五味子治疗大鼠糖尿病肾病作用机制的血清代谢组学研究_皮子凤
五味子药理作用研究概况
五味子药理作用研究概况摘要：五味子为木兰科植物五味子的果实。
为中医临床常用润肺、滋肾、止汗、止泻、涩精药，主治咳喘、自汗、盗汗、遗精、久泻、神精衰弱等证。
近几年来对五味子药理研究报导较多，其主要具有镇咳祛痰、调整血压、调节胃液分泌及促进胆汁分泌、兴奋中枢神经系统、兴奋脊髓、提高大脑皮层的调节作用。
近几年临床上主要用于治疗肝炎和神经衰弱等症。
对其药理研究概况简述如下。
1．对中枢神经系统的作用1．1对睡眠时间的影响五味子仁乙醇提取液对戊巴比妥钠睡眠时间和阈下剂量有催眠作用。
药物作用与用药剂量有关，实验用每只鼠给予五味子仁乙醇提取液5g／kg，在小鼠口服3O分钟后，腹腔注射戊巴比妥钠50mg／kg。
以翻正反射消失至恢复的时间为指标，用t值测定给药且和对照组睡眠时间相比呈显著性差异。
结果表明，五味子仁乙醇提取液5mg／kg组的睡眠时间约为对照组的3倍。
1．2对行为活动的作用五味子乙醇提取液对小鼠行为活动的影响：用光电装置记录小鼠自主活动。
活动箱放置在22~24"C恒温箱中，每次放5只动物，动物放入后立即测定1O分钟内该组动物遮断光线的次数，以此作为活动数。
结果表明：小鼠服五味子乙醇提取液，可使自主活动明显减少，可明显增强中枢安定药氯丙嗪及利血平对自主活动的抑制作用，并对抗中枢兴奋药苯丙胺对自主活动的兴奋作用[1]。
1．3抗惊厥作用五味子乙醇提取液有抗电休克和中枢兴奋药引起惊厥的作用。
但其对中枢系统的作用，更多的表现为中枢抑制作用[现代本草纲目]。
对五味子醇甲对中枢抑制作用机理的研究表明，高效液相色谱电化学检测法及受体配体结合法表明，五味子醇甲可使大鼠纹状体及下丘脑多色胺含量明显增加，这提示五味子醇甲的中枢抑制作用与多巴胺系统有一定联系[2]。
1．4五昧子改善神经系统功能的作用实验显示：五味子对动物神经系统功能有调节作用。
五味子喂养老年大鼠两个月后，可改变某些脑区及其同功酶活性，影响单受类介质水平而改善神经系统功能，使丘脑、纹状体的小脑等脑区活性同时下降。
五味子药理作用研究进展硕士论文_毕业论文范文_
五味子药理作用研究进展硕士论文前者习称“北五味子”，主产于东北，后者习称“南五味子”，主产于西南及长江流域以南各省。
五味子味酸、甘，性温，归肺、心、肾经。
具有敛肺滋肾、生津敛汗、涩精止泻、宁心安神的功效。
用于久嗽虚喘、梦遗滑精、遗尿尿频、久泻不止、自汗、盗汗、津伤口渴、短气脉虚、内热消渴、心悸失眠等症，临床应用广泛。
我国七十年代临床用五味子治疗慢性肝炎，取得较好疗效。
目前对五味子药理作用研究较多，为五味子的临床应用提供了实验依据。
现将五味子药理作用研究进展综述如下。
对中枢神经系统的作用镇静五味子乙醇提取液、北五味子水提取物均可使小鼠自主活动明显减少[1]，并可增强中枢安定药氯丙嗪及利血平对自主活动的抑制作用，对抗中枢兴奋药苯丙胺对自主活动的兴奋作用。
五味子醇甲为五味子仁乙醇提取物中主要有效成分之一。
五味子醇甲抑制小鼠由电刺激或长期单居引起的激怒行为，对大鼠回避性条件反射及二级条件反射有选择性抑制作用，大剂量使大鼠产生木僵，该木僵可被脑室注射da 所对抗[2]。
五味子醇甲可使大鼠纹状体及下丘脑多巴胺含量明显增加，提示五味子醇甲的中枢抑制作用可能与多巴胺系统有一定联系。
催眠五味子超微粉水煎液、五味子水煎液、北五味子水提取物及其有效成分五味子甲素、丙素、醇乙等均可增加阈下睡眠剂量戊巴比妥钠致小鼠睡眠只数，延长阈上睡眠剂量戊巴比妥钠致小鼠睡眠时间[1]。
其中乙素及酯乙对小鼠的睡眠时间有先延长后缩短的双相性影响。
五味子挥发油能明显缩短戊巴比妥钠引起的小鼠睡眠时间，但与中枢兴奋药戊四唑及士的宁无协同作用。
五味子挥发油剂量为1.24g/kg 及0.71g/kg 时，能引起小鼠活动减少，并能显着增加肝细胞细胞色素p-450 含量。
因此提示五味子挥发油并无中枢兴奋作用，其缩短戊巴比妥钠引起的睡眠时间的机理，与其对肝药酶诱导作用有关，而非对中枢神经系统的直接作用[3]。
北五味子对糖尿病脑病大鼠脑中神经活性物质含量影响的在线微透析-高效液相色谱-串联质谱联用分析
Vol.36高等学校化学学报No.32015年3月 CHEMICAL JOURNAL OF CHINESE UNIVERSITIES 442~448 doi:10.7503/cjcu20140813北五味子对糖尿病脑病大鼠脑中神经活性物质含量影响的在线微透析-高效液相色谱-串联质谱联用分析皮子凤1,王倩倩1,张 静2,宋凤瑞1,刘志强1(1.中国科学院长春应用化学研究所国家质谱中心(长春),吉林省中药化学与质谱重点实验室,长春130022;2.吉林大学药学院,长春130021)摘要 采用在线微透析-高效液相色谱-串联质谱联用方法,测定了糖尿病脑病大鼠大脑海马区的8种脑递质的含量,从脑中神经活性物质的角度研究五味子改善学习记忆能力的作用机制.实验结果表明,经五味子治疗后,痴呆大鼠脑透析液中的谷氨酸(Glu)㊁丝氨酸(Ser)㊁多巴胺(DA)及5-羟色胺(5-HT)的含量显著降低(P <0.05),牛磺酸(Tau)及乙酰胆碱(Ach)的含量显著升高(P <0.01),天冬氨酸(Asp)和γ-氨基丁酸(GABA)的含量有降低趋势(P >0.05),8种神经活性物质的水平均向正常水平发生了调节.此结果说明五味子可能通过调节糖尿病大鼠大脑中神经活性物质的含量发挥保护中枢神经系统的作用,从而改善糖尿病脑病大鼠的学习记忆能力.Morris 水迷宫实验结果表明,五味子水提物可以明显缩短糖尿病脑病大鼠的逃避潜伏期,增加穿越目标区域次数及中心区域(%)(P <0.05).关键词 五味子;在线微透析-高效液相色谱-串联质谱联用;糖尿病脑病大鼠;海马区;神经活性物质中图分类号 O656 文献标志码 A收稿日期:2014-09-09.网络出版日期:2015-01-30.基金项目:国家自然科学基金(批准号:81373952)和国家科技部创新方法工作专项(批准号:2012IM030600)资助.联系人简介:刘志强,男,博士,研究员,博士生导师,主要从事天然药物化学与有机质谱学研究.E-mail:liuzq@ 五味子(Schisandra fruit)是我国传统中药,包括北五味子[Schisandra chinensis(Turcz)Baill]和南五味子(Schisandra Sphenanthera),以北五味子为上品.传统中医认为该药具有收敛固涩㊁益气生津及补肾宁心等多种功效[1].研究表明,五味子的药理作用涉及中枢神经系统㊁心血管系统㊁消化系统㊁生殖系统以及泌尿系统等多个方面[2~4].五味子中主要成分对中枢神经系统具有改善学习记忆㊁镇静㊁催眠㊁抗衰老和镇痛等作用.文献[5]报道五味子总木脂素可延长记忆障碍模型小鼠在有效区和平台区的停留时间,其机制可能与细胞水平调节Bcl-2家族蛋白的表达而有效降低脂质过氧化产物水平,或抑制NF-κB 的核转录㊁抑制海马区Caspase-3蛋白的表达等多种途径有关[6].五味子水提液能恢复D -半乳糖所致损伤的乳鼠大脑培养神经的超微结构,对D -半乳糖所致衰老神经细胞有保护作用[7].此外,五味子醇甲可提高PC12细胞的存活率并降低其细胞上清液中NO 的浓度,可增加Bcl-2蛋白的表达量,高剂量组五味子醇甲可降低bax 蛋白表达量[8].微透析技术是一种利用膜透析原理,在不破坏(或很少破坏)生物体内环境的前提下,对生物体细胞间液内源性或外源性物质进行连续采样的新技术.它具有原位取样㊁组织损伤少和无需样品预处理等优点.在线微透析是一种微量和动态的连续采样方法,已被广泛应用于活体分析㊁过程监测及药物与蛋白相互作用等方面的研究[9~12].如常理文等[10]采用反相液相色谱分离-脉冲安培检测和微透析取样技术,测定了取自鼠脑尾核和海马区微透析液中儿茶酚胺类神经递质的含量,并对不同神经活动状态下所得微透析液中肾上腺素含量进行了比较.利用质谱进行定量分析,具有灵敏㊁快速及特异性强的优点,适合生物样本的分析[13,14].此外,由于高效液相色谱在样品运行中对管路压力的要求较高,文献[15~17]报道的微透析与LC-MS 的联用也大多采用离线的方式进行.本课题组[18]通过自行研发的耐高压自动进样器实现了微透析与HPLC-MS 或UPLC-MS 的在线联用,并将微透析-高效液相色谱-质谱联用方法用于研究人参对糖尿病大鼠脑递质含量的影响.目前,对五味子提高动物学习记忆能力的作用机制主要从生化及分子生物学角度进行研究,本文则采用在线微透析-高效液相色谱-质谱联用技术,从大脑神经活性物质角度探讨了五味子改善学习记忆能力的作用机制.1 实验部分1.1 仪器与试剂微透析系统包括微透析泵(CMA402)㊁灌注器(CMA1.0mL)㊁清醒动物活动装置(CMA120)㊁MAB6脑探针㊁ASI 脑定位仪和颅钻;ACQUITY TM 超高效液相色谱和Xevo TQ 质谱仪(美国Waters 公司);Venusil ASB C 18液相色谱柱(250mmˑ4.6mm,5μm,天津Agela Technologies);WMT-100水迷宫系统(成都泰盟科技有限公司);自组装耐高压在线进样器.链脲佐菌素(STZ)㊁谷氨酸(Glu)㊁天冬氨酸(Asp)㊁牛磺酸(Tau)㊁丝氨酸(Ser)㊁γ-氨基丁酸(GABA)㊁5-羟色胺(5-HT)㊁多巴胺(DA)和乙酰胆碱(Ach)对照品(Sigma-Aldrich 公司);甲醇(HPLC 级,Fisher 公司);甲酸(HPLC 级,Tedia 公司);Milli-Q 超纯水制备系统(Millipore 公司).人工脑脊液(aCSF)由1.2mmol /L CaCl 2,2.0mmol /L Na 2HPO 4㊃12H 2O,1.0mmol /L MgCl 2,2.7mmol /L KCl 和145mmol /L NaCl 配制,pH =7.4.北五味子购于北京同仁堂药店,经长春中医药大学王淑敏教授鉴定.北五味子水提物的制备:将北五味子粉碎后称取适量,加10倍体积水浸泡20min,加热回流提取2次,每次45min,合并提取液,浓缩后冻干,置于阴凉干燥处储存,备用.1.2 动物实验Wistar 大鼠30只(雄性,体重180~200g),适应性喂养7d 后,对其中20只进行糖尿病造模,另10只作为正常对照组.糖尿病大鼠造模:将雄性大鼠用高脂高糖饲料(18%猪油+20%蔗糖+3%蛋黄+59%基础饲料)饲养56d.按体重腹腔注射(35mg /kg)新鲜配制的链尿佐菌素(STZ)溶液(0.1%柠檬酸缓冲液,pH =4.5),7d 后,尾部采血测定血糖浓度大于16.7mmol /L 即为成功的糖尿病模型大鼠.正常对照组喂大鼠标准饲料.造模成功后,五味子组(Schisandra group)按照2g /kg 剂量给药,模型组(model group)和正常对照组(control group)灌胃给予等量蒸馏水.给药第10周,参照文献[19]进行水迷宫实验,定位航行实验以逃避潜伏期(ELT)为考察指标;空间探索实验监测大鼠120s 内穿越有效区域次数及原平台所在象限路程/总路程[中心区域(%),central zone(%)].