铁皮石斛愈伤组织稳定培养体系的建立

天津农$科学Tianjin Agricultural Sciences
2018,24#8):67-69,90•作物栽培与设施园艺
铁皮石斛愈伤组织稳定培养体系的建立
许丁帆，李建科，刘艳军，罗锐，白燕娇，曹凌峰，丁鹏玮，黄俊轩
(天津农学院园艺园林学院，天津300384)
摘要：为了建立稳定的铁皮石斛愈伤组织培养体系，试验开展了铁皮石斛愈伤组织最佳外植体类型、诱导培养基配方以及继代培养基配方研究。

，铁皮石斛茎段为外植体，愈伤组织诱导最步诱导出的愈伤组织在MS+2mg*L-1KT+2mg*L-12,4-D+0.2mg*L-1：AA的培养基上能够诱导生长速度快、质地硬、结构松散的理想愈伤组织;经过筛选的愈伤组织在MS+0.5mg • H T+lm g • L-'.-D的培养基上继代培养，愈伤组织以。

关键词:铁皮石斛;培养基;愈伤组织I
中图分类号：S682.31 文献标识码：A DOI 编码！ 10.3969/j.issn.l006 — 6500.2018.08.016 Establishment of Stable Culture System of Dendrobium candidum Callus
XU Dingfan,LI Jianke,LIU Yanjun,LUO Rui,BAI Yanjiao,CAO Lingfeng,DING Pengwei,HUANG Junxuan (College of Horticulture and Landscape Architecture, Tianjin Agricultural University, Tianjin 300384, China)
Abstract: In order to establish a stable callus culture system of D. candidum, the optimal explant type, callus induction medium for­mula, and subculture medium formula were studied and screened. The results showed that using the stems of D. candidum as explants had the best callus induction effect; the medium MS+2 mg*L-1 KT+2 mg*L-1 2.4-D+0.2 mg*L-1 NAA could induce the ideal callus with fast growth rate, hard texture and loose structure; the subculture medium MS+0.5 mg*L-1 KT+1 mg*L-1 2,4-D could remain the inducted ideal callus above for a long time.
Key words：Dendrobium candidum; medium; callus; hormone
生产的大，，
的和，导 生产受了，人 分的
，的研究 在 分的
和生产上，的[1-3]。

植物愈伤组织 生 物的生，在
植物上 。

，植物组织培养体生 植物的 分 [4-7]。

愈伤组织 生物 的研究 为
植物体生产的主，主要 -，愈伤组织生速，在 的，从
的分 ，愈伤组织 诱导，且 体外控，以在体条件下改培养基分，生出的分 三，愈伤组织的培养本较低；第四，以愈伤组织 '
体诱变，育 高的 株系。

目前，愈伤组 织在生物生 广泛应，在未生物 领域将发挥要作。

本研究 诱导铁皮石斛外植体产生生稳定、组织形 的愈伤组织，目的 类愈伤组织 定的科学研究或 愈伤组织培养生 物分，为生物 的发展奠定基础。

1材料和方法
1.1'验材料
研究所铁皮石斛组培苗由天津农学院园林 植物实验室供。

1.2 '验方法
1.2.1铁皮石斛愈伤组织诱导最佳外植体的筛选
收稿日期：2017-10-30
基金项目：天津农学院大创项目（201710061161)
作者简介：许丁帆（1997—），男，浙江临海人，在读本科生，主要从事园林植物研究。

通讯作者简介-刘艳军（1970-)，男，天津蓟县人，高级实验师，硕士，主要从事园艺植物组织培养和分子育种研究。

• 68 •天津表$科学第24卷
本试验采用铁皮石斛组培苗的不同组织部位作为 外植体，进行愈伤组织的诱导，筛选出愈伤组织诱 导效果最好的外植体类型。

剪取铁皮石斛组培苗，在超净台中将叶片、茎 段和根剪下，造成两端都有伤口的外植体，其中叶 片剪掉叶尖，茎段不带 ，根剪掉根尖。

将剪好 的外植体接种 的MS+2 mg.L-12,4-D+30g-L-#培 诱导愈伤组织。

将接种
好的 组培室中进行培。

培养条件:温
度25!，24h连光照，光 度1000 lx。

接种 外植体伤口部位的 和外植体的生 ，60: 愈伤组织诱导 。

1.2.2不同激素对铁皮石斛愈伤组织诱导的影 响根 1.2.1试验结果 ，茎段诱导的愈伤组织最，为进一 结松散、质地较硬的愈伤组织类型，本试验采用有不同素的培进行愈伤组织 诱导，筛选出愈伤组织和生速度最好的培。

