苯并噻唑衍生物BD759抗T细胞增殖的机制研究
苯并[a]芘对生殖系统的毒性作用及其机制研究进展
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生态毒理学报Asian Journal of Ecotoxicology第19卷第2期2024年4月V ol.19,No.2Apr.2024㊀㊀基金项目:国家自然科学基金项目(31960154);中央引导地方科技发展资金项目(2023ZY0004);内蒙古自治区 草原英才 工程青年创新创业人才项目(Q2022085);内蒙古自治区高等学校科学研究项目(NJZZ23017);内蒙古自治区自然科学基金项目(2023QN03047);内蒙古医科大学面上项目(YKD2022MS033)㊀㊀第一作者:王惠增(1997 ),女,硕士研究生,研究方向为生殖毒理㊁分子诊断,E -mail:******************* ㊀㊀*通信作者(Corresponding author ),E -mail:*********************.cnDOI:10.7524/AJE.1673-5897.20230413002王惠增,刘秉春,陈红,等.苯并[a]芘对生殖系统的毒性作用及其机制研究进展[J].生态毒理学报,2024,19(2):165-183Wang H Z,Liu B C,Chen H,et al.Research progress on toxic effects of benzo(a)pyrene on reproductive system and its mechanism [J].Asian Journal of Ecotoxicology,2024,19(2):165-183(in Chinese)苯并[a ]芘对生殖系统的毒性作用及其机制研究进展王惠增1,刘秉春2,陈红1,徐沛欣1,郭鑫1,袁建龙1,*1.内蒙古医科大学附属医院检验科,呼和浩特0100502.内蒙古医科大学附属医院干细胞实验室/内蒙古自治区肿瘤细胞基因检测应用与研究工程实验室,呼和浩特010050收稿日期:2023-04-13㊀㊀录用日期:2023-11-02摘要:苯并[a]芘(benzo(a)pyrene,BaP)作为多环芳烃(polycyclic aromatic hydrocarbons,PAHs)的成员,是最早发现也是最具有代表性的环境污染物,通过空气㊁食物㊁水源等途径进入人体,引起细胞氧化应激损伤㊁DNA 损伤和基因异常表达导致细胞死亡㊂研究表明雄性与雌性动物经BaP 染毒后,其生殖器官㊁生殖细胞甚至激素水平均会受到影响,进而影响受精卵形成和胚胎发育,造成不良妊娠结局㊂因此,近年来BaP 的生殖毒性受到广泛关注,其作用机制包括改变胞内活性氧水平㊁诱导细胞DNA 损伤以及调控生殖发育相关基因㊁类固醇合成相关基因和促凋亡基因影响生殖发育㊂BaP 作为环境毒物,不仅可以影响生态环境的稳定性,还可以影响生物的生殖发育,损害生态环境中的物种多样性,从长远来看,BaP 的不良影响不但会威胁到陆地与海洋生物种群的稳定,还会破坏陆地和海洋生态系统的功能㊂本文将从生殖健康㊁配子与合子形成以及胚胎发育的角度,详细阐述BaP 染毒对生殖系统的毒性作用与机制,为预防BaP 引起的生殖危害㊁减少不良妊娠结局提供理论依据,旨在为BaP 的环境毒性行为和对生物的毒性研究提供有效借鉴,为合理预防和缓解因接触BaP 等环境毒物而带来的健康影响提供参考㊂关键词:苯并[a]芘(BaP);生殖细胞;生殖毒性;生殖器官;激素;细胞毒性文章编号:1673-5897(2024)2-165-19㊀㊀中图分类号:X171.5㊀㊀文献标识码:AResearch Progress on Toxic Effects of Benzo (a )pyrene on Reproductive System and Its MechanismWang Huizeng 1,Liu Bingchun 2,Chen Hong 1,Xu Peixin 1,Guo Xin 1,Yuan Jianlong 1,*1.Department of Laboratory Medicine,The Affiliated Hospital of Inner Mongolia Medical University,Hohhot 010050,China2.Stem Cell Research Center,The Affiliated Hospital of Inner Mongolia Medical University/Inner Mongolia Autonomous Region Tumor Cell Gene Detection Application and Research Engineering Laboratory,Hohhot 010050,ChinaReceived 13April 2023㊀㊀accepted 2November 2023Abstract :Benzo(a)pyrene (BaP),as a member of the polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs),is the earliest dis -covered and most representative environmental pollutant.It enters the human body through the air,food,and water,causing cellular oxidative stress damage,DNA damage,and abnormal gene expression,leading to cell death.Studies have shown that when male and female animals are exposed to BaP,their reproductive organs,cells,and hormone166㊀生态毒理学报第19卷levels are affected,which in turn will affect the formation of fertilized eggs and embryonic development,resulting in adverse pregnancy outcomes.Hence,the reproductive toxicity of BaP has received more attention in recent years.Its mechanism of action on reproductive development includes alteration of intracellular reactive oxygen species levels,induction of cellular DNA damage,and modulation of genetic changes related to reproductive development,steroid synthesis and pro-apoptosis.BaP,as an environmental toxicant,could influence the stability of the ecological environment,the reproductive development of organisms and destroy the diversity of species in the ecosystems.In this review,we will detailly elaborate on the toxic effects and mechanisms of BaP on the reproductive system,and provide a theoretical evidence for prevention reproductive harm caused by BaP and the reduction of adverse pregnancy outcomes,with the aim to providing an effective reference for the study of BaP s toxicity to the environment and organisms,and for the rational prevention and