疟原虫12

1. 疟原虫生活史 2. 疟原虫检验 3. 疟原虫镜下形态镜
疟原虫生活史
疟原虫的发育和繁殖，必须通过脊椎动物与昆 虫媒介两个宿主，人体疟原虫的宿主是人和按蚊。 疟原虫在人体内的发育分成肝细胞内的发育（红 细胞外期或肝细胞期）和红细胞内的发育（红细 胞内期）两个阶段。
生活史要点
1.疟原虫生活史需要两个宿主：人和按蚊 中间宿主：人（肝细胞、红细胞）
圆形，空泡消失
圆形，空泡消失
圆形或卵圆形，空泡消失
黄褐色，分布不匀
黑褐色团块状
深褐色，分布不匀
棕黄色，分布不匀
大于正常红细胞
小于正常红细胞
小于正常红细胞
小于正常红细胞
12～24个，常为16～18个，排列8～26个，常为8～18个，排列不规则，6～12个，常为8个，常排列如菊花 6～14个，常为8个，排列不规则，
5. 血片中可见各 期的原虫形态
6. 成熟裂殖体约 含12-24个裂殖 子
三日疟（P.malariae）诊断要点
1. 红细胞不 涨大或略 小
2. 环状体可 呈方形
3. 胞浆不活 跃呈带状 形
4. 成熟滋养 体呈菊花 状,内含 6-12个裂 殖子
5. 核可能出 现在环状 体边缘
卵形疟（P. ovale）诊断要点
2. 刚涂制的血膜要平放在标本盒内，厚血膜未干前勿使标本盒 倾斜，以免血膜倾向一侧，造成血膜厚薄不均。
3. 血膜让其自然干燥，切忌用太阳晒或火烤，干透后才能用甲 醇固定薄血膜。夏天标本尽可能24-48小时内固定染色；冬天 也不能超过72小时。放置时间越久，厚血膜越不易脱血，染 色效果也差。
血膜的染色
目前常用的血膜染剂有吉氏和瑞氏两种。 推荐使用吉氏染色法： 1、吉氏染剂不仅适用于厚血膜和批量血膜的染 色，而且效果稳定，染色时间和染液浓度对染色 结果影响较小，染色后的血膜保存时间较长，同 时吉氏染剂能长期保存而不变质，染色技术也易 掌握。 2、瑞氏染色法对浆、颗粒着色较好，而吉氏染 色法对核和寄生虫着色较好。
不规则，较大
较小
状，较大
较大
色素
黄褐色，常聚集一侧
黑褐色团块
深褐色，常聚集中央
棕黄色，聚集中央或一侧
大小形状
大于正常红细胞，圆形
较大，新月形，两端尖锐
小于正常红细胞，园形
小于正常红细胞，圆形
雌配子体
核 1个，较小，深红色，位于一侧
胞浆 色素
深蓝色 黄褐色，均匀散在
大小形状
大于正常红细胞，园形
1个，较小，深红色，位于中央 深蓝色
黑褐色，松散分布于核周围
1个，较大，淡红色，位于中央 浅蓝色
深褐色，均匀散在
1个，较大，淡红色，位于中央 浅蓝色
棕黄色，散在
四种疟原虫厚血膜形态鉴别(吉氏染色)
间日疟原虫
恶性疟原虫
三日疟原虫
卵形疟原虫
小滋养体
较大。核1个，较大，胞 较小。核1～2个，较小，
浆较厚。常呈"！"或"，" 胞浆纤细。常呈"！"、"飞
成批血片染色
将已固定薄血膜的血片插入染色缸，倒入3%吉氏染 液稀释液（3毫升吉氏原液加缓冲液或净水97毫升， 混匀）浸没血片，同时对厚薄血膜染色30min （如染液不合标准时，得酌情增减染色时间和浓 度），然后用清水轻轻将染液漂洗干净，将血片标 本（血膜面朝下）插于晾干板上晾干，包装，镜检。
❖ 质量好的染色 : 显微镜下核呈红色,胞浆呈蓝色
一团不透明者不是。 4、体积最大的疟原虫也不能超过中性粒细胞。 5、数量极少，似是而非者判为可疑，应重新选择时机
多次制片、多次检查。
薛氏点出现较早粗大，数多
大小
较大，约占红细胞直径的1/ 3
小环状体较小，约占红细胞直径1/6, 大环状体与间日疟原虫相似
中等
中等
小滋养体 大滋养体 未成熟裂殖体 成熟裂殖体
核
胞浆
色素 大小
核 胞浆
色素
大小 核
胞浆 色素 大小
裂殖子
1个
较薄
无 较大 多见1个 阿米巴样，常含空泡
1或2个 小环状体纤细，大环状体与间日疟原
