香青兰总黄酮调节MEK

收稿日期:２０２１Ｇ０３Ｇ０１
作者简介:王俊井(１９８８ )
,男,硕士,主治医师,主要从事骨关节疾病的相关研究.香青兰总黄酮调节M E K /E R K 信号通路
诱导B M S C s 增殖及成骨分化的作用
王俊井,邵银初,谌少波,李㊀浩
(中国人民解放军联勤保障部队９０８医院骨科,南昌３３０００２
)摘要:目的㊀探讨香青兰总黄酮对骨髓间充质干细胞(B M S C s )增殖㊁分化及其对M E K /E R K 蛋白表达的影响.方法㊀颈椎脱臼处死４周龄雌性S D 大鼠,分离㊁培养B M S C s ,按香青兰总黄酮处理浓度的不同将B M S C s 分为:空白对照组㊁阳性对照组(５０μg m L －１抗坏血酸＋１０mm o l L －１β甘油磷酸钠＋１
０－８m o l L －１地塞米松)㊁香青兰总黄酮高(１００μg m L －１)㊁中(５０μg m L －１)㊁低(２５μg
m L －１)３个不同浓度组.２４h 后检测细胞存活率(C C K Ｇ８法);７d 后行碱性磷酸酶(A L P )染色及A L P 比活性测定;２４h 后采用W e s t e r nb l o t i n g 法检测M E K １和E R K １蛋白表达水平.结果㊀随着香青兰总黄酮干预浓度的增加,B M S C s 胞浆内棕红色逐渐加深,且咖啡色颗粒逐渐变大㊁增多.与空白对照组比较,香青兰总黄酮低㊁中㊁高浓度组和阳性对照组B M S C s 存活率㊁A L P 比活性和M E K １㊁E R K １蛋白表达水平均依次升高,且各浓度组显示出浓度依赖性(均P ＜０．０５
);香青兰总黄酮高浓度组和阳性对照组检测结果相似,差异无统计学意义(P ＞０．０５).结论㊀香青兰总黄酮可诱导B M S C s 增殖及分化,其机制可能是香青兰总黄酮通过激活M E K /E R K 信号通路蛋白诱导B M S C s 向成骨细胞分化.
关键词:香青兰总黄酮;骨髓间充质干细胞;增殖;分化;动物实验,大鼠中图分类号:R Ｇ３３２㊀㊀㊀文献标志码:A㊀㊀㊀文章编号:２０９５Ｇ４７２７(２０２２)０１－００３８－０５
D O I :１０．１３７６４/j
．c n k i ．n c d m．２０２２．０１．００７E f f e c t s o fT o t a l F l a v o n o i d s f r o m D r a c o c e p h a l u m O d o r a t u mo n P r o l i f e r a t i o na n dO s t e o g e n i cD i f f e r e n t i a t i o no fB M S C s b y
R e g u l a t i n g M E K /E R KS i g n a l i n g P a t h w a y
W A N GJ u n Ｇj i n g ,S H A OY i n Ｇc h u ,C H E NS h a o Ｇb o ,L IH a o (D e p a r t m e n t o f O r t h o p e d i c s ,t h e ９０８t h
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i l l e db y
c e r v i c a l
d i s l o c a t i o n ,a n dB M S C sw
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o t h e c o n c e n t r a t i o n s o f t o Ｇt a l f l a v o n o i d s f r o m D r a c o c e p h a l u mo d o r a t u m ,B M S C sw e r e d i v i d e d i n t o b l a n k c o n t r o l g r o u p ,p o s i Ｇt i v e c o n t r o l g r o u p (１０mm o l L －１βＧg l y c e r o p h o s p h a t e ＋５０μg m L －１a s c o r b i c a c i d ＋１０－８m o l L －１d e x a m e t h a s o n e ),h i g h Ｇd o s e g r o u p (１００μg m L －１t o t a lf l a v o n o i d s ),m e d i u m Ｇd o s e g r o u p
(５０μg m L －１t o t a l f l a v o n o i d s ),a n dl o w Ｇd o s e g r o u p (２５μg m L －１t o t a l f l a v o n o i d s )．A f t e r２４h o u r s o f t r e a t m e n t ,c e l l v i a b i l i t y w a sm e a s u r e db y C C K Ｇ８a s s a y a n d t h e e x p
r e s s i o no fM E K １a n d E R K １w a s d e t e c t e db y W e s t e r nb l o t t i n g ．A l k a l i n e p h o s p h a t a s e (A L P )s t a i n i n g w a s p e r f o r m e d a n d s p e c i f i c a c t i v i t y w a sm e a s u r e d a f t e r ７d a y
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a r e d w i t ht h e ８
３南昌大学学报(医学版)２０２２年第６２卷第１期㊀J o u r n a l o fN a n c h a n g U n i v e r s i t y
(M e d i c a l S c i e n c e s )２０２２,V o l ．６２N o ．１ Copyright©博看网 . All Rights Reserved.