水迷宫实验方法:实验前一天,将大鼠面朝池壁放入水中游泳120s 后除湿放回笼中,进行适应性实验.(1)定位航行实验:在迷宫(直径120cm,高50cm)内注入一定量水,水温控制在(24ʃ2)ħ.选取4个入水点,并将迷宫等分为4个象限.在其中任一象限正中放置透明塑料平台(直径10cm),没于水下2cm,并在实验过程中保持其位置不变.水中加入脱脂奶粉使大鼠不能见到平台.将大鼠分别从各象限入水点面朝池壁顺次放入水中,记录其在120s 内寻找并爬上平台的时间,即为逃避潜伏期,爬上平台后允许大鼠停留20s,间隔60s 后进行下一次测试.如果大鼠在120s 内未能找到平台,则将其引上平台并停留20s,记录其潜伏期为120s.实验连续进行5d.(2)空间探索实验:定位航行实验结束24h 后取出平台,在原平台所在象限的相对象限入水点将大鼠放入水中,监测其120s 内穿越有效区域的次数(time of crossing target zone)及原平台所在象限路程/总路程.微透析采样:在大鼠海马区(A:-5.6mm,L:-4.6mm,V:-4.6mm)[20]埋入脑探针套管,恢复2天后,在动物清醒状态下插入脑探针,以1.0μL /min 流速灌流aCSF,平衡2h,给药1h 后开始在线检测,每20min 进样一次,每只大鼠监测3h.1.3 色谱及质谱条件色谱条件:柱温为室温;流速0.5mL /min;流动相A 为含0.12%(体积分数)甲酸的水溶液;流动相B 为含0.06%(体积分数)甲酸的33%(体积分数)的甲醇水溶液;梯度洗脱:0~3.5min,0%B;344 No.3 皮子凤等:北五味子对糖尿病脑病大鼠脑中 串联质谱联用分析3.5~4min,0~22%B;4~8min,22%~24%B;8~8.5min,24%~100%B;8.5~15.5min,100%B;15.5~16min,100%~0;进样量20μL.0~3.5min流出物切换至废液,不进入质谱检测.质谱条件:ESI正离子模式,多反应监测模式(MRM),毛细管电压2.5kV,脱溶剂气温度350ħ,脱溶剂气流量800L/h,锥孔气流量50L/h.质谱MRM采集条件见表1.Table1 MRM parameters for eight neurochemicals*Analyte Cone voltage/V Quantitation transition,m/z(Collision/eV)Confirmation transition,m/z(Collision/eV)t R/minGlutamic acid(Glu)20148.10>84.05(16)148.03>102.01(10) 6.27 Aspartic acid(Asp)22134.01>73.92(14)134.08>87.97(10) 6.07γ-Aminobutyric acid(GABA)20104.04>87.05(10)104.02>68.97(14) 5.70 Serine(Ser)19106.07>60.07(10)105.99>87.94(14) 5.78Taurine(Tau)26126.04>44.02(14)126.03>108.08(10) 6.09 Acetylcholine(Ach)18146.01>87.03(14)146.01>43.06(22)9.99 Dopamine(DA)18154.18>136.97(10)154.18>90.96(20)10.49 5-Hydroxytryptamine(5-HT)15177.02>160.00(12)177.02>132.00(20)14.89 *Collision energies(eV)are given in brackets.1.4 样品分析1.4.1 标准溶液的配制分别精密称取8种待测物并以超纯水溶解,配制成1.0mmol/L的单标储备液.用0.12%甲酸/aCSF(体积比9:1)稀释至100μmol/L的混合标准溶液,再逐级稀释配制成不同浓度的标准工作液.1.4.2 方法学考察标准曲线及定量限:按照上述方法配制系列混合标准溶液,采用外标法定量.以待测物浓度作为横坐标,定量离子对峰面积为纵坐标,得到8种待测物的线性回归方程,以10倍信噪比(S/N)为标准确定方法的定量限(LOQ).精密度㊁加标回收率及基质效应:在人工脑脊液中添加高㊁中㊁低3个浓度水平的标准溶液,每个浓度平行测定6次,分别在3日内测试,测得日内㊁日间精密度和加标回收率.添加浓度分别为0.5, 1.25和5.0μmol/L Glu,0.25,0.75和2.5μmol/L Asp,0.25,0.75和1.5μmol/L GABA;0.75,2.5和10μmol/L Tau;0.75,2.5和10μmol/L Ser;0.5,2.0和7.5nmol/L Ach;0.5,2.0和7.5nmol/L DA以及0.5,1.5和5.0nmol/L5-HT.以流动相A配制8种分析物高㊁中㊁低3个浓度水平的溶剂标样,用脑透析液配制相同浓度水平的基质标样考察基质效应(ME)[ME(%)=(基质标样峰面积-脑透析液中待测物峰面积)/溶剂中标样峰面积ˑ100%].2 结果与讨论2.1 五味子水提物对糖尿病脑病大鼠记忆能力的影响定位航行实验用于考察大鼠的空间学习能力,ELT越短说明学习能力越强;而空间探索实验考察大鼠的空间记忆能力,原平台所在象限路程/总路程[中心区域(%)]越大㊁穿越目标次数越多说明动物的记忆能力越强.由表2可见,模型组大鼠的逃避潜伏期显著高于空白组(P<0.01),穿越目标区域的次数及中心区域(%)显著低于空白组(P<0.05),说明实验期间糖尿病动物已经发生了记忆能力下降的脑病病变.经五味子给药治疗70d后,五味子组可以显著降低模型大鼠逃避潜伏期(P<0.01),提高中心区域(%)及穿越目标区域的次数(P<0.01),表明五味子具有治疗糖尿病性脑病的作用,从而改善模型动物的记忆能力.Table2 Effects of schisandra aqueous extract on learning and memory abilities ofdiabetic encephalopathy rats#Group Dose/(g㊃kg-1)ELT/s Central zone(%)Times of crossing target zone Control group51.90ʃ34.62**21.87ʃ6.25* 2.43ʃ0.78*Model group103.50ʃ33.0615.23ʃ5.34 1.05ʃ0.57Schisandra group251.53ʃ47.80**24.70ʃ5.97** 3.50ʃ0.84**#Data vs.model group;*P<0.05,**P<0.01.444高等学校化学学报Vol.362.2 五味子水提物对糖尿病脑病大鼠海马区神经活性物质含量的影响采用自制的耐高压在线进样器实现了清醒动物在线微透析-高效液相色谱-质谱联用分析,其样品无需前处理即可进行检测,同时动物可在清醒状态下进行内源性神经递质含量的测定,结果更加真实可靠.在优化在线微透析技术采样条件的过程中,灌流液㊁灌流速度以及采样间隔是主要的考察因素.人工脑脊液在脑部微透析研究中应用最广泛,且符合本研究中神经活性物质极性较强㊁水溶性好的特点.各待测物在1.0及2.0μL /min 的灌流速度下均具有良好的探针回收率,而在线检测系统中进样体积取决于灌流速度及采样间隔两方面因素,为满足色谱分析要求㊁避免样品量过载,实验选择灌流速度为1.0μL /min,间隔20min,进样体积为20μL 的在线采样检测系统.此外,保证检测的灵敏度对于监测神经化学物质的体内含量的准确性非常重要.我们[21]已经建立了无需衍生化㊁采用液相色谱-质谱联用技术直接对干血斑中9种氨基酸的定量分析方法.在本研究中,除了检测脑脊液中的几种氨基酸含量,还同时检测了3种神经递质的含量,采用MRM 模式测定了待测物的含量.为了保证检测的灵敏度,根据待测物的保留时间不同将它们分为2组,分别在质谱的不同通道中检测,每组化合物在各自的运行期间同时监测.此外,人工脑脊液中所含无机盐会对质谱离子源造成污染,故前3.5min 的液相流出液切换至废液中,不进行质谱检测.2.2.1 标准曲线的测定 图1为正常大鼠大脑海马区8种神经活性物质的微透析-液质联用在线检测的提取离子流图.8种待测物的标准曲线㊁线性范围㊁相关系数(R 2)及定量限的测定结果列于表3.Fig.1 Extracted ion chromatograms of eight analytes in control rat hippocampus(A)GABA;(B)ASP;(C)Tau;(D)Glu;(E)Ser;(F)Ach;(G)DA;(H)5-HT.Table 3 Results of eight analytes measured by online MD-HPLC-MS /MS methodAnalytet R /min Dynamic range /(μmol㊃L -1)Regression equation Correlation coefficient(R 2)LOQ /(nmol㊃L -1)Glu 6.280.25 10.0y =13.2x +3025.20.99950Asp6.100.1 5.0y =16.1x +1886.30.99980GABA 5.720.1 2.5y =4.56x +235.30.99748Tau 6.090.5 10.0y =0.81x +323.70.998250Ser 5.790.5 10.0y =7.34x +2247.20.99975Ach 9.992ˑ10-4 10ˑ10-2y =775.0x +1102.20.9950.02DA 10.505ˑ10-4 10ˑ10-2y =354.7x -0.40.9970.0255-HT 14.895ˑ10-4 10ˑ10-2y =296.5x -7.10.9990.0752.2.2 方法学考察 8种待测物各浓度水平的日间精密度㊁日内精密度㊁加标回收率以及基质效应的测定结果列于表4.可见,各待测物QC 样品测试结果均符合生物样品测定有关要求.