seahorse能量代谢实验步骤

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Seahorse海马代谢仪使用说明

配制XF细胞线粒体压力测试盒中药物母液
检测液体积 Oligomycin FCCP Rotenone/Ant imycin A 630 μL 720 μL 540 μL
终浓度 100 μM 100 μM 50 μM
将药物稀释为10×浓度，用于加到加药孔中
1.按左边表格，用3 mL 检测液将 oligomycin稀释为所需浓度（或使用大多数细胞都适用的1 μM）。
3.放入无CO2的培养箱，37℃过夜（使校准液能浸没在sensors 中；保证培养箱湿度，防止干燥）
培养细胞
1.100ul 培养液收集细胞，按最佳细胞密度重悬细胞（10,000 - 80,000个细胞/ 孔）。 2.每孔接种100 μL细胞悬液，背景校正孔（A1, B4, C3, D6）不接种细胞。将细胞板室温静置在超净台上1 h。
实验当天准备XF检测液
一个培养板手动加液需100ml，仪器加液需 200ml
1.使用NaOH调节pH值至7.35±0.05 2.检测液中所需要添加的底物及浓度取决于细胞类型和实验设计，或者与生长培养基保持一致。 3.37℃放置备用。
NO sodium bicarbonate Low phenol red (3 mg/L)
Review Run-----Plate Information-----Well Volume-----Plate by----Start Run，放入测试板。当软件出现校准完成提示时，将Utility板换为细胞培养板。点击Continue。仪器完成OCR值测定，数据分析。
寡霉素：ATP合酶抑制剂； FCCP：解偶联剂；抗霉素A/鱼藤酮：呼吸链抑制剂；
How do I know whether the cell density is good?

seahorse 图片结果的分析

seahorse 图片结果的分析（OCR）（ECAR)
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•更新：2014-03-10 23:48
seahorse系列的细胞能量代谢检测仪器，对于检测细胞的糖酵解及氧化磷酸化等比较方便，根据本人的经验给大家讲解一下具体代表的意义希望对做试验的人们有用的。

1. 1
一、首先是耗氧量的检测，
在加oligo之前显示的数值，代表的是细胞的基础耗氧量，包括线粒体氧化磷酸化及质子漏耗氧。

即质子在线粒体膜通过呼吸链形成电势能后，一部分质子回流可以通过ATP合酶形成ATP，将势能转化为ATP中的能量。

一部分通过线粒体膜但是只是发生氧化，势能转化为热量，但是没有用于合成ATP。

oligo是ATP合酶抑制剂，加入此药后减少的耗氧代表的是机体用于ATP合成的耗氧量，间接显示此时细胞的ATP产量。

FCCP是一种解偶联剂，作为一种质子载体使得大量质子回流，大量耗氧，但是这种质子回流不能形成ATP，FCCP后耗氧的增加，代表线粒体的最大耗氧能力，间接显示最大的呼吸能力，
而其相对与基础值的高值代表其还具有的呼吸潜力。

最后加入是抗霉素A和寡霉素，二者是呼吸链抑制剂，完全阻止线粒体耗氧。

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二、细胞的胞外产酸能力间接显示糖酵解能力
基础值代笔的是细胞的非糖酵解产酸值，加入葡糖糖后代表的是此时细胞的糖酵解能力，而加入oligo后，氧化磷酸化被抑制，此时细胞完全靠糖酵解供氧，此时产酸增加，增加值代表细胞的还具有的糖酵解能力即潜力，总的数值代表细胞的最大糖酵解能力，最后加的是糖酵解抑制剂，此药之后的数值表明完全是由糖酵解之外的机理产酸所致的。