mitigation of the health effects of exposure to BaP or other environmental toxins.Keywords:benzo(a)pyrene;germ cell;reproductive toxicity;genital organ;hormone;cytotoxicity㊀㊀PAHs是由2个或2个以上的稠环芳烃组成的有机化合物[1],由于其化学性质稳定且具有疏水性[2],因此多环芳烃可以在环境中稳定存在,是常见的环境污染物,广泛存在于油炸烧烤食物㊁香烟烟雾[3]㊁汽车尾气[4]㊁煤炭燃烧[5]等中㊂人类可以通过空气㊁饮用水㊁食物等不同方式暴露于多环芳烃[6]㊂此外,多环芳烃的亲脂性有利于它们在水生生物的脂肪中积累[7],并随着食物链进入人体,对人类健康产生威胁㊂BaP是多环芳烃中最具有代表性也是毒性最大的致癌物[8],可以诱发肺癌[9]㊁乳腺癌[10]等癌症,危害人类健康㊂BaP广泛存在于人类生活环境中,2019年公布的美国毒物和疾病登记机构物质优先清单中,BaP被列为第8名,在污染的空气[11]㊁土壤[12]㊁水源[13]㊁食物[14]中均可以检测到BaP㊂近年来,越来越多研究表明BaP与胚胎畸形[15]和不良妊娠[16]有着密切的联系㊂在妊娠早期暴露于BaP会导致小鼠胎儿畸形率增高[17]㊂此外,一项病例对照研究表明,接触BaP与早孕流产之间存在联系,妊娠女性发生流产的风险与血中BaP-DNA加合物的浓度成正比,这进一步说明BaP除了致癌性也具有生殖毒性㊂目前对于BaP的研究多聚焦于其诱发癌症[18-19]尤其是肺癌[20]这一方面,虽有研究表明BaP 具有生殖毒性,其生殖毒性机理尚未研究透彻㊂本综述的目的是总结BaP生殖毒性相关文章,讨论BaP导致生殖毒性的潜在分子机制㊂1㊀BaP在生殖方面的主要致毒途径(The main toxic pathway of BaP in reproduction)近些年研究发现,BaP发挥其致毒作用主要有3种途径:(1)通过氧化应激影响细胞正常代谢;(2)BaP可以与DNA形成加合物,进而导致DNA损伤;(3)BaP可以通过调控基因表达,发挥其毒性作用㊂BaP致毒途径是多种机制相辅相成㊂由于生殖对繁育后代具有重要意义,因此研究BaP的生殖毒性已成为科学家们的研究重点,下文将重点总结BaP的生殖毒性机制㊂1.1㊀氧化应激(Oxidative stress)BaP进入细胞后,通过AHR途径诱导细胞发生氧化应激反应,其主要过程为:BaP刺激细胞质中的一种转录因子 芳香族化合物受体(aryl hydrocar-bon receptor,AHR)[21],使其转入到细胞核后,再与芳香族化合物受体核转运蛋白(aryl hydrocarbon recep-tor nuclear transporter,ARNT)结合形成异二聚体[22],结合在下游靶基因上,激活细胞色素P450目标基因的异常表达,包括细胞色素P4501A1(cytochrome P450family1subfamily A member1,CYP1A1)㊁细胞色素P4501A1(cytochrome P450family1subfamily A member2,CYP1A2)㊁细胞色素P4501B1(cyto-chrome P450family1subfamily B member1, CYP1B1)[21,23],进而引起细胞产生大量活性氧(reac-tive oxygen species,ROS),使机体发生氧化应激反应,如果体内的活性氧产生过多,超出了细胞的清除能力,会影响细胞的正常代谢甚至会破坏细胞结构㊂低㊁高剂量的BaP均可导致小鼠卵母细胞功能障碍,降低精卵结合与融合率,这与线粒体ROS水平增加和卵膜脂质过氧化密切相关[24]㊂Zhang等[25]发现BaP可以削弱雌鼠的繁殖能力,通过增加雌鼠卵母细胞中ROS,扰乱纺锤体组装,染色体配对,阻滞卵母细胞减数分裂过程㊂BaP诱导的氧化应激不仅仅通过产生ROS这一条途径,还可以通过降低过氧第2期王惠增等:苯并[a]芘对生殖系统的毒性作用及其机制研究进展167㊀化氢酶(catalase,CAT)㊁抗坏血酸过氧化物酶(ascor-bate peroxidase,AP)㊁谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GPX)㊁超氧化物歧化酶(superoxide dis-mutase,SOD)㊁谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase, GR)等抗氧化酶的活性[26-27]以及促进炎症细胞因子表达[28]导致氧化应激的发生,最终引起细胞功能受损㊂1.2㊀BPDE引起DNA损伤(BPDE induces DNA damage)BaP进入体内经过一系列氧化代谢反应,生成二羟环氧苯并[a]芘(BaP-7,8-dihydrodiol-9,10-epoxide, BPDE),进而发挥其毒性,Penning[29]认为生成BPDE 的主要途径是在细胞色素P450酶的催化下,BaP末端的苯环上发生单加氧化反应,生成BaP-7,8-环氧化物(BaP-7,8epoxide),在环氧化物水解酶作用下转化为BaP-7,8-二氢二醇(BaP-7,8diol),该过程循环往复最终形成致癌物 BPDE[30-32]㊂BPDE可以与DNA共价结合形成加合物,造成DNA损伤㊂Shiizaki等[33]提出一个关于BaP-DNA加合物成因的假设,即CYP1A1是BaP被激活形成BPDE反应中的关键酶,这与Bukowska等[32]提出的观点一致㊂Einaudi等[34]通过建立BaP染毒的雌性小鼠模型,发现BaP可以导致卵母细胞与卵丘细胞DNA损伤,并且他们认为导致DNA断裂的主要原因是由于细胞中的修复机制对BPDE-DNA加合物切除和修复导致的㊂Zhan等[35]研究表明BaP形成的DNA加合物可以干扰DNA复制,进一步引起胚胎的DNA损伤,影响胚胎的发育㊂Zhan等[35]进一步研究发现DNA加合物与ROS共同造成基因组严重损伤,还可以引起卵裂球的端粒功能障碍,最终引起胚胎的异常㊂Miao等[36]发现BaP会引起猪卵母细胞纺锤体组装缺陷进一步引起减数分裂停滞,而导致这一结果的原因可能是DNA加合物引起的㊂Zhang 等[25]将小鼠卵母细胞暴露于BaP后,发现纺锤体的组装㊁染色体的排列和着丝点-微管附着均被破坏,这可能与DNA加合物的形成有关联,与Miao的设想一致㊂1.3㊀基因表达调控(Regulation of gene expression)基因表达调控是生物学研究的重要内容之一,在细胞分化发育的不同时期,基因表达的种类和强度各不相同,共同决定着细胞的形态与功能;细胞为了适应环境变化改变自身的基因表达有利于生存,因而基因表达调控十分重要㊂海洋污染问题日趋严重,BaP具有水生生物生殖毒性,是造成海洋污染的重要原因之一,受到广泛关注㊂有研究发现BaP生殖毒性的潜在分子机制是通过调控相关基因表达㊂数字基因表达技术表明BaP对雄性栉孔扇贝睾丸中的生殖基因有影响,其中热休克蛋白90㊁细胞色素P4503A㊁凋亡抑制蛋白3个基因的改变会引起睾丸组织损伤,此外BaP与性激素合成和睾丸发育相关基因有密切联系[37]㊂Albornoz-Abud等[38]研究表明苯并芘可以通过调控GH/IGF轴发挥其生殖毒性,急性暴露于BaP会导致尼罗罗非鱼睾丸中内分泌相关基因:胰岛素样生长因子1(insulin-likegrowth factor1,IGF1)和生长激素受体基因1(growth hormone receptor1,GHR1)基因表达降低,并造成发育问题㊂BaP通过基因调控引起的生殖毒性不仅仅在海洋生物中体现,陆地生物也同样受这一机制调控㊂BaP通过影响父本基因,最终影响胚胎发育㊂用BaP染毒的雄性小鼠进行体外受精后,发现在8-细胞期和囊胚期存在基因表达异常,包括调控细胞周期以及DNA修复的基因[39]㊂妊娠黄体可以分泌雌孕激素,在生殖系统中发挥重要作用,黄体的发育与血管内皮生成因子有着密切联系[40]㊂苯并芘可以使血管内皮生成因子相关基因,如血管生成素-1(an-giopoietin-1,Ang-1)㊁血管内皮细胞生长因子受体(vascular endothelial growth factor,VEGFR)㊁内皮细胞TEK酪氨酸激酶表达下调,并增加抗血管生成因子血小板反应蛋白(recombinant