取铁皮石斛组培苗茎段诱导的愈伤组织，
将其 成 2"3 mm的，接种 ：好的愈伤组织诱导培 。

培 为MS 本培 ，不同度的BA、KT、NAA和 2,4-D。

培养条件 1.2.1同。

1.2.3不同激素对铁皮石斛愈伤组织稳定生长 的影响为 1.2.2试验中 的结松散、质地较硬、生快速的愈伤组织有和生，本试验选用不同培 ，愈伤 组织进行 培 ，筛选出 铁皮石斛愈伤组 织 生 的培 。

选取1.2.2中诱导的铁皮石斛理想的愈伤组织类型，在超净台中 成 为3"5mm
径的 ，接种 好的有不同度KT、2,4-D和NAA的培 ，培
和培条件同。

2~3 培，中选 的愈伤组织进行 ，
表2
为30:，统计每种培养基愈伤组织的生。

2结果与分析
2.1 不同铗皮-斛外植体诱导念5组7的9选
1，采用叶片作为外植体进行愈伤组织诱导，其诱导为0，铁皮石斛叶片 不诱导愈伤组织，叶片组织中有生组织 有 采用茎段和 诱导 愈伤 组织，2种外植体有一的生组织，愈伤组织诱导，愈伤组织诱导 ，茎 段 ，茎段中有的生组织愈伤组织 和生速度，茎段伤口诱导的愈伤组织生较快，为的，而
诱导出的愈伤组织则生缓慢，为白。

由此 见，茎段作为铁皮石斛愈伤组织初诱导的外 植体较为适合。

表1铁皮石斛不同外植体诱导愈伤组织的效果
不同
外植体
接种外植
体数
愈伤组织
诱导率/%
愈伤组织
颜色
愈伤组织
生速度叶片500
茎段5086淡绿色较快
根5044白较慢2.2 不同激素对铗皮-斛念5组7诱导的？响
2 ，不同 素组合的培
铁皮石斛愈伤组织生的影响较，不仅影响 其生速度，还愈伤组织质地和结构产生较影响。

具体 ，2$%.&-12,4-,组合时，同浓度的KT较BA 够 生速度快、质地硬 且结构松散的愈伤组织，BA 比，KT :合作铁皮石斛愈伤组织诱导用裂素，生 速度并不 在KT和2+4-D的础上，加人0.2mg*L-1生素NAA，即可使愈伤组织生速度加快，其中当KT为2 mg，L-1，同生
不同培养基对铁皮石斛愈伤组织诱导的影响
激素组合接种外植体数愈伤组织生长速度愈伤组织质地愈伤组织结构1mg*L-1KT *2 mg*L-1 2,4-D50较快较硬松散
2 mg*L-1KT*2 mg*L-1 2,4-D50一般硬松散
1mg*L-1BA *2 mg*L-1 2,4-D50慢软较松散2 mg*L-1BA *2 mg*L-1 2,4-D50慢较硬较松散1mg* L-1KT*2 mg*L-1 2,4-D*0.2 mg* L-1NAA50快软松散
2 mg* L-1KT*2 mg*L-1 2,4-D*0.2 mg* L-1NAA50快硬松散
第！期许丁7等：&皮（斛愈+组—穗走培<=>的建立• 69 •
长速度快且质地和结构理想的愈伤组织。

