丹酚酸B纯品的制备方法[发明专利]

[19]
中华人民共和国国家知识产权局
[12]发明专利申请公布说明书
[11]公开号CN 101434590A
[43]公开日2009年5月20日
[21]申请号200710166155.2[22]申请日2007.11.12
[21]申请号200710166155.2
[71]申请人北京科士蓝医药技术有限公司
地址100020北京市朝阳区吉庆里小区11号楼9
单元201室
[72]发明人魏峰 [51]Int.CI.C07D 307/80 (2006.01)A61K 36/53 (2006.01)
权利要求书 2 页 说明书 5 页
[54]发明名称
丹酚酸B纯品的制备方法
[57]摘要
本发明公开了一种丹酚酸B纯品的制备方法。

其工艺步骤为：1.丹参用酸水提取；2.提取液上聚
酰胺柱；3.洗脱液上大孔吸附树脂柱；4.干粉A用
溶剂法精制；5.干粉C上Sephadex LH－20柱或反相
硅胶柱。

用本发明的方法制备的丹酚酸B，其纯度
大于或等于98％(中检所标准品标定)，而且成本低、
环境污染小，易于工业化生产。

可用于治疗冠心病、
心绞痛、脑血栓、慢乙肝肝纤维化、老年痴呆症、
动脉粥样硬化、肿瘤等。

200710166155.2权 利 要 求 书第1/2页
1、一种丹酚酸B纯品的制备方法，其特征是，包括如下步骤：
(a)丹参用酸水提取
(b)提取液上聚酰胺柱
(c)洗脱液上大孔吸附树脂柱
(d)干粉A用溶剂法精制
(e)干粉C上Sephadex LH-20柱或反相硅胶柱。

2、根据权利要求1所述的制备方法，其特征是，步骤(a)中还包括，提取方法可用浸渍法、渗漉法、煎煮法、温浸法和回流法，酸水PH值小于4，酸水提取液过滤；步骤(b)中还包括，滤液上聚酰胺柱，用含水或无水低级醇洗脱除杂质，然后用水洗色谱柱，将低级醇洗净后，用碱性水溶液洗脱，收集碱洗脱液；步骤(c)中还包括，步骤(b)中的碱洗脱液，用酸调P H值到酸性后，上大孔吸附树脂柱，先用5—40％低级醇水溶液洗脱除杂质，再用50—95％低级醇水溶液或无水低级醇洗脱，收集洗脱液，减压回收洗脱液至干，得干粉A。

步骤(d)中还包括，取步骤(c)中的干粉A，加丙酮240倍量溶解，过滤，回收滤液至干，得干粉B；取干粉B，加乙酸乙酯2—40倍量溶解，过滤，回收滤液至干，得干粉C；步骤(e)中还包括，取步骤(d)中的干粉C，用溶剂溶解，上Sephadex LH-20柱或反相硅胶柱(Rp-2，Rp-8，Rp-18)，用溶剂洗色谱柱，根据T L C合并洗脱液，回收洗脱液至干，得干粉D(丹酚酸B含量大于或等于98％)。

3、根据权利要求2所述的制备方法，其特征是，步骤(a)中还包括，提取方法首选浸渍法、渗漉法；步骤(a)中加入酸水量是丹参重量的2—50倍，浸渍1—40次，每次1—48小时，酸水P H值小于2，酸水是无机酸或有机酸的水溶液。

4、根据权利要求2所述的制备方法，其特征是，步骤(a)中加入酸水量是丹参重量的10—20倍，浸渍10—20次，每次6—10小时，酸水PH值小于1.5，酸水是盐酸、硫酸、磷酸、硝酸、甲酸、醋酸、丙酸、丁酸、草酸、丙二酸、丁二酸的水溶液。

步骤(b)中还包括，用1—50％甲醇或乙醇水溶液洗聚酰胺柱除杂质，步骤(b)中还包括，用0.005—3％碳酸氢钠、碳酸钠或氢氧化钠水溶液洗脱，步骤(b)中所述聚酰胺为聚己内酰胺(尼龙—6)。

5、根据权利要求2所述的制备方法，其特征是，步骤(a)中的酸水是盐酸或硫酸水溶液；步骤(b)中还包括，用2—20％甲醇或乙醇水溶液洗聚酰胺柱，步骤(b)中还包括，用0.005—0.5％碳酸氢钠、碳酸钠或氢氧化钠水溶液洗脱。