thrombospondin1, THBS1)的表达,还影响了对黄体血管系统建立至关重要的基因Notch1㊁DLL4㊁Jag1和Hay2的表达,破坏了黄体血管网络系统的形成,最终影响了妊娠过程中黄体的内分泌功能[41]㊂综上所述,在3种BaP发挥致毒作用的机制中(图1),BaP诱导生殖发育相关基因表达异常或提高促凋亡基因表达起主导作用,也是目前研究较为透彻的机制(图2),下面将从雄性生殖㊁雌性生殖以及胚胎发育3个角度详述BaP的毒性机制㊂2㊀BaP的雄性生殖毒性(Male reproductive toxici-ty of BaP)2.1㊀BaP对雄性激素的毒性(Toxicity of BaP to an-drogens)BaP作为内分泌干扰物主要影响睾酮水平[42],睾酮主要是由睾丸间质细胞合成分泌的,其主要成分为类固醇㊂BaP可以降低睾酮的转化率[43]和(或)睾酮的浓度[44]㊂有研究表明睾丸巨噬细胞分泌的白介素1β(interleukin-1β,IL-1β)和肿瘤坏死因子α168㊀生态毒理学报第19卷(tumor necrosis factor α,TNF α)通过抑制类固醇生成急性调节蛋白(steroidogenic acute regulatory protein,STAR)表达进一步抑制间质细胞合成睾酮[45]㊂Zheng 等[46]发现BaP 通过增加IL -1β的表达,显著抑制雄性大鼠睾酮的产生,他们还发现BaP 可以改变睾丸巨噬细胞亚群,激活ED2+睾丸巨噬细胞并促进了IL -1β的产生,最终抑制雄性大鼠睾酮合成㊂此外,3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-hydroxysteroid dehy -drogenase,3β-HSD)与细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶(cholesterol side -chain lyase P450scc,P450scc)在间质细胞合成睾酮中起着重要作用[47],其表达改变时会影响睾酮水平;STAR 表达的下调也可以导致睾酮合成减少[48-49]㊂雄性大鼠用BaP 灌胃90d 后,检测到BaP 下调间质细胞中的STAR ㊁3β-HSD 以及细胞色素P45017A1(cytochrome P450family 17subfamily A member 1,CYP17A1)表达,并上调P450scc 表达,进而降低大鼠睾丸间质细胞生成睾酮的能力[50]㊂Sheweita 等[51]发现BaP 降低类固醇合成酶CYP17A1和17β-羟基类固醇脱氢酶(17β-hydroxysteroid dehydrogenase,17β-HSD)蛋白表达,使大鼠血浆睾酮浓度降低㊂Banerjee 等[52]进一步验证了BaP 通过抑制类固醇生成蛋白表达,如细胞色素P450ⅡA1(cytochrome P450family Ⅱsubfamily A member 1,CYP ⅡA1)㊁STAR ㊁3β-HSD ㊁17β-HSD ,进一步降低血清睾酮水平,2021年Daoud 等[53]再一次证实了上述观点㊂Yang 等[54]发现BaP 也可以通过影响3β-HSD ㊁CYP17和17β-HSD 表达进一步扰乱雄性栉孔扇贝的激素水平㊂Booc 等[55]研究发现BaP 可降低雄性底鳉的睾酮水平,与其他动物不同的是BaP 并非通过调控类固醇相关基因表达造成这一结果,而是可能通过精原细胞包囊大小进而影响睾酮水平㊂综上所述,BaP 主要通过改变类固醇生成相关基因与酶的表达,抑制睾酮的生成,对雄性的生殖发育产生不利影响㊂epoxide(BPDE)图1㊀BaP 致毒途径机制注:AHR 表示芳香族化合物受体,ARNT 表示芳香族化合物受体核转运蛋白,HSP90表示热休克蛋白90,CYP450表示细胞色素P450,CYP17A1表示细胞色素P45017A1,STAR 表示类固醇生成急性调节蛋白,3β-HSD 表示3β-羟基类固醇脱氢酶,17β-HSD 表示17β-羟基类固醇脱氢酶,Caspase -3表示半胱氨酸蛋白酶-3,Caspase -9表示半胱氨酸蛋白酶-9,Bax 表示Bcl -2相关X 蛋白㊂Fig.1㊀Mechanism of BaP toxicity pathwayNote:AHR represents aryl hydrocarbon receptor,ARNT represents aryl hydrocarbon receptor nuclear transporter,HSP90represents heat shock protein 90,CYP450represents cytochrome P450family,CYP17A1represents cytochrome P450family 17subfamily A member 1,STAR represents steroidogenic acute regulatory protein,3β-HSD represents 3β-hydroxysteroid dehydrogenase,17β-HSD represents 17β-hydroxysteroid dehydrogenase,and Bax represents Bcl -2associated X protein.第2期王惠增等:苯并[a]芘对生殖系统的毒性作用及其机制研究进展169㊀图2㊀BaP通过基因调控引起生殖毒性注:GnRH2表示促性腺激素释放激素,GnRH3表示促性腺激素释放激素,IL-1β表示白介素1β,CYP17A1表示细胞色素P45017A1,STAR表示类固醇生成急性调节蛋白,3β-HSD表示3β-羟基类固醇脱氢酶,17β-HSD表示17β-羟基类固醇脱氢酶,CYP1A1代表细胞色素P4501A1, P450scc代表细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶,Adcy-PKA代表上游腺苷环化酶-蛋白激酶,Caspase-3表示半胱氨酸蛋白酶-3,Caspase-9表示半胱氨酸蛋白酶-9,Bax表示Bcl-2相关X蛋白,Hsp90aB1代表90kDa热休克蛋白aB1,VTG代表卵黄蛋白原,CD34代表分化簇34, AMH代表抗缪勒管激素,CCND2代表细胞周期蛋白D2,FOXO1代表叉头框蛋白O1,HoxA10代表同源盒基因,BMP2代表骨形态发生蛋白-2,IBA1代表离子钙结合衔接分子1,SNCA代表重组人α-突触核蛋白,CYP19a代表细胞色素P450家族19亚家族a㊂Fig.2㊀BaP causes reproductive toxicity through gene regulationNote:GnRH2represents gonadotropin-releasing hormone2,GnRH3represents gonadotropin-releasing hormone3,IL-1βrepresents interleukin-1β, CYP17A1represents cytochrome P450family17subfamily A member1,STAR represents steroidogenic acute regulatory protein,3β-HSD represents3β-hydroxysteroid dehydrogenase,17β-HSD represents17β-hydroxysteroid dehydrogenase,CYP1A1represents cytochrome P450family1subfamily A member1,P450scc represents cholesterol side-chain lyase P450scc,Adcy-PKA represents adenylate cyclase-protein kinase,Bax represents Bcl-2associated X protein,Hsp90aB1represents recombinant heat shock protein90kDa alpha B1, VTG represents vitellogenin,CD34represents cluster designation34,AMH represents anti-Müllerian hormone, CCND2represents cyclin-D2,FOXO1represents forkhead box O1,HoxA10represents homeobox