衣原体检验立克次体检验支原体检验螺旋体及检验课件

生化反应
分解葡萄糖糖：生殖道支原体、肺炎支 原体 不分解葡萄糖、利用精氨酸：人型支原 体、口腔支原体等
泌尿生殖道感染支原体
种类： 人型支原体、生殖道支原体、溶脲脲原 体 传播途径： 性传播 垂直传播 所致疾病： 非淋病性尿道炎 早产、流产
微生物学检查
分离培养：菌落特征、形态观察、生化反应 冷凝集试验：检测冷凝集素 PCR技术：采用基因扩增技术检测支原体 的DNA
莫氏立克次体
所致疾病：地方性斑疹伤寒
传染源：鼠等
鼠
传播媒介：鼠蚤
传播方式： 鼠蚤 鼠虱
鼠蚤
人
鼠
地方性斑疹伤寒传播方式
免疫性
以细胞免疫为主 病后免疫力牢固
衣原体
是一类能通过细菌滤器、严格的细胞内 寄生、有独特发育周期的原核细胞型微 生物。
衣原体共同特征
革兰阴性、圆形或椭圆形 有细胞壁 有独特的发育周期，二分裂繁殖 细胞内寄生 对抗生素敏感 种类： 沙眼衣原体
病毒的鉴定－－最后鉴定
中和试验
已知抗体＋待检病毒－→细胞培养－→观察有无细胞病变
交叉保护试验
病毒免疫动物－→2周后，用标准动物作攻击试验 不接种病毒的动物－→2周后，用标准动物作攻击试验
病毒的血清学诊断
标本采集：早期和 恢复期双份血清
急性期单份血清IgM 的测定
双份血清的IgG 的测 定
常用方法 中和试验 补体结合试验 血凝抑制试验 免疫荧光试验 酶免试验 胶乳凝集试验 间接血凝试验
二、病毒感染的免疫病理损伤 体液免疫损伤
通过Ⅱ、Ⅲ型超敏反应引起损伤 细胞免疫损伤
通过Tc细胞和Th1细胞杀伤病毒感染的细胞， 同时造成组织细胞损伤 病毒直接损伤淋巴细胞或淋巴器官 艾滋病毒直接杀伤CD4T细胞
抗病毒免疫
干扰素
干扰素概念：干扰素是个体出生后，由病毒 或干扰素诱导剂刺激多种细胞所产生的一种 糖蛋白。 种类： Ⅰ型干扰素：α干扰素、β干扰素 Ⅱ型干扰素：γ干扰素（免疫干扰素） 干扰素的产生及干扰素的作用机制 干扰素的生物学活性： 抗病毒、免疫调节、抗肿瘤
病毒的分类
根据宿主不同分类 动物病毒、植物病毒、昆虫病毒、细菌病毒 根据核酸类型分类： DNA病毒、RNA病毒 根据有无包膜分类： 有包膜病毒、无包膜病毒 临床分类 呼吸道病毒、消化道病毒、肝炎病毒、虫媒 病毒、出血热病毒、肿瘤病毒
亚病毒
类病毒： 只有单股RNA，无蛋白质衣壳 主要引起植物疾病
朊粒 只含具有感染性的蛋白质
宿主细胞
病毒增殖示意图
吸附 穿入 脱壳 生物合成 组装 释放
病毒的异常增殖和干扰现象
病毒的异常增殖：顿挫感染、缺陷病毒 病毒的干扰现象
概念：两种病毒同时或先后感染同一宿主细 胞，可发生一种病毒干扰另一种病毒增殖的 现象。 干扰机理 诱导细胞产生干扰素、竞争干扰 干扰类型：同种干扰、异种干扰、自身干扰 实际意义：指导疫苗的合理使用
免 疫
特异性抗体
制 治疗性疫苗
剂
补体结合试验
抗原-抗体
＋ 补体
＋ 绵羊红细胞-溶血素
病毒与抗体不对应
病毒与抗体对应
溶血
不溶血
血凝试验和血凝抑制试验