脑透析液基质对8种物质的基质效应(ME)在91.90%~107.42%之间,表明基质对待测物无干扰.2.2.3 不同组别大鼠脑内8种神经活性物质水平的比较 不同组别大鼠脑内8种神经活性物质水平的比较结果如图2所示.544 No.3 皮子凤等:北五味子对糖尿病脑病大鼠脑中 串联质谱联用分析Table4 Precisions and recoveries of the eight analytes(μmol/L)Analyte Addedconcerntion/(μmol㊃L-1)Precision(%)Intra-day Inter-day Recovery(%)AnalyteAddedconcerntion/(μmol㊃L-1)Precision(%)Intra-day Inter-day Recovery(%)Glu0.58.21 1.9595.27Ser0.75 6.48 5.75102.541.258.542.3496.38 2.5 5.24 5.1899.36510.90 1.87104.3210 6.39 4.9792.56 Asp0.258.34 4.6898.25Ach5ˑ10-49.688.69108.410.7510.72 3.2590.882ˑ10-311.379.2894.312.5 6.593.48110.797.5ˑ10-310.249.0498.37 GABA0.258.3411.6789.80DA5ˑ10-48.614.64105.370.7511.989.6798.062ˑ10-39.54 6.2890.871.510.029.2193.247.5ˑ10-39.06 6.33103.28 Tau0.758.88 3.26109.265-HT5ˑ10-49.2812.43106.042.57.69 4.14106.38 1.5ˑ10-39.5810.2592.4710 6.32 4.87106.855ˑ10-37.249.94102.19牛磺酸(Tau)是一种抑制性神经调质,具有神经保护作用,包括抗兴奋性氛基酸神经毒性㊁调节渗透压㊁维持细胞膜结构完整和细胞内Ca2+动态平衡㊁抗氧化和抗炎症反应等作用.研究[22]表明,牛磺酸可降低中性粒细胞的浸润,改善局灶性脑缺血损伤后的能量代谢,减轻局灶性脑缺血引起的过氧化损伤.对肥胖并持续糖尿病大鼠在饮食中补充2%牛磺酸,能够降低血糖㊁甘油三酯及胆固醇水平,改善胰岛素抵抗,牛磺酸缺乏会导致糖尿病症状加剧并进一步促进并发症的发生[23].Fig.2 Comparison on the contents of8kinds of neurochemicals in the cerebral dialysate ofdifferent group rats*P<0.05,**P<0.01.乙酰胆碱(Ach)存在于胆碱能神经元泡囊中,是迄今发现与学习记忆关系最为密切的一种神经递质.研究[24]表明,在血管性痴呆的发病进程中,随着乙酰胆碱酯酶活性的增强,海马区及下丘脑中单胺类神经递质(5-HT,DA和NA等)的含量显著下降.通过对阿尔茨海默病患者脑内Ach测定发现,海马和皮质胆碱活性降低与内隐㊁外显记忆缺失相关[25].谷氨酸(Glu)和天门冬氨酸(Asp)是中枢神经系统的兴奋性神经递质,尤其谷氨酸是中枢神经系统含量最高㊁分布最广且作用最强的兴奋性神经递质.正常情况下兴奋性氨基酸主要存在于神经末梢的突触囊泡内,末梢去极化时释放到突触间隙,作用于突触后膜的特异性受体,从而完成兴奋性突触传递及其它生理作用.而过量的兴奋性氨基酸对神经系统具有神经毒性作用.γ-氨基丁酸(GABA)是海马区中最主要的抑制性神经递质.GABA能突触具有类似兴奋性谷氨酸能突触的作用,阻断GABA能抑制可以显著提高神经元的兴奋性[26].GABA具有激发血糖升高同时降低血清胰岛素水平的作用[27].丝氨酸(Ser)可促进脂肪和脂肪酸的新陈代谢,有助于维持免疫系统.丝氨酸主要参与突触可塑性调节㊁信息传递以及神经兴奋性毒性等生理病理过程[28].脑组织中L-丝氨酸是合成神经递质D-丝氨酸和甘氨酸的前体,是甘氨酸受体内源性配体之一.而甘氨酸受体的激活可引起神经元膜超极化,阻断NMDA(N-methyl-D-aspartate)受体的通道开放,从而抑制谷氨酸对神经元的兴奋性毒性[29].模型动物海马区透析液中丝氨酸含量的增多可能导致甘氨酸受体减少,从而影响甘氨酸发挥抑制谷氨酸的神经元兴奋性毒性.644高等学校化学学报Vol.365-羟色胺(5-HT)是一种抑制性神经递质,在大脑皮层质及神经突触内含量很高.海马区也有5-HT能神经元存在,通过5-HT 的受体中介调控靶细胞的兴奋或抑制,进而调节学习记忆功能[30,31].多巴胺(DA)是主要的单胺类神经递质,研究[32]表明STZ 建立糖尿病大鼠模型6周后模型组大鼠脑内DA 水平较正常大鼠显著升高,5-HT 水平显著降低.初步推测DA 可通过调节精神活动㊁情绪㊁识别㊁思维和推理过程间接影响记忆能力.Luine 等[33]的报道也证明了多巴胺能系统对老年大鼠的学习记忆能力非常重要.3 结 论对糖尿病脑病大鼠脑透析液中8种神经活性物质的含量测定结果表明,模型组动物大脑海马区透析液中Glu,Asp,GABA,Ser,DA 和5-HT 的含量显著升高(P <0.05或P <0.01),Tau 及Ach 的含量显著降低(P <0.01),表明兴奋性氨基酸㊁抑制性氨基酸及相关神经递质均参与了糖尿病脑病的发病.行为学实验结果表明,经五味子治疗后,疾病动物的逃避潜伏期明显缩短,穿越目标区域次数及中心区域(%)显著增加;糖尿病脑病大鼠脑透析液中的Glu,Ser,DA 和5-HT 的含量显著降低(P <0.05),Tau 及Ach 的含量显著升高(P <0.01),Asp 和GABA 的含量有降低趋势(P >0.05),这8种神经活性物质的水平均向正常水平发生了调节.说明五味子可能通过调节糖尿病脑病大鼠脑中神经活性物质的含量发挥保护中枢神经系统的作用,从而改善糖尿病脑病大鼠的学习记忆能力.参 考 文 献[1] Editorial Committee of Pharmacopoeia of People s Republicof China,Pharmacopoeia of People s Republic of China ,Beijing,2010,6162(中华人民共和国药典委员会,中华人民共和国药典,北京,2010,61 62)[2] Lu H.,Liu G.T.,Planta Med.,1992,58,311 313[3] Hu Y.W.,Food and Drug ,2008,10(11),53 54(胡彦武.食品与药品,2008,10(11),53 54)[4] Huyke C.,Engel K.,Simon-Haarhaus B.,Quirin K.W.,Schempp C.M.,Planta Med.,2007,73,1116 1126[5] Wang Y.C.,Ren K.,Fan H.Y.,Shen N.,Huang X.D.,Chang Y.,Xu N.,Liu S.B.,Liu W.,Lei J.T.,An Y.,Chen X.,Chin.J.Chin.Mater.Med.,2011,36(23),3310 3314(王艳春,任旷,范红艳,沈楠,黄晓东,常影,许娜,刘师兵,刘微,雷钧涛,安英,陈雪.中国中药杂志,2011,36(23),3310 3314)[6] Yu F.,Tuo X.P.,LüJ.Y.,Chen H.S.,.Med.Univ.,2007,28(12),1351 1355(于方,拓西平,吕建勇,陈海生.第二军医大学学报,2007,28(12),1351 1355)[7] Gao W.R.,Jin X.Z.,Li X.D.,Lishizhen Med.Mater.Med.Res.,2010,21(10),2705 2706(高文荣,金香子,李香丹.时珍国医国药,2010,21(10),2705 2706)[8] Wang Y.C.,Ren K.,Fan H.Y.,Shen N.,Huang X.D.,Xu N.,Liu S.B.,Liu W.,Lei J.T.,An Y.,Chen X.,Chang Y.,Chin.Pharm.J.,2011,46(11),1097 1103(王艳春,任旷,范红艳,沈楠,黄晓东,许娜,刘师兵,刘微,雷钧涛,安英,陈雪,常影.中国药学杂志,2011,46(11),1097 1103)[9] Zhang J.F.,Coupling on-line Microdialysis Sampling with the Electrogenerated Chemiluminescence Sensor for Studying Drug Protein Inter-actions ,Shanxi Normal University,Xi an,2012(张建锋.在线微透析电化学发光传感器研究药物蛋白相互作用,西安:陕西师范大学,2012)[10] Chang L.W.,Xu G.Y.,Han H.W.,Chang X.Y.,Zhao Z.,Chem.J.Chinese Universities ,2002,23(4),552 554(常理文,徐桂芸,韩慧婉,常溪燕,赵卓.高等学校化学学报,2002,23(4),552 554)[11] Zheng H.,Shi L.F.,Hu J.H.,Biomed.Chromatogr.,2007,21(1),101 106[12] Tzschentke T.M.,Folgering 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MD-HPLC-MS/MS method was applied to explore the effect of schisandra fruit on eight neurochemicals changes in hippocampus of diabetic encephalopathy rats.The results showed that the contents of Glu,Ser,DA and5-HT decreased significantly(P<0.05),while the contents of Tau and Ach in-creased significantly(P<0.01)after treated by schisandra fruit.The contents of Asp and GABA tended to de-crease but the difference was not significant(P>0.05).The levels of eight neurochemicals regulated to normal level.The results indicated that schisandra may play a protective function of the central nervous system by ad-justing the contents of neurochemicals in diabetic rats,which can improve the memory and learn ability of dia-betic encephalopathy rat.Keywords Schisandra fruit;Online MD-HPLC-MS/MS;Diabetic encephalopathy rat;Hippocampus; Neurochemical(Ed.:N,K)Supported by the National Natural Science Foundation of China(No.81373952)and the Innovation Method Fund of Ministry of Science and Technology,China(No.2012IM030600).北五味子对糖尿病脑病大鼠脑中神经活性物质含量影响的在线微透析-高效液相色谱-串联质谱联用分析作者：皮子凤， 王倩倩， 张静， 宋凤瑞， 刘志强， PI Zifeng， WANG Qianqian，ZHANG Jing， Song Fengrui， LIU Zhiqiang作者单位：皮子凤,王倩倩,宋凤瑞,刘志强,PI Zifeng,WANG Qianqian,Song Fengrui,LIUZhiqiang(中国科学院长春应用化学研究所国家质谱中心 长春，吉林省中药化学与质谱重点实验室，长春130022)， 张静,ZHANG Jing(吉林大学药学院,长春,130021)刊名：高等学校化学学报英文刊名：Chemical Journal of Chinese Universities年，卷(期)：2015(3)引用本文格式：皮子凤.王倩倩.张静.宋凤瑞.刘志强.PI Zifeng.WANG Qianqian.ZHANG Jing.Song Fengrui. LIU Zhiqiang北五味子对糖尿病脑病大鼠脑中神经活性物质含量影响的在线微透析-高效液相色谱-串联质谱联用分析[期刊论文]-高等学校化学学报 2015(3)。