A10,BMP2represents bone morphogenetic protein-2,IBA1represents ionized calcium-binding adapter molecule1,SNCA representsrecombinant human alpha-synuclein,CYP19a represents cytochrome P450family19subfamily a.2.2㊀BaP对精子的毒性(Toxicity of BaP to sperm) 2.2.1㊀BaP减少精子生成(BaP reduces spermato-genesis)哺乳动物雄性生殖器官主要有睾丸㊁附睾㊁输精管等,其中睾丸的主要作用是生成精子和产生雄性激素,BaP主要通过损害睾丸进一步影响精子生成㊂BaP通过氧化应激或基因调控介导睾丸细胞凋亡,影响睾丸功能受损,减少精子数量㊂Banerjee等[52]证实BaP激活P38蛋白激酶(P38mitogen activated protein kinase,P38MAPK)通路来增加睾丸细胞内ROS,并降低细胞中的抗氧化酶活性[56],使睾丸细胞氧化应激损伤,减少精子的生成㊂Sheweita等[51]研究发现BaP通过降低睾丸组织中抗氧化酶CAT㊁SOD㊁GPX的活性,增加ROS水平,导致睾丸细胞线粒体膜破裂,进而引起睾丸组织凋亡㊂BaP还可通过AHR途径降低睾丸中CAT㊁SOD活性,升高H2O2含量,诱导睾丸细胞氧化应激,影响睾丸功能[57]㊂上述均为BaP对小鼠的生殖毒性,Tian等[58]发现BaP通过可引起雄性栉孔扇贝精巢氧化应激损伤,进一步减少精子生成㊂此外,BaP可以通过基因调控诱导睾丸细胞凋亡,提高睾丸细胞内的凋亡蛋白半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和半胱氨酸蛋白170㊀生态毒理学报第19卷酶-9(Caspase-9)表达;促进细胞色素C转位到细胞质,启动线粒体凋亡途径,导致睾丸细胞凋亡,进一步导致精子生成减少[52,59]㊂BaP不仅通过影响睾丸功能减少精子生成,而且可以直接影响精子生成过程㊂Verhofstad等[60]的研究表明在精子发育各个阶段均可以检测到BPDE 导致的精子DNA损伤,这也是精子数量减少的原因之一㊂BaP可以导致雄鼠精子功能缺陷以及生育能力下降,并且Mohamed等[61]的实验证明了BaP的生殖毒性具有遗传性,但毒性随着子代数增加逐渐减弱㊂BaP可以减少精母细胞和次级精母细胞进入中晚期粗线期,阻止减数分裂过程的完成,导致精子生成减少[62]㊂此外,BaP诱导的氧化应激会降低精原细胞的存活率,并且通过下调基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)水平以及上调促凋亡因子Caspase-3和Caspase-9表达促进精原细胞凋亡[63]㊂BaP作为广泛存在于生态系统中的环境污染物,不仅使陆地雄性动物精子生成异常,还影响水生生态系统中的雄性动物的精子生成㊂BaP可以通过基因调控扰乱雄性栉孔扇贝的精子发生相关基因:细胞周期蛋白D2(cyclin-D2,CCND2),联会复合体3㊁核呼吸因子1和水通道蛋白9,进一步减少精子生成[54]㊂斑马鱼胚胎暴露于BaP后,其睾丸中生殖细胞特异基因的启动子发生甲基化上调,进一步下调相关基因表达,最终抑制精子生成,影响雄性斑马鱼的生殖能力[64]㊂2.2.2㊀BaP降低精子活力(BaP reduces sperm motility)BaP可以损害睾丸和附睾的内分泌功能,从而导致储存的精子活力下降[65-67]㊂睾丸的质量和大小与精子的数量和活力成正比[68],雄性小鼠用BaP连续灌胃60d,检测到小鼠的睾丸质量明显降低,精子的活力也随之降低[69]㊂小鼠暴露于BaP后,其睾丸支持细胞和间质细胞均凋亡,进而影响精子发生过程,最终导致精子活力减弱[69]㊂畸形精子的活力及存活率显著低于正常精子,BaP暴露会导致精子形态异常,畸形精子大幅增加,主要异常表现为无尾㊁双头㊁中段弯曲[57]㊂Xu等[59]验证了BaP可导致精子活动力降低,精子头㊁尾部畸形率以及总畸形率均显著升高㊂最新研究表明BaP改变睾丸激素水平引起雄性交配强度减弱,降低精子质量,引起畸形精子增多[70-71]㊂有研究表明精子短端粒可能是导致男性不育的原因之一[72],Ling等[73]研究发现BaP可以使精子端粒变短,且与剂量成反比㊂3㊀BaP的雌性生殖毒性(Female reproductive toxicity of BaP)3.1㊀BaP对雌性激素的毒性(Toxicity of BaP to es-trogen)BaP作为一种常见的环境污染物,是海洋环境污染原因之一,影响水生动物的繁殖㊂雌孕激素对雌性发育有不可或缺的作用,而BaP作为内分泌干扰物可以降低水生动物血浆中的孕酮㊁雌激素和催乳素浓度[74]㊂为进一步探究其发生机制,Tian等[58]用不同浓度的BaP处理雌性栉孔扇贝,发现BaP可以导致类固醇合成相关酶(3β-HSD㊁CYP17㊁17β-HSD)表达下降,并呈剂量依赖性;高浓度的BaP还可抑制AHR㊁ARNT㊁CYP1A1以及17β-雌二醇-雌激素受体转录,2种机制相辅相成,共同抑制雌孕激素的生成㊂BaP通过干扰激素膜受体降低三疣梭子蟹的雌二醇(estradiol,E2)浓度[75]㊂斑马鱼胚胎暴露于BaP会导致成年雌鱼卵巢中E2水平下降,其机制为雌鱼脑中促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormone,GnRH)基因中的GnRH3的甲基化水平显著升高,并下调GnRH3mRNA表达,从而影响E2的产生[76]㊂与斑马鱼报道相反的是BaP可促进雌性海马GnRH2和GnRH3mRNA的表达,并导致血浆中E2水平显著下降[77]㊂2种相反结果可能与BaP的浓度㊁作用时间以及实验对象不同有关㊂Yang等[78]发现BaP抑制雌性栉孔扇贝的上游腺苷环化酶-蛋白激酶(adenylate cyclase-protein ki-nase,Adcy-PKA)信号通路,下调促性腺激素受体转录水平,如促卵泡激素受体(follicle-stimulating hor-mone receptor,FSHR)和黄体生成素/绒毛膜促性腺激素受体(luteinizing hormone/choriogonadotropin re-ceptor,LHCGR),导致类固醇生成酶(3β-HSD㊁CYP17㊁17β-HSD)表达减少,最终引起抗雌激素效应㊂Kennedy和Smyth[79]发现雌鲑鱼体内E2的减少并非是通过常规的BaP作用于类固醇机制,而是通过其他内分泌干扰机制来对抗雌激素的方式改变了血浆E2的浓度,这种机制有待进一步研究㊂综上所述,BaP主要通过基因表达调控这一途径降低雌性体内E2和孕酮水平,进而影响雌性的生殖发育㊂3.2㊀BaP对卵巢的毒性(Toxicity of BaP to ovary)卵巢是雌性生殖发育中最重要的生殖器官,具有排卵和内分泌功能,对维持雌性激素水平至关重要,暴露于BaP会扰乱卵巢的结构与功能,进一步第2期王惠增等:苯并[a]芘对生殖系统的毒性作用及其机制研究进展171㊀影响生育㊁妊娠㊂高剂量的BaP可以导致卵巢细胞退化并出现管状结构,而这些组织学变化属于癌前病变[80]㊂Rahmani等[81]发现BaP通过氧化应激导致卵巢表面上皮内陷㊁细胞堆积㊁管状结构形成,卵巢间质出现间质水肿㊁出血等病理学改变,并且BaP 诱导卵巢中Caspase-3表达升高,影响卵巢的生理功能,与睾丸相比,BaP对卵巢的危害更严重,这是因为在BaP处理后,胎儿卵巢中促细胞凋亡蛋白Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2associated X protein,Bax)表达增加,并激活下游Caspase-3和Caspase-9,导致卵巢细胞凋亡[82]㊂卵黄蛋白原(vitellogenin,VTG)和CCND2是雌激素介导的卵巢发育相关基因[83],BaP可以下调VTG和CCND2表达,造成雌性栉孔扇贝卵巢受损,组织学检查发现,BaP可引起卵巢发育延迟和卵母细胞退化,并且卵巢的病变情况随着染毒时间和染毒剂量的增加而严重[78]㊂研究发现BaP可以抑制脂联素受体1(adiponectin receptor protein1,AdipoR1)和脂联素受体2(adiponectin receptor