疟原虫
常识及检验
疟原虫为单细胞真核生物，属原生动物亚界、 顶端复合物门、孢子纲、真球虫目、疟原虫科、 疟原虫属。
人体疟原虫有4种：间日疟原虫、恶性疟原 虫、三日疟原虫和卵形疟原虫，依次引起间日疟、 恶性疟、三日疟和卵形疟。
疟原虫主要分布在地球热带、亚热带各国，即非洲、 东南亚、南美等地区，约有20亿人口在疫区。每年死于疟 疾的儿童约100万。我国在华南、华中的某些地区，特别 是云南和海南省，因此，疟疾仍是我国重点防治的寄生虫 病之一。至今全球发现疟原虫有130多种，宿主：人类、 哺乳动物、鸟类及爬行类。
终末宿主：按蚊 2.感染期：子孢子 3.感染方式：蚊虫叮咬、输血
●分子生物学、血清学技术发展迅猛,但是确诊疟 疾的“金标准” 仍然是血液显微镜检查
●显微镜检查是唯一可鉴别4种疟原虫的方法
●厚薄血涂片的检查仍被认为是不可替代的疟疾 诊断的金标准
血片制作与染色
常用的血涂片有两种：
薄血膜 厚血膜
薄血膜
红细胞单层排列
标本片
注意：抗凝血制作的血片其粘附力差，染色冲 洗易于脱落，可先用生理盐水洗涤2-3次后，再 制作厚、薄片。
1、薄血膜固定 2、厚血膜溶血
制作血膜的注意事项
1. 玻片清洗时，避免玻片碰撞、磨损。制作血膜的载玻片必须 完全清洁而毫无油渍或污垢。制片时，手指只能持载片的边 缘，不能接触玻片表面。
1. 红细胞涨大
2. 常见慧星状 ( 也称齿轮状)
3. 环粗大
4. 薛氏点明显
5. 成熟滋养体类 似三日疟原虫 但更粗大
6. 成熟裂殖体约 含4-12个裂殖 子
小结：血片镜检中 鉴定是否为疟原虫的五条原则
1、疟原虫要有核有浆（红核蓝浆）。 2、疟原虫各期（除环状体外）均含有疟色素。 3、疟原虫自然形态要像；疟原虫呈半透明状态，模糊
冲洗方法：染色后不要直接将染液倒掉，应 将玻片连同染液一起放在水中漂洗，或沿玻片及 染色缸边缘加水使染液表层溢出，并轻轻冲洗， 以免染液色素颗粒玷污血膜。
疟原虫的形态
疟原虫形态检查三要素：胞核、胞质和虐色素
胞核 即细胞核或染色质粒。在正常情况下核呈鲜红色，呈圆形或不规则的颗粒状。 核的结构致密，只有在个别发育阶段较为疏松。例如间日疟原虫雄配子体的 核，有时因胞浆厚密或染色深蓝，使核呈暗红或紫红色。
被寄生红细 常见红细胞“影子”和薛 可见红细胞“影子”和茂
胞
氏点
氏点
可见红细胞“影子”
小滋养体时即可见薛氏点
其他
仅见小滋养体(或)和配子 常可查到各阶段的疟原虫 体。一般不见大滋养体和 常可查到各阶段疟原虫
裂殖体
常可查到各阶段疟原虫
恶性疟（P.falciparum）鉴定 要点
1. 红细胞不涨大 2. 环状体细小, 一个红
黑褐色，紧密分布于核周围 较大，腊肠形，两端钝园
1个，较小，深红色，位于一侧 深蓝色
深褐色，均匀散在 小于正常红细胞，圆形
1个，较小，深红色，位于一侧 深蓝色
棕黄色，散在 小于正常红细胞，圆形
雄配子体
核
胞浆 色素
1个，较大，淡红色，位于中央 浅蓝色
黄褐色，均匀散在
1个，较大，淡红色，位于中央 浅蓝色或淡红色
❖ 如果血片偏红,说明染液偏酸性 ❖ 如果血片偏蓝,说明染液偏硷性
偏酸
标准
偏碱
稀释和冲洗用水：为使厚、薄血膜着色好， 应使稀释的染液呈中性或稍偏碱性，故应用 pH7.0~7.2的水稀释。当染色太蓝，可用pH较 低的缓冲水冲洗；如染色太红，则用pH较高的缓 冲液冲洗；如染色太深，可延长冲洗时间，予以 校正。
与间日疟原虫相似，但较 小。色素较粗大
卵圆形，大小与间日疟原虫 相似， 雌配子体核致密，偏
于一侧，雄配子体核疏松
色素
黄褐色，细小。杆状，或 结成粗大颗粒。分布不匀
黄褐色，颗粒细小，结成 团块后，呈黑褐色。配子 体色素粗大，分布于核周
围
有时小滋养体可见色素， 深褐色，较粗大。沿边分