尿液代谢组学方法研究人参总皂苷治疗糖尿病心肌病大鼠作用机制
尿液代谢组学是一种通过分析尿液中代谢产物来研究人体代谢状况的方法， 具有无创、简便、重复性好等优点。通过尿液代谢组学方法，我们可以准确地描 绘出人参总皂苷对糖尿病心肌病大鼠的治疗作用机制。
本研究采用高糖高脂饲料加小剂量链脲佐菌素注射的方法建立糖尿病心肌病 大鼠模型。将模型大鼠随机分为两组：模型组和人参总皂苷组。人参总皂苷组大 鼠给予人参总皂苷灌胃给药，模型组大鼠给予等量生理盐水灌胃给药。在给药期 间，采集各组大鼠的尿液样本，采用液相色谱-质谱联用技术进行代谢组学分析。
然而，本研究仍存在一定的局限性。首先，实验样本量相对较小，可能影响 结果的稳定性。其次，本研究仅从尿液代谢组学角度分析了人参总皂苷的作用机 制，未涉及其他可能的分子机制，如基因表达、蛋白质组学等。因此，未来研究 可进一步扩大样本量，并结合多学科技术手段探讨人参总皂苷治疗糖尿病心肌病 的全面作用机制。
谢谢观看
本研究选取了40只健康雄性大鼠，随机分为4组：正常组、糖尿病肾病组、 五味子组和糖尿病肾病+五味子组。除正常组外，其余3组大鼠均给予高糖高脂饲 料喂养，诱导糖尿病肾病模型。五味子组和糖尿病肾病+五味子组大鼠在模型诱 导的同时分别给予五味子灌胃和五味子联合糖尿病肾病饲料喂养。实验周期为12 周。
通过血清代谢组学分析，我们发现五味子主要通过调节脂肪酸代谢、氨基酸 代谢、糖代谢等途径来发挥治疗大鼠糖尿病肾病的作用。具体而言，五味子能够 抑制脂肪合成、促进脂肪酸氧化，从而改善脂肪酸代谢；同时还能调节氨基酸的 合成与分解，增加机体必需氨基酸的摄入，减少非必需氨基酸的生成，改善氨基 酸代谢；此外，五味子还能抑制糖异生，促进葡萄糖氧化，改善糖代谢。这些代 谢调节作用共同作用，有助于降低血糖、改善肾功能。
2、延长实验时间：目前的研究主要集中在短期治疗上，未来可以对长期治 疗后的糖尿病大鼠进行代谢组学研究，以观察药物对代谢的影响是否会随着时间 的推移而发生变化。
混合探针底物法测定五味子提取物对大鼠细胞色素P450同工酶的作用
酸钠 、４一羟基美 芬 妥英 、６一羟基 氯 唑沙宗 、１ 一羟 基 咪达 唑 仑 ） ，以产 物 生成 速 率反 映 Ｃ Ｐ５ Ｙ ４０ 同工酶 活性 。结 果 表 明 五 味 子 醇 提 物 给 予 大 鼠 ７天 对 Ｃ Ｐ Ｃ 、Ｃ Ｐ Ａ Ｙ ２ ６ Ｙ １ ２没 有 显 著 性 影 响 ，对 Ｃ ＰＤ Ｙ ２ ２具 有极 显著 性抑 制作 用 ，对 Ｃ Ｐ Ｃ Ｙ２ １ １有显 著性 抑制 作用 ，对 Ｃ Ｐ Ａ ／ Ｙ ３ １２和 Ｃ Ｐ Ｅ Ｙ ２ １具有 极 显著 性 诱 导 作 用 ；五 味 子 水 提 物 对 Ｃ Ｐ Ｃ 、Ｃ Ｐ Ａ ／ 、Ｃ Ｐ Ａ 、Ｃ Ｐ Ｃ １没 有 显 著 性 影 Ｙ ２ ６ Ｙ ３ １２ Ｙ １ ２ Ｙ ２ １ 响 ，对 Ｃ Ｐ Ｄ Ｙ ２ ２有 极显 著性 抑制 作用 ，对 Ｃ Ｐ Ｅ 有 极显 著性 诱导 作用 ，因此 ，五 味子 与其 它药 Ｙ２ １
５ ８
中国药理通讯 ２ １ ０ ０年第二十七卷第二期
咪达 唑仑 （ Ｙ ３ １２ Ｃ Ｐ Ａ ／ 采用 液相 色谱 一串联 质 谱分
析方法 测定 ６个 特异 性底 物对 应生 成 的 ６种 代谢 产 物 （ 乙 酰氨 基 酚 、右啡 烷 、４一羟基 双 氯 酚 对
物标 志物 ） 。方法 ：建立不 同剂 量 咖啡 因 、尼古 丁孕期 暴露 所致 大 鼠 ＩＧ Ｕ Ｒ模 型 ，利用 Ｎ ＭＲ代谢
组学技术检测胎 鼠血浆、羊水中的差异代谢谱 ，找出差异代谢物证明 ＩＧ Ｕ Ｒ胎鼠体内三大物质代
谢通路 的改变 ，反 映胎儿 神经 内分 泌 代 谢 紊乱 ；利用 上 述 差 异代 谢 物 与 孕期 咖啡 因 、尼 古 丁暴
王 宝莲 扈金 萍 陈晖 李 燕
五味子多糖干预胰岛素抵抗大鼠作用研究
见表 １ 。
１ ． ２ 仪器
优越血糖仪 Ａ ｄ ｖ ａ ｎ ｔ ａ ｇ ｅ Ｉ Ｉ 及试纸 （ 美 国罗
表 １ 五 昧 子 多糖 对 大 鼠 Ｆ Ｂ Ｇ的 影 响 （ ｘ± ｓ ）
氏诊 断公 司 ） ； Ｇ ＭＪ型全 自动 放射 免 疫 计数 器 （ 江 苏
省 医疗 电子 研究 所 ） 。 １ ． ３ 试剂 罗 格列 酮 （ 江苏 恒瑞 医 药股 份 有 限 公 司 ，
五 味子 多糖 干 预 胰 岛素抵 抗 大 鼠作 用研 究
马 育轩 ， 范越 ， 张 晓娟 ， 王艳 丽 ， 付殷 ， 芦冲 ， 黄艳 霞 ， 李 冀
（ 黑 龙江 中 医药大 学 ， 黑龙 江 摘 哈尔 滨 １ ５ ０ ０ ４ ０ ）
要： 目的 ： 探 讨 五味 子 多糖 改善 大鼠胰 岛素抵抗 的作 用 。方 法 ： 观 察 五 味 子 多糖 对 模 型 大 鼠空腹 血
列 酮组 给 药剂 量 为 ０ ． ２ ｇ ／ ｋ ｇ ， 五 味 子 多 糖 组 大 鼠给 药
剂量 为 ４ ｇ ／ ｋ ｇ ， 连续 灌 胃给药 ４周 ， 空 白组 、 模 型 组 大
科植 物 五 味子 的干燥 成熟 果 实 ， 有 南北 五 味子之 分 ， 通
常 说 的为 “ 北五 味子 ” ｌ １ Ｊ 。其 味酸 、 甘、 温， 具 有 收敛 固 涩， 补 肾宁 心 ， 益气 生 津之 功效 。五味 子多糖 是从 五 味 子 干燥成 熟 果实 中提取 的含 有 五 味 子 总 多糖 ， 本 文 旨
糖、 空腹 胰 岛素 的影 响 。结果 ： 与模 型 组 比较 ， 五味 子 多糖 组 大 鼠 空腹 血糖 、 空腹 胰 岛素 水平 明 显 降低 ，
差异具有统计学意义（ Ｐ＜ ０ ． ０ ５ ， Ｐ＜ ０ ． Ｏ １ ） 。结论 ： 五味子多糖可明显降低模型大鼠空腹血糖 、 空腹胰岛
五味子合剂干预糖尿病肾病小鼠肾小球纤维化进展的实验研究的开题报告
五味子合剂干预糖尿病肾病小鼠肾小球纤维化进展的实验研究的开题报告一、背景糖尿病是一种常见的代谢性疾病，其主要并发症之一是肾脏病变，也称为糖尿病肾病。
糖尿病肾病的发生和发展是一个复杂的过程，其中肾小球纤维化是其重要的病理变化之一。
肾小球纤维化是肾脏疾病发生和发展的一个关键病理过程，是肾小球硬化的主要机制之一，亦是糖尿病肾病的重要病理变化。
五味子是一种中药，具有抗氧化、抗炎和抗纤维化等作用。
文献报道五味子合剂具有降血糖、保护肝肾等药理作用。
近年来的研究表明，五味子合剂对糖尿病肾病具有一定的干预作用，能够减轻肾小球纤维化的进展，但是其机制尚不明确。
二、研究目的本实验旨在探究五味子合剂对糖尿病肾病小鼠肾小球纤维化进展的干预作用及其可能的作用机制。
三、研究方案1.实验动物：选用C57BL/KsJ-db/db小鼠作为糖尿病模型动物，共30只。
2.实验分组：随机将小鼠分为空白对照组、模型组、五味子合剂高剂量组、中剂量组、低剂量组，每组10只。
3.实验干预：给予五味子合剂高剂量组、中剂量组、低剂量组分别灌胃不同剂量的五味子合剂，每只小鼠每天灌胃1次，连续干预8周；空白对照组和模型组同样的时间给予等量的生理盐水。
4.检测指标：检测小鼠血糖、肾功能、肾小球形态、肾小球系膜细胞增生情况和肾小球基质积累情况。
5.预期结果：预计五味子合剂可降低糖尿病肾病小鼠的血糖、肾损伤程度和肾小球纤维化进展，预计其可能作用机制为抗氧化、抗炎和抗纤维化作用。
四、研究意义本实验结果有助于深入了解五味子合剂对糖尿病肾病肾小球纤维化进展的干预作用和其可能的作用机制，为糖尿病肾病的临床治疗探索新的治疗方法提供理论依据。
五味子提取物对大鼠肾缺血再灌注损伤保护研究
结论
五味子提取物保护 肾缺血性损伤的作用可能与抗 自由基损伤和减轻脂质过氧化有关。
【 关键词】 五昧子科 ； 鼠； 大 五味子提取物： 肾缺血再灌注
五味子具收敛 固涩、 益气生津及补 １２ 动物分组及缺 血再灌注损 伤模型 法 测 Ｎ 乙 酰．． ． 基 葡 萄 糖 苷 酶 ． 一 ＢＤ 氨
肾宁 心 之 功效 ， 临床 用 于 治疗 久 嗽 虚 喘 、 建 立 ３ ６只 大 鼠 随 机 分 成 假 手 术 对 照 （ Ｇ） 日立 ７ ８ ＮＡ ， １０型 自动 分 析 仪 检 测 血
可能机制 。报告如下 。
１ 材 料 与 方法
、
肪 组织 ， 无创 动 脉 夹夹 闭左 肾动 脉 、 用 静 ４℃下 制 成 匀 浆 ， 浆 液 以 ３０ ０ｒ ｎ 匀 ０ ｍｉ ／
脉及输尿管， ０ ｎ后去夹恢复血液灌 的 转速 ， 心 １ ｎ 取上 清 液 以考 马 斯 ３ ｍｉ 离 ５ ｍｉ，
６ 量 １０ ２０ｇ 由宁 波大 学 医 学 院实 验 灌 注 观 察 肾脏 颜 色 由暗 红变 成 鲜 红后 ， 光 光 度 计 ６０衄 波 长 处 测 定 肾 组 织 ９ ～ ６ ， ， ４ｈ 置 Ｏ ３ ｍ 动 物 中心 提供 ； 昧 子购 自于 宁波 药 材 分 别 于 ３ ６和 ２ 收 集 肾组 织 ， 于 体 Ｓ Ｄ 活性，５ ２ｎ 波长处测定肾组织 五 ％的 多 聚 甲 醛 ， 固 定 １ ＭＤＡ 含 量 。 ２ｈ 市 场 ， 杭 州 市 药 品检 验 所 鉴 定 为 木 兰 积 分 数 为 ４ 经
五味子治疗大鼠糖尿病肾病作用机制的血清代谢组学研究
五味子治疗大鼠糖尿病肾病作用机制的血清代谢组学研究一、本文概述随着现代生活方式的改变，糖尿病（Diabetes Mellitus，DM）的发病率逐年上升，而糖尿病肾病（Diabetic Nephropathy，DN）作为其最常见的并发症之一，对公共健康造成了巨大威胁。
因此，寻找有效治疗糖尿病肾病的方法成为了医学研究的热点。
五味子，作为一种传统中药材，具有悠久的历史和广泛的应用。
近年来，五味子在糖尿病肾病治疗中的潜力逐渐受到关注。
本研究旨在通过血清代谢组学的方法，深入探讨五味子治疗大鼠糖尿病肾病的作用机制，以期为临床应用提供理论依据。