Seahorse XFe96 申报资料-药物

4.样品种类：数量为103-105的原代细胞、培养的贴壁或悬浮细胞，胰岛，组织，线粒体及其它细胞器，酵母，线虫，斑马鱼胚胎等。
5.可调温控检测室，温度控制在30-37℃。
6.药物注入系统：气体驱动，自动注入药物。每孔整合4个独立加药窗口，加药体积为20-25l。
7.全程非接触式设计，免去使用任何染料、标签和报告子，摒除放射线或有毒化学物质对操作人员的伤害。
2.软件：windows 7.0操作系统；XFe96数据获取及分析软件。
主要功能、应用范围
主要功能：海马XFe96细胞能量代谢分析系统以96孔微孔板为平台，实时同步检测细胞以及线粒体中的有氧呼吸以及糖酵解功能。主要通过检测细胞或线粒体中代谢指标变化，如ECAR(细胞外酸化率)和OCR（耗氧率），进而解析线粒体的功能，从而了解代谢变化的真实内涵或做出药物毒性评价。检测快速、灵活、通量及灵敏高，能广泛应用于基础研究的各个方面。
美国海马生物技术公司拥有细胞多种生理指标同时检测等多项专利。海马XFe96细胞能量代谢分析系统使用高灵敏度微型传感器及首创的检测原理，革命性地在不破坏样本、不侵入细胞、实验条件无生物危害性的前提下实现实时、高通量、多样本来源的细胞有氧呼吸以及糖酵解作用的检测。在一次实验中能够得到样本的基础呼吸能力、ATP转换、质子渗漏、极限呼吸能力、储备呼吸能力、糖酵解通量、最大糖酵解能力及糖酵解储备能力等细胞代谢主要指标的检测值，并得到细胞生物能量的变化图。并通过这两大能量生成途径的实时对比，揭示它们之间的动态互动变化。
8.耗材一次性使用，用后无须清洗，杜绝交叉污染可能性。
9.检测后细胞保持活性，可以用于后续的其它检测。
10.可以无限次地重复测试以检测动力学反应。
测试样品制备工作站：
包括无二氧化碳培养箱、自动培养基更换系统和温控系统。

海马能量代谢测试流程

海马能量代谢测试流程英文回答：The process of conducting a seahorse energy metabolism test involves several steps. First, the seahorse is placed in a specially designed respirometry chamber, which is a closed system that allows for the measurement of oxygen consumption. The chamber is equipped with sensors to monitor the oxygen levels inside.Once the seahorse is settled in the chamber, the next step is to establish a baseline oxygen consumption rate. This is done by measuring the oxygen levels for a certain period of time while the seahorse is at rest. This baseline measurement provides a reference point for comparison during subsequent stages of the test.After establishing the baseline, the seahorse is then subjected to physical activity, such as swimming or hunting for food. The oxygen consumption is continuously monitoredduring this active phase. This allows researchers to determine the metabolic rate of the seahorse during different levels of activity.The final step of the test involves analyzing the data collected during the rest and active phases. By comparing the oxygen consumption rates during these two phases, researchers can gain insights into the energy expenditure and metabolic efficiency of the seahorse. This information can be used to study the impact of various factors, such as temperature or diet, on the seahorse's energy metabolism.In conclusion, the process of conducting a seahorse energy metabolism test involves placing the seahorse in a respirometry chamber, establishing a baseline oxygen consumption rate, subjecting the seahorse to physical activity, and analyzing the data collected. This test provides valuable information about the seahorse's energy expenditure and metabolic efficiency.中文回答：海马能量代谢测试的流程包括几个步骤。

Seahorse XF实验流程

Seahorse XF实验流程（此为简略版实验流程，详细步骤参见培训手册）XF实验前一天1.种细胞：将细胞接种到Seahorse XF细胞培养板中，在生长培养基中过夜培养。

注：细胞接种时间和培养时间可根据细胞处理要求进行选择。

2.预热仪器：打开Seahorse仪器和电脑，并打开软件，使仪器升温至37℃，过夜预热。

3.水化探针：在Utility Plate中加入Seahorse XF校准液，将测试板放回Utility Plate上，置于37℃无CO2培养箱中过夜水化探针。

XF实验当天1.准备检测液：用Seahorse XF Base Medium配制检测液，加入所需要的底物，将溶液加热至37℃，用NaOH调pH值至7.4，过滤，置37℃水浴中备用。