b l a n k
c o n t r o l g r o u p,c e l lv i a b i l i t y,s p e c i f i ca c t i v i t y o fA L Pa n de x p r e s s i o no f M E K１a n dE R K１w e r e i n c r e a s e db y t r e a t m e n tw i t ht o t a l f l a v o n o i
d s f r o m D r a c o c
e p h a l u m o d o r a t u mi nad o s eＧd eＧp e n d e n tm a n n e r(P＜０．０５)．T h e r ew e r en os i g n i
f i c a n td i f f e r e n c e s i nt h e s e i n d e x e sb e t w e e nh i
g hＧd o s e g r o u p a n d p o s i t i v e c o n t r o l g r o u p(P＞０．０５)．C o n c l u s i o n㊀T o t a l f l a v o n o i d s f r o m D r a c o c e p hＧa l u mo d o r a t u mc a n i n d u c e p r o l i f e r a t i o na n dd i f f e r e n t i a t i o no fB M S C s t
h r o u g ha c t
i v a t i n g M E K/ E R Ks i g n a l i n gp a t h w a y a n d i n d u c i n g B M S C s t od i f f e r e n t i a t e i n t oo s t e o b l a s t s．
K E Y W O R D S:t o t a l f l a v o n o i d s f r o m D r a c o c e p h a l u mo d o r a t u m;
b o n em a r r o w m e s e n
c h y m a l s t e mc e l l s;p r o l i f e r a t i o n;
d i f f
e r e n t i a t i o n;
a n i m a l l a
b o r a t o r y,r a t s
㊀㊀随着年龄的逐渐增长,特别是妇女绝经后雌激素的减少,骨髓间充质干细胞(B M S C s)分化的成骨细胞逐渐减少,破骨细胞生成增多,从而引起骨质疏松症,容易导致老年人病理性骨折,因此促进B MＧS C s向成骨细胞分化,对于骨质疏松症的防治具有重要意义[１].香青兰是兰科青兰属植物,广泛分布于我国西南地区,可入药,具有清热解毒㊁利咽止咳㊁凉肝止血之功效,主要用于呼吸道感染性疾病的治疗,临床上也用来治疗原发性高血压㊁冠状动脉粥样硬化性心脏病等心血管疾病[２].近年来,随着中医的快速发展,对香青兰的研究愈加深入,从中分离出的黄酮类化合物受到重点关注,因其广泛的生物学功能,成为各研究学者的研究热点[３].香青兰总黄酮具有调节内分泌和心血管系统的功效,对该类疾病效果显著,其内分泌调节功能使其对骨髓微环境的改变成为可能[４].细胞外调节蛋白激酶(E R K)包括E R K１和E R K２,其能够将信号从细胞表面受体传导至细胞核受体[５].作为分裂原的活化抑制剂,M E K１㊁M E K２可通过调节T y r和T h r双位点的磷酸化来激活E R K的表达[６].M E K/E R K信号通路还参与多种细胞功能的调控,与多种疾病的发生㊁发展密切相关[７].本研究探讨香青兰总黄酮是否能够通过调节M E K/E R K信号通路蛋白的表达来促进B M S C s细胞向成骨细胞分化,为其作用机制提供可靠的实验依据.
