固相萃取-高效液相色谱法测定植物油中的TBHQ含量

固相萃取-高效液相色谱法测定植物油中的TBHQ含量
熊巍林;包李林;邹燕娣;金瑚;李敏利;张谦益;万聪
【摘要】建立了植物油中TBHQ的中性氧化铝固相萃取-高效液相色谱分析法.分别用TBHQ标准溶液10、25μg/mL和50 μg/mL进行加标回收率和精密度试验.结果表明:加标回收率在100.0％～103.0％之间,RSD为2.0％～6.0％,说明该方法具有良好的可靠性和重现性.研究表明,该方法操作简便,油脂净化完全,结果准确可靠.%A neutral alumina solid phase extraction-high performance liquid chromatography method was established for the analysis of TBHQ in vegetable oil.The standard recovery experiment and precision experiment were conducted using 10,25 μg/mL and 50 μg/mL TBHQ standard solutions.The results showed that the recovery rate of standard and RSD were 100.0％-103.0％ and 2.0％-6.0％,respectively,which showed that the method had good reliability and repeatability.The study indicated that the method had the items of simpleness,complete oil purification,and accurate and reliable result.
【期刊名称】《中国油脂》
【年(卷),期】2017(042)010
【总页数】3页(P143-145)
【关键词】植物油;TBHQ;中性氧化铝;HPLC
【作者】熊巍林;包李林;邹燕娣;金瑚;李敏利;张谦益;万聪
【作者单位】道道全粮油股份有限公司国家油菜籽加工技术研发分中心,湖南岳阳414000;道道全粮油股份有限公司国家油菜籽加工技术研发分中心,湖南岳阳414000;道道全粮油股份有限公司国家油菜籽加工技术研发分中心,湖南岳阳414000;道道全粮油股份有限公司国家油菜籽加工技术研发分中心,湖南岳阳414000;道道全粮油股份有限公司国家油菜籽加工技术研发分中心,湖南岳阳414000;道道全粮油股份有限公司国家油菜籽加工技术研发分中心,湖南岳阳414000;道道全粮油股份有限公司国家油菜籽加工技术研发分中心,湖南岳阳414000
【正文语种】中文
【中图分类】TS227;O657.7+2
油脂的氧化和酸败直接影响油脂的质量，尤其是含不饱和脂肪酸较多的植物油更容易发生氧化变质，危害人体健康[1-5]。

为了防止油脂氧化变质，一般会向其加入
抗氧化剂。

目前常用的抗氧化剂主要有丁基羟基茴香醚(BHA)、二丁基羟基甲苯(BHT)、特丁基对苯二酚(TBHQ)、没食子酸(PG)等，其中TBHQ的抗氧化性能是BHA、BHT、PG的2～5 倍，且因其热稳定性好、低毒、具有抑制细菌和霉菌作用、遇金属离子不着色等诸多优点而被广泛应用在食用植物油中[6-7]。

但是摄入
过多TBHQ会危害人体健康。

我国《食品添加剂使用卫生标准》(GB 2760—2007)规定TBHQ使用最大量为200 mg/kg[8]，因而植物油中的TBHQ含量成
为了食品安全检测的重要指标之一。

目前高效液相色谱因灵敏度高、重现性好、结果准确可靠等优点成为测定TBHQ含量的首选方法[9-15]。

高效液相色谱的前处理主要采用溶剂萃取法，但是溶剂会将油脂带入萃取的样品中，污染色谱柱，缩短色谱柱的使用寿命，甚至会污染仪器的流路系统。

本文采用中性氧化铝固相萃取法，将油脂净化完全，再通过高效液相色谱测定植物油中的
TBHQ含量，旨在建立一种更为科学和准确地测定植物油中TBHQ含量的方法。

1.1 试验材料
1.1.1 原料与试剂
中性氧化铝(100～200目)；TBHQ标准品(纯度≥99%)；甲醇，色谱纯；无水硫酸钠、乙酸、正己烷，分析纯；超纯水；一级葵花籽油(TBHQ含量120 mg/kg)；
不含TBHQ的四级菜籽油。

