【CN110272948A】ATP荧光lgCSubASublgISubASub标曲法评价一次性卫生用

(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910199718.0
(22)申请日 2019.03.15
(71)申请人 李文杰
地址 063000 河北省唐山市路北区祥云西
里17楼3门202号
(72)发明人 李文杰　靳慧达　娄巧哲　连素梅　
崔宗岩　
(51)Int.Cl.
C12Q 1/18(2006.01)
C12Q 1/06(2006.01)
C12N 1/16(2006.01)
C12N 1/14(2006.01)
C12R 1/725(2006.01)
C12R 1/685(2006.01)
C12R 1/82(2006.01)
C12R 1/645(2006.01)
(54)发明名称
ATP荧光lgC A -lgI A 标曲法评价一次性卫生
用品真菌杀灭效果的方法
(57)摘要
本发明涉及一种一次性卫生用品真菌杀灭
效果评价方法，检测步骤包括：样品提取等要求；
设备选型及试剂、培养基配制；菌种保藏、活化及
菌悬液制备；美蓝染色后菌悬液活菌含量C B 血球
板计数；ATP浓度对数值lgC A -相对荧光强度对数
值lgI A 标曲建立及接种菌液活菌C A 标定；中和剂
鉴定及杀菌试验；回收液I A 测定及C A 推算；杀菌
率R和灭菌指数A计算；结果评价；其特别之处在
于：应用ATP荧光光度计对以R或A表征的卫生用
品真菌杀灭效果进行精准定量评价。

本发明规定
洗脱回收染菌不同时间后的对照样品和试验样
品，测定回收液I A 并以lgI A 表征和计算R或A；提
供结果评价依据。

本发明研发的一次性卫生用品
真菌杀灭效果评价的ATP生物荧光lgC A -lgI A 标
曲法，
可完善相关评价方法体系。

权利要求书10页 说明书24页CN 110272948 A 2019.09.24
C N 110272948
A
1.一种一次性卫生用品真菌杀灭效果的评价方法，包括：(1)样品提取等要求；(2)设备选型及试剂、培养基配制；(3)菌种保藏、活化及菌悬液制备；(4)美蓝染色后菌悬液活菌含量C B的血球板计数；(5)ATP浓度对数值lgC A-相对荧光强度对数值lgI A标准曲线建立及接种菌液的活菌ATP浓度C A标定；(6)中和剂鉴定及杀菌试验；(7)回收液相对荧光强度值I A测定；
(8)回收液的活菌ATP浓度C A和T A推算以及杀菌率R和灭菌指数A计算；(9)结果评价；其特征在于，应用ATP荧光光度计对以杀菌率R或灭菌指数A表征的一次性卫生用品真菌杀灭效果进行精准定量评价的ATP生物荧光lgC A-lgI A标准曲线法，具体的：
在回收液相对荧光强度值I A测定中：
明确对照样品和试验样品的提取、数量、尺寸等要求，将真菌试验菌种的标准菌株进行传代、活化后，取新鲜白色念珠菌或霉菌孢子培养物制备菌悬液；经美蓝染色后用血球计数板测定菌液中活菌含量C B，并对不同稀释度的菌悬液进行C B标定，然后，用ATP荧光试剂缓冲溶液将1.0×10-3mol/L的ATP标准原液稀释为高、低浓度标准系列溶液：7.0×10-8mol/L、7.0×10-7mol/L、7.0×10-6mol/L和1.4×10-9mol/L、1.4×10-8mol/L、1.4×10-7mol/L，测定其相对荧光强度值I A；绘制两条相应浓度的lgC A-lgI A标准曲线，推导得出曲线方程式Y＝a A0X+b A0(高浓度)、Y＝a A X+b A(低浓度)和线性相关系数R A02(高浓度)、R A2(低浓度)，同时，用察氏培养液对活菌含量C B为5.0×108CFU/mL～9.0×108CFU/mL的试验菌种悬浮液进行连续10倍梯度稀释，测定稀释菌液的相对荧光强度值I A，根据高浓度标准曲线方程式Y＝a A0X+b A0推算其相应的活菌ATP浓度C A；经调整得到C A为5.0×10-7mol/L～9.0×10-7mol/L的接种菌液，在中和剂鉴定结果合格的条件下，向每件对照样品和试验样品的2块样片表面分别滴加0.1mL菌液并涂布均匀；待杀菌作用持续2、5、10、20min后，用4.7mL中和剂溶液对其进行洗
脱回收，
应用ATP荧光光度计测定回收液的相对荧光强度值
和
根据低浓度标准曲线方程式Y＝a A X+b A推算相应的活菌ATP浓度C Aij和T Aij；
在杀菌率R或灭菌指数A计算中：
根据ATP低浓度标准曲线lgC A-lgI A的线性方程式Y＝a A X+b A，以不同染/灭菌时间条件下
每件对照样品和试验样品回收液的相对荧光强度测定值
和
作为基础数据；计算其在一个完整灭菌周期内的杀菌率R ij 和灭菌指数A ij；对每组样品的R ij和A ij取算术平均值得到相应的R i和A i；每批一次性卫生样品的杀菌率R和灭菌指数A为其三组样品R i、A i的算术平均值；并明确相关数据修约和测量不确定度要求；
在结果评价中：
参考卫生行业通用做法和相关抗菌产品标准要求，确定真菌杀灭效果分级判定标准；当某组(件)一次性卫生样品的杀菌率R i(R ij)或灭菌指数A i(A ij)与其他两组(件)样品的真菌杀灭效果相比至少相差一个水平级时，重新提取一组(件)样品重复实验；计算其经ATP生物荧光lgC A─lgI A标准曲线法测得的杀菌率或灭菌指数，如果前后两组(件)一次性卫生样品的真菌杀灭效果水平相同，则弃之；取另外两组(件)剩余样品杀菌率R i(R ij)或灭菌指数A i(A ij)的算术平均值作为试验批次一次性卫生样品真菌杀灭效果的评价结果。

权　利　要　求　书1/10页
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CN 110272948 A。