口蹄疫疫苗浓缩纯化方法[发明专利]

(10)申请公布号 CN 102631673 A

(43)申请公布日 2012.08.15C N 102631673 A

*CN102631673A*

(21)申请号 201210112283.X

(22)申请日 2012.04.17

A61K 39/135(2006.01)

C07K 14/09(2006.01)

C07K 1/36(2006.01)

A61P 31/14(2006.01)

(71)申请人金宇保灵生物药品有限公司

地址010030 内蒙古自治区呼和浩特市鄂尔

多斯大街58号

(72)发明人张翀宇 李荣 魏学锋 徐师军

任伟 郭建军 张龙 陈九连

(74)专利代理机构北京中海智圣知识产权代理

有限公司 11282

代理人曾永珠

(54)发明名称

口蹄疫疫苗浓缩纯化方法

(57)摘要

本发明提供了一种高效的口蹄疫病毒抗原浓

缩纯化的新方法，其包括以下步骤：1)、用连续流

离心机除去抗原中大颗粒物质；2)、用中空纤维

超滤系统处理步骤1)后抗原液；3)、用PEG6000

处理步骤2)后循环液。利用本发明提供的口蹄疫

疫苗浓缩纯化方法能够兼顾口蹄疫抗原的浓缩和

纯化，制得的口蹄疫疫苗的免疫效果好，不良反应

少。

(51)Int.Cl.

权利要求书1页 说明书6页

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请

权利要求书 1 页 说明书 6 页

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1.口蹄疫疫苗浓缩纯化方法，包括以下步骤：

1)、用连续流离心机除去抗原中大颗粒物质；

2)、用中空纤维超滤系统处理步骤1)后抗原液；

3)、用PEG6000处理步骤2)后循环液。

2.根据权利要求1所述的口蹄疫疫苗浓缩纯化方法，其特征在于，步骤1)中，(1)连续流离心机设定转速为3000～15000转/分，(2)收集离心后的轻液，弃去重液。

3.根据权利要求1所述的口蹄疫疫苗浓缩纯化方法，其特征在于，步骤2)中，(1)用于口蹄疫病毒浓缩用中空纤维分子量规格为30K ～750K ，孔径是0.25～2.0mm ，(2)当循环液体积为原液体积的1/20～1/4时，收集中空纤维超滤系统的循环液，弃去透过液。

4.根据权利要求3所述的口蹄疫疫苗浓缩纯化方法，其特征在于，中空纤维的数量为1000～4000根纤维/支膜柱，用于口蹄疫病毒浓缩的中空纤维膜柱数是1～24支。

5.根据权利要求1所述的口蹄疫疫苗浓缩纯化方法，其特征在于，步骤3)中，(1)用于处理口蹄疫病毒抗原的PEG6000的浓度是待处理液的体积的5％～15％。

6.根据权利要求1所述的口蹄疫疫苗浓缩纯化方法，其特征在于，步骤3)的具体操作为：将PEG6000加入到步骤2)后循环液中，离心、沉淀，收集沉淀液部分，收集量为处理液的1/5～1/2000，弃去轻液，收集沉淀液；加入PBS 液。

7.根据权利要求6所述的口蹄疫疫苗浓缩纯化方法，其特征在于，在沉淀液中加入的PBS 液的PH 为7.4～8.0，加入PBS 液，使终体积量是沉淀液量1.1倍～1000倍，即得到目标抗原液。

8.口蹄疫疫苗浓缩纯化方法，其特征在于，用连续流离心机除去抗原中大颗粒物质后即用PEG6000处理。

9.根据权利要求8所述的口蹄疫疫苗浓缩纯化方法，其特征在于，

用连续流离心机除去抗原中大颗粒物质的步骤中，(1)连续流离心机设定转速为3000～15000转/分，(2)收集离心后的轻液，弃去重液；

用PEG6000处理的步骤中，(1)用于处理口蹄疫病毒抗原的PEG6000的浓度是待处理液的体积的5％～15％，具体操作为：将PEG6000加入到处理液中，离心、沉淀，收集沉淀液部分，收集量为处理液的1/5～1/2000，弃去轻液，收集沉淀液；加入PBS 液。权 利 要 求 书CN 102631673 A

口蹄疫疫苗浓缩纯化方法

技术领域

[0001] 本发明涉及一种口蹄疫病毒疫苗浓缩纯化方法，通过连续流离心机、中空纤维、PEG联合使用，既能浓缩口蹄疫抗原，又可以使抗原得到纯化。

背景技术

[0002] 口蹄疫是由口蹄疫病毒所引起的偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病，被国际兽医局(OIE)列为A类传染病之首。疫苗接种是世界上多数国家控制口蹄疫疫病的主要手段。疫苗制造工艺复杂，尤其是抗原处理工艺的选择特别重要，146S抗原是口蹄疫疫苗免疫原性起决定性作用的的抗原，比较脆弱，容易破碎或裂解，会导致免疫原性丧失或下降。

[0003] 口蹄疫灭活疫苗在质量方面存在的主要问题是：1.安全性差，动物在注苗后出现不同程度的不良反应，轻者减食或停食2～3天或发生流产，重者发生死亡，原因是疫苗中的非目的蛋白成分高。疫苗中的非目的蛋白包括：培养细胞时残留的血清和水解乳蛋白，细胞蛋白和口蹄疫病毒的非结构蛋白。2.疫苗免疫效力不稳定，其表现是，疫苗注射后免疫持续期短，其主要原因是疫苗中有效抗原(146S抗原)含量低。

[0004] 为提高疫苗的免疫效力，通常采用对抗原浓缩的办法，但浓缩的同时，往往将非目的蛋白也浓缩了，导致不良反应增加。同样，为降低不良反应而对疫苗进行纯化时，常规方法的缺点是有效抗原在纯化过程中的损失太大，不良反应得到改善但疫苗的免疫效果却降低了。

发明内容

[0005] 本发明的目的是提供一种高效的口蹄疫病毒抗原浓缩纯化的新方法，以解决口蹄疫灭活疫苗安全性与免疫效果不稳定的问题。

[0006] 本发明提供的口蹄疫疫苗浓缩纯化方法，包括以下步骤：

[0007] 1)、用连续流离心机除去抗原中大颗粒物质；

[0008] 2)、用中空纤维超滤系统处理步骤1)后抗原液；

[0009] 3)、用PEG6000处理步骤2)后循环液。

[0010] 较佳地，步骤1)中，(1)连续流离心机设定转速为3000～15000转/分，优选为3000～10000转/分，(2)收集离心后的轻液，弃去重液。

[0011] 较佳地，步骤2)中，(1)用于口蹄疫病毒浓缩用中空纤维分子量规格为30K～750K，优选为30K～300K，孔径是0.25～2.0mm，优选为0.5～1.0mm，(2)当循环液体积为原液体积的1/50～1/4，优选为1/20～1/10时，收集中空纤维超滤系统的循环液，弃去透过液。

[0012] 较佳地，中空纤维的数量为1000～4000根纤维/支膜柱，用于口蹄疫病毒中空纤维膜柱数是1～24支，优选为2～12支。

[0013] 较佳地，步骤3)中，(1)用于处理口蹄疫病毒抗原的PEG6000的浓度是待处理液