１㊀材料与方法
１．１㊀主要仪器与试剂
T h e r m oS c i e n t i f i c T M M u l t i s k a n T M G O型酶标仪(美国T h e r m oF i s h e r公司);B X５３显微镜(日本奥林巴斯公司);胎牛血清(美国S i g m a公司,批号:５０２１９８);地塞米松(美国S i g m a公司,批号:５１４９８４);香青兰总黄酮(南京建成生物工程研究所,纯度:９９．９９％,批号:１２４８５４８);细胞计数试剂盒８(C C KＧ８k i t,南京宏哲生物有限公司,批号:２０１３６４)㊁碱性磷酸酶(A L P)染色试剂盒㊁A L P比活性试剂盒(武汉赛培生物科技有限公司,批号:２０１８４５１２㊁２０１８４５７７);M E K１㊁E R K１蛋白抗体(美国a b c a m公司,批号:２０１５４８㊁２０１５７４).
１．２㊀实验方法
１．２．１㊀实验动物
S P F级４周龄S D大鼠,雌性,体重６０~９０g,购自重庆医科大学实验动物中心,动物生产许可证号:S C X K(渝)２０１８Ｇ０００３,动物使用许可证号: S Y X K(渝)２０１８Ｇ００２７,动物质量合格证号:１０１２４５８４.本研究已获得中国人民解放军联勤保障部队９０８医院医学伦理委员会审查和批准,符合动物伦理学实验标准要求.
１．２．２㊀细胞培养与分组
颈椎脱臼处死大鼠,７０％酒精浸泡大鼠１０m i n,于超净工作台上无菌条件下取出双侧股骨和胫骨,骨剪剪去骨干骺端,采用含１０％胎牛血清的D M E M完全培养基(含１００U m L－１青霉素＋１００μg m L－１链霉素的双抗)反复冲洗骨髓腔,冲洗液收集到５０m L离心管中,制成细胞悬液,在１０００r m i n－１条件下离心１０m i n,弃上清,加入D M E M完全培养基,吹打混匀,以５ˑ１０６个 c m－２的密度接种于细胞培养瓶中,恒温培养箱(３７ħ,５％C O２)中孵育４８h.待细胞铺满瓶底后给予传代培养,取P３代细胞进行实验.将培养后的细胞分为空白对照组(完全培养基)㊁阳性对照组(５０μg m L－１抗坏血酸＋１０mm o l L－１β甘油磷酸钠＋１０－８m o l L－１地塞米松)[８]㊁香青兰总黄酮高浓度组(１００μg m L－１)㊁香青兰总黄酮中浓度组(５０μg m L－１)㊁香青兰总黄酮低浓度组(２５μg m L－１)[９].１．２．３㊀C C KＧ８法检测细胞存活率
用C C KＧ８法检测B M S C s细胞的活力:胰蛋白酶消化对数生长期的B M S C s细胞２m i n,充分吹打,制作成单细胞悬液,３０００r m i n－１离心１０m i n 后弃上清,加入含有１０％胎牛血清的R P M I１６４０培
９３
王俊井等:香青兰总黄酮调节M E K/E R K信号通路诱导B M S C s增殖及成骨分化的作用
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养基,轻微吹打,重悬细胞,以每孔１００μL接种到９６孔板,３７ħ㊁５％C O２培养２４h后更换新的培养基,按实验分组,加入不同浓度的香青兰总黄酮和阳性对照物,各组６个复孔,培养２４h,更换培养液后每孔加入１０μL C C KＧ８溶液,持续培养３h,使用B i oＧR a d微孔板阅读器读取４５０n m处的吸光度,重复３次,通过吸光度计算各实验组细胞存活率.１．２．４㊀A L P比活性检测