注：检测液中所需要添加的底物及浓度取决于细胞类型和实验设计，或者与生长培养基保持一致。

2.观察细胞：将细胞板从CO2培养箱中取出，在显微镜下观察细胞状态。

3.细胞换液：将生长培养基换为检测液，然后将细胞放置在37℃无CO2培养箱中1小时。

4.配药：根据试剂盒说明书，配制并稀释药物至所需浓度。

5.加药：将稀释好的药物分别加入测试板上的A，B，C，D 四个加药孔中。

注：根据实验设计选择所用加药孔数量。

6.设计实验模板：用软件记录实验条件和设计实验程序。

7.上机：开始运行实验程序，将加过药的测试板和装有校准液的Utility Plate一起放置到仪器托板上。

8.仪器自动校准探针。

9.换细胞板：当软件出现提示信息时，将Utility Plate换为细胞板。

10.实验完成时根据软件提示信息退出测试板和细胞板，并在显微镜下观察细胞状态。

11.数据分析：采用wave软件和report generator对实验数据进行分析。

基于能量代谢系统评价延胡索乙素对人肝癌细胞的影响

doi：10.3969/j.issn.1000-484X.2021.04.009•肿瘤免疫学•基于能量代谢系统评价延胡索乙素对人肝癌细胞的影响①尹逊哲刘作家②郭焱（长春中医药大学，长春130117）中图分类号R73⁃3文献标志码A文章编号1000-484X（2021）04-0426-05［摘要］目的：利用Seahorse XFp体外细胞能量代谢分析系统探讨延胡索乙素（THP）对人肝癌（HCC）SMMC-7721细胞能量代谢的影响。

方法：不同浓度的THP作用SMMC-7721细胞后，CCK-8法检测THP对SMMC-7721细胞增殖的影响；采用Seahorse XFp细胞能量代谢分析系统检测THP对SMMC-7721细胞线粒体呼吸和糖酵解的影响；优化Seahorse XFp细胞能量代谢分析系统检测SMMC-7721细胞线粒体压力（OCR）和糖酵解条件；流式细胞术检测THP诱导SMMC-7721细胞的凋亡率及细胞周期；Western blot检测SMMC-7721细胞中caspase-3、caspase-9及cytochrome c蛋白的表达差异。

结果：THP处理后的SMMC-7721细胞增殖明显受到抑制，且具有时间和剂量效应关系；OCR最优条件为：葡糖糖浓度2.5mol/L、谷氨酰胺0.2mol/L、丙酮酸钠0.1mol/L，寡霉素1µmol/L、FCCP1µmol/L、鱼藤酮0.5µmol/L；ECAR最优条件为：葡糖糖10mmol/L、寡霉素10µmol/L、2-DG50mmol/L。

THP（150µg/ml）作用SMMC-7721细胞24h后，线粒体呼吸作用被抑制，线粒体基础呼吸、ATP产量及最大呼吸能力均下降；同时抑制糖酵解作用，糖酵解能力、最大糖酵解能力及糖酵解储备均下降；流式细胞术结果显示细胞凋亡率升高，G1期细胞增多，且阻滞在G1期；同时，caspase-9及cytochrome c蛋白表达水平显著升高，形成凋亡小体上调caspase-3表达。

seahorse xf pro工作原理

Seahorse XF Pro是一款高端的代谷细胞分析仪，它采用了新颖的技术，可以实时监测细胞的代谢状态和功能。

Seahorse XF Pro的工作原理是基于代谷细胞的特异性代谷测定技术，它能够实时测定细胞内ATP产生速率和氧化磷酸化水平，从而揭示细胞的能量代谢和功能活性。

下面将逐步介绍Seahorse XF Pro的工作原理：1. 原理概述Seahorse XF Pro利用代谷细胞分析技术，通过测定细胞内ATP产生速率和氧化磷酸化水平来实时监测细胞的能量代谢和功能活性。

