组织匀浆步骤
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组织匀浆步骤
组织匀浆的步骤如下:
1.取组织块(0.1g~0.2g)在冰冷的生理盐水中漂洗,除去血
液,滤纸拭干,准确称重,放入5ml的匀浆管中。
2.按重量(g):体积(ml)=1:9的比例加入9倍体积的匀浆介质
(一般为pH 7.4, 0.01mol/L Tris-HCl, 1mmol/L EDTA-2Na,
0.01mol/L蔗糖, 0.8%的氯化钠溶液)或者0.86%的生理盐水
于匀浆管中,冰水浴条件下,用眼科小剪尽快剪碎组织块。
3.选择合适的匀浆方式。
手工匀浆是将剪碎的组织倒入玻璃匀浆
管中,用剩余的1/3匀浆介质或生理盐水冲洗残留在烧杯中的碎组织块,一起倒入匀浆管中进行匀浆。
机器匀浆可以使用组织捣碎机或内切式组织匀浆机。
超声粉碎则是用超声波细胞破碎仪进行破碎。
镜检观察取少量组织匀浆作涂片,显微镜下观察细胞是否破碎,若没有则可延长匀浆时间。
4.将制备好的匀浆液用普通离心机或低温低速离心机离心,取上
清液进行测定。
以上步骤仅供参考,具体的实验步骤可能会因实验需求和实验条件的不同而有所调整。
在实验过程中,需要注意保持低温和避免反复
冻融,以保持组织的活性和完整性。
同时,也需要注意实验安全,避免使用过于暴力或不安全的操作方法。