细胞处理及给药同１．２．２,于６孔板上给药培养７d后,收集细胞于１．５m L离心管中,每管加入４００μL的１０mm o l L－１T r i sＧH C L(含０．１％T r i t o nXＧ１００),吹打混匀,用超声细胞破碎仪破碎细胞,４ħ下１００００r m i n－１离心１０m i n,取上清液于新的１．５m L离心管中,根据A L P检测试剂盒说明检测细胞A L P活性,再根据蛋白测定试剂盒说明检测蛋白含量,两者比值即为A L P比活性.１．２．５㊀A L P染色
细胞处理及给药同１．２．２,６孔板上培养细胞７d 后取出,弃培养液,P B S冲洗,将固定液加入孔板中,作用１m i n,流水冲洗２m i n,晾干.滴加孵育液,于３７ħ恒温箱中孵育１５m i n,流水冲洗２m i n,晾干,苏木精染色５m i n,流水冲洗２m i n,晾干,光学显微镜下观察各孔细胞形态.１．２．６㊀M E K１㊁E R K１蛋白表达水平的检测
细胞处理及给药同１．２．２,在无菌操作台上取出２４h培养后细胞,弃去培养液,加入胰蛋白酶消化细胞,３０００r m i n－１离心１０m i n后转移至１．５m L E P重悬,蛋白提取试剂盒提取细胞蛋白,收集于新的１．５m LE P管中.经S D SＧP A G E分离后,蛋白转移到硝化纤维素膜上,将膜放在５％脱脂奶粉溶液中封闭２h,然后用特异性抗体M E K１㊁E R K１和βＧa c t i n在４ħ条件下孵育１２h,P B S溶液清洗３次,每次１０m i n,进行二抗孵育２h,然后在L A S４０００成像系统上显影.
１．３㊀统计学方法
采用S P S S１９．０统计软件对数据进行分析,数据结果以xʃs表示,通过单因素方差分析并采用L S DＧt法进行多重比较,P＜０．０５为差异有统计学意义.
２㊀结果
２．１㊀香青兰总黄酮对B M S C s细胞存活率的影响香青兰总黄酮低㊁中㊁高浓度组和阳性对照组B M S C s细胞存活率显著高于空白对照组,且呈浓度依赖性(均P＜０．０５),高浓度组和阳性对照组作用相似,差异无统计学意义(P＞０．０５).见表１.
表１㊀香青兰总黄酮对B M S C s细胞存活率的影响
xʃs 组别n细胞存活率/％
空白对照组㊀㊀㊀㊀㊀３１００．００ʃ０．００
香青兰总黄酮低浓度组３１１２．５７ʃ１８．１２∗香青兰总黄酮中浓度组３１３２．１２ʃ１６．０３∗ʀ香青兰总黄酮高浓度组３１５１．５２ʃ１７．１４∗ʀә阳性对照组㊀㊀㊀㊀㊀３１５２．９９ʃ１８．３９∗ʀә㊀㊀㊀∗P＜０．０５与空白对照组比较;ʀP＜０．０５与香青兰总黄酮低浓度组比较;әP＜０．０５与香青兰总黄酮中浓度组比较.２．２㊀香青兰总黄酮对B M S C s细胞A L P比活性的影响
香青兰总黄酮低㊁中㊁高浓度组和阳性对照组B M S C s细胞A L P比活性显著高于空白对照组,且呈浓度依赖性(均P＜０．０５),高浓度组和阳性对照组作用相似,差异无统计学意义(P＞０．０５).见表２.
表２㊀香青兰总黄酮对B M S C s细胞A L P比活性的影响
xʃs 组别n
A L P比活性/
(U g－１ L－１)空白对照组㊀㊀㊀㊀㊀３３８．９６ʃ７．１２
香青兰总黄酮低浓度组３４９．９１ʃ８．１２∗
香青兰总黄酮中浓度组３６０．１２ʃ８．０３∗ʀ香青兰总黄酮高浓度组３７１．５２ʃ７．１４∗ʀә阳性对照组㊀㊀㊀㊀㊀３７２．６９ʃ９．３９∗ʀә㊀㊀㊀∗P＜０．０５与空白对照组比较;ʀP＜０．０５与香青兰总黄酮低浓度组比较;әP＜０．０５与香青兰总黄酮中浓度组比较.２．３㊀各组B M S C s细胞A L P染色结果
随着香青兰总黄酮干预浓度的增加,B M S C s胞浆内棕红色逐渐加深,且咖啡色颗粒逐渐变大且增多,且香青兰总黄酮高浓度组与阳性对照组染色结果相似.见图１.