它采用了荧光探针技术和高通量检测系统，可以在短时间内对细胞进行多参数测定，为细胞代谷研究提供了重要的工具和技术支持。

2. 测定原理Seahorse XF Pro通过测定细胞内ATP产生速率和氧化磷酸化水平来实时监测细胞的代谢状态和功能活性。

它利用荧光探针技术，通过不同荧光信号的变化来反映细胞内代谷物质的浓度和动态变化。

Seahorse XF Pro采用了高通量检测系统，可以对多个样品进行同时测定，提高了测定效率和数据可靠性。

3. 适用范围Seahorse XF Pro主要应用于生物医学研究领域，可以用于细胞代谷、药物筛选、毒性评价和疾病模型研究等方面。

它可以对不同类型的细胞和生物样品进行分析，为科研人员和生物制药企业提供了一种快速、准确、可靠的细胞功能分析方法。

4. 工作流程Seahorse XF Pro的工作流程一般包括样品处理、实验设置、反应测定和数据分析四个步骤。

在样品处理阶段，需要对细胞进行适当的处理和预处理，以保证实验的准确性和可靠性。

在实验设置阶段，需要根据实验的要求进行合理的参数设置和实验方案设计。

在反应测定阶段，需要将样品加入到测定盘中，通过Seahorse XF Pro进行代谷测定实验。

在数据分析阶段，需要对测定结果进行分析和解读，得出实验结论和科研成果。

5. 应用前景Seahorse XF Pro作为一种新型的细胞分析仪器，具有广阔的应用前景和市场潜力。

seahorse实验原理

seahorse实验原理Seahore细胞能量代谢分析仪是检测线粒体功能和细胞代谢的有力工具，在代谢研究中广泛使用。

因为其检测过程中用到了一系列氧化磷酸化和电子传递抑制剂，也涉及到糖酵解、氧化磷酸化等不同代谢途径，所以了解其基本原理和分析方法对理论学习和科研实践都很有帮助。

Seahore Fe96Seahore检测时将细胞培养在专用的微孔板上，实时检测加入不同药物后的耗氧率（O2 conumption rate，OCR）和胞外酸化率（etracellular acidification rate，ECAR），来表征细胞的代谢状况。

其中OCR由线粒体电子传递造成，ECAR则源自乳酸发酵（糖酵解酸化）和线粒体产生的二氧化碳（线粒体酸化）。

OCR用来研究线粒体氧化磷酸化功能。

检测时一般先测定正常状态下的基础呼吸（baal repiration），然后加入寡霉素（oligomycin）抑制ATP合酶，这是OCR显著下降，仅余下质子渗漏（proton leak）造成的耗氧率。