步骤(c)中还包括，步骤(b)中的碱洗脱液，用盐酸或硫酸调P H值小于4；步骤(c)中还包括，先用10—20％甲醇或乙醇水溶液洗脱，再用甲醇或95％乙醇洗脱；步骤(c)中所述大孔吸附树脂为苯乙烯型。

6、根据权利要求2所述的制备方法，其特征是，步骤(c)中还包括，步骤(b)
200710166155.2权 利 要 求 书 第2/2页
中的碱洗脱液，用盐酸或硫酸调P H值小于2；步骤(b)和步骤(c)中所述低级醇是C1—C5低级醇。

7、根据权利要求2所述的制备方法，其特征是，步骤(d)中还包括，加丙酮10—20倍量溶解，加乙酸乙酯10—20倍量溶解。

步骤(e)中还包括，用水、含水或无水甲醇、含水或无水乙醇溶解干粉C，上色谱柱，用水、含水或无水甲醇、含水或无水乙醇洗色谱柱。

8、根据权利要求2所述的制备方法，其特征是，步骤(e)中还包括，用595％甲醇或乙醇水溶液溶解干粉C，上色谱柱，用5—95％甲醇或乙醇水溶液洗色谱柱。

9、根据权利要求2所述的制备方法，其特征是，步骤(e)中还包括，用20—60％甲醇或乙醇水溶液溶解干粉C，上色谱柱，用20—60％甲醇或乙醇水溶液洗色谱柱。

10、根据权利要求2所述方法制备的丹酚酸B，其纯度大于或等于98％(中检所标准品标定)。

200710166155.2说 明 书第1/5页
丹酚酸B纯品的制备方法
技术领域
本发明涉及从中药丹参中提取、分离、精制丹酚酸B的方法。

背景技术
丹参为常用中药，始载于《神农本草经》，列为上品。

中国药典(2005年版)规定丹参为唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根及根茎。

丹酚酸B是丹参中水溶性有效成分之一，中国药典(2005年版)将丹酚酸B的含量(大于3％)作为丹参的质量标准，说明丹酚酸B是丹参中最主要的活性成分。

丹酚酸B具有多方面的药理作用。

(1)保护脑血管，(2)保护肝细胞，(3)抗动脉粥样硬化，(4)保护心肌缺血再灌注损伤，(5)治疗心肌梗死，(6)对家兔全血粘度、红细胞压积和聚集指数有明显的降低作用。

目前，制备丹酚酸B的专利主要有五项：
申请号：200610200682.6 微波提取加聚酰胺柱分离 申请号：02160771.0 大孔吸附树脂柱分离
申请号：02137375.2 先用大孔吸附树脂柱分离，后用聚酰胺柱分离
申请号：03151476.6 先用壳聚糖絮凝，后用有机溶剂萃取，最后用
硅胶柱分离。