protein2,AdipoR2)表达,进而影响卵巢功能[84]㊂最新研究表明,BaP及其代谢产物BPDE可抑制妊娠小鼠卵巢中腺嘌呤核苷酸转运体1(adenine nucleotide translocator1,ANT1)的表达,进一步研究发现ANT1的过表达可以修复BPDE引起的有丝分裂缺陷,恢复卵巢功能[85]㊂3.3㊀BaP对雌性生殖细胞的毒性(Toxicity of BaP to female germ cells)3.3.1㊀BaP影响卵泡发生和发育(BaP affects folli-cular genesis and development)卵泡发育是女性正常的生理过程,卵泡的发育情况直接关系到后代繁殖㊂卵泡作为卵巢的功能单位,支持卵母细胞的发育和成熟[86]㊂卵泡的生长发育过程相当复杂,原始卵泡经历初级卵泡㊁窦前㊁窦卵泡才能发育为成熟卵泡[87-88]㊂有报道称BaP作为卵毒物质,可以破坏原始卵泡[89],或者使原始卵泡迅速枯竭[90],BaP还可以通过香烟烟雾进入卵泡液中,对卵泡发育产生不利影响[91]㊂Sobinoff等[24]研究了BaP卵毒性的机制,连续用BaP处理雌性小鼠7d会导致卵巢中的原始卵泡显著减少,卵泡闭锁,其具体机制为BaP通过干扰AHR发育信号破坏卵泡形成㊂有报道称BaP不仅可以减少或耗尽原始卵泡和初级卵泡的数量[89-90],还可以抑制卵泡生长发育,即BaP处理过的卵泡均发育不到窦前阶段[92]㊂Sadeu和Foster[93]将小鼠卵泡暴露于不同浓度的BaP,发现卵泡存活率均降低,其中高浓度的BaP会抑制窦卵泡发育,使卵泡停滞于窦前卵泡阶段,窦卵泡比例显著减少㊂抗缪勒管激素(anti-Müllerian hormone,AMH)浓度增加与卵泡发育停滞有关[94-95]㊂有研究表明BaP可以通过减少AMH生成,促进卵泡募集到卵泡池中,最终加快卵泡枯竭的速度[96]㊂Sadeu和Foster[93]进一步探索了BaP诱导卵泡发育异常的关键分子途径,发现BaP暴露通过激活窦前㊁窦卵泡和成熟卵泡中AHR信号通路,进一步促进促凋亡因子Bax激活,此外,BaP暴露还会导致90kDa热休克蛋白aB1(recombinant heat shock protein90kDa alpha B1,Hsp90aB1)基因表达上调,导致卵泡生长延迟和存活率下降㊂卵泡生长和卵泡发育在雌性哺乳动物生殖中有着重要地位,BaP不但可以通过基因表达调控导致卵泡生长发育异常,还可能通过氧化应激影响卵泡发育㊂3.3.2㊀BaP影响卵母细胞功能(BaP affects oocyte function)BaP可使卵母细胞线粒体内ROS水平升高,导致精-卵结合和融合障碍,影响动物的繁殖[24,36]㊂BaP可导致卵母细胞和卵丘细胞DNA断裂,细胞功能障碍,影响卵母细胞进一步发育,精卵融合失败[34],这也是BaP生殖毒性机制之一㊂卵母细胞的减数分裂在卵母细胞成熟与成功受精中起着重要作用[97],BaP诱导卵母细胞减数分裂异常,卵母细胞功能障碍,不利于动物繁殖㊂BaP可以阻滞猪卵母细胞减数分裂,使部分卵母细胞停滞在MⅡ期,进一步检测发现BaP通过降低乙酰化α-微管蛋白,导致微管不稳定,损害纺锤体组装,从而干扰卵母细胞减数分裂过程[36]㊂Sui等[98]通过将雌鼠暴露于BaP检测其对子代的影响,验证了BaP对卵母细胞的遗传毒性:生发泡破裂(germinal vesicle breakdown, GVBD)是卵母细胞成熟的关键事件,母体暴露BaP 会降低子代GVBD率[99];并且BaP会扰乱子代卵母细胞的纺锤体组装和染色体配对,使卵母细胞减数分裂停滞;最后,雌鼠暴露于BaP可导致子代卵母细胞基因组高甲基化,损害卵母细胞的发育能力㊂综上所述,母系BaP暴露损害了子代卵母细胞的进一步发育,这与上文Miao等[36]研究结果相一致㊂4㊀BaP对胎儿或胚胎的生殖毒性(Reproductive toxicity of BaP to the fetus or embryo)4.1㊀BaP的胚胎发育毒性(Embryonic developmen-tal toxicity of BaP)早有研究表明,吸烟损害身体健康,还对孕妇以。
2-芳基苯并噻唑的合成研究进展
2-芳基苯并噻唑的合成研究进展摘要：2-芳基苯并噻唑是一类非常重要的杂环化合物，是构建药物分子、天然产物、功能材料和很多生物活性分子的骨架。
由于这些良好的特性，2-取代的苯并噻唑类化合物在医药方面有着很广泛的应用，它在抗菌、抗肿瘤、抗过敏、抗惊厥、消炎、保护神经系统和免疫调节等方面都有较好的活性。
关键词：2-芳基苯并噻唑；合成；研究一、2-芳基苯并噻唑的的重要性2-芳基苯并噻唑是一类非常重要的杂环化合物，是构建药物分子、天然产物、功能材料和很多生物活性分子的骨架[1] 例如，唑泊习他（zopolrestat1）是一种抑制醛糖还原酶的药物，能够治疗糖尿病[2]；2-(4-氨基苯基)苯并噻唑及其衍生物（如5F203(2)和PMX610(3)）是一类高效且具有良好选择性的抗肿瘤试剂，对人类乳腺癌、卵巢癌和结肠癌有毫微摩尔级的抑制活性；席夫碱（4）可用作类淀粉蛋白抑制剂，用于治疗老年痴呆症（图1）。
图1含取代基团的苯并噻唑类药物苯并噻唑类化合物在农用化学品中也表现出除草、抗菌和杀毒等方面的活性。
除草剂Benazoline是人工合成的具有生物活性的苯并噻唑衍生物。
另外，苯并噻唑类化合物在工程材料领域中也有着广泛应用，被用作塑料染色剂、橡胶硫化促进剂以及荧光探针材料等。
例如，荧光素存在于萤火虫中，在其体内经酶氧化导致生物发光；2-巯基苯并噻唑作为自由基转移试剂，在聚丁二烯和聚异戊二烯的硫化反应中起催化作用。
二、2-芳基苯并噻唑的合成研究进展1.以邻氨基芳基硫酚为原料合成2-芳基苯并噻唑最常用的方法是以邻氨基芳基硫酚为原料，和羧酸、醛、腈类、β-二酮或苄胺等缩合，该类反应经过了中间体邻酰氨基苯硫酚。
当使用芳基羧酸和邻氨基芳基硫酚反应时，一般需要在强酸或者高温条件下才能够得到较高产率的2-芳基苯并噻唑。
邻氨基苯硫酚和芳香醛也能够缩合得到2-芳基苯并噻唑，该方法一般需要Lewis酸或者强氧化剂。
除此之外，能够提供苯甲酰基的化合物都能与邻氨基苯硫酚反应生成2-芳基苯并噻唑。
一种2-肼基苯并噻唑衍生物作为Ag^+荧光探针的研究
第3期
古雯蕾等： 一种 2－肼基苯并噻唑衍生物作为 Ag+ 荧光探针的研究
25
SHIMADZU） 、核磁共振波谱仪（ Varian NMＲ Systems 400 MHz） 、液 相 色 谱 － 质 谱 联 用 仪 （ LCQ Deca XP MAX 型） ．
主要试剂： 2－氰基苯甲醛、2－肼基苯并噻唑、无水 乙醇、无水甲醇、乙腈、四氢呋喃（ THF） 、二甲基亚砜 （ DMSO） 、N，N－二甲基甲酰胺（ DMF） 、冰醋酸、去离 子水、FeCl3·6H2 O、AgNO3 、AlCl3 、BaCl2 、CaCl2 、CdCl2· 5H2O、CoCl2·6H2O、CrCl3·6H2O、CuSO4·5H2 O、HgCl2、 KCl、MgCl2、MnSO4·H2O、NaCl、Ni （ NO3 ） 2·6H2O、 Pb（ NO3） 2和 Zn（ NO3） 2·6H2O 等试剂，皆为分析纯． 1．2 探针的合成与表征 1．2．1 TZA 的合成［8－9］ 利用 2 －氰基苯甲醛和 2 － 肼基苯并噻唑合成荧光探针 TZA，其合成路线如图 1 所示． 称取0．140 4 g 2－氰基苯甲醛（ 1．05 mmol） 加 入到容积为 100 mL 的圆底烧瓶中，加入 20．0 mL 无 水乙醇，搅 拌，使 2 － 氰 基 苯 甲 醛 全 部 溶 解． 称 取 0．208 7 g 2－肼基苯并噻唑（ 1．20 mmol） 添加到容积 为 100 mL 的圆底烧瓶中，再加入 10． 0 mL 无水乙 醇，搅拌直至固体基本溶解． 最后加入 5 滴冰醋酸， 在圆底烧瓶上安装氮气保护冷凝回流装置，在反应 温度为 80 ℃ 、搅拌子转速为 500 r / min 条件下反应． 待反应 2 h 后，对产物进行抽滤处理，并用冷的无水 乙醇反复 洗 涤 多 次，洗 涤 后 的 产 物 为 淡 黄 色 固 体． 将产物放入真空烘箱中烘干，得到荧光探针 TZA 为 0．180 1 g，产率为 61．63%．
2_3_丁炔酰胺基苯基_苯并噻唑衍生物的合成及抗肿瘤活性研究
2-(3-丁炔酰胺基苯基)苯并噻唑衍生物的合成及抗肿瘤活性研究尹桂林1, 李燕2, 唐克2, 金小锋1, 陈晓光2, 李莉1, 冯志强1*(中国医学科学院、北京协和医学院药物研究所 1. 活性物质发现与适药化研究北京市重点实验室,2. 药理学研究室, 北京 100050)摘要: 以4-氟-3-硝基苯甲酸为起始原料, 通过两条合成路线, 经5～7步反应得到20个全新的2-(3-丁炔酰胺基苯基) 苯并噻唑类化合物。