降低部分即为氧化磷酸化的耗氧率（ATP production）。

加入解偶联剂FCCP后，电子传递失去质子梯度的约束，就会以最大速率进行。

所以OCR急剧升高，达到最大耗氧量（maimal repiration）。

此值与基础呼吸之差，称为呼吸潜力（pare repiratory capacity）。

最后加入电子传递抑制剂，如抗霉素A（antimycin A），完全抑制电子传递，耗氧率降至最低。

ECAR经常用来研究糖酵解等代谢状况。

加入葡萄糖之前的基础值是非酵解产酸，如线粒体呼吸产生的二氧化碳造成的线粒体酸化。

之后加入葡萄糖，升高的值就代表糖酵解。

加入寡霉素后，因为氧化磷酸化被抑制，细胞被迫完全采用乳酸发酵供能，所以产酸增加。

此时的值称为酵解容量（glycolytic capacity），与糖酵解之差称为酵解储备（glycolytic reerve）。

seahorse实验原理

seahorse实验原理Seahorse（海马仪器）是一种流式细胞代谢分析系统，用于评估细胞的呼吸和酸碱平衡。

它可以通过测量氧气消耗和酸碱转化的动力学来确定细胞的能量代谢状态和功能。

Seahorse仪器的工作原理包括以下几个步骤：细胞预处理、装载、测量和分析。

首先，细胞预处理。

细胞在培养基中孵育，通过调整培养条件来激活或抑制细胞代谢途径。

例如，将细胞孵育在低糖或高糖培养基中，以模拟缺氧或高糖环境。

在处理前，细胞需要进行准备，包括洗涤和预处理。

其次，装载。

经过预处理的细胞被装载到Seahorse培养底片的微孔中，通常每个孔有数千个细胞。

装载时要确保细胞均匀分布，以使测量结果准确。

接下来，测量。

Seahorse系统通过将循环的介质通过底片的微小泵浦系统，将细胞与测量区分离。

细胞所在的区域中有传感器，可以测量介质中的氧气和酸碱变化。

在测量期间，根据预设的实验方案，底板内的介质会逐渐变化。

例如，可以通过控制气体组成来调节氧气浓度，并在短时间内迅速改变实验环境。

最后，分析。

Seahorse系统通过测量介质中的氧气和酸碱变化来计算各种细胞代谢参数。

氧气消耗速率（OCR）是一个关键指标，它反映了细胞的呼吸活性。

酸化速率（ECAR）是另一个关键指标，它反映了细胞的酸碱代谢状态。

通过分析OCR和ECAR之间的关系，可以评估细胞的能量代谢状态和功能。

需要注意的是，Seahorse系统只能提供相关的代谢数据，对于潜在的生物学机制的解释需要进一步的研究和分析。

总结起来，Seahorse（海马仪器）通过测量细胞的呼吸和酸碱平衡来评估细胞的能量代谢状态和功能。

它的工作原理包括细胞预处理、装载、测量和分析。

通过分析氧气消耗速率（OCR）和酸化速率（ECAR）之间的关系，可以评估细胞的能量代谢状态和功能。

Seahorse系统为细胞研究提供了一个有力的工具，可以深入了解细胞代谢的机制。

seahorse线粒体能量代谢中的计算公式

seahorse线粒体能量代谢中的计算公式
线粒体是细胞中的重要器官，负责维持细胞的能量代谢。

seahorse是一种常用于研究线粒体功能的设备，通过测量细胞的呼吸功能来评估线粒体对能量代谢的贡献程度。

在seahorse实验中，有几个重要的计算公式用于评估细胞的线粒体能量代谢。

1. 基础能量代谢率（Basal metabolic rate, BMR）：
BMR是用来评估细胞在静息状态下的能量消耗速率，通常以单位时间内消耗的氧气量（OCR）为衡量指标。

BMR的计算公式为：
BMR = OCR - 非线性静息呼吸（Non-mitochondrial respiration）
2. 最大呼吸性能（Maximal respiration）：
最大呼吸性能是指细胞在最大程度上利用氧气进行呼吸以产生能量的能力。

在seahorse实验中，最大呼吸性能通常通过刺激剂（如化合物）的添加来激活细胞的呼吸，其计算公式为：
Maximal respiration = 最高OCR - 非线性静息呼吸
3. 呼吸耦合效率（Respiratory coupling）：
呼吸耦合效率是指细胞将氧气转化为ATP的效率。

该指标常用于评价细胞的线粒体功能状态和运作情况。

呼吸耦合效率的计算公式为：
Respiratory coupling = (最高OCR - 非线性静息呼吸) / 最高OCR
以上是seahorse线粒体能量代谢中常用的计算公式，通过这些公式我们可以评估细胞的能量代谢状况、线粒体功能以及细胞对外界刺激的响应情况。

这些计算公式在研究线粒体与能量代谢有关的问题时起到了重要的作用，并有助于揭示细胞内部的能量调控机制。

seahorse糖酵解压力计算

主题：seahorse糖酵解压力计算1. 什么是seahorse糖酵解压力计算Seahorse糖酵解压力计算是一种用于测量细胞糖酵解压力的技术。

通过这种计算方法，可以准确地评估细胞的能量代谢状态，从而帮助科研人员更好地理解细胞的生物化学过程。

2. 计算原理Seahorse糖酵解压力计算基于细胞对不同代谢物的利用情况，通过测量溶解氧和酸化速率来估算细胞的糖酵解压力。

在实验中，细胞被置于含有葡萄糖和琥珀酸的培养基中，随后通过测量细胞所产生的二氧化碳和溶解氧来计算细胞的代谢活性和糖酵解压力。

3. 应用领域Seahorse糖酵解压力计算被广泛应用于生物医学研究领域。

特别是在肿瘤代谢、代谢性疾病和药物筛选研究中，这种技术可以提供重要的数据支持，帮助科研人员更好地理解细胞代谢的变化和调控机制。

4. 实验步骤进行seahorse糖酵解压力计算实验需要严格按照以下步骤进行： a. 细胞培养：首先需要培养待测的细胞系，保证其健康状态和代谢活性。

b. 实验准备：将细胞接种于seahorse仪器提供的微孔板中，并将培养基替换为含有葡萄糖和琥珀酸的测定培养基。

c. 数据获取：通过seahorse仪器，测量细胞的酸化速率和溶解氧水平。

d. 数据分析：根据实验数据，计算细胞的糖酵解压力和代谢活性，从而得出相关结论。

5. 优势和局限性Seahorse糖酵解压力计算技术具有高灵敏度、高通量和实时监测的优势，但也存在一些局限性，如对细胞样本量和培养条件的要求较高，需要严格控制实验操作等。