申请号：200610170981.X 乙醚萃取加逆流色谱分离 这五项专利所制备的丹酚酸B，其纯度达不到98％，而且有的专利不适合工业化生产。

本发明提供的方法，即能使丹酚酸B的纯度达到98％(中检所标准品标定)，又适合工业化生产，而且成本低，环境污染小。

发明内容
本发明的目的是克服现有技术中的不足，提供一种成本低、纯度高、产率高，可以工业化生产的丹酚酸B(纯度大于或等于98％)的制备方法。

用外标一点法计算，标准品由中国生物制品检定所提供。

本发明的丹酚酸B的制备方法，基本是由丹参用酸水提取，聚酰胺柱分离，大孔吸附树脂柱分离，溶剂法精制，Sephadex LH-20柱或反相硅胶柱分离等几个步骤组成。

本发明通过下述技术方案予以实施：
(a)丹参去杂质，用PH值小于4的酸水浸渍，滤过；
(b)滤液上聚酰胺柱，用含水或无水低级醇洗脱除杂质，然后用水洗聚酰胺柱，将低级醇洗净后，用碱性水溶液洗脱，收集碱洗脱液；
(c)碱洗脱液用酸调PH值到酸性后，上大孔吸附树脂柱，先用5—40％低级醇水溶液洗脱除杂质，再用50—95％低级醇水溶液或无水低级醇洗脱，收集洗脱液，减压回收洗脱液至干，得干粉A；
(d)取干粉A，加丙酮2—40倍量溶解，过滤，回收滤液至干，得干粉B；取干粉B，加乙酸乙酯2—40倍量溶解，过滤，回收滤液至干，得干粉C；
(e)取干粉C，用水、含水或无水甲醇、含水或无水乙醇溶解，上Sephad ex
LH-20柱或反相硅胶柱(Rp-2，Rp-8，Rp-18)，用水、含水或无水甲醇、含水或无水乙醇洗色谱柱，根据T L C合并洗脱液，回收洗脱液至干，得干粉D(丹酚酸B含量大于或等于98％)。

其中：步骤(a)中，浸渍丹参的酸水是盐酸或硫酸的水溶液，加入酸水量是丹参重量的2—50倍(最佳为10—20倍)，浸渍1—40次(最佳为10—20次)，每次1—48小时(最佳为6—10小时)，酸水P H 值小于2(最佳为PH值小于1.5)。

步骤(b)中，用1—50％(最佳为2—20％)甲醇或乙醇水溶液洗聚酰胺柱除杂质，用0.005—3％(最佳为0.005—0.5％)碳酸氢钠、碳酸钠或氢氧化钠水溶液洗脱。

聚酰胺为聚己内酰胺(尼龙—6)。

步骤(c)中，碱洗脱液用盐酸或硫酸调P H值小于4(最佳为P H值小于2)，先用10—20％甲醇或乙醇水溶液洗脱除杂质，再用甲醇或95％乙醇洗脱。

大孔吸附树脂为苯乙烯型。

步骤(d)中，取干粉A，加丙酮10—20倍量溶解，取干粉B，加乙酸乙酯10—20倍量溶解。

步骤(e)中，用5—95％(最佳为20—60％)甲醇或乙醇水溶液溶解干粉C，上色谱柱，用5—95％(最佳为20—60％)甲醇或乙醇水溶液洗色谱柱。

依本发明的方法制成的丹酚酸B，其纯度大于或等于98％(中检所标准品标定)，可用于治疗冠心病、心绞痛、脑血栓、慢乙肝肝纤维化、老年痴呆症、动脉粥样硬化、肿瘤等；可制成任何一种药剂学上所说的剂型，也可配合其它药物或组分一起制成制剂使用。

本发明的优势与特点
1、成本低，环境污染小，易于工业化生产
(1)首选浸渍法和渗漉法提取，不消耗能源
(2)大孔吸附树脂、Sephadex LH-20或反相硅胶填料用完后，不需要再 生处理，填料就恢复到使用前的颜色，可以反复使用。

(3)用聚酰胺柱、大孔吸附树脂柱、Sephadex LH-20柱或反相硅胶柱时，大量使用的洗脱剂是廉价的甲醇或乙醇水溶液，而且洗脱剂可以回
收反复使用。

(4)用溶剂法精制时，用有机溶剂溶解比较纯的中间体，故有机溶剂用量不大；而且有机溶剂可以回收反复使用。

2、产品纯度高
由于丹酚酸B不稳定，所以首选酸水浸渍法和渗漉法提取；提取液中杂质少，故对填料污染少，丹酚酸B纯度高。

具体实施方式
下述各实施例仅用于说明本发明而非对本发明的限制： 实施例一
丹参粗粉3kg，加盐酸水溶液(PH值小于1.5)15倍量，浸渍15次，每次6小时，过滤，滤液上聚酰胺(60—100目，1kg)柱，上完各次酸水浸渍液后，用18—19％乙醇水溶液洗聚酰胺柱除杂质，然后用水洗色谱柱，将醇洗净后，用0.01％碳酸氢钠水溶液洗色谱柱，收集洗脱液，用盐酸调洗脱液使PH值小于2，上大孔吸附树脂(AB—8，2kg)柱，上完大孔吸附树脂柱后，用16％乙醇水溶液洗树脂柱除杂质，再用95％乙醇洗树脂柱，收集95％乙醇洗脱液，回收至干，得干粉A。

