长必须小于检测波长。
5.1.2.4适用范围：大多数有紫外吸收的化合物。
5.2高效液相色谱仪的使用要求5.2.1按国家技术监督局国家计量检定规程汇编中“实验室液相色谱仪检定规程（JJG705-90）”的规定进行定期检定，应符合规定。
5.2.2仪器各部件应能正常工作，管路为无死体积连接，流路中无堵塞或漏液，在设定的检测器灵敏度条件下，色谱基线噪音和漂移应能满足分析要求。
5.2.3具体仪器在使用前应详细参阅各操作说明书。
5.3操作前的准备5.3.1流动相的制备5.3.1.1用高纯度的试剂配制流动相，必要时照紫外分光光度法进行溶剂检查，应符合要求；水应为新鲜制备的高纯水，可用超级纯水器制得或用重蒸馏水。
凡规定pH值的流动相，应使用精密pH计进行调节。
SOP-液相色谱岗位分析方法性能标准、其他要求和步骤
中华人民共和国安徽出入境检验检疫局The Chemical Laboratory of AHCIQ标准操作程序Standard Operation Procedure液相色谱岗位分析方法性能标准、其他要求和步骤Concerning the Performance of Analytical Methods and the Interpretation of Results at LC Post安徽出入境检验检疫局化学技术中心液相色谱岗位分析方法性能标准、其他要求和步骤1．定义1.1 准确度检测结果与可接受参考值之间的符合度。
通过测定真实性和精密度来确定。
1.2 α误差指测试样品符合规定的概率，尽管获得的是不符合规定的测定(是一个假的不符合规定的决定)。
1.3 分析物将要检测、鉴别和/或定量的物质以及分析过程中产生的衍生物。
1.4 β误差测试样品确实不符合规定的概率，尽管获得的是符合规定的测定(是一个假的符合规定的决定)。
1.5 偏差指检测结果与可接受参考值之间的差异。
1.6 标准校准用参考基准值的测量值来代表所测物质量的测量手段。
1.7 认证过的基准物质(CRM)CRM指一种有特定分析物含量赋值的物质材料。
1.8 共色谱法指一个将提取物在进行色谱分离之前分成两个部分的过程。
第一部分进行色谱分离。
第二部分与要测定的标准分析物混合。
然后将该混合物也进行色谱分离。
所加标准分析物的量必须与提取物中分析物的估计值相差不大。
设计此方法是要提高采用色谱法时分析物的鉴别，特别是在没有适宜的内标物可用时。
1.9 协同试验用相同的方法对相同的样品进行分析以确定该方法的性能特性。
该试验包括随机测定误差和实验室偏差。
1.10 确认方法能提供全面或补充信息使物质得到明确地鉴定，并且能在感兴趣的水平进行定量的方法。
1.11 决定限度(CCα)CCα指等于和高于此值时，可以用α误差概率得出认为样品不符合规定的结论的限度。
1.12 检测容量(CCβ)CCβ指可以用β误差概率检测、鉴别和／或定量样品中物质的最小含量。
SOP-QC 对乙酰氨基酚检验操作规程
对乙酰氨基酚检验操作规程1. 目的建立对乙酰氨基酚检验标准操作规程，使对乙酰氨基酚检验操作规范化。
2. 范围适用于对乙酰氨基酚的质量检验。
3. 术语或定义N/A4. 职责质量控制部对本规程的实施负责。
5. 程序5.1 检验依据5.1.1 《中国药典》2020年版二部（第386页）。
5.1.2 对乙酰氨基酚质量标准（质量标准编号：5.1.3 《中国药典》2020年版四部。
5.2 性状本品为白色结晶或结晶性粉末；无臭。
本品在热水或乙醇中易溶，在丙酮中溶解，在水中略溶。
5.2 熔点仪器与器具:熔点测定仪、毛细管。
取干燥失重项下的本品适量，置熔点测定用毛细管中，轻击管壁或借助长短适宜的洁净玻璃管，垂直放在表面皿或其他适宜的硬质物体上，将毛细管自上口放入使自由落下，反复数次，使粉末紧密集结在毛细管的熔封端。
装入供试品的高度约为3mm。
依熔点测定操作规程操作，记录供试品在初熔至终熔时的温度，重复测定三次，取其平均值，既得。
本品的熔点应为168～172℃。
5.3 鉴别仪器与试剂：电子天平、红外分光光度计、三氯化铁试液、稀盐酸、亚硝酸钠试液、碱性β—萘酚试液。
5.3.1 本品的水溶液加三氯化铁试液，即显蓝紫色。
5.3.2 取本品约0.1g，加稀盐酸5ml，置水浴中加热40分钟，放冷；取0.5ml，滴加亚硝酸钠试液5滴，摇匀，用水3ml稀释后，加碱性β—萘酚试液2ml，振摇，即显红色。
5.3.3 本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集131图）一致。
取供试品约1mg，置入玛瑙研钵研细，再取溴化钾粉(约200mg)，在玛瑙研钵中充分研磨混匀，移置于直径13mm的压模中，使铺布均匀，加压至20MPa，约60秒取出。
目视检查应均匀，无明显颗粒。
将供试片置于仪器的样品光路中，进行光谱扫描。
供试品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集131 图）一致。
5.4 检查5.4.1酸度仪器与试剂：电子天平、精密酸度计、pH标准缓冲液。