6. 结论Seahorse糖酵解压力计算是一种非常有价值的技术，可以帮助科研人员深入了解细胞的代谢活性和糖酵解压力，为生物医学研究提供重要的数据支持。

随着这一技术的不断发展和完善，相信它将在生命科学领域发挥越来越重要的作用。

Seahorse糖酵解压力计算技术作为一种先进的代谢测定技术，正在被广泛应用于生物医学研究领域，并且在不断地发展和完善。

在肿瘤代谢、代谢性疾病和药物筛选研究中，Seahorse糖酵解压力计算技术可以提供重要的数据支持，帮助科研人员深入了解细胞的代谢活性和糖酵解压力。

海马能量代谢测试流程

海马能量代谢测试流程英文回答：The process of conducting a hippocampal energy metabolism test involves several steps. First, the subjectis prepared for the test by fasting for a certain period of time, usually overnight. This ensures that the body is in a fasting state and allows for more accurate measurements of energy metabolism. Next, the subject is brought into the testing room and connected to various monitoring devices, such as electrodes and sensors, to collect data during the test.Once the subject is prepared, the actual test begins. The subject is given a specific task or activity to perform, such as solving puzzles or walking on a treadmill. These activities are designed to stimulate the hippocampus and increase its energy consumption. While the subject is engaged in the task, measurements of oxygen consumption and glucose utilization are taken to assess the energymetabolism of the hippocampus.During the test, it is important to monitor thesubject's vital signs and ensure their safety. This includes keeping track of heart rate, blood pressure, and oxygen saturation levels. Any abnormal or concerning readings should be addressed immediately to ensure the subject's well-being.After the test is completed, the collected data is analyzed to determine the energy metabolism of the hippocampus. This analysis may involve comparing the subject's results to a control group or previous data to assess any abnormalities or deviations. The findings from the test can provide valuable insights into the functioning of the hippocampus and its role in energy metabolism.In conclusion, the process of conducting a hippocampal energy metabolism test involves preparing the subject, performing a task to stimulate the hippocampus, monitoring vital signs, and analyzing the collected data. This test provides valuable information about the energy metabolismof the hippocampus and its functioning.中文回答：进行海马能量代谢测试的过程包括几个步骤。

Seahorse海马代谢仪使用说明

2.按以下表格，用检测液将FCCP稀释为不同的浓度
3.取300 μL 50 μM rotenone/antimycin A母液至2700 μL检测液中。
加药
从无CO2培养箱中取出已水化的测试板。按以下说明，将药物分别加到每个加药孔里。
加药孔A：细胞孔内oligomycin终浓度为1 μM。每个A 孔加入56 μL 10×药物。
Cartridge Lid
耗材
自动药物注射端口启用实时功能分析
Cell Mito Stress Test Assay Kits
实验前一天
水化探针
1.在Utility Plate每孔中加入1ml校准液
(Seahorse XF 校准液用于溶解和校准 XF 小柱，并包含 FluxPak)
2.将Hydro Booster放在Utility Plate上，Sensor Cartridge放在最上面
B C同样
Pretreatment----add-----不用做修改
Assay Media-----Mito Stress test medium
填写相关信息：Name ,Cell Type, Seeding density（Cell Type2，3， 4 同样），之后点击“Generate Group”查看
配制XF细胞线粒体压力测试盒中药物源自母液检测液体积Oligomycin FCCP Rotenone/Ant imycin A
630 μL 720 μL 540 μL
终浓度
100 μM 100 μM 50 μM
将药物稀释为10×浓度，用于加到加药孔中
1.按左边表格，用3 mL 检测液将 oligomycin稀释为所需浓度（或使用大多数细胞都适用的1 μM）。

seahorse测糖酵解实验步骤

seahorse测糖酵解实验步骤一、引言糖酵解是生物体中常见的一种能量供应途径。

通过糖酵解，葡萄糖被分解为乳酸或乙醇，同时释放大量的能量。

糖酵解实验可以通过测量氧耗和酸产量来评估细胞的酵解能力。

本实验将介绍如何使用seahorse测量细胞的糖酵解能力。

二、实验材料1. Seahorse XFe96 Analyzer2. Seahorse XFe96 FluxPak3. Seahorse XF Cell Mito Stress Test Kit4. 预培养的细胞5. 糖酵解缓冲液三、实验步骤1. 细胞预处理a. 取出预培养的细胞，用PBS洗涤一次，以去除培养基中的残留物。