代谢组学是一种研究生物体内所有代谢产物的变化及其与生理病理过程关系的新兴学科。
通过代谢组学分析，我们可以全面了解生物体在特定条件下的代谢状态，从而揭示疾病的发生发展机制以及药物的治疗作用。
本研究将采用血清代谢组学技术，结合多元统计分析方法，对五味子治疗大鼠糖尿病肾病的代谢变化进行深入分析。
具体而言，我们将通过构建糖尿病肾病大鼠模型，并给予五味子治疗，收集大鼠血清样本进行代谢组学分析。
通过对代谢产物的定性定量分析，揭示五味子治疗后大鼠血清代谢谱的变化，并筛选与糖尿病肾病相关的潜在生物标志物。
结合生物信息学方法，探讨五味子治疗糖尿病肾病的作用途径和机制。
本研究预期将为五味子在糖尿病肾病治疗中的应用提供科学依据，并为其他中药材的开发利用提供借鉴。
本研究还将为代谢组学在中医药研究中的应用拓展新的思路和方法。
二、材料与方法选用健康雄性Sprague-Dawley大鼠，体重约200-250g，购自北京华阜康生物科技股份有限公司。
所有动物实验均按照本实验室动物伦理委员会的规定进行。
五味子提取物购自上海某药业有限公司，纯度≥98%。
大鼠糖尿病肾病造模药物（如链脲佐菌素，STZ）购自Sigma-Aldrich公司。
所有生化试剂均为分析纯，购自国内知名试剂公司。
高效液相色谱-质谱联用仪（HPLC-MS/MS）购自Agilent公司；全自动生化分析仪购自Beckman Coulter公司；低温离心机购自Eppendorf 公司；其他常用实验仪器均为国产优质产品。
五味子合剂对糖尿病肾病小鼠肾脏炎症抑制作用的实验研究的开题报告
五味子合剂对糖尿病肾病小鼠肾脏炎症抑制作用的实验研究的开题报告1. 研究背景糖尿病肾病是糖尿病的常见并发症之一，是一种肾小球和肾小管结构受损并导致肾功能不全的疾病。
糖尿病肾病的发生机制涉及多个方面，其中炎症反应是重要的病理机制之一。
因此，研究如何抑制糖尿病肾病中的炎症反应具有重要的临床意义。
五味子合剂是中药复方，包括五味子、芍药、熟地黄、丹参和泽泻等成分。
五味子合剂在中医临床上被广泛用于调节人体内环境的平衡，治疗多种疾病，包括糖尿病、肾病等。
据报道，五味子合剂具有抑制炎症反应的作用。
因此，研究五味子合剂对糖尿病肾病小鼠肾脏炎症抑制作用具有重要的理论和实际意义。
2. 研究目的本研究旨在探讨五味子合剂对糖尿病肾病小鼠肾脏炎症抑制作用及其机制，为糖尿病肾病的临床治疗提供新的理论和实践依据。
3. 研究方法3.1 研究动物选用C57BL/6J小鼠，体重20~25g，分为正常对照组、糖尿病模型组、五味子合剂高剂量组、五味子合剂低剂量组和对照剂量组。
糖尿病模型组采用高脂饮食加链脲佐菌素注射诱导，糖尿病模型建立成功后，开始干预治疗。
3.2 干预治疗五味子合剂高剂量组和低剂量组分别给予相应的剂量的五味子合剂，对照剂量组给予生理盐水。
正常对照组和糖尿病模型组不予干预。
3.3 检测指标观察小鼠的一般情况、体重变化及血糖水平。
采用酶联免疫吸附法检测小鼠血清中炎症因子(IL-6、TNF-α、IL-1β)的含量。
采用免疫组织化学染色法观察小鼠肾脏中IL-6、TNF-α、IL-1β表达情况。
4. 研究意义本研究将为探究五味子合剂对糖尿病肾病小鼠肾脏炎症抑制作用提供科学实验证据和理论指导，并通过实验结果验证中药治疗糖尿病肾病的疗效及应用前景。
这有望为糖尿病肾病的临床治疗提供新的方案和思路，促进中药治疗的应用和发展。
(黄尿酸)五味子治疗大鼠糖尿病肾病作用机制的血清代谢组学研究_皮子凤
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研究报告
分析化学 （ FENXI HUAXUE） 研究报告 Chinese Journal of Analytical Chemistry
第2 期 169 ～ 175
DOI： 10． 11895 / j． issn． 0253-3820． 140564
正常对照组（ Control group） ： 给予 8 只 SD 雄性大鼠标准饲料，正常喂养。 Ⅱ型糖尿病大鼠造模参照文献［7］进行。 16 只糖尿病大鼠随机分为两组： 模型组（ Model group） 和五味子组（ WWZ group） 。五味子组每日 灌胃五味子水提液，剂量为每 kg 体重 5 g 生药，模型组和空白组灌胃蒸馏水。连续给药 12 星期后，收 集 24 h 尿液，按照试剂盒方法测定尿蛋白、尿肌酐含量。末次给药 24 h 后，动物断头处死，取血， 3000 r / min 离心，收集空白对照组、模型组和五味子组的血清，!80 ℃ 储存备用。 2． 3 样品收集和制备 五味子水提物制备： 药材粉碎后称取适量，加 10 倍体积水浸泡 20 min，加热回流提取两次，每次 45 min，合并提取液，浓缩后冻干，阴凉干燥处储存备用。 样品检测前，4 ℃ 融化血清样品，在 100 μL 血清样品中加入 400 μL 无水乙腈，剧烈振荡 30 s，室 温静置 10 min，样品在 4 ℃ 条件下，12000 r / min 离心 10 min，上清液用 0． 22 μm 滤膜过滤，滤液供 UPLC / MS 测定。 2． 4 色谱质谱条件及样品分析 色谱条件： A 超纯水（ 0． 1% 甲酸） ，B 乙腈； 梯度洗脱： 0 ～ 2 min，5% ～ 60% B； 2 ～ 4 min，60% ～ 70% B； 4 ～ 7 min，70% ～ 100% B； 7 ～ 8 min： 100% B。柱温： 30℃ ； 流速： 0． 5 mL / min，进样量 5 μL。 质谱条件： 电离源温度 120℃ ； 锥孔气为氮气，流速 50 L / h； 去溶剂气为氮气，温度 350 ℃ ，流速 700 L / h。正离子模式下毛细管电压为 3． 0 kV，锥孔电压为 30 V，提取锥孔电压为 5． 0 V； 负离子模式 下毛细管电压为 2． 0 kV，锥孔电压为 30 V，提取锥孔电压为 5． 0 V。甲酸钠建立质量轴标准曲线，亮 氨酸脑啡肽进行实时质量校正。串联质谱碰撞气为氩气，低碰撞能为 5 eV，高碰撞能为 25 ～ 35 eV。 为保证整个分析系统的稳定性，在本实验中使用质控样品（ Quality control，QC） 进行方法验证，QC 样品由每个正常样品各取 100μL 混合而得。为避免误差样品的检测顺序为随机进行。对样品进行分 析前，先运行 5 次 QC 样品，以起到平衡系统的作用。样品的检测过程中，每检测 5 个正常样品后运行 1 次 QC 样品以衡量系统的稳定性。 2． 5 数据处理 样本用 UPLC / Q-TOF-MS 进行检测，得到样品的总离子流色谱图，利用 MarkerLynx 对采集得到的 谱图进行离子对的提取、峰对齐、峰匹配和峰强度校正等操作，将结果转化为包含化合物的保留时间和 质荷比信息的 csv 格式文件。再将其导入 EZinfo 2． 0 统计软件进行分析。使用 HMDB （ http： / / www． hmdb． ca / ） 、METLIN （ http： / / metlin． scripps． edu / ） 等生物学数据库进行生物标志物的鉴定和代谢通路 的分析。
五味子不同提取成分对糖尿病小鼠血糖的影响
五味子不同提取成分对糖尿病小鼠血糖的影响马杰【摘要】目的：：研究五味子不同提取成分对糖尿病小鼠血糖的影响。
方法：选取五味子将其分为4份，分别经过水、乙酸乙酯、乙醇以及石油醚等4种不同溶剂，获得4种不同的提取成分，然后制作糖尿病小鼠模型。
将70只小鼠分为正常对照组(9只)和糖尿病小鼠模型组(61只)。
将建模成功的54只糖尿病小鼠模型随机分为糖尿病组、阳性对照组、水提取物组、乙酸乙酯提取物组、乙醇提取物组和石油醚提取物组，每组各9只。
将不同的提取物分别给糖尿病小鼠灌下，观察不同组糖尿病小鼠的体重、饮食、饮水变化，并及时的测定糖尿病小鼠体内血糖以及胰岛素的水平，并进行比较分析。
结果：这4种不同的提取物中，水提取物以及乙醇提取物可以明显降低小鼠的血糖，提高胰岛素的分泌水平；而乙酸乙酯提取物以及石油醚提取物改善糖尿病小鼠的效果不明显。
水提取物和乙醇提取物相比较，在改善糖尿病小鼠方面，乙醇组小鼠表现的更好一些，但是这两者之间的差异不明显。
结论：五味子不同提取成分对糖尿病小鼠血糖的影响具有差异性，水提取物以及乙醇提取物可明显的改善血糖变化，乙酸乙酯和石油醚的提取物对小鼠血糖的改善不明显。
【期刊名称】《中国民康医学》【年(卷),期】2016(028)003【总页数】2页(P71-72)【关键词】五味子;不同提取成分;糖尿病小鼠;血糖;影响研究【作者】马杰【作者单位】河南中医学院第一附属医院药学部，河南郑州 450000【正文语种】中文【中图分类】R-332【基础研究】五味子具有镇静、降酶的作用，在长期的研究过程中，人们发现五味子治疗糖尿病患者效果显著，可有效地降低血糖，在临床上得到了广泛的应用。
但是随着研究的进一步深入[1]，人们想进一步了解五味子中哪种提取物对糖尿病具有降低作用，从而以提高药品使用过程中的有效性，减少药品使用中患者不良反应的发生率。
本文主要对五味子不同提取成分对糖尿病小鼠血糖的影响情况进行研究，现就其中的主要内容报道如下：1.1 动物、试剂和仪器选取雄性昆明小鼠70只，平均体重(22.0±1.6)g。
五味子对糖尿病大鼠肾脏基质金属蛋白酶系统的影响
五味子对糖尿病大鼠肾脏基质金属蛋白酶系统的影响糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)是由糖尿病引起的一种较为常见的慢性并发症,可导致终末期肾病,是糖尿病中危害性最大的一种并发症。
DN时肾脏细胞外基质(extracellular matrixc,ECM)合成和降解失衡,导致ECM积聚,其主要与基质金属蛋白酶(Matrix metalloproteinases,MMPs)系统等有关。
五味子是木兰科植物五味子或华中五味子的干燥成熟果实,属传统中药,但关于其单味药以及提取物对DN的作用尚无人研究。
因此在本研究中,我们从多种机制研究了五味子提取物对DN大鼠的肾脏保护作用,分别检测了五味子提取物对DN大鼠的血糖水平、血脂代谢、氧化应激水平及肾功能变化等多方面的影响,并观察了五味子提取物对DN大鼠肾脏ECM成分(纤维连接蛋白FN、Ⅳ型胶原蛋白colⅣ)含量的影响,及MMP-2活性、TIMP-2表达情况,从基质降解的角度进行进一步的机制探讨,为五味子提取物治疗和改善DN提供理论基础。
利用大鼠单次腹腔注射STZ(55 mg/kg)复制糖尿病动物模型,造模成功的糖尿病大鼠随机分为正常对照组(Control)、模型组(DN)、五味子提取物组(Sch)和贝那普利阳性药组(Bena),并于12周后观察五味子提取物对DN大鼠各项指标的作用。
我们检测了各组大鼠常规血、尿生化指标,分别检测了血清、肾组织各项氧化应激水平;常规病理染色(HE、PAS)观察各组大鼠肾脏组织形态学改变;免疫组织化学法检测肾小球纤维连接蛋白(fibronectin,FN)、Ⅳ型胶原蛋白(CollagenⅣ,colⅣ)、TIMP-2在肾脏的表达;酶谱法检测MMP-2活性。
