中国疫苗株鸡痘病毒插入载体的构建与MDV糖蛋白B的表达

中国疫苗株鸡痘病毒插入载体的构建与MDV糖蛋白B的表
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王志亮;彭大新;张如宽;焦新安;崔虹;侯云德;刘秀梵
【期刊名称】《病毒学报》
【年(卷),期】1996(12)1
【摘要】在对中国鸡痘病毒疫苗株２８２Ｅ４基因组ＤＮＡ进行克隆与亚克隆的基础上，进一步插入Ｐｌｌ一ＬａｃＺ标记基因，根据蓝斑选择原理筛选出３个为病毒在细胞培养物上生长所不必需的片段。

为了便于外源基因的插入，特将Ｐ７．５一Ｐｌｌ一ＬａｃＺ基因框转移至ＢＬＵＥＳＣＲＩＰＴＳＫＭ１３一的ＢｄｍＨＩ位点，在Ｐ７．５下导人多克隆位点（ＭＣＳ），建立了载体插入标记ｐＳＧＭ１１７５。

以ＳｓｔＩＩ和ＡｐａＩ将ＭＣＳ一Ｐ７．５一Ｐｌｌ一ＬａｃＺ框切下，置入一个亚充隆的非必需片段中，构建成中国鸡痘病毒插入载体ｐＦＧ１１７５一１。

以ＰｓｔＩ和ＳｍａＩ酶切ｐＶＬｇＢ分离ＭＤＶｇＢ基因的开放阅读框，并将其插入ｐＦＧ１１７５中Ｐ７．５的下游，得到携带ｇＢ基因的质粒ｐＦＧＢ１１７５一１。

将此质粒以脂质体转染２８２Ｅ４株感染３一４小时的鸡胚成纤维细胞，同样采用蓝斑筛选技术得到重组的蓝斑病毒。

以ＭＤＶｇＢ单克隆抗体进行间接免疫荧光，证实了感染细胞中ｇＢ抗原的存在，从而成功地建立了可表达ＭＤＶｇＢ糖蛋白的以中国疫苗株为基础的重组鸡痘病毒。

【总页数】7页(P48-54)
【关键词】重组鸡痘病毒;马立克氏病病毒;糖蛋白B
【作者】王志亮;彭大新;张如宽;焦新安;崔虹;侯云德;刘秀梵
【作者单位】扬州大学农学院动物医学系,中国预防医学科学院病毒学研究所国家病毒基因工程实验室
【正文语种】中文
【中图分类】S852.65
【相关文献】
1.共表达MDV糖蛋白B和鸡γ干扰素基因的重组鸡痘病毒的构建 [J], 彭大新;刘秀梵;程坚;周春红;陈素娟
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4.表达马立克氏病病毒CVI988／Rispens株糖蛋白B基因的重组鸡痘病毒疫苗的免疫保护研究 [J], 彭大新;刘秀梵;吴长新;吴艳涛;文其乙;高崧;张如宽;吴晓丰;邢力;朱爱华;詹爱军
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