丙型肝炎病毒CTL-Th表位嵌合DNA疫苗的构建

丙型肝炎病毒CTL-Th表位嵌合DNA疫苗的构建
李德周;段志良;郭江龙;王思娜;刘慧芳;王志斌;钟晓芝;陈永平;金生
【期刊名称】《温州医学院学报》
【年(卷),期】2015(45)2
【摘要】目的：构建丙型肝炎病毒（HCV）CTL-Th表位嵌合DNA疫苗并探讨其体内免疫学效应。

方法：基于我们前期从HCV中鉴定的4条HLA-A*0201限制
性CTL（细胞毒性T细胞）表位（NS4b78-86、NS5a367-375、C181-189和NS2172-180），2条HLA-A*1101限制性CTL表位（NS3609-617和
NS5b251-259），1条HLA-A*2402限制性CTL表位（NS5b382-390）和2条Th（辅助性T细胞）表位（P73-15和NS5A276-288），合成编码串联CTL表
位和Th表位的基因并克隆入真核表达质粒pcDNATM3.1/myc-His（-）A；阳性重组质粒分别免疫HLA-A*0201、HLA-A*1101和HLA-A*2402转基因小鼠，采用ELISPOT实验和CTL杀伤实验检测小鼠脾细胞内单个CTL表位特异性T细胞
的水平及其杀伤靶细胞的效应。

结果：合成了含有Kozak序列和编码Igκ信号链
序列、7条CTL表位、2条Th表位的基因序列并顺利克隆入了真核表达质粒。

阳性重组质粒免疫三种转基因小鼠后，采用ELISPOT实验检测到小鼠脾细胞内存在
单个CTL表位特异性分泌IFN-γ的CTL，后者可杀伤负载单个CTL表位的脾细胞。

结论：成功构建了可诱导CTL反应的HCV的CTL-Th表位嵌合DNA疫
苗。

%Objective: To construct hepatitis C virus (HCV) CTL-Th epitopes chimeric DNA vaccine and explore its in vivo immune response. Methods:Based on previously identified four HCV-specific HLA-A*0201-restricted CTL (Cytotoxic T Lymphocyte) epitopes (NS4b_78, NS5a_367,
C_181 and NS2_172), two HLA-A*1101-restricted CTL epitopes (NS3_609 and NS5b_251), one HLA-A*2402-restricted CTL epitopes (NS5b_382) and two Th epitopes (P73-15 and NS5A276-288), the gene encoding chimeric CTL epitopes and Th epit-opes was synthesized and cloned into eukaryotic expressing vector pcDNATM3.1/myc-His(-) A. The recombinant plasmid was used to immunize HLA-A*0201, HLA-A*1101 and HLA-A*2402 transgenic mice, ELISPOT and CTL cytotoxicity assay were used to measure the frequencies of CTL epitope-speciifc T cells in splenocytes of mice and the cytotoxic activity of CTL against target cells. Results:The gene containing Kozak sequence and en-coding Igκchain signal sequence, seven CTL epitopes, two Th epitopes was successfully cloned into eukaryotic expressing vector. Recombinant plasmid immunization elicited epitope-speciifc IFN-γ-secreting T cells which could lyse CTL epitope-pulsed splenocytes. Conclusion:A Hepatitis C virus CTL-Th epitopes chimeric DNA vaccine which can induce epitope-speciifc CTL response is successfully constructed.
【总页数】6页(P79-84)
【作者】李德周;段志良;郭江龙;王思娜;刘慧芳;王志斌;钟晓芝;陈永平;金生
【作者单位】宁波市第二医院肝病科，浙江宁波 315000;温州医科大学虫媒病毒研究所，浙江温州325035;温州医科大学虫媒病毒研究所，浙江温州325035;温州医科大学虫媒病毒研究所，浙江温州325035;温州医科大学虫媒病毒研究所，浙江温州325035;温州医科大学虫媒病毒研究所，浙江温州325035;温州医科大
学虫媒病毒研究所，浙江温州325035;温州医科大学附属第一医院感染科，浙江温州 325015;温州医科大学虫媒病毒研究所，浙江温州325035
【正文语种】中文
【中图分类】R373.2
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