实验二微生物的分离纯化_图文_图文

④真空冷冻干燥法 加有保护剂的菌悬液在冻结状态下予以真空干 燥。 适用于各种微生物，便于大量保藏，菌种存活 时间长，是目前最好的保藏方法。 ⑤液氮超低温保藏法 将菌种置于保护剂中，预冻后保存在液氮超低 温冰箱中（ -196℃）。 适用于各种微生物的较理想的保藏方法。
几种常用菌种保藏方法的比较
方法名称
实验二微生物的分离纯化_图文_图文.ppt
内容提要
• 分离 • 纯化 • 形态观察
（1）接种
• 半固体培养基：穿刺接种 • 液体培养基接种 • 普通琼脂培养基：涂布平板，平板划线接种，斜
面划线接种 • 浅盘固体接种
划线接种注意要点
• 划线时接种环与平皿约成30-40度角,轻轻接触, 以腕力在琼脂表面轻快滑动,不能划破琼脂.
同一细菌在不同的培养平板上形成不同的特征菌落
（4）菌种保藏
• 最常见的保藏方法：斜面 • 细菌的保藏：甘油保藏 • 真菌的保藏：石蜡油保藏、孢子保藏
菌种保藏的方法
菌 种 保 藏 方 法

连续在培养基上（内）移种
生活态 传代培养保藏法 连续在活宿主上（内）移种
固体斜面
湿法 半固体琼脂柱
真菌分离
• 利用低碳／氮比的培养基可使真菌生长菌落 分散，利于计数，分离和鉴定。这里主要是 利用营养成分的减少而使生长减慢，并由此 限制真菌的迁涉生长。
• 一般采用PDA培养基 • 改变培养温度将有利于不同嗜温区真菌的分
离。 • 有时，真菌子实体形成必须有光线，这在分
离培养时应加以考虑。
（2）纯化
2、琼脂平板在使用前应置于37℃培养箱中孵育l 、2天。
3、培养基的生物物理学参数，如pH及盐分也应 调节到与试样的生态系统参数值相近。
放线菌的分离
放线菌分离培养需考虑的生态参数：
– 温度、pH、离子强度、氧化还原电势和底物浓度。 – 一般采用高氏1号培养基，大多数放线菌的分离培
养是在贫脊或复杂底物的琼脂平板上进行的。除嗜 温性放线菌外，其他放线菌一般在培养4-20天内在 分离平板上缓慢形成菌落。 – 选择性地添加抗生素，通常加入抗真菌剂制霉菌素 或放线菌酮，以抑制真菌的繁殖。
主要措施
适宜菌种 保藏期 评 价
冰箱保藏法（斜面 ）
冰箱保藏法（半固 体）
石蜡油封藏法* 沙土保藏法
冷冻干燥法
低温 低温 低温、缺氧 干燥、无营养
各大类 细菌、酵母菌
各大类** 产孢子微生物
干燥、无氧、低 温、有保护剂
各大类
3~6月 6~12月 1~2年 1~10年
5~15年 以上
简便 简便 简便 简便 有效 简便 有效
• 第一次划线应占平皿面积的1/10,以后每次划线 约占面积的1/4—1/5.
• 划线为连续划线,不能间断.应占满平皿.划线不 能交叉重复.
• 每次划完后接种环应灭菌.
稀释分离涂布平板
稀释分离倾注平板
厌氧微生物的分离
厌氧罐
厌氧手套箱
厌氧罐
厌氧手套箱
细菌的分离
1、一般采用NA培养基，加入抗真菌剂(如放线菌 酮和制霉素)，掺加浓度一般为50μg／m1， 以 抑制真菌的生长。
（3）形态观察
菌落（colony）： 单个（或聚集在一起的一团）微生物在适宜
的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度 可以形成肉眼可见的、 有一定形态结构的子细胞 生长群体
众多菌落连成一片
菌苔（lawn）
不同微生物在特定培养基上生长形成的菌落或菌苔一般 都具有稳定的特征（形状、颜色等），可以成为对该微 生物进行分类、鉴定的重要依据。
休眠态
液体介质（蒸馏水、糖液、其它溶液）
干法 藏在玻低温保藏法 方法：菌种管置4℃冰箱保藏，定时传代 原理：低温下，微生物代谢强度明显下降 。 ②石蜡油低温保藏法： 橡皮塞取代棉塞、加石蜡油。 ③干燥保藏法 将菌种置于土壤、细纱、滤纸、硅胶等干燥材料 上保藏。如砂土管法，适用于放线菌、芽孢菌和 某些真菌保藏，保藏时间几至几十年。
• 将分离得到的单菌落分别接种到单个平 板上
待分离的微生物的生长特征明显不同
牛奶平板：分离蛋白酶产生菌； 颜色反应：分离特定的菌株；
液体培养基分离纯培养
稀释法进行液体分离必须在同一个稀释度的 许多平行试管中，大多数（一般应超过95%）表 现为不生长。
单细胞（孢子）分离
一般采用显微操作仪，在显微镜下进行；操 作难度与细胞或个体的大小成反比；