药物分析实验讲义

（二）包含实验项目基本信息
实验项目一 1、实验项目名称： 薄层色谱 2、实验项目目的和任务： 掌握 TLC 的原理，制备和运用 3、实验内容： 制备薄层色谱硅胶板，供试品分析，计算供试品中化合物的 Rf 值
4、项目需用仪器设备名称： 烘箱 加热套 （电炉 水浴锅） 电子天平
5、所需主要元器件及耗材： 玻璃板 层析缸 碘缸 点样毛细管 烧杯等 碘 展开剂（乙酸乙酯—正己烷）供试
甘亚
编写
成都大学生物产业学院 二 0 一二年二月
《药物分析实验》课程大纲
（一）本课程实验总体介绍
1、 本课程实验的任务： 《药物分析实验》是《药物分析》课程中重要组成部分，要求 学生系统地学习中国药典常用分析方法的基本原理和实验技术，熟 练地掌握药物分析中包括样品处理、药物鉴别、杂质检查和含量测 定等各项实验技能以及常用分析仪器的正确使用方法，培养学生严 谨的科学态度和独立的药物分析能力，从而能熟练地借助药典完成 药品质量检验工作。 实验课教学应做到： 1） 认真验证实验教材指定的药物分析理论，加深对本学科专业 知识的理解 2） 正确掌握实验教材中各类代表药物的分析方法，熟悉各种分 析方法的操作技术。 3） 全面了解药物分析工作的性质和内容，培养严肃认真，实事 求是的科学态度和工作作风。 2、本课程实验简介： 本课程的教学方式是在教师的指导下， 由学生自己动手独立完成 有关的实验。要求学生实验前必须预习，明确实验目的，了解实验 内容与方法， 考虑实验中应注意的事项及安排实验的步骤。 设计的 5 个实验，包括了色谱技术（TLC、HPLC、GC）、容量分析（两步滴定 法）、光谱技术（紫外分光光度法），涉及原料药的分析和制剂分 析。 3、本课程适用专业：
5、所需主要元器件及耗材： 容量瓶（250mL 100mL） 移液管（5mL） 烧杯 乙酰氨基酚片，氢氧化钠 6、学时数： 4 学时。
实验项目三 1、实验项目名称： 阿司匹林片的分析 2、实验项目目的和任务： 掌握阿司匹林片剂的分析方法； 掌握 2 步滴定法和剩余滴定； 掌 握阿司匹林片剂含量的计算方法 3、实验内容： 阿司匹林的鉴别（FeCl3 法） ，用 2 步滴定法滴定、计算阿司匹林片 的百分标示量 4、项目需用仪器设备名称： 精密电子天平 5、所需主要元器件及耗材： 滴定管 三角瓶
Rf
溶质最高浓度中心至原点中心的距离 溶剂前沿至原点中心的距离
2）快速分离少量物质。 （几到几十微克，甚至 0.01µg）
3）跟踪反应进程。在进行化学反应时，常利用薄层色谱观察原 料斑点的逐步消失，来判断反应是否完成。 4）化合物纯度的检验（只出现一个斑点，且无拖尾现象，为纯 物质。 ） 此法特别适用于挥发性较小或在较高温度易发生变化而不能用 气相色谱分析的物质。 三、所需主要元器件及耗材： 玻璃板 层析缸 碘缸 点样毛细管 烧杯等 碘 展开剂 供试品 A B C
药学
制药工程
4、本课程实验涉及核心知识点： 药物分析的原理、原料药和制剂含量的计算方法、仪器的使用 5、本课程实验重点与难点： 重点：掌握实验的原理；难点：仪器的学习使用、操作的规范性 6、考核方式： 根据学生的预习、实验操作、实验结果、报告书写以及科学作风等 方面的情况评定成绩。成绩占期末成绩的 25% 7、总学时： 24 学时 8、教材 讲义 9、参考资料： 《药物分析》第 2 版 年 《药物分析》第 6 版 刘文英， 人民卫生出版社，2009 年 齐永秀 ，中国医药科技出版社， 2006
羧甲基纤维素钠 四 、实验装置
硅胶 H
薄层板在不同的层析缸中展开的方式 四、实验操作步骤： 1. 吸附剂的选择 薄层色谱的吸附剂最常用的是氧化铝和硅胶。 1） 、硅胶： “硅胶 H”—不含粘合剂； “硅胶 G”—含煅石膏粘合剂；
