CDX2基因在胃癌癌前病变不同中医证型中的表达

CDX2基因在胃癌癌前病变不同中医证型中的表达
目的通过检测胃癌癌前病变（PLGC）不同中医证型患者胃黏膜组织CDX2基因的表达，探讨不同中医证型与CDX2基因表达之间的相关性及CDX2表达与不同病理类型之间的关系。

方法将24例健康人及120例PLGC患者分为健康对照组、脾虚气滞证组、阴虚有热证组、胃络瘀阻证组，每例取新鲜胃黏膜6块，包括胃体、胃角和胃窦各2块，经免疫组织化学染色观察CDX2基因的表达。

结果CDX2基因阳性表达在脾虚气滞证中为16.67%（6/36），阴虚有热证中为52.17%（24/46），胃络瘀阻证中为63.16%（24/38），健康对照组无表达；其在Ⅰ型肠化生表达为33.33%（18/54），Ⅱ型肠化生表达为25.93%（14/54），Ⅲ型肠化生表达为27.78%（15/54），异型增生表达为12.96%（7/54）。

结论CDX2基因的表达与病理类型有关，在不同中医证型的表达有统计学意义，可为PLGC 的中医证型客观化提供依据。

标签：胃癌癌前病变；中医证型；CDX2基因
胃癌是我国常见的恶性肿瘤之一，早诊早治是目前提高胃癌存活率的唯一有效措施，而早诊早治主要依赖于对胃癌前期病变（PLGC），包括肠化生（intestinal metaplasia，IM）、不典型增生（dysplasia，Dys）的诊治。

现代医学对治疗PLGC 尚无理想的疗法，而中医通过对其病因病机的研究，并运用辨证论治、专方专治、针灸等方法已取得了一定的疗效，在改善PLGC的临床症状，减轻胃黏膜萎缩程度，逆转IM和Dys等方面，与西医比较显示出一定优势。

本研究旨在探讨胃癌癌前病变患者中医辨证分型与CDX2（caudal-related homeobox transcription factor 2）基因表达的关系，为本病的中医证型客观化及临床的辨证施治提供一定帮助。

1 资料与方法
1.1 一般资料
收集2009年7月-2011年7月甘肃中医学院附属医院门诊PLGC患者120例，男性76例，女性44例；年龄36～76岁，平均（56.48±8.24）岁，其中≥60岁33例，0.05），具有可比性。

1.2 诊断标准
1.2.1 西医诊断标准（1）临床诊断：症状主要表现为上腹胀、腹痛，恶心、呕吐，泛酸、食欲不振等。

（2）病理诊断：依据1991年悉尼会议胃炎新分类法[1]及《实用内科学》[2]。

①肠腺化生。

用组织化学和酶学方法将其分完全型肠上皮化生又称作Ⅰ型，组织形态中除出现杯状细胞外，还出现潘氏细胞、吸收细胞和分泌细胞，呈现肠上皮的组织学特征；不完全型肠上皮化生包括Ⅱ型和Ⅲ型，特点是可见柱状细胞和杯状细胞，Ⅱ型肠上皮化生分泌中性和唾液酸黏液，Ⅲ型肠上皮化生分泌硫酸黏液。

一般认为Ⅲ型肠上皮化生与胃癌的发生关系密切。

②上皮内瘤变。

即Dys，系指腺管及表面上皮在增生中偏离正常分化所产生的形态
和功能异常，可发生在胃小凹上皮和肠化生处。

其具有较高的癌变倾向，但无间质侵犯。

国际上通行的做法是分为低、高两级别，高级别异型增生癌变率高。

1.2.2 中医辨证标准依据《中药新药临床研究指导原则（试行）》[3]。

（1）脾虚气滞证。

主症：①胃脘胀满或隐痛；②胃部喜按或喜暖。

次症：①食少呆；
②大便稀溏；③倦怠乏力；④气短懒言；⑤食后脘闷；⑥舌质淡，脉细弱。

（2）阴虚内热证。

主症：①胃脘痞闷不适或灼痛；②舌红少津，苔少。

次症：①饥不欲食或嘈杂；②口干；③大便干燥；④形瘦食少；⑤脉细。

（3）胃络瘀阻证。

主症：①胃脘痞满或痛有定处；②舌质黯红或有瘀点、瘀斑。

次症：①胃痛拒按；
②面色暗滞；④脉弦涩。

证候确定：主症必备，加次症2项以上即可诊断。

1.3 病例排除标准
①心、肝、肾功能明显异常；②急慢性胃炎（浅表性或萎缩性无肠化及无典型增生的胃炎）、胃癌及转移肿瘤的患者；③资料不全或不完整者；④中医证型两型并见无主次之分或三型并见证型复杂者。