目标化合物的结构经1H NMR和HR-MS鉴定。
采用MTT法考察了其对5种肿瘤细胞株 (HCT116、Mia-PaCa2、U87-MG、A549、NCI-H1975) 的抗增殖作用, 结果表明大部分化合物选择性地对其中的3种肿瘤细胞具有明显的抗增殖活性, 其中化合物14c对人脑胶质母细胞瘤U87-MG细胞、化合物14h对结肠癌HCT116细胞的IC50值均在1×10−8 mol·L−1数量级水平, 在此基础上对该类化合物进行了初步构效分析。
关键词: 苯并噻唑; 抗肿瘤活性; 构效关系中图分类号: R916 文献标识码:A 文章编号: 0513-4870 (2014) 06-0888-08Synthesis and biological evaluation of 2-(3-butynoicamidophenyl) benzothiazole derivatives as antitumor agents YIN Gui-lin1, LI Yan2, TANG Ke2, JIN Xiao-feng1, CHEN Xiao-guang2, LI Li1, FENG Zhi-qiang1*(1. Beijing Key Laboratory of Active Substance Discovery and Druggability Evaluation, 2. Department of Pharmacology, Institute of Materia Medica, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College, Beijing 100050, China)Abstract: A series of 2-(3-butynoicamidophenyl)benzothiazole derivatives were synthesized starting from 4-fluoro-3-nitrobenzoic acid. Structures of all the synthesized compounds were confirmed by 1H NMR and HR-MS. Their antitumor activities against human tumor cells lines (HCT116, Mia-PaCa2, U87-MG, A549, NCI-H1975) were evaluated by MTT assay. The results revealed that most of the synthesized compounds showed potent activities against HCT116, Mia-PaCa2, U87-MG tumor cells lines. Particularly, compounds 14c and 14h exhibited better activity with IC50 values of 1×10−8 mol·L−1 against U87-MG and HCT116 respectively.The structure-activity relationship of compounds was also discussed preliminarily.Key words: benzothiazole; antitumor; structure-activity relationship癌症是严重威胁人类健康的重大疾病之一。
黄酮苯并咪唑衍生物的合成及体外抗肿瘤活性研究
到 ９ 个全新的 ３′４′５￣三甲氧基￣７￣羟基黄酮苯并咪唑衍生物ꎮ 采用 ＭＴＴ 法检测化合物的体外抗肿瘤活性ꎮ 化合物
４￣１２ 对 ＭＧＣ￣８０３ 细胞株和 ＭＣＦ￣７ 细胞株更为敏感ꎮ 其中ꎬ化合物 ８ 的体外抗肿瘤活性最好ꎬ对胃癌细胞 ＭＧＣ￣
８０３、乳腺癌细胞 ＭＣＦ￣７ 和肝癌细胞 ＨｅｐＧ￣２ 的 ＩＣ５０ 值分别为 ２０.４７±２.０７ μｍｏｌ / Ｌ、４３.４２±３.５６ μｍｏｌ / Ｌ 和 ３５.４５±２.０３ μｍｏｌ / Ｌꎬ均优于阳性对照药 ５￣氟尿嘧啶ꎮ 化合物 ８ 具有较强的抗肿瘤活性ꎬ值得进一步探究其抗肿瘤活性与活性
������论著:基础医学������
黄酮苯并咪唑衍生物的合成及体外抗肿瘤活性研究
俞晨泽ꎬ袁 昊ꎬ黄晓敏ꎬ郑瑰琼ꎬ邓湘萍ꎬ王 哲ꎬ曹 轩ꎬ唐国涛∗ ( 南华大学药物药理研究所ꎬ湖南省分子靶标新药研究协同创新中心ꎬ湖南 衡阳 ４２１００１)
摘 要: 根据药效基团拼合原理ꎬ苯三甲氧基在黄酮 Ｂ 环上进行结构修饰ꎬ再与苯并咪唑类化合物衍生化得
类似物 ＺＤ６１２６[８] ꎬＢＮＣ１０５[９] 和 ＣＫＤ￣５１６[１０] ( 图 １) 结构中均含苯三甲氧基基团ꎮ
此外ꎬ苯并咪唑类化合物也已被广泛用于抗肿 瘤药物的设计和开发ꎮ 苯并咪唑及其衍生物通过 抑制肿瘤细胞的有丝分裂和增殖ꎬ介导肿瘤细胞凋 亡或抑 制 缺 氧 诱 导 因 子 的 表 达[１１] ꎮ 因 此ꎬ 在 本 文 中ꎬ苯三甲氧基在酮 Ｂ 环上进行结构修饰ꎬ再与 苯并咪唑类化合物衍生化得到 ９ 个全新的 ３′４′５￣三 甲氧基￣７￣羟基黄酮苯并咪唑衍生物ꎬ并初步评价其 体外抗肿瘤活性ꎮ
Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙꎬ ｔｈｅ ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙ ｇｒｏｕｐ ｗａｓ ｉｎｔｒｏｄｕｃｅｄ ｉｎｔｏ ｔｈｅ Ｂ￣ｒｉｎｇ ｏｆ ｆｌａｖｏｎｏｉｄ ａｎｄ ｌｉｎｋ ｂｅｎｚｉｍｉｄａｚｏｌｅ ａｎｄ ｉｔｓ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ ｔｏ ７￣ＯＨ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｈａｉｎ ａｌｋａｎｅｓ. Ｔｈｅ ａｎｔｉ￣ｔｕｍｏｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｆｌａｖｏｎｏｉｄ ｂｅｎｚｉｍｉｄａｚｏｌｅ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ ４￣１２ ｗａｓ ｓｔｕｄｉｅｄ ｂｙ ＭＴＴ ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ ａｓｓａｙ. Ｏｎ ｔｈｅ ｗｈｏｌｅꎬ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ４￣１２ ｓｈｏｗｅｄ ｂｅｔｔｅｒ ａｎｔｉ￣ｔｕｍｏｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｇａｉｎｓｔ ＭＧＣ￣８０３ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ＭＣＦ￣７ ｃｅｌｌｓ. Ｗｈａｔ������ｓ ｍｏｒｅꎬ Ｃｏｍｐｏｕｎｄ ８ ｅｘｈｉｂｉｔｅｄ ｔｈｅ ｍｏｓｔ ｐｏｔｅｎｔ ａｎｔｉ￣ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｇａｉｎｓｔ ＭＧＣ￣８０３ ｃｅｌｌｓꎬ ＭＣＦ￣７ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ＨｅｐＧ２ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｔｈｅ ＩＣ５０ ｗａｓ ２０.４７± ２.０７ μｍｏｌ / Ｌ、４３.４２± ３.５６ μｍｏｌ / Ｌ ａｎｄ ３５.４５± ２.０３ μｍｏｌ / Ｌꎬ ｒｅ￣ ｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ. Ｃｏｍｐｏｕｎｄ ８ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ａ ｎｏｖｅｌ ａｎｔｉ￣ｔｕｍｏｒ ｌｅａｄｉｎｇ ｃｏｍｐｏｕｎｄ ｔｏ ｆｕｒｔｈｅｒ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ.