其颗粒大小一般为 260 目以上。颗粒太大，展开剂移动速度快， 分离效果不好；反之，颗粒太小，溶剂移动太慢，斑点不集中，效 果也不理想。 化合物的吸附能力与它们的极性成正比，具有较大极性的化合 物吸附较强，因而 Rf 值较小。 酸和碱 > 醇、胺、硫醇 > 酯、醛、酮 > 芳香族化合物 > 卤 代物、醚 >烯 > 饱和烃 本实验选择的吸附剂为薄层色谱用硅胶 H。 2. 薄层板的制备（湿板的制备） 1）CMC－Na 溶液的配制：一般其浓度为 0.3～0.5％，具体方 法如下：先将预用的水加热至 60~70℃，将称好的 CMC-Na 加入所需 水量的 8/10,让其充分溶涨后,再加热煮沸,然后将剩余水慢慢加入. 这样在煮沸过程中不易形成颗粒,煮沸时间短。 2） 与硅胶混合：CMC－Na 溶液与硅胶的比例为 4：1。具体方法 如下：先将 CMC－Na 溶液倒入自动搅拌器或研钵中，然后加入硅胶， 搅匀即可。若是在研钵中研磨，按一个方向研磨，自下而上，然后 自上而下，以赶尽气泡为佳。 3） 铺板：手动或机械。手动铺出的板的薄厚与所加的混合后 的硅胶量有关，而机械铺出的板的薄厚与机械所选用的钢板有关， 可根据需要来定。但此过程中最关键的是板子边缘铺得好坏，手动 铺板一定要将玻璃板边缘硅胶涂匀。而机械铺板要注意板与板之间 平整性，或者由高到低排列。 （100×200mm） 4） 晾干：自然晾干。 薄层板制备的好坏直接影响色谱的结果。薄层应尽量均匀且厚 度要固定。否则，在展开时前沿不齐，色谱结果也不易重复。在烧
实验一
一、 实验目的：
薄层色谱
1、了解薄层色谱的基本原理和应用。 2、掌握薄层色谱的操作技术。
二、实验原理：
1、原理 薄层色谱(Thin Layer Chromatography)常用 TLC 表示，又称薄 层层析，属于固－液吸附色谱。样品在薄层板上的吸附剂（固定相） 和溶剂（移动相）之间进行分离。由于各种化合物的吸附能力各不 相同，在展开剂上移时，它们进行不同程度的解吸，从而达到分离 的目的。 2、薄层色谱的用途： 1）化合物的定性检验。 （通过与已知标准物对比的方法进行未知 物的鉴定） 在条件完全一致的情况， 纯粹的化合物在薄层色谱中呈现一定 的移动距离，称相对比移值（Rf 值） ，所以利用薄层色谱法可以鉴定 化合物的纯度或确定两种性质相似的化合物是否为同一物质。但影 响比移值的因素很多，如薄层的厚度，吸附剂颗粒的大小，酸碱性， 活性等级，外界温度和展开剂纯度、组成、挥发性等。所以，要获 得重现的比移值就比较困难。为此，在测定某一试样时，最好用已 知样品进行对照。
药物分析实验是药物分析课程中重要组成部分要求学生系统地学习中国药典常用分析方法的基本原理和实验技术熟练地掌握药物分析中包括样品处理药物鉴别杂质检查和含量测定等各项实验技能以及常用分析仪器的正确使用方法培养学生严谨的科学态度和独立的药物分析能力从而能熟练地借助药典完成药品质量检验工作
药物分析实验讲义
（供药学和制药工程专业使用）
羧甲基纤维素钠 品AH
实验项目二 1、实验项目名称： 紫外分光光度法测定对乙酰氨基酚片的含量 2、实验项目目的和任务： 熟悉紫外分光光度计的使用方法；熟悉片剂分析的基本操作 3、实验内容： 在 257 波长处，测定对乙酰氨基酚碱性水溶液的吸光度，用吸光系 数法计算其百分标示量 4、项目需用仪器设备名称： 精密电子天平 紫外分光光度计
阿司匹林片、乙醇、酚酞、硫酸、邻苯二甲酸氢钾（基准试剂） 、 碳酸钠（基准试剂） 、甲基红-溴甲酚绿、三氯化铁 6、学时数： 5 学时。
实验项目四 1、实验项目名称： 高效液相色谱法测定盐酸小檗碱的含量 2、实验项目目的和任务： 了解高效液相色谱仪的结构和正确使用；熟悉 HPLC 中用外标法测定 组分含量的方法、操作要点及注意事项； 掌握盐酸小檗碱含量测定 的操作条件和要点
杯中放入 2g 硅胶 G，加入 5—6ml
0.5%的羧甲基纤维素钠水溶液，
调成糊状。将配制好的浆料倾注到清洁干燥的载玻片上，拿在手中 轻轻地左右摇晃，使其表面均匀平滑。颠好的板，表面看上去要光 滑平整，没有气孔。薄层板铺好后一定要放置在平的台面上，否则 难保证板面硅胶的厚度均匀。 3、薄层板的活化 将涂布好的薄层板置于室温晾干后，放在烘箱内加热活化，活 化条件根据需要而定。硅胶板一般在烘箱中渐渐升温，维持 105— 110℃活化 30min。 氧化铝板在 200℃烘 4h 可得到活性为Ⅱ级的薄板， 在 150—160℃烘 4h 可得活性为Ⅲ—Ⅳ级的薄板。 活化后的薄层板放 在干燥器内保存待用。 4、点样 先用铅笔在距薄层板一端 1cm 处轻轻划一横线作为起始线，然 后用点样毛细管吸取样品，在起始线上小心点样，斑点直径一般不 超过 2mm。