血凝试验： 血凝素＋鸡红细胞－→红细胞凝集 血凝抑制试验： 血凝素－抗体＋鸡红细胞－→红细胞不凝集
20面体立体对称
螺旋对称
RNA
Capsomere(壳粒)
免疫性
以细胞免疫为主 抗磷脂抗体（梅毒反应素）对机体无保 护作用，仅供血清学试验。
微生物学检查
硬性下疳、梅毒疹 渗出液
非特异性试验
血
清
标
特异性试验
本
镜检梅毒螺旋 体
查梅毒反应素
测定梅毒螺旋体 特异性抗体
防治原则
加强性卫生教育和严格社会管理。 梅毒确诊后，宜用青霉素等药物及早 予以彻底治疗
二期梅毒
包膜
化学成分：类脂、多糖和蛋白质 类脂、多糖来自宿主细胞 蛋白质由病毒基因编码 包膜蛋白形成刺突
包膜蛋白的作用： 具有抗原性 参与病毒感染 可引起机体发热
病毒的增殖
病毒的增殖周期
吸附
穿入
脱壳
组装与释放
生物合成
病毒的增殖周期
吸附：特异性吸附 穿入：通过胞饮、融合、转位作用方式 脱壳： 生物合成： 病毒mRNA的转录 复制子代病毒核酸 转译子代病毒蛋白 组装与释放 芽生释放、破胞释放
微生物学检查
标本采集与送检： 用于培养：注意时间、部位、处理、保 存 血清学诊断：双份血清标本 检查方法： 显微镜观察：电镜、光镜 血清学：查病毒标记物、检测特异性抗 体 病毒基因检测
病毒的分离培养
组织细胞培养：将组织或细胞模拟体 内的生理条件在试管或培养瓶内培养， 使其生存或生长，称组织培养
组织培养方法
特异性预防
人工主动免疫 灭活疫苗 减毒活疫苗 亚单位疫苗 基因工程疫苗 人工被动免疫 抗病毒免疫血清 丙球
药物治疗
抗 金刚烷胺：抑制病毒脱壳-----预防感冒
病 核苷类药物：疱疹净，阿昔洛韦
毒 药
病毒蛋白酶的抑制物：indinavir
物 抗病毒基因治疗：asODN，asON，核酶
其他：干扰素及干扰素诱生剂，中草药
肺炎衣原体 鹦鹉热衣原体
生物学特性
形态染色与发育周期： 原体（感染型） 始体（繁殖型） 培养特性： 专性细胞内寄生 鸡胚卵黄囊接种
致病性与免疫性
致病物质 内毒素 、外膜蛋白
所致疾病 沙眼 包涵体性结膜炎 非淋病性泌尿生殖道感染 性病淋巴肉芽肿 呼吸道感染
免疫性：病后免疫力不牢固
微生物学检查
直接镜检: 结膜病灶刮片Giemsa染色，查包涵体 免疫荧光染色查衣原体 碘液 分离培养 鸡胚卵黄囊接种 核酸检测
支原体“荷包蛋”样菌落
肺炎支原体 支原体电镜图
恙虫病立克次体
所致疾病：恙虫病
传染源：鼠等
传播媒介：恙螨
传播方式：
鼠 类
恙 螨 幼 虫
卵
成虫
稚虫
稚虫
成虫 卵
第 二 代 幼 虫
人
恙虫病传播方式
病毒
病毒是个体微小，结构简单，只含一种核 酸，在细胞内以复制方式进行增殖的非细 胞型微生物。
病毒特征
理化因素对病毒的影响
温度：病毒耐冷不耐热，应低温保存病 毒 辐射：破坏病毒核酸结构，导致病毒灭 活 脂溶剂：有包膜病毒对脂溶剂敏感 消毒剂：可灭活病毒 抗生素：病毒对抗生素不敏感，抗生素 治疗病毒性疾病无效
病毒的变异
变异类型： 毒力变异 耐药性变异 抗原性变异 温度敏感性变异
变异机制 基因突变 基因重组
二期梅毒
三期梅毒