1.4 观察方法
镜下和病理诊断、均由本院病理专业医师负责。

辨证由高级职称以上中医消化专科医生根据临床调查量表客观填写，采用统一诊断标准、统一调查表格。

同时为保证辨证论治的准确与规范性，对各参与临床研究的调查人员进行统一培训。

所选病例符合中医辨证分型脾胃虚弱、阴虚内热、胃络瘀阻证。

与患者签署知情同意书。

每例取新鲜胃黏膜6块，其中胃体、胃角和胃窦各2块。

用10%福尔马林固定，自动脱水，浸腊，石蜡包埋，制成4 μm切片，进行HE染色及CDX2免疫组织化学Elivison二步法染色。

按照CDX2试剂盒说明书，浓缩型CDX2抗体为兔单克隆抗体，稀释浓度均为1∶50。

实验用已知阳性片作阳性对照，用PBS代替一抗作阴性对照。

HID-AB-pH 2.5黏蛋白组织化学染色试剂盒、兔抗人CDX2 mAb、免疫组化二步法试剂盒和DAB试剂盒均购自福州迈新生物技术开发有限公司，兔抗人CDX2免疫组化单克隆抗体，稀释浓度均为1∶50（编号RMA-0631）。

阳性反应判定：CDX2基因表达为细胞核呈棕红色或棕黄色，少数细胞浆出现棕黄色颗粒。

阳性细胞占10%以上为阳性表达，0.05）。

3 讨论
胃癌的发生是一个涉及多基因改变的多步骤过程，要研究中医分型与PLGC 基因表达的相关性首先要找到较特异的分子病理学标志物。

CDX2是一种特异性的核转录因子，在成人组织的分化和增殖调控中起着重要作用[4]。

近年来研究表明，CDX2是IM敏感和特异性指标[5]。

而IM被认为是胃癌发生多步骤假设的中间步骤，已被视为癌前病变。

本研究结果显示，在正常胃黏膜CDX2表达为阴性，在PLGC组织CDX2表达阳性率为45% （54/120）。

说明CDX2可以作为早期IM的敏感和特异性指标。

根据PLGC胃脘痞满、疼痛、食欲减退、嗳气、反酸等临床症状特征，可将其归于中医“胃痛”、“痞证”等范畴。

本病病位在胃脘，病变脏腑关键在脾胃，大多数医家认为“因邪致虚，因虚生邪”是该病病机转化的主要特点。

治疗上以健脾益气养阴、清热化湿、活血通络等药物组方为主。

如王垂杰教授认为脾胃虚弱、胃体失养是本病的病理基础[6]。

在此基础上进一步出现湿邪内阻、湿郁化热、气机不畅、瘀血内停等病理变化，引起胃黏膜发生中、重度不典型增生或肠化生。

王氏[7]认为，脾胃素虚是发病和转归的根本内因，表现为脾胃气虚和胃阴不足，虚实夹杂为基本特点，病理演变过程为虚-毒-瘀-虚。

临床报道显示了中医的整体观念、辨证论治在治疗PLGC上的独特优势。

但临床医生各持己见，其辨证分型多达30多种，使临床医生很难准确地做到辨证治疗，又制约其进一步深入研究。

本研究的结果显示在阴虚内热证、胃络瘀阻证CDX2阳性表达率高于健康对照组和脾虚气滞证组。

说明中医证型与癌基因表达之间存在一定相关性，与本病发病初期实多虚少、以实证为主，后期以虚为主、虚实夹杂的中医辨证思想符合。

这有利于临床的辨证施治及中医证型客观化。

我们将进一步寻找其较特异的分子病理学标志物，更深入地研究不同辨证治法对其影响，希望能为临床更准确地立法组方，选择用药，提高疗效提供科学依据。

参考文献：
[1] Miehael F Dixon，Robert M Genta，John H Yardley，et al.胃炎的分类和分级—新悉尼系统[J].胃肠病学，1999，l4（4）：250-255.
[2] 陈灏珠.实用内科学[M].13版.北京：人民卫生出版社，2009：1737-1740.
[3] 郑筱萸.中药新药临床研究指导原则（试行）[S].北京：中国医药科技出版社，2002：124-128.
[4] Silberg DG，Sullivan J，Kang E，et al. Cdx2 ectopic expression induces gastric intestinal metaplasia in transgenic mice[J]. Gastroenterology，2002，122（3）：689-696.
[5] Escaffit F，Pare F，Gauthier R，et al. Cdx2 modulates proliferation in normal human intestinal epithelialcrypt cells[J]. Biochem Biophys Res Commun，2006，342：66-72.
[6] 张秀娟.王垂杰教授治疗胃癌前病变经验介绍[J].新中医，2009，41（10）：13-15.
[7] 王禄.治疗慢性萎缩性胃炎的体会[J].中医研究，2005，18（10）：59-60.。