1.1.2 仪器与设备
安捷伦1260型高效液相色谱仪(配紫外检测器)；RE-201型旋转蒸发仪；HGC-
12A型氮吹仪；玻璃层析柱(d=1.2 cm，l=47 cm，带砂芯配旋塞)。

1.2 试验方法
1.2.1 HPLC分析条件
Nova-pakC18柱(3.9 mm×150 mm，5 μm)；流动相甲醇-水(体积比98∶2)；
流速0.8 mL/min；柱温30℃；紫外检测波长280 nm；进样量10 μL。

1.2.2 标准曲线绘制和仪器检出限
称取100 mg TBHQ标准品，用甲醇溶解并定容至100 mL，配制1 mg/mL标样储备液。

取一定量的标样储备液用甲醇分别稀释配制10、50、100、150、200、250 μg/mL标准使用液，进行高效液相色谱分析。

以标准使用液的质量浓度(C)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标绘制标准曲线。

其线性关系为Y=20.214 5C+13.96，R2=0.997 9。

以仪器的S/N=3计算，测得仪器最低检出限为1 mg/kg。

1.2.3 样品的处理
V级氧化铝的制备：90 g中性氧化铝置于马弗炉中450℃煅烧12 h，冷却至室温，加入15 mL超纯水，充分摇匀，黑暗处放置12 h以上备用。

样品处理：向层析柱中装入适量的正己烷，快速装入1.0 g V级氧化铝，加入适量无水硫酸钠，装填过程中避免产生气泡。

当正己烷流出至无水硫酸钠顶端1 mm
处时，关闭旋塞。

称取0.5 g(精确至0.000 1 g)的油样，上样，用两次共20 mL 正己烷清洗烧杯使转移彻底，加入20～30 mL甲醇将油脂完全洗脱下来，再加入10 mL甲醇-冰醋酸-水混合液(体积比5∶3∶2)，流速10滴/10 s，开始收集洗脱液，旋蒸浓缩至剩余0.5～1.0 mL，弱氮气流吹干，加甲醇定容至3 mL，过0.45 μm有机滤膜，待HPLC测定。

2.1 样品前处理
试验表明：氧化铝的用量和级别直接影响目标物的吸附和洗脱。

当采用吸附性能最弱的V级氧化铝1 g作为吸附剂时，甲醇淋洗油脂更容易更完全；使用甲醇-冰醋酸-水混合液洗脱目标物时，当固定混合液10 mL，冰醋酸3 mL时，加水量直接影响目标物能否洗脱下来。

试验证明，当加入大于等于2 mL水时，目标物能被完全洗脱出来，但加水量较大，不但影响滴速，更多杂质也被洗脱下来。

因此，加入2 mL水为宜。

2.2 样品分离(见图1)
从图1可以看出，样品中的TBHQ与杂质能较好地分开，杂质峰不干扰测定。

TBHQ的保留时间为8.054 min。

将同一样品在同一天内重复测定6次并取平均值计算仪器的精密度，测得变异系数为3.2%，说明仪器精密度良好。

2.3 方法的回收率和精密度
以不含TBHQ的四级菜籽油为本底，分别加入低(10 μg/mL)、中(25 μg/mL)、高(50 μg/mL)3个水平的TBHQ标准溶液各1.0 mL，每个加标样水平进行3次平行测定，计算3个水平的回收率和RSD。

结果见表1。

由表1可知，方法的回收率在100.0%～103.0%之间，RSD为2.0%～6.0%，说明该方法具有良好的可靠性和重现性。

采用固相萃取-高效液相色谱法测定植物油中TBHQ含量，方法的回收率在100.0%～103.0%之间，RSD为2.0%～6.0%。

该方法操作简便，灵敏度高，耗
时短，准确度和重现性好，对油脂净化完全，避免了油脂污染仪器系统，是测定植物油中TBHQ含量的有效方法，适用于实验室的日常检测。

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