b. 加入足够的细胞培养基，将细胞悬浮液转移到离心管中。

c. 用离心机将细胞离心，去除上清液。

d. 加入适量的糖酵解缓冲液，将细胞重新悬浮。

e. 计算细胞数目，并将细胞悬浮液移至测量板中。

2. 实验准备a. 准备Seahorse XFe96 FluxPak，根据说明书将其准备好。

b. 准备Seahorse XF Cell Mito Stress Test Kit，根据说明书将其准备好。

3. 测量细胞糖酵解能力a. 将测量板放入Seahorse XFe96 Analyzer中。

b. 启动Seahorse XFe96 Analyzer软件，并选择合适的实验模板。

c. 将实验板装入Seahorse XFe96 Analyzer，开始进行实验。

d. 在实验过程中，软件会自动控制仪器，记录氧耗和酸产量的变化。

e. 实验结束后，软件会生成实验结果报告，包括氧耗速率和酸产量等数据。

f. 根据实验结果分析细胞的糖酵解能力。

四、实验注意事项1. 细胞预处理时要注意操作的无菌性，以避免细菌污染。

2. 在实验过程中要保持实验条件的稳定，避免外部因素对实验结果的干扰。

3. 实验前要熟悉Seahorse XFe96 Analyzer的操作步骤，并确保设备正常工作。

ecar 实验步骤

ecar 实验步骤
ECAR（Extracellular Acidification Rate，细胞外酸化速率）实验是一种用于检测细胞糖酵解能力的实验方法。

以下是进行ECAR实验的一般步骤：
1. 准备实验所需的细胞、试剂和仪器。

确保Seahorse仪器已经提前打开并预热至37℃，同时打开电脑和软件。

2. 在Utility Plate中加入Seahorse XF校准液，并将测试板放回Utility Plate上，然后置于37℃无CO2培养箱中过夜水化探针。

3. 将实验细胞用试剂盒提供的生长培养基收集，接种到Seahorse XF细胞培养板中，每孔铺105个细胞。

待细胞贴壁后（通常需要4-6小时），将生长培养基换为检测液，然后将细胞放置在37℃无CO2培养箱中1小时待用。

4. 准备检测液。

使用Seahorse XF Base Medium配制检测液，并加入所需的底物。

将溶液加热至37℃，用NaOH调pH值至7.4，过滤后备用。

在使用前，需要将检测液在37℃水浴中预热1小时。

5. 将细胞培养板放入Seahorse仪器中，开始进行实验。

实验过程中，仪器会检测细胞外酸化速率（ECAR），以反映细胞的糖酵解能力。

6. 实验结束后，收集数据并进行分析。

通过比较不同条件下的ECAR值，可以评估细胞糖酵解能力的变化。

请注意，具体的实验步骤可能因不同的实验条件和仪器而有所不同。

因此，在进行ECAR实验时，建议参考仪器制造商提供的操作手册和指南，以确保实验的准确性和可靠性。

Seahorse XF96 线粒体功能测定系统实验方案

Seahorse XF96 线粒体功能测定系统实验方案填写模版申请实验时间： 2012.12.22优化条件预实验： √ 正式试验：（打√）1.实验对象：细胞 √ ；线粒体（打√）细胞品系： A549 ；培养条件：Hyclone 高糖DMEM ，贴壁生长细胞种板时间： 12-21 PM16:00 ；a .细胞浓度：（浓度已确定）：细胞衰老（线粒体功能）3.预处理：提前12小时加某药预处理时间： 12-21 PM9:00a.各加药孔所加试剂及浓度：A 孔： Oligo 0.5μMB 孔： FCCP 优化C 孔： InhibitorA+B 各0.5μMD 孔：b. 需优化条件试剂名称： FCCPc.最终配制试剂方案： 175μl A孔：试剂 Oligo 4.8 μl + 2995 μl测定培养液每孔加25μl 200μl B孔：试剂 FCCP 14 μl + 2986 μl测定培养液每孔加25μl 225μlC孔：试剂 Inhib A 6 μl + 2988 μl测定培养液试剂 Inhib B 6 μl每孔加25μl 250μl D孔：试剂μl+ μl测定培养液B孔：0.3μM孔：0.5μl + 499μl0.5μM孔：0.9μl + 499μl1μM孔： 1.8μl + 498μl2μM孔： 3.6μl + 496μl4μM孔： 7.2μl + 493μl注：1.提供排枪，不需摸浓度的试剂推荐一次配3ml，足够加96孔2.为保证结果准确性及稳定性，建议每组设置至少3-4个复孔3.现有试剂盒均只需≤3个加药孔，推荐使用ABC孔，如果需要利用加药孔加其他药物请自行修改填写以上配制方案费用：开机费： 50元仪器使用费：150元检测板：460元Kit： 280元检测液：80元细胞培养：免费配套设备：免费合计：1020元。