Cbp分子在CD59 GPI介导的T细胞抑制信号转导中的作用研究的开题报告
Cbp分子在CD59 GPI介导的T细胞抑制信号转导中的作用研究的开题报告一、研究背景和意义T细胞是机体免疫系统中的重要细胞类型，其功能异常与身体免疫系统的失调、自身免疫性疾病和感染等疾病的发生有密切关系。
CD59是一种通过糖脂肪酰化连接到细胞膜表面的磷脂酰肌醇酰化糖蛋白(GPI)，是一种重要的抑制多种细胞的免疫反应的蛋白质。
它的主要功能是通过转移多种细胞分子之间的信号来抑制T细胞的活化和增殖。
此外，CD59也能调节细胞因子分泌、调节细胞内钙离子浓度等多种细胞生理过程。
因此，研究CD59介导的T细胞抑制信号转导机制及其作用分子对于揭示机体免疫微环境的调节机制及防治免疫性疾病具有重要意义。
二、研究目的本研究旨在通过数据挖掘和实验验证的方法，筛选和鉴定CBP分子(CREB结合蛋白)在CD59介导的T细胞抑制信号转导中的作用及其分子机制。
CBP是一种具有组蛋白去乙酰化酶和转录激活性的核糖核酸蛋白，具有广泛的生物学功能。
通过进一步分析CBP在CD59介导的T细胞抑制中的作用机制，可以为新的免疫治疗靶点奠定基础。
三、研究内容和拟解决的问题1. 筛选CBP分子在CD59介导的T细胞抑制中的潜在作用。
2. 通过生物信息学和实验验证筛选CBP作用相关的下游靶标分子。
3. 探究CBP作用下游分子在CD59介导的T细胞抑制中的作用机制。
4. 继续发掘CBP在CD59介导的T细胞抑制中的作用机制，并为疾病治疗提供理论基础。
四、研究方法和技术路线1. 生物信息学分析：利用高通量测序技术，分析不同分化阶段的CD59介导T细胞抑制相关基因表达谱，并通过差异基因筛选和功能注释等手段，搜寻CBP作为潜在的调控分子。
2. RNA干扰技术：利用RNAi技术，采用CRISPR-Cas9技术构建CBP基因敲除模型，探究CBP分子在CD59介导的T细胞抑制中的作用机制。
3. 免疫印迹法：通过免疫印迹法，检测CBP分子与CD59的相互作用关系，分析CBP分子上靶后对CD59介导的T细胞抑制信号转导的影响。
蛹虫草多糖抑制刀豆蛋白诱导的T细胞增殖
蛹虫草多糖抑制刀豆蛋白诱导的T细胞增殖杨磊;黄洋;龙珍【摘要】Objective To study the cell mechanism of Cordyceps Militaris extract inhibits immune reaction.Methods Mice splenocytes were seeded into U-shaped 96-well cell cuhure plate,the cell concentration was 3 × 105/well.0.8 μg/mL concanavalin A (ConA)was added into cell culture system and cultured for 3 days to stimulate T cell to proliferate,then added different concentration Cordyceps Militaris polysaccharides(CMP),and the concentration was 0.5 mg/mL and 1.0 mg/mL,respectively.Flow cytometry was used to detect the proliferation of CD4+ T cell and CD8+ T cell.Results CMP can inhibit the CD4+ T cell and CD8+ T cell proliferation induced by ConA.There were statistical significantly differences between CMP group and control group(P＜ 0.001),and it was with dose-effect relationship.Conclusion CMP can inhibit the T cell proliferation induced by antigen,and it is possible the cellular mechanism for CMP carrying out immune regulation function.%目的探究蛹虫草多糖抑制免疫反应的细胞机制.方法小鼠脾脏单细胞悬液接种于U型底的96孔细胞培养板,细胞接种密度为3×105/孔,采用0.8 μg/mL刀豆蛋白(concanavalin A,ConA)刺激3d,构建T细胞增殖模型.在培养体系中加入不同浓度的蛹虫草多糖(0.5 mg/mL和1 mg/mL),流式细胞学检测蛹虫草多糖对CD4+T细胞和CD8+T细胞的效应.结果蛹虫草多糖可以抑制ConA诱导的CD4+T和CD8+T细胞增殖反应,与对照组相比,CD4+T细胞和CD8+T细胞增殖比例组间差异均具有统计学意义(P＜0.001),且呈现剂量—效应关系.结论蛹虫草多糖可以抑制抗原诱导的T细胞增殖反应,这可能是蛹虫草多糖发挥免疫调节效应的细胞学基础.【期刊名称】《贵州医药》【年(卷),期】2017(041)008【总页数】4页(P810-813)【关键词】蛹虫草;多糖;T细胞;增殖;免疫调节【作者】杨磊;黄洋;龙珍【作者单位】湖北省妇幼保健院小儿呼吸科,湖北武汉430070;湖北省妇幼保健院小儿呼吸科,湖北武汉430070;湖北省妇幼保健院小儿呼吸科,湖北武汉430070【正文语种】中文【中图分类】R-33;R392.12随着生活水平的提高，过敏性疾病如哮喘[1]、过敏性鼻炎[2]、湿疹及药物或食物过敏的患病率不断上升；与此同时，自身免疫性疾病如肾小球肾炎的患病率也在不断上升，而类风湿性疾病如类风湿性关节炎的全球患病率为0.3%～1%。
不同离心力分离外周血单个核细胞的条件优化
不同离心力分离外周血单个核细胞的条件优化熊静;王思雨;张云惠;吴利红;邓弘仙;刘阳;罗兴燕【摘要】目的观察不同离心力对人外周血单个核细胞 (PBMC) 分离的影响.方法采用聚蔗糖密度梯度离心法分离人外周血中PBMC, 不同分离离心力及洗涤离心力获取细胞, 利用流式细胞仪检测细胞得率和存活状况, 并进行统计学分析.结果分离离心力结果:离心力600g时获取的细胞数最多;24h检测的凋亡细胞数在离心力300～900g分离时差异无统计学意义 (P>0.05) 且相对较少, 增加离心力, 凋亡细胞数增加;72h检测离心力大于1 200g或低至300g时, 存活细胞数显著减少.洗涤离心力结果:离心力150g时细胞得率显著低于300～2 400g时;24h检测细胞凋亡显示离心力大于600g时, 凋亡细胞数增加;72h检测显示洗涤离心力大于1 200g 时, 存活细胞数显著减少.结论分离离心力在600～900g及洗涤离心力在300～600g均可用于PBMC的分离.%Objective To observe the effect of different centrifugal force on the separation of peripheral blood mononuclear cell (PBMC) .Methods PBMCs were isolated by adopting the ficoll density gradient centrifugation at different centrifugal force of separation and centrifugal force of washing.Then the yield rate and survival status of PBMCs were measured by flow cytometry and the statistical analysis was performed.Results The results of separation centrifugal force:the maximum number of PBMCs was obtained at 600 g.The number of apoptotic cells between 300-900 g separation in detection at 24 hhad no statistically significant difference, moreover was relatively less, increasing centrifugal force, the number of apoptosis cells was increased;in the detection at 72 h, the centrifugal force higher than 1 200 g or low to 300 g, the survival cellswere significantly decreased.The results of washing centrifugal force:the centrifugal force was 150 g, the yield rate of PBMCs was significantly lower than that of 300-2 400 g.The apoptotic cells detected at 24 hshowed that the centrifugal force was more than 600 g, the number of apoptosis cells was increased;the detection at 72 h showed that the washing centrifugal force was more than 1 200 g, and the number of survival cells was decreased significantly.Conclusion The centrifugal force of separation is 600-900 g and centrifugal force of washing is 300-600 g, which all can be used for the separation of PBMC.