研究结果表明,模型组大鼠肾脏部分肾小球出现血管管腔塌陷、系膜区细胞数增加、系膜区扩大等病理学改变,在给予五味子提取物治疗后,大鼠组织形态学改变明显改善。
对血脂指标进行检测,模型组大鼠血T-CHO和LDL-C含量明显增多(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,五味子提取物治疗组LDL-C明显降低(P<0.05),T-CHO也有降低趋势。
五味子油对2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠的作用及机制
五味子油对2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠的作用及机制刘馨;刘学政【期刊名称】《中国生化药物杂志》【年(卷),期】2012(33)6【摘要】Purpose To explore the effect of Schisandrae chinenesis oil on insulin resistance of type 2 diabetes rats and its mechanism. Methods The high-fat diet combined with low-dose STZ at the ideal interval was used to establish the experimental rat model of type 2 diabetes. Rats were randomly divided into nomal group,model group,Schisandrae chinenesisoil 1 and 0. 5 mg/kg groups and rosiglitazone group. Fasting blood glucose(FBG) .fasting insulin( FINS) ,free fatty acids( FFA) and leptin were measured after 6 weeks,and the insulin resistance index( HOMA-IR) was caculated. Results Schisandrae chinenesis oil could obviously decrease FBG,FINS,leptin and HOMA-IR. Conclusion Schisandrae chinenesis oil could decrease the level of leptin,and improve insulin resistance. The function of improving insulin resistance of Schisandrae chinenesis oil is associatedwith the leptin in type 2 diabetes rats.%目的探讨五味子油对2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗的作用及其机制.方法高脂饲料联合小剂量链脲佐菌素(STZ)诱导建立2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗模型.将SD大鼠随机分为正常组,模型组,五味子油高剂量(1mg/kg)、低剂量(0.5 mg/kg)组,罗格列酮组.连续灌胃6周,测定空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、游离脂肪酸(FFA)、血清中瘦素的水平,并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR).结果五味子油可降低FBG、FINS、FFA的水平,抑制瘦素的表达,降低HOMA-IR.结论五味子油改善2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗的作用可能与瘦素有关.【总页数】3页(P800-802)【作者】刘馨;刘学政【作者单位】辽宁中医药大学,辽宁沈阳110033;辽宁医学院附属第一医院,辽宁锦州121001;辽宁医学院,辽宁锦州121001【正文语种】中文【中图分类】R285.5【相关文献】1.泽泻多糖对2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗及脂代谢紊乱的改善作用及机制研究 [J], 张明丽;陈吉全;周新强2.玉米油对2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗的作用研究 [J], 白艳香;刘馨3.五味子油对2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗的影响 [J], 刘馨;刘学政;李香华4.五味子油对2型糖尿病大鼠胰岛B细胞凋亡的影响 [J], 安丽萍;杜培革;孙志伟;王英平;王春梅;金明华;刘晓梅;詹巾卓;孙汇;李娜;王拓5.五味子多糖对2型糖尿病大鼠血清中炎症因子的影响及其作用机制 [J], 杜兴旭; 乔子敬; 杨硕; 许智莹; 杨波; 李贺; 陈建光; 王春梅因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
五味子合剂对糖尿病肾病小鼠肾组织MCP1及iNOS表达的影响
五味子合剂对糖尿病肾病小鼠肾组织MCP-1及iNOS表达的影响赵君张勉之△谭小月摘要目的：观察五味子合剂(SM)对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病肾病(DN)小鼠肾组织MCP-1及iNOS表达水平的影响。
方法：雄性C57BL/6 小鼠24 只随机分正常对照组、DN模型组和SM治疗组，采用腹腔注射STZ 法建立DN模型，收集各组血、尿及肾组织，检测血糖、体质量及尿白蛋白肌酐比值(UACR)，光镜观察肾组织形态改变；免疫组化法检测各组肾组织MCP-1及iNOS的表达；RT-PCR 检测各组肾组织单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA水平。
结果：与模型组比较，SM治疗组血糖及UACR降低；小球系膜区、小管间质区细胞外基质堆积减少。
SM能下调肾组织中MCP-1及iNOS 的蛋白和mRNA表达水平(P<。
结论：SRC可以通过下调MCP-1及iNOS的表达以减轻肾组织内的炎症反应，从而减轻DN小鼠的肾脏损伤。
关键词五味子科糖尿病肾病单核细胞趋化蛋白-1 诱导型一氧化氮合酶小鼠近交C57BLEffect of Schisandra Chinensis Mixture on Expression of MCP-1 and iNOS in Renal Tissues of Mice withDiabetic NephropathyZHAO Jun,TAN Xiaoyue,ZHANG MianzhiTianjin Medical University,Tianjin300070,ChinaAbstract Objective:To investigate the effect of schisandra chinensis on the expression of MCP-1 and iNOS in renal tissue of mice with Diabetic Nephropathy induced by streptozotocin(STZ). Methods:Twenty-four male C57BL/6 mice were randomly divided into three groups:normal control group,diabetic model group and SM-treated mouse model of diabetes was induced by STZ serum level of glucose,body weight and urinary albumin creatinine ratio(UACR) were measured. Furthermore,the morphological changes of renal tissue were observed under expression of mRNA in kidney tissues were determined by RT-PCRl protein expression in kidney tissues were determined by immunohistochemical method. Results:Compared with the diabetic model group,there were significantly lower level of serum glucose and UACR in SM-treated group,SM could also reduce the extracellular matrin accumulation in glomerular mesangial region and renal tubule and interstitial area. There were lower protein and mRNA expression of MCP-1 and iNOS in SM group.,too(P<.Conclusion:After treatment of SM, the expression of MCP-1 and iNOS were decreased, which may reduce renal inflammation and relieve renal injury.Key words schisandraceae diabetic nephropathies MCP-1 iNOS mice C57BL糖尿病肾病(diabetic nephropathy ,DN)是世界范围内终末期肾病(end-stagerenal disease,ESRD)的最主要原因之一。
糖尿病与五味子
糖尿病与五味子北五味子为木兰科植物，五味子的干燥成熟果实，具有敛肺滋肾、生津敛汗、涩精止泻、宁心安神等功效。
研究表明，五味子有效成分主要包括木脂素、多糖、挥发油、有机酸、脂肪油、氨基酸、色素、鞣质等，其中，多种化合物显示出改善胰岛素抵抗、抗炎、抗氧化、清除自由基、抑制细胞凋亡、保护血管等作用，在糖尿病及其并发症的治疗中发挥了显著优势。
五味子降糖机制研究表明，五味子油可以改善2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗，改善β细胞的功能缺陷，提高胰岛素的分泌量，增加胰岛素和胰十二指肠同源盒因子基因的表达，从而发挥降血糖作用。