由此可 见，铁皮石斛理想愈伤组织的诱导培养基为d MS+ 2 mg"L_1KT+2 mg•L_12,4-D+0.2 mg•L_1NAA。

2.3 不同激素对铗皮（斛愈+组-穩走生长的彩响
从表3可以看出，采用不同培养基获得的铁 皮石斛愈伤组织的生长情况存在较大的差异，在 KT+2,4-D激素组合基础上，添加生长素NAA可 使愈伤组织生长速度加快，但其质地和结构均不 理想，说明铁皮石斛愈伤组织稳定培养基中不宜 继续添加NAA;在相同浓度的KT(1.0 mg*L-1)基 础上，2 m g•L-1 2,4-D 较 1m g•L-1 2,4-D 条件愈伤组织的生长速度快，但其结构较松散，说明增加2,4-D的浓度会提高愈伤组织生长速度但降其 松散度，为获得质地和结构理想的铁皮石斛愈 伤组织，2,4-D的浓度以1mg七1为宜，但其生长速 度较；定 2,4-D的浓度（1mg.L-1)，0.5mg.L-1KT 较1.0 mg•L-1K T条件愈伤组织生长速度快，说 明降K T的使用浓度可以 愈伤组织生长速度下降 由可见，采用MS+0.5 mg-L-1KT + 1mg‘L-12,4-D的培养基 继培养可以铁皮石斛愈伤组织型不变，虽然生长速度较诱导 时有所下降，但可以通过 继代时间加以 _。

表3不同培养基对铁皮石斛愈伤组织稳定生长的影响
激素组合接种外植体数愈伤组织生长速度愈伤组织质地愈伤组织结构1.0 mg.L-1 KT+1 &[g*L-1 2,4-D+0.2 mg*L-1 NAA150快较较松散1.0 mg*L-1 KT+2.0mg*L-1 2,4-D+0.2 mg*L-1 NAA150快软紧密
0.5 mg*L-1 KT+1 &!g-L-1 2,4-D150较快硬松散
1.0 mg.L-1 KT+1 &丨g.L-12,4-D150慢硬松散1.0 mg.L-1 KT+2 mg.L-1 2,4-D150较快硬较松散
3结论与讨论
愈伤组织结构、质地和生长速度可以 ，不同型，其质地 组愈伤组织的在培养 期时的 由
过 的愈伤组织 结构 ，愈伤组织在生长期有愈伤组织的表
生长 ，组织 ，
结构，有 的；由散的
的愈伤组织会结构松散，，
愈伤组织 均由相同 组成，^
用 和用中[8-12]。

愈伤组织的 由组 的型定，不同 的诱导不同型的愈伤组织，用愈伤组织的诱导 生 的生产的愈伤组织 结构松散、质地较且生
长速度较快 ，愈伤组织 由较 质浓度较大 不
的组；13<，铁皮石斛结构松散、质地较且生长速度较快的愈伤组织型作为理想的愈伤组织。

过 铁皮石斛愈伤组织诱导过程中的因素 ，获了一套诱导松散型、质
地且生长速度快的铁皮石斛愈伤组织型的诱
导方法：采用茎段为 ，其 M S+
2 mg.L-12,4-D+30 g.L-1(糖培养基上，愈
伤组织的初步诱导；诱导出的愈伤组织转
MS+2 mg*L-1KT+0.2 mg*L-1NAA+2 mg*L-12,4-D 的培养基上 诱导，诱导出结构松散、质地且
生长速度较快的愈伤组织类型；愈伤组织MS+0.5 m g L-1KT +1 m g L-1 2,4-D 的培 养基上 继培养，愈伤组织可以长时
理想状态。

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(下转第90页）
• 90 •天津科学第24卷
图4男女大学生就职单位选择对比图3.2 5升7$知9与1场3求；<皮，提升大学
生的1场认可皮
随着我国等教育吸纳能力的提学生
5天之骄子”的时代早已去学生 普 通的职者进人业学历的优势日渐减[8]。

新疆校在设置农科业课程时，应着加强业与 的紧密程度，传授前沿农业 ，，序开展关职业技能培训实践，提升农科 业生的 度。

其他
自己创业
私营企业涊少数赚汉族■总体外企或合资企业
大型国企
靴学校等事、Ik单位
政府机关
0.00 5.00 10.00 15.0020.00 25.00 30.00 35.00 40.00 45.00 50.00
比例/%
图5 汉族和少数民族毕业生职业选择对比
业生 业时的
业生 型国企的占18.18%，比：民
业生 13.18%，
3对策建议
3.1 转史就$观—，/01场3求
在 的农科 业生
与 应的就业业念学专业 的工
性的 业[6]。

学生
的[7]发达
业念中小
些中小业，还 在基层工寻找的发展空间，实现个人价3.3 落卖、健全大学生+$各项优惠政策
目前我国关促进大学生业的政策：“大学 生志愿服务部计划”、“三支一扶”、学生村官”fe 调生”、岗教师”等措施，但愿意到基层去的学生 比例仍较低。

各级政府 把政策落到实 '通过基层工的优树吸学生去基层工进 学生的 业意
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