梅毒螺旋体
钩端螺旋体
碘液染色
原体 衣原体免疫荧光染色
沙眼
独特的发育周期
外斐反应
变形杆菌OX菌株代替立克次体抗原进 行交叉凝集反应，以检测患者血外斐反应的交叉凝集
立克次体
普氏立克次体 莫氏立克次体 恙虫病立克次体
OX19
生物学特性
形态染色：球杆状、常用Giemsa染色， 在感染的细胞中排列不规则 培养方法：动物接种、鸡胚接种、细胞 培养 抗原构造：与变形杆菌OX菌株有共同 抗原（用于外斐反应）
所致疾病
种类
传播媒介
所致疾病
普氏立克次体 人虱 流行性斑疹伤寒
莫氏立克次体 鼠蚤 地方性斑疹伤寒
恙虫病立克次体 恙螨
恙虫病
特征
有细胞壁 有DNA 和RNA 以二分裂方式繁殖 对抗生素敏感
钩端螺旋体
引起钩端螺旋体病
生物学性状
形态染色 细长、螺旋细密、两端弯曲如钩 常用Fontana镀银染色，染成棕褐色 运动活泼 培养：适宜温度28～30℃，常用柯氏培 养基，生长缓慢 抵抗力：一般，对青霉素敏感，在水中 存活时间长
病毒的结构与化学组成
病毒结构
基本结构 （核衣壳）
辅助结构
核心 衣壳（壳粒→衣壳） 包膜
核心
只含一种核酸，DNA或RNA（分别称DNA 病毒和RNA病毒） 控制病毒的增殖、变异、毒力等性状 除去病毒衣壳仍具有感染性的核酸称感染 性核酸
衣壳
化学成分为蛋白质 构型：螺旋对称、20面体立体对称、复合 对称 具有保护核酸的作用 具有抗原性，能刺激机体产生免疫应答 通过与宿主细胞表面受体结合参与感染
隐性感染：成为病毒携带者；获得免疫 显性感染： 急性感染 持续性感染 慢性感染 潜伏感染： 慢发感染
病毒的致病机制
一、病毒对宿主细胞的直接作用 影响细胞的生命力 杀细胞感染 非杀细胞感染 细胞融合 形成包涵体：有些病毒感染的细胞在普通光学显 微镜下可观察到胞浆或胞核内出现圆形或卵圆形 的斑块状结构 细胞转化 细胞凋亡
支原体
概念：支原体是一类缺乏细胞壁、形态 上呈高度多形性、可通过滤菌器，并能 在无生命培养基中生长繁殖的最小的原 核细胞型微生物。
形态染色
无细胞壁，能通过滤菌器 高度多形性 革兰阴性，不易着色 常用吉姆萨染色，呈淡紫色
培养特性
细胞膜含胆固醇 营养要求高 二分裂繁殖为主 生长缓慢 “荷包蛋”样菌落
原代培养：如原代猴肾细胞等 次代培养： 二倍体细胞株：如人胚肺成纤维细胞传 代株W1-38 传代细胞系：多为肿瘤细胞或突变的二 倍体细胞，如Hela细胞、Hep-2细胞等
鸡胚接种
鸡胚接种的优点 鸡胚接种的缺点 鸡胚接种部位
卵黄囊接种 尿囊腔接种 绒毛尿囊膜接种
动物接种
病毒的鉴定－－初步鉴定
动物感染：根据病毒感染动物的表现初 步判断 鸡胚接种：根据接种部位不同，收获不 同材料，进行观察 细胞培养：细胞病变效应 红细胞吸附 干扰作用 物理化学实验
NK细胞
非特异性杀伤 不受MHC限制 通过依赖抗体的杀伤作用（ADCC） 不依赖抗体的杀伤作用（自然杀伤） 干扰素可调节NK细胞的杀伤作用
特异性免疫
