集菌涂片一步法检测脑脊液抗酸杆菌实验诊断结核性脑膜炎

集菌涂片一步法检测脑脊液抗酸杆菌实验诊断结核性脑膜炎随着结核病发病率的提高，结核性脑膜炎（结脑）病例在临床也不断增多。

目前，结脑病例
呈常年发病、不典型表现病例增多、各年龄组均有分布等特点，其中以不典型的临床表现和
不典型的脑脊液（CSF）实验室检查结果增多为突出特点。

由于结脑的临床表现和CSF检测结果均呈不典型化变化，使临床诊断结脑的难度进一步增大。

结脑仍然是结核病中死亡率和致
死率最高的病种，而降低其死亡率和致死率唯一有效的方法就是及时确认和及时治疗。

临床
诊断结脑在很大程度上依靠实验室资料，但由于常规实验室方法诊断结脑的敏感性低（10-40%左右），难以满足诊断结脑的需要。

因此，进一步研究特异、灵敏、实用的实验诊断结脑的
方法，具有重要的临床实用意义。

研究提示，集菌涂片一步法（一步法）能够显著地提高抗
酸杆菌（AFB）的检出率。

1材料与方法
1．1对象:所检测的对象，均为临床确认的病例，共165例，年龄2-70岁，男86例，女79例。

其中，结脑患者115例（结脑组）；对照组50例，包括病毒性脑膜炎患者30例、非结
核性细菌性脑膜炎患者12例、新型隐球菌性脑膜炎8例。

所有对象经过临床诊断、实验室
诊断、影像学诊断、临床治疗评价等而最终确诊。

1.2方法:采集CSF为检测标本。

对第一份CSF标本，平行进行培养结核杆菌、常规法检测AFB、一步法检测AFB，比较各种方法的特异性和阳性率。

1.2.1培养结核杆菌:应用改良罗氏法，按《结核病诊断细菌学检验规程》有关操作规程进行。

试剂自制。

1.2.2常规法检测AFB:应用CSF沉渣涂片、萋-纳氏抗酸染色法检测AFB，试剂自制，按《结
核病诊断细菌学检验规程》有关操作规程进行。

1.2.3一步法检测AFB:此法检测CSB标本AFB实验分为3个步骤：首先，进行“玻片直接离心
集菌涂片”步骤：取CSF1-5ml（根据CSF细胞数，摸索CSF用量，一般使用3ml可以满足检测需要），于CSF细胞离心涂片器（本实验应用第四军医大学生产的FMU-5型仪器）中用
500rpm条件将液体全部离心甩干，进行CSF的离心集菌涂片。

此时可将CSF内的全部有形成分集聚在载玻片上直径约为0. 8cm的范围内。

如此操作可以将常规方法的“离心集菌”和“手工涂片”两个操作步骤用一个步骤完成。

其次，进行抗酸染色（同常规法）。

第三，检查AFB：
在显微镜的油镜下检测全部样本区。

1．3统计学方法:应用卡方检验进行统计学分析，以P＜0.05为具有统计学意义界限。

2结果
CSF标本各指标检测结果，见表1。

检测结果显示：培养法仅有5份CSF有结核杆菌生长，常规法仅有16份CSF检测到AFB阳
性结果；而这些阳性标本，应用离心涂片一步法均得到AFB阳性结果。

对照组无阳性发现，
特异性均为100%。

统计学结果显示：离心涂片一步法的阳性率明显高于培养结核杆菌和常规法检测AFB，差别均具有统计学意义（配对卡方检验，x2=67.01-56.02，P＜0.001）。

表1CSF标本各指标检测阳性结果n（%）
.
3讨论
CSF能够直接反映中枢神经系统病理变化，是实验诊断结脑的理想标本。

如果在CSF中检测
出结核杆菌及其特异性标志物、某些与结脑密切相关的标志物或指标等，则能够为临床诊断
结脑提供诊断依据。

其中，结核杆菌、AFB等被认为是实验诊断结脑的较好指标，也是临床
常用的指标。

一般认为，实验诊断结脑“金指标”是于CSF中培养出结核杆菌或检测出AFB，
因此CSF标本培养结核杆菌和检测AFB是实验诊断结脑的常规方法。

但因方法学的缺陷，常
规检测CSF中AFB方法的敏感很低，一般只能达到14-40%左右的阳性率；培养结核杆菌也存
在周期长（3-5周）、阳性率低（10%）左右等问题。

本实验，培养结核杆菌的阳性率为
4.3%，常规检测AFB的阳性率为13.9%。

这样的阳性率显然不能满足诊断结脑的需要。

尽管
有很多诊断结脑的方法不断问世，但因存在着某些问题或缺陷而引起不同程度的质疑，多不
如AFB直接、客观和被公认。

检测CSF标本AFB，是实验诊断结脑特异性指标和常规指标之一，但常规方法的敏感性较低，不能满足实际需要。

实验显示，应用集菌涂片一步法检测CSF标本AFB特异性为100%、敏
感性为64.3%，特异性与常规方法一致，仅需添置一台脑脊液细胞离心涂片器便可开展此方法。

与常规方法比较，一步法的优点有：能够大幅度提高AFB的检出率，可由常规方法的13.9%提高至64.3%；简化操作步骤，交常规方法的“离心集菌”和“手工涂片”两个操作过程用
一个步骤完成：能有效地解决常规方法中CSF沉渣膜易剥脱的问题，应用离心涂片一步法几
乎无CSF沉渣膜剥脱现象；极大限度地缩小了待检测区域，将常规方法的“大待检区”（占玻
片的（3/4-4/5）缩小到约直径0.8cm范围，从而方便检测。

研究提示，集菌涂片一步法在检
测CSF标本AFB和实验诊断结脑方面，具有高度特异性和较高敏感性，应用价值较高，可以
作为替代常规法开展应用。

参考文献
[1]刘引，王子才.结核性脑膜炎的诊断和治疗进展[J].临床儿科杂志，1997，17（4）：237-
248
[2]中国防痨协会基础专业委员会审编.《结核病诊断细菌学检验规程》.北京：中国防协会，1995，3-9。