２．４㊀香青兰总黄酮对B M S C s细胞M E K１㊁E R K１蛋白表达的影响
香青兰总黄酮低㊁中㊁高浓度组和阳性对照组B M S C s细胞M E K１㊁E R K１蛋白表达量显著高于空白对照组,且呈浓度依赖性(均P＜０．０５),高浓度组和阳性对照组作用相似,差异无统计学意义(P＞０．０５).见表３,图２.
０４南昌大学学报(医学版)２０２２年２月,第６２卷第１期 Copyright©博看网 . All Rights Reserved.
E
D C B A
㊀㊀A :空白对照组;B :香青兰总黄酮低浓度组;C :香青兰总黄酮中浓度组;D :香青兰总黄酮高浓度组;E :
阳性对照组.
图１㊀不同浓度香青兰总黄酮作用后B M S C sA L P 染色(A L P 染色,２００ˑ)
表３㊀香青兰总黄酮对B M S C s 细胞M E K １㊁E R K １蛋白表达的影响
x ʃs
组别
n
M E K １/βA c t i n E R K １/βA c t i n 空白对照组
３０．２１ʃ０．０６㊀０．２４ʃ０．０５香青兰总黄酮低浓度组３０．３１ʃ０．０７
∗
０．４２ʃ０．０７∗香青兰总黄酮中浓度组３０．４３ʃ０．０７∗ʀ
０．５９ʃ０．０６∗ʀ
香青兰总黄酮高浓度组３０．７１ʃ０．０８∗ʀә０．８９ʃ０．０５∗ʀә阳性对照组
３
０．７２ʃ０．０９∗ʀә
０．９１ʃ０．０７∗ʀә
㊀㊀∗P ＜０．０５与空白对照组比较;ʀP ＜０．０５与香青兰总黄酮低浓度组比较;әP ＜０．０５与香青兰总黄酮中浓度组比较.
E
D C B A MEK1
ERK1
β-actin
㊀㊀A :空白对照组;B :香青兰总黄酮低浓度组;C :香青兰总黄酮中浓度组;D :香青兰总黄酮高浓度组;E :
阳性对照组.图２㊀不同浓度香青兰总黄酮作用后B M S C sM E K １㊁E R K １蛋白印迹
３㊀讨论
㊀㊀B M S C s 又称骨髓源性多能间充质干细胞,
已被证实能向包括骨㊁软骨㊁肌肉和脂肪在内的所有间充
质组织分化[１０
].由于其具有多潜能的分化特性,且
细胞易于获得和操作,骨髓基质干细胞已经成为组
织工程应用和再生研究领域的理想候选者[
１１
].当上调与基质发育和成熟相关的基因表达时,可导致B M S C s 在增殖完成后发生成骨分化,
在分化过程中,由于基因和蛋白质表达的改变,B M S C s 在细胞外基质矿化开始之前,经历了形态和功能的改
变[
１２
].目前香青兰总黄酮是否具有成骨诱导作用尚不清楚,但是其可调节机体内分泌功能㊁改善机体内微环境的作用已被确定,这对B M S C s 的分化可
能具有促进作用[１３]
.本研究结果显示,在给予B M Ｇ
S C s 不同浓度的香青兰总黄酮干预后,
均可导致B M S C s 分化数量增加,且随着香青兰总黄酮干预浓度的增加,B M S C s 分化数量呈显著递增趋势,呈明显浓度依赖性.活跃的成骨细胞可释放出较多的A L P ,因此A L P 染色和A L P 比活性可以反映出机
体骨形成情况,本研究实验组中A L P 染色颗粒的明显增加和A L P 比活性的升高,均提示B M S C s 向成骨分化.以上结果显示香青兰总黄酮可促进B M Ｇ
S C s 向成骨细胞分化,
其原因可能是香青兰总黄酮改善机体骨髓微环境,使得B M S C s 利于分化.