取干粉A，加丙酮10倍量溶解，过滤，回收滤液至干，得干粉B；取干粉B，加乙酸乙酯10倍量溶解，过滤，回收滤液至干，得干粉C。

取干粉C，加60％乙醇水溶液适量溶解，上Sephadex LH-20柱，用60％乙醇水溶液洗色谱柱，根据TLC合并洗脱液，回收至干，得干粉D(丹酚酸B含量为99.62％)。

实施例二
丹参饮片3kg，加盐酸水溶液(PH值小于1.5)10倍量，浸渍18次，每次8小时，过滤，滤液上聚酰胺(60—100目，1kg)柱，上完各次酸水浸渍液后，用5—6％乙醇水溶液洗聚酰胺柱除杂质，然后用水洗色谱柱，将醇洗净后，用0.005％氢氧化钠水溶液洗色谱柱，收集洗脱液，用盐酸调洗脱液使PH值小于2，上大孔吸附树脂(D101，2kg)柱，上完大孔吸附树脂柱后，用12％乙醇水溶液洗树脂柱除杂质，再用95％乙醇洗树脂柱，收集95％乙醇洗脱液，回收至干，得干粉A。

取干粉A，加丙酮10倍量溶解，过滤，回收滤液至干，得干粉B；取干粉B，加乙酸乙酯10倍量溶解，过滤，回收滤液至干，得干粉C。

取干粉C，加20％乙醇水溶液适量溶解，上反相硅胶柱(Rp-18)，用20％乙醇水溶液洗色谱柱，根据TLC合并洗脱液，回收至干，得干粉D(丹酚酸B含量为98.65％)。

实施例三
丹参粗粉3kg，加硫酸水溶液(PH值小于1.5)10倍量，浸渍10次，每次6小时，过滤，滤液上聚酰胺(60—100目，1kg)柱，上完各次酸水浸渍液后，用9—10％甲醇水溶液洗聚酰胺柱除杂质，然后用水洗色谱
柱，将醇洗净后，用0.01％碳酸钠水溶液洗色谱柱，收集洗脱液，用硫酸调洗脱液使PH值小于2，上大孔吸附树脂(AB—8，2kg)柱，上完大孔吸附树脂柱后，用20％甲醇洗树脂柱除杂质，再用甲醇洗树脂柱，收集甲醇洗脱液，回收至干，得干粉A。

取干粉A，加丙酮20倍量溶解，过滤，回收滤液至干，得干粉B；取干粉B，加乙酸乙酯20倍量溶解，过滤，回收滤液至干，得干粉C。

取干粉C，加30％乙醇水溶液适量溶解，上Sephadex LH-20柱，用30％乙醇水溶液洗色谱柱，根据TLC合并洗脱液，回收至干，得干粉D(丹酚酸B含量为98.97％)。

实施例四
丹参饮片3kg，加硫酸水溶液(PH值小于1.5)15倍量，浸渍15次，每次8小时，过滤，滤液上聚酰胺(60—100目，1kg)柱，上完各次酸水浸渍液后，用15—16％乙醇水溶液洗聚酰胺柱除杂质，然后用水洗色谱柱，将醇洗净后，用0.08％碳酸氢钠水溶液洗色谱柱，收集洗脱液，用硫酸调洗脱液使PH值小于2，上大孔吸附树脂(D101，2kg)柱，上完大孔吸附树脂柱后，用20％乙醇水溶液洗树脂柱除杂质，再用95％乙醇洗树脂柱，收集95％乙醇洗脱液，回收至干，得干粉A。

取干粉A，加丙酮15倍量溶解，过滤，回收滤液至干，得干粉B；取干粉B，加乙酸乙酯15倍量溶解，过滤，回收滤液至干，得干粉C。

取干粉C，加40％甲醇水溶液适量溶解，上反相硅胶柱(Rp-18)，用40％甲醇水溶液洗色谱柱，根据T L C合并洗脱液，回收至干，得干粉D(丹酚酸B含量为99.13％)。

实施例五
丹参个子货3kg，加盐酸水溶液(PH值小于1.5)20倍量，浸渍20次，每次10小时，过滤，滤液上聚酰胺(60—100目，1kg)柱，上完各次酸水浸渍液后，用2—3％乙醇水溶液洗聚酰胺柱除杂质，然后用水洗色谱柱，将醇洗净后，用0.03％碳酸氢钠水溶液洗色谱柱，收集洗脱液，用盐酸调洗脱液使PH值小于2，上大孔吸附树脂(AB—8，2kg)柱，上完大孔吸附树脂柱后，用10％乙醇水溶液洗树脂柱除杂质，再用95％乙醇洗树脂柱，收集95％乙醇洗脱液，回收至干，得干粉A。