体液免疫的保护作用 中和抗体：阻止病毒吸附 依赖抗体的细胞毒作用（ADCC）：杀 伤病毒寄生的细胞 细胞免疫的保护作用 TH1：释放细胞因子 效应Tc（CTL）：特异性杀伤病毒寄生 的细胞
体积微小：能通过滤菌器，需用电子显 微镜观察 非细胞结构：无细胞结构，由蛋白质和 核酸组成， 核酸类型单一：只含一种核酸 严格的细胞内寄生 以复制方式增殖 抵抗力特殊：耐冷不耐热，对抗生素不 敏感
病毒的基本性状和分类
病毒的形态、结构和化学组成
病毒的大小与形态
病毒体：指完整的、成熟的具有感染性的病 毒颗粒。 病毒的测量单位：纳米（nm） 病毒形态：球形、杆形、丝状、弹状、砖形 蝌蚪形等 研究病毒大小和形态的方法： 电子显微镜 超滤膜法 超速离心法
临床特征: 钩体血症：“眼红腿疼淋巴大；寒热酸 痛一身乏” 临床类型： 流感伤寒型 黄胆出血型 肺出血型 肾功衰竭型等
免疫性
病后对同型钩体有牢固免疫力 以体液免疫抗感染为主
微生物学检查
血清学诊断 检测特异性抗体
显微镜凝集溶解试验 酶联免疫吸附试验
防治原则
防鼠、灭鼠，加强对带菌家畜的管理 流行地区易感人群接种疫苗 治疗首选青霉素
梅毒螺旋体
是引起梅毒的病原体 梅毒属性传播疾病
生物学性状
形态染色:两端尖直、螺旋细密规则、运 动活泼 培养特性：不易人工培养 抗原性：
特异性抗原:刺激机体产生特异性凝集抗体 复合抗原：刺激机体产生梅毒反应素
抵抗力:极弱，对青霉素、四环素等敏感
致病性
致病物质：荚膜样物质、粘多糖酶 所致疾病－－梅毒 后天梅毒－－经性接触传染 临床分期 一期梅毒：外生殖器硬性下疳 二期梅毒：全身梅毒疹 三期梅毒：皮肤粘膜溃疡、侵犯内脏器官或组织 先天梅毒－－经胎盘传给胎儿 胎儿表现为流产、死胎 出生后表现为锯齿形牙、鞍形鼻等
+++ +++
_
变形杆菌
OX2
+ + _
OXK
_ _ +++
支原体与细菌L型的区别
主要性状
支原体
细菌L型
来源 返祖 遗传
自然界中独立存在
在任何情况下都不能变 成细菌 在遗传上与细菌无关
细菌细胞壁缺陷的变异 型
除去抗生素等诱因可回 复为细菌原有形态
在遗传上与原菌相关
培养 培养基中需加入胆固醇 一般不需要胆固醇
（分子量3.0×104 ） 与老年性痴呆、多发性硬化症、脑组织 海绵状淀粉样变（疯牛病）等有关
病毒的感染与免疫
病毒的感染方式
水平传播：
通过黏膜表面：呼吸道、消化道、泌尿生殖 道 通过皮肤传播：媒介昆虫叮咬皮肤 医源性传播：经输血、注射、拔牙、手术等 垂直传播： 经胎盘传播 经产道传播
病毒感染的类型
支原体与细菌的区别
性状
支原体
细菌L型
滤过性
有
有
细胞壁
无
无
油煎蛋状菌落 形成
形成
对青霉素
抵抗
抵抗
对胆固醇需要 生长需要
不一定需要
来源
自然界、人与动物 由细菌在环境条件下诱导形成
回复变成细菌 不能
能
遗传性
与细菌无关
与原细菌相同
立克次体共同特点
大小介于细菌和病毒之间，革兰染色阴 性，多呈球杆状 专性细胞内寄生 以节肢动物为传播媒介 多引起人畜共患病 对抗生素敏感
病毒的分离培养
三大培养技术 动物接种 鸡胚接种 细胞培养
细胞病变效应 （CPE）