五味子多糖可控制糖尿病小鼠体重减轻、多饮和血糖升高的症状，能显著促进肝糖原的合成，抑制肝糖原分解而发挥降糖作用，且对糖尿病所引起的脂代谢异常也具有改善作用。
五味子与糖尿病并发症糖尿病并发症的发生严重影响患者的生活质量，是导致患者病情恶化与死亡的关键因素，因此改善糖尿病并发症在糖尿病的治疗过程中十分重要。
五味子活性成分如五味子醇甲、五味子乙素等在糖尿病并发症的治疗方面发挥了重要作用。
1、五味子对糖尿病肾病的作用研究发现，五味子乙素可能通过抑制肾脏炎症通路的活化，降低细胞因子和炎症介质的产生，保护肾脏，进而发挥对糖尿病肾病的治疗作用。
五味子醇甲通过增加一氧化氮合酶的表达，以缓解高血糖所致的糖尿病肾病。
五味子素通过显著抑制高糖诱导的细胞内活性氧的增加及鼠系膜细胞的增殖，抑制蛋白质合成和细胞外基质蛋白质的积累，进而改善糖尿病肾病的进展。
2、五味子对糖尿病视网膜病变的作用五味子乙素通过上调血红素加氧酶的表达进而抑制新生血管形成、抑制炎症反应及氧化损伤以预防视网膜病变。
五味子醇甲具有增加一氧化氮合酶表达的作用，提示其在糖尿病视网膜病变的治疗中，有着重要的潜在应用价值。
3、五味子对糖尿病心脑血管病的作用五味子醇甲可剂量依赖性地抑制血管平滑肌细胞的增殖，促进血管平滑肌细胞的凋亡，从而改善糖尿病动脉粥样硬化。
糖尿病的发病机制十分复杂，且伴随多种并发症，五味子活性成分在糖尿病及其并发症的治疗作用及机制仍未完全阐明，需要更加全面和深入的研究。
五味子乙素对肝肾综合征大鼠的保护作用及其机制研究
五味子乙素对肝肾综合征大鼠的保护作用及其机制研究易国栋;谭静【期刊名称】《医学研究杂志》【年(卷),期】2018(047)009【摘要】目的研究五味子乙素对肝肾综合征大鼠的保护作用,并对其作用机制进行初步探讨.方法采用胆总管结扎诱导肝肾综合征大鼠模型,将大鼠随机分为5组:对照组,模型组,低、中、高剂量组(15、30、60mg/kg);测定大鼠血中ALT、TBL、CRE、UREA、尿量、肌酐清除率、内毒素、NO、ET及ATⅡ水平,并采用RT-PCR法对肝肾组织中GRP78/94及TLR4 mRNA表达水平进行分析.结果五味子乙素可改善肝肾综合征模型大鼠的肝肾功能,血中ALT、TBL、CRE、UREA降低,尿量及肌酐清除率增加;还发现血清内毒素及NO含量也显著降低;五味子乙素还可以诱导肝肾组织中GRP78/94的表达,抑制TLR4的表达.结论五味子乙素能够改善肝肾综合征大鼠的肝肾功能,其作用机制可能与肝肾组织中GRP78/94及TLR4基因表达水平相关.【总页数】4页(P172-175)【作者】易国栋;谭静【作者单位】445000 恩施土家族苗族自治州中心医院消化内科;445000 恩施土家族苗族自治州中心医院肾病风湿科【正文语种】中文【中图分类】R5【相关文献】1.北五味子乙素对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用 [J], 孙红霞;陈建光2.五味子乙素对链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠视网膜病变的保护作用及机制研究[J], 刘青3.基于HMGB1/TLR4信号通路评价五味子乙素对2型糖尿病肾病大鼠肾脏功能的保护作用 [J], 熊刚;邹华;胡承莲;吴丹;邓贵柳4.五味子乙素通过Nrf2/ARE信号通路对肾病综合征大鼠的保护作用 [J], 陈振羽5.五味子乙素通过Nrf2/ARE信号通路对肾病综合征大鼠的保护作用 [J], 陈振羽因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
复方五味子醇提液对糖尿病肾病的治疗作用及机制
复方五味子醇提液对糖尿病肾病的治疗作用及机制刘苗;张勉之;谭小月;袁沙沙【期刊名称】《天津医药》【年(卷),期】2011(39)6【摘要】目的:探讨复方五味子醇提液(SRC)对链脲佐菌素(STZ)诱导的小鼠糖尿病肾病(DN)的治疗作用及可能机制.方法:雄性C57BL/6小鼠24只随机分正常对照组、DN模型组和SRC治疗组,采用腹腔注射STZ法建立DN模型,收集各组血、尿及肾组织,检测血糖、体质量及18 h尿白蛋白排泄率(UAER),Western blotting检测各组肾组织E-钙黏蛋白(E-cadhenn)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和纤溶酶原活化抑制因子-1(PAI-1)水平;免疫组化检测各组肾组织纤黏蛋白(FN)和α-SMA的表达;光镜观察肾组织形态改变.结果:与模型组比较,SRC治疗组的右肾质量和UAER较低;SRC能上调E-cadherin,下调α-SMA和PAI-1的表达(P<0.05);抑制小管间质区FN、α-SMA表达;改善小管管腔扩张或小管萎缩,减轻间质区细胞外基质堆积.结论:SRC能显著改善C57BL/6小鼠的DN,阻抑肾小管上皮细胞一间充质转化(EMT)及PAI-1表达是其作用机制.%Objective: To explore effects of ethanol extract of schisandra chinensis thizoma chuanxiong common oyster shell (SRC) on nephropathy of diahetic mouse induced by streptozotocin (STZ), and the possible mechanisms thereof. Methods: Twenty-four maleC57BL/6 mice were randomly divided into 3 groups : normal controlgroup , diabetic model group and SRC-treated group. The mouse modelof diabetes was induced by injection of STZ intraperitoneally. The serum level of glucose, body weight and urinary albumin excretion rate (UAER)were measured. Furthermore , the protein expression of E-cadherin, α-smooth muscle actin (α-SMA) and plasminogen activator inhibitor-1(PAI-1) in kidney tissues were determined by Western blotting. The expressions of fibronectin (FN) and α-SMA in kidney tissues were determined by immunohistochemical method. The morphological changes of renal tissue were observed under microscope. Results: Compared with the diahetic model group, there were significantly lower urine albumin excretion rate, right kidney weight and UAER in SRC group, and up-regulated expression of E-cadherin, down-regulations of α-SMA and PAI-1 as well(P＜ 0.05). Also, there were an inhibited expression of FN and α-SMA in tubulointerstitial area, ameliorated tubule extension or atrophy and reduced extracellular matrix accumulation in interstitial. Conclusion : SRC can ameliorate the renal fibrosis with the mechanism of suppressing epithelial- mesenchymal transition (EMT) and the protein expression of PAI-1.【总页数】4页(P557-559,后插4)【作者】刘苗;张勉之;谭小月;袁沙沙【作者单位】300070,天津医科大学;天津市公安医院肾内科;南开大学医学院;300070,天津医科大学【正文语种】中文【相关文献】1.五味子纳米醇提液对衰老小鼠脑神经细胞DNA损伤的保护作用 [J], 张涛;蔡克瑞;王明富;田丽华;杨晶2.复方参芪五味咀嚼片制备中五味子与人参的醇提工艺 [J], 孙学惠;史国兵;何静;赵明宏;李文韬3.五味子醇提液对半乳糖致衰小鼠脑神经细胞保护作用的研究 [J], 蔡克瑞;张涛;金华4.五味子醇提液对阿霉素损伤足细胞中nephrin和desmin表达的影响 [J], 艾辰;谭小月;张勉之;张大宁5.南北五味子醇提液的荧光光谱鉴别 [J], 杨孝容;向清祥;熊俊如;陈刚因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
五味子对大鼠肝CYP3A酶抑制和诱导双重作用机制的探讨的开题报告
五味子对大鼠肝CYP3A酶抑制和诱导双重作用机制的探讨的开题报告1. 研究背景和意义五味子是一种传统中药，被广泛用于治疗各种疾病，包括呼吸道疾病、心血管疾病和神经系统疾病。
五味子也被发现具有抗氧化、抗炎和抗肿瘤等作用。
然而，五味子对肝酶代谢的影响仍不清楚。
肝脏细胞中的细胞色素P450酶（CYP450）对药物代谢和解毒有重要作用。
其中CYP3A家族酶是最常见和最重要的一类酶，参与代谢和清除很多药物。
因此，了解五味子对CYP3A酶的效应可有助于理解其药物相互作用及与药物代谢有关的不良反应。
2. 研究目的本研究旨在探讨五味子对大鼠肝CYP3A酶的双重作用机制，即抑制和诱导作用，并分析其可能的作用机理。
3. 研究方法（1）动物模型：采用雄性Sprague Dawley（SD）大鼠作为研究对象。
（2）实验设计：将大鼠随机分为对照组、五味子低剂量组、五味子中剂量组和五味子高剂量组。
每组12只大鼠，给予不同剂量的五味子提取物（分别为0、50、100和200 mg/kg）经口灌胃，每日一次，连续14天。
对照组给予等量蒸馏水。
（3）样品处理：在使用五味子提取物之前和给药后的第7天和第14天，观察大鼠体重、肝脏重量和血清生化指标。
随后，收集肝脏组织采用同位素标记技术测定大鼠肝CYP3A酶的活性，并利用Western blot 分析CYP3A酶的蛋白质水平。
（4）数据分析：采用SPSS 19.0软件进行数据处理和统计分析，并使用方差分析（ANOVA）方法进行比较。
4. 预期结果和意义本研究预计发现，五味子提取物在不同剂量下会对大鼠肝CYP3A酶的活性和蛋白质水平产生明显影响。