M E K 信号通路是由E R K ㊁c Ｇj
u n n h ２末端激酶(J N K )和p ３８３种蛋白激酶级联而成的一种信号通路,它参与多种重要的细胞事件的进程,尤其是细胞
增殖㊁分化和凋亡[１４Ｇ１５
].E R K 通常被有丝分裂原和
生长因子激活,在细胞生长㊁防止凋亡和细胞分化等
１
４王俊井等:香青兰总黄酮调节M E K /E R K 信号通路诱导B M S C s 增殖及成骨分化的作用
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方面有着重要的调节作用[１６].有文献[１７]报道E R K 和p３８在在骨髓基质细胞成骨分化过程被激活.本研究通过检测骨髓间充质干细胞中A L P比活性㊁M E K１和E R K１信号通路蛋白的表达,证明激活M E K/E R K信号通路中相关蛋白表达,可促进细胞增殖能力.然而,也有研究[１８]表明,M E K/E R K信号通路抑制细胞成骨分化,因此,M E K/E R K信号通路在成骨细胞分化中的作用目前尚有争议,使其成为本研究需要重点探讨的内容.本研究从细胞存活率㊁A L P比活性㊁M E K１及E R K１蛋白表达量等方面分析M E K/E R K信号通路在B M S C s成骨分化中的作用,阐明M E K/E R K信号通路在B M S C s 成骨分化中的意义,结果显示M E K/E R K信号通路的激活可能有助于B M S C s成骨分化.其机制可能是香青兰总黄酮引起体内骨髓微环境发生改变,从而导致M E K/E R K信号通路激活,M E K１㊁E R K１相关蛋白表达水平增加,促进B M S C s成骨分化.且在本研究中,随着香青兰总黄酮干预浓度的增加, M E K１㊁E R K１蛋白表达水平呈显著递增趋势,表明香青兰总黄酮能够有效地激活M E K/E R K信号通路,其蛋白表达效果与香青兰总黄酮浓度密切相关,说明香青兰总黄酮可能是一种有效的促成骨分化的药物,而M E K/E R K信号通路就是其作用靶点之一.
综上所述,本研究结果初步证明了香青兰总黄酮可诱导B M S C s增殖及分化,其机制可能是香青兰总黄酮通过激活M E K/E R K信号通路,上调M E K１㊁E R K１相关蛋白表达来实现的,M E K/E R K 信号通路极可能是B M S C s增殖及分化的重要调控靶点.
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b l o
c kP K C/E R K/N FＧκBa n dJ N K p a t h w a y s i n g l i o b l a s t o m a[J]．
C e l l
D e a t hD i s,２０１８,９(３):３９４．
[６]㊀Y A N GSY,Y U A NL,WA N G YF,e t a l．B７ＧH６p r o m o t e s c e l l p r o l i f e r a t i o n,m i g r a t i o n a n d i n v a s i o no f n o nＧh o d g k i n l y m p h o m a v i aR a s/M E K/E R K p a t h w a y b a s e do n q u a n t i t a t i v e p h o s p h oＧp r o t e o m i c s d a t a[J]．O n c oT a r g e t sT h e r,２０２０,１３:５７９５Ｇ５８０５．[７]㊀K I M W O,K I M SA,J U N G Y A,e t a l．U l t r a v i o l e t Bd o w n r e gＧu l a t e da q u a p o r i n１e x p r e s s i o nv i at h e M E K/E R K p a t h w a y i n t h ed e r m a l f i b r o b l a s t s[J]．A n n D e r m a t o l,２０２０,３２(３):２１３Ｇ２２２．
[８]㊀刘家寅,刘光源,田发明,等．辛伐他汀通过p３８MA P K信号通路诱导B M S C s成骨分化的研究[J]．中国骨质疏松杂志,２０１６,２２(２):１２５Ｇ１３０,１４９．
[９]㊀都研文,郑瑞芳,曾诚,等．香青兰总黄酮对阿霉素心肌毒性的保护机制研究[J]．中草药,２０１９,５０(２４):６０４５Ｇ６０５１．
[１０]㊀L IP,C H E N Y D,Y A N G K,e t a l．M e c h a n i c a l c h a r a c t e r i s t i c s o f B M S C sＧi n t e r v e n e d s c i a t i c n e r v e i n c h r o n i c a l c o h o lＧi n t o x i c aＧ
t e da n i m a lm o d e l[J]．I n t JN e u r o s c i,２０２１,１３１(７):６５０Ｇ６５６．[１１]㊀Z H O N G G,Y A OJ,HU A N G X,e t a l．I n j e c t a b l eE C M h y d r oＧ
g e l f o r d e l i v e r y o f B M S C s e n a b l e d f u l lＧt h i c k n e s sm e n i s c u s r eＧ