取干粉A，加丙酮15倍量溶解，过滤，回收滤液至干，得干粉B；取干粉B，加乙酸乙酯15倍量溶解，过滤，回收滤液至干，得干粉C。

取干粉C，加50％甲醇水溶液适量溶解，上Sephadex LH-20柱，用50％甲醇水溶液洗色谱柱，根据TLC合并洗脱液，回收至干，得干粉D(丹酚酸B含量为99.35％)。

实施例六
丹参个子货3kg，加盐酸水溶液(PH值小于1.5)20倍量，浸渍10次，每次10小时，过滤，滤液上聚酰胺(60—100目，1kg)柱，上完各
次酸水浸渍液后，用7—8％甲醇水溶液洗聚酰胺柱除杂质，然后用水洗色谱柱，将醇洗净后，用0.1％碳酸氢钠水溶液洗色谱柱，收集洗脱液，用盐酸调洗脱液使PH值小于2，上大孔吸附树脂(H103，2kg)柱，上完大孔吸附树脂柱后，用10％甲醇水溶液洗树脂柱除杂质，再用甲醇洗树脂柱，收集甲醇洗脱液，回收至干，得干粉A。

取干粉A，加丙酮20倍量溶解，过滤，回收滤液至干，得干粉B；取干粉B，加乙酸乙酯20倍量溶解，过滤，回收滤液至干，得干粉C。

取干粉C，加20％甲醇水溶液适量溶解，上Sephadex LH-20柱，用20％甲醇水溶液洗色谱柱，根据TLC 合并洗脱液，回收至干，得干粉D(丹酚酸B含量为99.48％)。

实施例七
丹参饮片3kg，加硫酸水溶液(PH值小于1.5)20倍量，浸渍15次，每次6小时，过滤，滤液上聚酰胺(60—100目，1kg)柱，上完各次酸水浸渍液后，用12—13％甲醇水溶液洗聚酰胺柱除杂质，然后用水洗色谱柱，将醇洗净后，用0.02％碳酸钠水溶液洗色谱柱，收集洗脱液，用硫酸调洗脱液使PH值小于2，上大孔吸附树脂(H103，2kg)柱，上完大孔吸附树脂柱后，用15％甲醇水溶液洗树脂柱除杂质，再用甲醇洗树脂柱，收集甲醇洗脱液，回收至干，得干粉A。

取干粉A，加丙酮15倍量溶解，过滤，回收滤液至干，得干粉B；取干粉B，加乙酸乙酯15倍量溶解，过滤，回收滤液至干，得干粉C。

取干粉C，加30％甲醇水溶液适量溶解，上反相硅胶柱(Rp-18)，用30％甲醇水溶液洗色谱柱，根据TLC合并洗脱液，回收至干，得干粉D(丹酚酸B含量为98.86％)。

实施例八
丹参个子货3kg，加硫酸水溶液(PH值小于1.5)20倍量，浸渍20次，每次10小时，过滤，滤液上聚酰胺(60—100目，1kg)柱，上完各次酸水浸渍液后，用19—20％甲醇水溶液洗聚酰胺柱除杂质，然后用水洗色谱柱，将醇洗净后，用0.005％氢氧化钠水溶液洗色谱柱，收集洗脱液，用硫酸调洗脱液使PH值小于2，上大孔吸附树脂(D101，2kg)柱，上完大孔吸附树脂柱后，用15％甲醇水溶液洗树脂柱除杂质，再用甲醇洗树脂柱，收集甲醇洗脱液，回收至干，得干粉A。

取干粉A，加丙酮10倍量溶解，过滤，回收滤液至干，得干粉B；取干粉B，加乙酸乙酯10倍量溶解，过滤，回收滤液至干，得干粉C。

取干粉C，加50％乙醇水溶液适量溶解，上反相硅胶柱(Rp-18)，用50％乙醇水溶液洗色谱柱，根据TLC合并洗脱液，回收至干，得干粉D(丹酚酸B含量为98.33％)。