若因样品溶液太稀，可重复点样，但应待前次点样的溶剂 挥发后方可重新点样，以防样点过大，造成拖尾、扩散等现象，而 影响分离效果。若在同一板上点几个样，样点间距离应为 1。点样要 轻，不可刺破薄层。 5、展开 薄层色谱的展开，需要在密闭容器中进行。为使溶剂蒸气迅速 达到平衡，可在展开槽内衬一滤纸。在层析缸中加入配好的展开溶 剂，使其高度不超过 1cm。将点好的薄层板小心放入层析缸中，点样 一端朝下，浸入展开剂中。盖好瓶盖，观察展开剂前沿上升到一定 高度时取出，尽快在板上标上展开剂前沿位置。晾干，观察斑点位 置，计算 Rf 值。
划去（ 但要求仍能看清原来写错的数值）在其旁写上正确数据，不 得涂改，涂改的原始记录无效。 3.4 实验过程中防止对试剂和药品的污染，取用时应仔细观察 标签和取用工具上的标志，杜绝错盖瓶盖或不随手加盖的现象发生。 当不慎发生试剂污染时，应及使报告指导教师。公用试剂、药品应 在指定位置取用。此外，取出的试剂、药品不能再倒回原瓶。 3.5 爱护仪器、小心使用，破损仪器应及时登记报损、补发。 动用精密仪器，须经教师同意，用毕登记签名。 3.6 实验时确保安全、时刻注意防火、防爆。发现事故苗头及 时报告，不懂时不要擅自动手处理。 3.7 清洁液一般只限于洗涤滴定管、吸量管、容量瓶等。使用 时，应先用水冲水仪器，沥至无滴水后，用清洁液浸洗；其他玻璃 仪器一般用洗涤剂刷洗。注意节约蒸馏水，清洗玻璃仪器应遵守少 量多次的原则。 3.8 爱护公物、节约水电、药品和试剂。可回收利用的废溶剂 回收至指定的容器中，不可任意弃去。腐蚀性残液应倒入废液缸中， 切勿倒进水槽。 3.9 实验完毕应认真清理实验台，仪器洗净后放回原处，擦净 台面，晾好抹布、毛刷、放好凳子，经教师同意后，方可离开。值 日生还应负责整理公用试 剂台、打扫地面卫生、清除垃圾及废液缸中污物，并检查水、电、 门窗等安全事宜。 3.10 认真总结实验结果，按指定或其他正确格式填写实验报 告，并按规定时间交指导教师。
3、实验内容： 用 HPLC 外标法测定的盐酸小檗碱片的含量 4、项目需用仪器设备名称： 精密电子天平 HPLC
5、所需主要元器件及耗材： 容量瓶 烧杯
盐酸小檗碱片等 6、学时数： 5 学时。 实验项目五 1、实验项目名称： 气相色谱法测定维生素 E 片的含量 2、实验项目目的和任务： 了解气相色谱仪的结构及正确使用； 掌握 GC 法测定维生素 E 含量 的方法、测定条件及要点；熟悉利用色谱法的内标法测定药物含量 3、实验内容： 用 GC 的内标法测定维生素 E 的百分标示量 4、项目需用仪器设备名称： 精密电子天平 气相色谱仪
5、所需主要元器件及耗材： 容量瓶（250mL 100mL） 烧杯 维生素 E 片 6、学时数： 4 学时。 正己烷 三十二烷 气相色谱进样器
实 验 须 知
药物分析实验是药物分析课程教学的重要组成部分。按教学大 纲规定，实验课教学应做到： 1. 认真验证实验教材指定的药物分析理论，加深对本学科专业 知识的理解。 2． 正确掌握实验教材中各类代表性药物的分析方法，熟练各 种分析方法的操作技术，培养独立开展药物分析工作的能力。 3． 全面了解药物分析工作的性质和内容，培养严肃认真、实 事求是的科学态度和工作作风。 为提高实验课教学质量，参加实验课学习者应努力做到： 3.1 做好预习，明确每次实验的目的和要求，理解实验原理和 操作要点，预先安排好实验进程，估计实验中可能发生的问题及处 理办法，以利实验的顺利完成。 3.2 严格按照实验规程操作，虚心接受教师的指导，认真掌握 操作技术，细心观察实验现象。进行教材指定内容以外的实验或重 做实验需经教师批准。 3.3 进入实验室要随带药物分析实验原始记录及报告。实验进 程中应尊重实验事实，及时做好完整而确切的原始记录。要用钢笔 或水性圆珠笔书写，字体端正。应直接记录于药物分析实验原始记 录上，绝不允许记于纸条上，手上或其他本子上再誊写，更不允许 暂记在脑子里等下一个数据一起记录。 原始记录是实验报告的一部分，尊重原始记录是必要的科学作 风。记录本不准撕页，如 记录有误，只 能将写错处用单线或双线