p a i r i na no r t h o t o p i c r a tm o d e l[J]．B i o a c tM a t e r,２０２０,５(４):
８７１Ｇ８７９．
[１２]㊀P U X,C H A IY H,G U A N LC,e t a l．A s t r a g a l u s i m p r o v e a gＧ
i n g b o n e m a r r o w m e s e n c h y m a ls t e m c e l l s(B M S C s)v i t a l i t y
a n do s t e o g e n e s i st h r o u g h V DＧF G F２３ＧK l o t h oa x i s[J]．I n tJ
C l i nE x p P a t h o l,２０２０,１３(４):７２１Ｇ７２９．
[１３]㊀WUP,Y A NXS,Z H A N GY,e t a l．T h e p r o t e c t i v em e c h a n i s m u n d e r l y i n g t o t a l f l a v o n e s o fD r a c o c e p h a l u m(T F D)e f f e c t so n
r a t c e r e b r a l i s c h e m i a r e p e r f u s i o n i n j u r y[J]．J T o x i c o lE n v i r o n
H e a l t hA,２０１８,８１(２１):１１０８Ｇ１１１５．
[１４]㊀T A N G F,P A C H E C O M T F,C H E N P,e ta l．S e c r e t o g r a n i n
I I I p r o m o t e s a n g i o g e n e s i s t h r o u g hM E K/E R Ks i g n a l i n g p a t hＧ
w a y[J]．B i o c h e m B i o p h y sR e sC o mm u n,２０１８,４９５(１):７８１Ｇ
７８６．
[１５]㊀W A N G Z,M ALM,S U M Q,e t a l．B a i c a l i n i n d u c e s c e l l u l a r s e n e sＧ
c e n c e i nh u m a nc o l o nc a n c e r c e l l sv i au p r e g u l a t i o no fD E P Pa n d
t h e a c t i v a t i o no fR a s/R a f/M E K/E R K s i g n a l i n g[J]．C e l lD e a t h
D i s,２０１８,９(２):２１７．
[１６]㊀Y A N GJ,Q I UJF,HU Y,e t a l．An a t u r a l s m a l lm o l e c u l e i nＧ
d u c
e sm e g a k a r y o c y t i c d i
f f e r e n t i a t i o n a n d s u p p r e s s e s l e u k e m oＧ
g e n e s i s t h r o u g ha c t i v a t i o no fP K Cδ/E R K１/２s i g n a l i n gp a t hＧ
w a y i n e r y t h r o l e u k e m i a c e l l s[J]．B i o m e dP h a r m a c o t h e r,２０１９,
１１８:１０９２６５．
[１７]㊀Z HA N G H,L I N J T,C H E N JJ,e ta l．E f f e c t so fn o t c h/ p３８MA P Ks i g n a l i n gp a t h w a y o na r t i c u l a r c a r t i l a g ed e f e c t r eＧ
c o v e r y b y B M S C s t i s s u e b a s e
d o n t h
e r a b b i t a r t i c u l a r c a r t i l a g e
d e f e c tm o d e l s[J]．S a u d i JB i o l S c i,２０２０,２７(３):８５９Ｇ８６４．[１８]㊀L I U Y,WA N G X Y,C H A N G H,e ta l．M o n g o l i a n m e d i c i n e
e c h i n o p s p r e v e n t e d p o s t m e n o p a u s a l o s t e o p o r o s i s a n d i n d u c e d
E R/A K T/E R K p a t h w a y i nB M S C s[J]．B i o s c iT r e n d s,２０１８,
１２(３):２７５Ｇ２８１．
(责任编辑:钟荣梅)
２４南昌大学学报(医学版)２０２２年２月,第６２卷第１期 Copyright©博看网 . All Rights Reserved.。