具体来说，低、中剂量的五味子可能会诱导CYP3A酶的表达和活性，而高剂量的五味子可能会抑制CYP3A 酶。
另外，我们也将探讨可能的作用机制，例如对转录因子的影响和代谢途径改变等。
这些结果将为我们更好地理解五味子的药物相互作用和毒副作用提供新的依据。
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檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵殝殝殝殝研究报告DOI ：10．11895/j．issn．0253-3820．140564五味子治疗大鼠糖尿病肾病作用机制的血清代谢组学研究皮子凤1门丽慧2张静2周园2宋凤瑞1刘志强*11（中国科学院长春应用化学研究所国家质谱中心（长春）吉林省中药化学与质谱重点实验室，长春130022）2（吉林大学药学院，长春130021）摘要采用基于超高效液相色谱与串联四级杆飞行时间质谱仪（Ultra-performance liquid chromatography coupled with quadrupole time-of-flight mass spectrometry ，UPLC /Q-TOF-MS ）联用技术的代谢组学方法，通过分析大鼠血清内源性代谢物的变化，研究五味子治疗糖尿病肾病的作用机制。
利用高脂高糖饲料喂养并腹腔注射链脲佐菌素（STZ ）建立糖尿病大鼠模型。
给药12周后，采用试剂盒方法测定尿蛋白、尿肌酐的含量，结果表明五味子水提取物可以显著降低模型动物的尿蛋白含量（p ＜0．05），对糖尿病大鼠肾病并发症具有一定的改善作用。
采用UPLC /Q-TOF-MS 方法分析了五味子对糖尿病肾病大鼠的血清代谢轮廓，分析了健康组、模型组和五味子给药组的大鼠血清，采用偏最小二乘法-判别分析（Partial least squares discriminant analysis ，PLS-DA ）进行数据分析。
PLS-DA 得分图显示健康组、模型组和五味子组的代谢轮廓有显著差别，根据正交偏最小二乘法-判别分析（Orthogonal partial least squares discriminant analysis ，OPLS-DA ）载荷图筛选，将对各组分离贡献大的化合物的串联质谱分析数据，经Human Metabolome Database （HMDB ）等数据库检索，进行质谱信息匹配，鉴定出黄尿酸、油酰胺、棕榈酰胺、尿酸、5-羟基己酸、硫酸对甲酚、对甲酚葡萄糖苷酸7种内源性代谢物为生物标记物。
研究结果表明五味子通过影响色氨酸代谢、嘌呤代谢、肠内菌代谢、脂肪酸代谢等通路对糖尿病肾病发挥治疗作用，其中嘌呤代谢、肠内菌代谢通路可能是五味子发挥治疗作用的重要途径。
关键词五味子；糖尿病肾病；血清；代谢组学2014-07-02收稿；2014-08-28接受本文系国家自然科学基金（No．81373952）资助*E-mail ：liuzq@ciac．ac．cn1引言北五味子为木兰科植物五味子（Schisandra chinensis （Turcz．）Baill．）的干燥成熟果实，具有敛肺滋肾、生津敛汗、涩精止泻、宁心安神等功效［1］。
研究表明，五味子有效成分主要包括木脂素、多糖、挥发油、有机酸、脂肪油、氨基酸、色素、鞣质等，药理作用涉及中枢神经系统、心血管系统、消化系统、生殖系统以及泌尿系统等各个方面。
研究表明，五味子油可以改善STZ 联合高脂饮食诱导的Ⅱ型糖尿病大鼠胰岛素抵抗，改善β细胞的功能缺陷，提高胰岛素的分泌量，增加胰岛素和胰十二指肠同源盒因子基因的表达，从而发挥降血糖作用［2］。
五味子多糖可控制糖尿病小鼠体重减轻、多饮和血糖升高的症状［3］，能显著促进肝糖原的合成，抑制肝糖原分解而发挥降糖作用，且对糖尿病所引起的脂代谢异常也具有改善作用。
五味子抗炎、抗氧化、清除氧自由基、增加周围组织对葡萄糖的摄取等药理活性在糖尿病肾病治疗中效果明显［4，5］。
五味子醇提液能显著改善C57BL /614小鼠的糖尿病肾病，阻抑肾小管上皮细胞-间充质转化及纤溶酶原活化抑制因子-1表达是其作用机制［6］。
目前，文献报道的五味子治疗糖尿病作用机制的研究，大多数是从药理作用以及分子角度进行的。
近年来，越来越多的研究采用代谢组学方法考察中药治疗糖尿病机制［7 9］，但尚无从五味子整体作用角度对其治疗糖尿病肾病的作用机制进行研究的报道。
本研究采用代谢组学方法，基于UPLC /Q-TOF-MS 技术，对五味子治疗前后糖尿病肾病大鼠血清中内源性代谢物进行了分析鉴定，从中药作用的整体性角度，初步阐明了五味子治疗糖尿病肾病的作用机制。
第43卷2015年2月分析化学（FENXI HUAXUE ）研究报告Chinese Journal of Analytical Chemistry第2期169 175071分析化学第43卷2实验部分2．1仪器与试剂WatersAcquity UPLC液相色谱系统、Q-TOF SYNAPT G2HDMS质谱仪和Waters ACQUITY UPLC BEH C色谱柱（50mmˑ2．1mm，1．7μm）。
18五味子购自北京同仁堂药店；链脲佐菌素（STZ，Sigma公司）；乙腈和甲酸（色谱纯，美国Fisher公司）；水经Millipore制得。
SD大鼠购自吉林大学白求恩医学院动物实验中心，实验动物许可证：SCXK （吉）2013-0001。
尿蛋白试剂盒、尿肌酐试剂盒购自南京建成生物工程研究所（批号20140515，20140506）。
2．2动物实验正常对照组（Control group）：给予8只SD雄性大鼠标准饲料，正常喂养。
Ⅱ型糖尿病大鼠造模参照文献［7］进行。
16只糖尿病大鼠随机分为两组：模型组（Model group）和五味子组（WWZ group）。
五味子组每日灌胃五味子水提液，剂量为每kg体重5g生药，模型组和空白组灌胃蒸馏水。
连续给药12星期后，收集24h尿液，按照试剂盒方法测定尿蛋白、尿肌酐含量。
末次给药24h后，动物断头处死，取血，3000r/min离心，收集空白对照组、模型组和五味子组的血清，!80ħ储存备用。
2．3样品收集和制备五味子水提物制备：药材粉碎后称取适量，加10倍体积水浸泡20min，加热回流提取两次，每次45min，合并提取液，浓缩后冻干，阴凉干燥处储存备用。
样品检测前，4ħ融化血清样品，在100μL血清样品中加入400μL无水乙腈，剧烈振荡30s，室温静置10min，样品在4ħ条件下，12000r/min离心10min，上清液用0．22μm滤膜过滤，滤液供UPLC/MS测定。
2．4色谱质谱条件及样品分析色谱条件：A超纯水（0．1%甲酸），B乙腈；梯度洗脱：0 2min，5% 60%B；2 4min，60% 70%B；4 7min，70% 100%B；7 8min：100%B。
柱温：30ħ；流速：0．5mL/min，进样量5μL。
质谱条件：电离源温度120ħ；锥孔气为氮气，流速50L/h；去溶剂气为氮气，温度350ħ，流速700L/h。
正离子模式下毛细管电压为3．0kV，锥孔电压为30V，提取锥孔电压为5．0V；负离子模式下毛细管电压为2．0kV，锥孔电压为30V，提取锥孔电压为5．0V。
甲酸钠建立质量轴标准曲线，亮氨酸脑啡肽进行实时质量校正。
串联质谱碰撞气为氩气，低碰撞能为5eV，高碰撞能为25 35eV。
为保证整个分析系统的稳定性，在本实验中使用质控样品（Quality control，QC）进行方法验证，QC 样品由每个正常样品各取100μL混合而得。
为避免误差样品的检测顺序为随机进行。
对样品进行分析前，先运行5次QC样品，以起到平衡系统的作用。
样品的检测过程中，每检测5个正常样品后运行1次QC样品以衡量系统的稳定性。
2．5数据处理样本用UPLC/Q-TOF-MS进行检测，得到样品的总离子流色谱图，利用MarkerLynx对采集得到的谱图进行离子对的提取、峰对齐、峰匹配和峰强度校正等操作，将结果转化为包含化合物的保留时间和质荷比信息的csv格式文件。
再将其导入EZinfo2．0统计软件进行分析。
使用HMDB（http：//www．hmdb．ca/）、METLIN（http：//metlin．scripps．edu/）等生物学数据库进行生物标志物的鉴定和代谢通路的分析。
3结果与讨论3．1五味子对糖尿病肾病大鼠尿肌酐、尿蛋白含量的影响糖尿病肾病早期，肾小球基底膜受损，过滤能力下降，会出现尿蛋白增加、尿肌酐含量减少的状况。
实验结果表明（表1），大鼠经糖尿病造模后12周，尿液中蛋白数量显著增加（p＜0．05）、尿肌酐水平显著下降（p ＜0．01），说明糖尿病模型大鼠发生了肾病并发症，肾小球滤过能力下降。
经五味子治疗后，尿蛋白排泄水平明显低于模型组（p ＜0．05），尿肌酐水平显著增加（p ＜0．05），表明五味子对糖尿病肾病具有一定的治疗作用。
表1五味子对糖尿病肾病大鼠尿肌酐、尿蛋白含量的影响Table 1Effect of Schisandra chinensis （WWZ ）on the contents of creatinine and protein in urine of rat diabetic nephropathy组别Group剂量Dose （g /kg ）尿蛋白Urine protein （g /L ）尿肌酐Urine creatinine （μmol /L ）空白组Control group －206．64ʃ28．97＊＊4449．26ʃ1810．98＊＊模型组Model group －403．08ʃ77．181328．16ʃ437．22五味子组WWZ group5256．88ʃ79．47*2677．53ʃ303．04*与模型组相比（vs model group ），*p ＜0．05，＊＊p ＜0．01．3．2五味子治疗糖尿病肾病的血清代谢组学研究3．2．1血清代谢轮廓分析采用UPLC /Q-TOF-MS 进行样本的分离和数据采集，图1为正、负离子模式下各组典型的总离子流基峰强度色谱图（Base peak intensity chromatogram ，BPI ）。
从图1可见，空白对照组、模型组和五味子治疗组大鼠血清代谢物具有明显的差异。
图1空白组（A ）、模型组（B ）和五味子组（C ）大鼠血清在正离子模式（1）和负离子模式（2）下的基峰强度色谱图（BPI ）Fig．1Typical serumal base peak intensity chromatograms in positive （1）and negative （2）ion mode of differentgroup （control group （A ），model group （B ）and WWZ group （C ））由空白对照组、模型组和五味子组的偏最小二乘法判别分析法（PLS-DA ）得分图（图2）可以看出，在正谱或负谱中，3组均能明显分开，其中正离子模式下模型的评价指标为Ｒ2X =0．9986，Q2=0．8675，负离子模式下模型的评价指标为Ｒ2X =0．9943，Q2=0．9026。