布
色素颗粒较大，呈深棕色， 分布弥散
厚血膜 标记处
厚薄血膜的优缺点及适用范围
薄血膜：用血量少1-1.5ul，耗时较多，不适用于大规 模调查，常出现漏诊，因薄血膜血液干燥快，原虫形 态极少变形，多用于以观察疟原虫形态与鉴别虫种。
厚血膜：用血量较多4-5ul，疟原虫胞浆和核有一定程
度的固缩，较难识别；但节省时间，阳性检出率较高， 厚血膜的镜检效率比薄血膜约高六倍。 现常用的一张载玻片上同时做厚薄血膜各一， 厚血膜用来检查，薄血膜供编号和鉴别虫种 用。
疟原虫镜下形态
被寄生的红细胞 核 胞浆
薛氏小点 空泡
核 虐色素
四种疟原虫薄血膜形态鉴别(吉氏染色)
间日疟原虫
大小形状
胀大
被寄生红细胞
颜色 斑点
褪色
薛氏点出现稍晚，红色，细小数 多
恶性疟原虫 正常
正常或稍紫 茂氏点红色，粗大数少
三日疟原虫 正常或缩小
正常 齐氏点淡红色，微细
卵形疟原虫
正常或稍胀大，卵圆形或边缘呈伞 矢状 褪色
细胞内可有几个环 状体,环状体内可有2 个核 3. 环状体可贴在红细 胞边缘 4. 血片中没有其他发 育期滋养体 5. 配子体呈新月形或 腊肠形 6. 成熟裂殖体约含632个裂殖子 7. 可出现茂氏点
间日疟（P. vivax ）鉴定要点
1. 红细胞通常涨 大
2. 薛氏点明显
3. 成熟环状体粗 大
4. 滋养体胞浆有 阿米巴样伪足
单个血涂片染 色
操作1 （快染） 量筒内量2ml缓冲液或净水， 直接滴加吉氏原液7滴，混匀，滴入待染标本 的厚薄血膜上，染色10min，清水细缓冲洗， 晾干镜检。
操作2 (慢染) 在量筒内量2ml蒸馏水或净水， 再滴加吉氏原液4滴，混匀，滴入待染标本上， 染色30~40min。清水细缓冲洗，晾干镜检。
不匀
裂殖体
较大。裂殖子12～24个。 较小。裂殖子8～26个。 较小。6～12个。裂殖子 大小与间日疟原虫相似，裂
裂殖子较大裂ຫໍສະໝຸດ 子较小大于间日疟原虫裂殖体 殖子6～14个，核较大
配子体
较大。圆形，色素粗大。
雌配子体较大，核小，胞 雌配子体新月形，雄配子
浆深蓝色，雄配子体较小，
体腊肠形
核大，胞浆浅蓝色
血膜的制作（涂片操作）
❖涂制厚、薄血膜的位置 通常是将厚、薄血膜涂在一 张载片上。方法是将载片分为6等分，第1、2格备贴 标签及编号用；厚血膜涂在第3格中央，薄血膜涂在 第4格前缘至第6格中部，血片每张玻片涂厚、薄血膜 各1个。
❖ 厚血膜血量适宜，不宜过
多或过少
❖ 薄血膜平整,无皱折和空泡，
标标签签
胞质 被染成蔚蓝色或深蓝色，随着虫体发育长大，细胞浆逐渐增多。间日疟原虫 发育到大滋养体阶段，胞浆呈阿米巴样活动，胞浆内有空泡。
疟色素 不着色，颜色和颗粒的形状，因疟原虫种类而异。间日疟原虫的色素颗粒呈 细小杆状，黄褐色；恶性疟原虫色素呈块状，黑褐色；三日疟原虫的色素呈 砂粒状，深褐色；卵形疟原虫的色素与间日疟原虫相似。疟色素在虫体内散 在分布或聚集成团块。
虫相似 无
较小 1或2个
圆形，空泡不显著
1个
较粗厚
偶见细小褐色颗粒 较小 1个
带状，空泡不显著
1个
较粗厚
无 较小 1个 圆形，空泡不显著
黄褐色，细小，杆状，散在分布
黄褐色，细小，结成团块后，呈黑褐 色
较大
较小
2个以上
2个以上
深褐色，粗大，沿边缘分布
较小 2个以上
棕黄色，较粗大
较小 2个以上
圆形或不规则，空泡消失
状
鸟"、"Ｖ"和"断环"状
中等。核1个，较大，胞 浆粗厚。常呈 "环状"或"
鸟眼"状
大小与间日疟原虫相似，胞 浆致密，核较大。
较大。呈阿米巴样，形状
大滋养体
不规则。核位于胞浆之中 或外边，胞浆常缩成圆形 或断裂成数块。色素分布
较小。常呈圆形，色素细 小或结成1～2个团块
中等。常呈圆形，色素粗 大
大小与间日疟原虫相似，胞 浆呈深蓝色，核较大