【期刊名称】《检验医学与临床》【年(卷),期】2019(016)003【总页数】3页(P289-291)【关键词】外周血单个核细胞;聚蔗糖密度梯度离心法;离心力【作者】熊静;王思雨;张云惠;吴利红;邓弘仙;刘阳;罗兴燕【作者单位】成都医学院检验医学院,成都 610500;成都医学院科研实验中心,成都610500;成都医学院科研实验中心,成都 610500;成都医学院科研实验中心,成都610500;成都医学院科研实验中心,成都 610500;成都医学院科研实验中心,成都610500;成都医学院科研实验中心,成都 610500【正文语种】中文【中图分类】R392.12外周血单个核细胞(PBMC)是外周血中具有单个核的细胞，包括淋巴细胞、单核细胞、吞噬细胞和树突状细胞等[1-3]。
噻唑并嘧啶类衍生物的设计合成及抗肿瘤活性研究
噻唑并嘧啶类衍生物的设计合成及抗肿瘤活性研究李江;张诗缇;孟利红;李放;吴鹏;邓赛男;贾云宏【期刊名称】《化学世界》【年(卷),期】2016(57)8【摘要】为了发现具有良好抗肿瘤活性的新型先导化合物,在综合分析多种高活性化合物结构特点的基础上,设计、合成了一系列含噻唑并[3,2-a]嘧啶-5-酮类化合物。
以6-氨基-2-硫脲嘧啶为原料,经4步反应制得目标化合物,其结构经IR,1 H NMR,13C NMR和HRMS确证,并对该类化合物合成影响因素和结构特点进行了探讨。
采用噻唑蓝(MTT)法测试了所合成化合物的体外抗肿瘤(A549,MCF-7)活性,测试结果表明大部分化合物对于所试验的癌细胞的增殖都有一定程度的抑制作用。
【总页数】8页(P493-500)【关键词】噻唑并嘧啶;合成;抗肿瘤活性【作者】李江;张诗缇;孟利红;李放;吴鹏;邓赛男;贾云宏【作者单位】锦州医科大学药学院,辽宁锦州121001;锦州医科大学基础医学院,辽宁锦州121001【正文语种】中文【中图分类】R914.5【相关文献】1.17-取代雌二醇-嘧啶类衍生物的合成与体外抗肿瘤活性研究 [J], 程克光;张江玉;刘观艳;初相伍;凌丹;姚国义2.6-取代亚甲肼基-2,4-双吗啉嘧啶及三嗪类衍生物的合成与抗肿瘤活性研究 [J], 曹云云;朱五福;祝妍;郭飞;鲁向冉;宫平3.含吡咯结构的二芳氨基嘧啶类ALK抑制剂的设计合成及抗肿瘤活性研究 [J], 徐守平;王婕;邢凌云;郭明;翟鑫4.新型吡唑并[1,5-a]嘧啶-氮芥衍生物的设计、合成及抗肿瘤活性研究 [J], 赵明霞;张东霞;常进;赵治巨;齐传民;姜俊兵5.含1,3,4-噁二唑的苯并[d]咪唑并[2,1-b]噻唑类Twist1抑制剂的设计合成及抗肿瘤活性研究 [J], 邓燕莉;赵天铭;杨晶;李通;翟鑫因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
无抗菌活性的红霉素衍生物对体外培养T淋巴细胞增殖的影响
无抗菌活性的红霉素衍生物对体外培养T淋巴细胞增殖的影响吴岚;张为革;屈英薇;张传良;赵丽娟【期刊名称】《中国医科大学学报》【年(卷),期】2006(35)6【摘要】目的:观察无抗菌活性的红霉素衍生物对体外培养T淋巴细胞增殖的影响,探讨其抗炎活性的机制.方法:利用MTT方法比较9种红霉素衍生物对体外培养T 淋巴细胞增殖影响的不同.结果:红霉素、克拉霉素、N-去甲基红霉素衍生物、9(S)-羟基红霉素和十二元环红霉素衍生物抑制T淋巴细胞增殖的活性较明显,其IC50值分别是(606.28±35.43)、(431.62±25.60)、(367.31±32.60)、(425.62±32.08)和(176.38±10.42)μmol/L,其中十二元环红霉素衍生物的IC50值明显低于红霉素和克拉霉素.结论:红霉素及其衍生物具有抑制T淋巴细胞增殖的活性,此活性可能与其抗炎活性有一定关联.【总页数】3页(P597-599)【作者】吴岚;张为革;屈英薇;张传良;赵丽娟【作者单位】中国医科大学附属第一医院老年病科,辽宁,沈阳,110001;沈阳药科大学制药工程学院;沈阳药科大学制药工程学院;沈阳药科大学制药工程学院;中国医科大学附属第一医院风湿免疫科,辽宁,沈阳,110001【正文语种】中文【中图分类】R978.1【相关文献】1.宝塔菜功能性低聚糖体外抗氧化活性及其对体外培养小鼠T淋巴细胞增殖能力的影响 [J], 沈德艳;郁建平;张训海;王旋2.红霉素衍生物抑制体外培养的人T淋巴细胞株增殖 [J], 吴岚;张为革;张传良;屈英薇;赵丽娟3.新型红霉素类大环内酯衍生物的合成及抗菌活性研究 [J], Li Li-jing;Gao Lei;Sun Jing;Li Jing;Chen Hua;Zhang Lei4.红霉素衍生物LY267108在抑制单核细胞增殖过程中对核因子-κB活化的影响[J], 吴岚;李鹏飞;林继红;包凯;张为革5.十二元环红霉素衍生物对T淋巴细胞增殖和细胞周期的影响 [J], 吴岚;张为革;赵丽娟;王虹;包凯;肖卫国因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
2-巯基苯并噻唑衍生物类小分子抑制剂对人结直肠癌细胞SW620的生长抑制作用
2-巯基苯并噻唑衍生物类小分子抑制剂对人结直肠癌细胞SW620的生长抑制作用彭星辰;陈烨;王铭【期刊名称】《科学技术与工程》【年(卷),期】2015(0)24【摘要】To study antitumor activity of SKLB-163 in vitro and in vivo and reveal the possible molecular mecha-nism, flow cytometry and MTT assay were used to detect cell apoptosis and proliferation induced by SKLB-163. The anti-tumor effects was investigated in SW620 mice model. Flow cytometry and MTT assay showed compound SKLB-163 could induce cell apoptosis and inhibit SW620 cell proliferation. The anti-tumor exprements in vivo showed compound SKLB-163 could significantly inhibit growth of SW620 tumor model. In conclusion, SKLB-163 showed a good anti-cancer activity. These findings will contribute to development of novel benzothiazole-2-thiol anti-cancer drugs.%拟研究2-巯基苯并噻唑衍生物类小分子抑制剂(SKLB-163)对结直肠癌细胞SW620增殖及凋亡的影响；并探讨可能的作用机制。
使用流式细胞术检测药物处理后肿瘤细胞凋亡的情况；利用MTT实验检测细胞增殖情况。
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论 著
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苯 并 噻 唑衍 生物 Ｂ Ｄ ７ ５ ９抗 Ｔ细 胞 增 殖 的 机 制 研 究
罗兴 燕 ， 邹 强 ，孙 海 ， 胡松 ， 唐信威 ， 何 莉 ， 夏 超 亚 ， 王茂田 ， 刘 阳 ， 赖翼 （ 成都医 学院， ａ ． 科研实验中心； ｂ ． 检
验医学院 ， 成都 ６ １ ０ ５ ０ ０ ）
摘要： 目的
探 讨 新 型 苯 并噻 唑 衍 生 物 Ｂ Ｄ ７ ５ ９抑 制 Ｔ细 胞 增 殖 的 作 用机 制 。 方法
流 式 细胞 术检 测 Ｔ细胞 增 殖 、 Ｃ Ｄ ２ ５表 达 及
细胞 周期 。酶联 免疫吸附法测定 Ｂ Ｄ ７ ５ ９对活化 Ｔ细胞分泌 白细胞介 素一 ２ 、 白细胞介 素－ ４ 、 白细胞介 素－ ６ 、 白细胞介 素－ １ ０ 、 白细 胞介 素． １ ７ Ａ及干扰 素． 等细胞 因子的影 向。结果 Ｂ Ｄ ７ ５ ９抑制抗 人 Ｃ Ｄ ３和 Ｃ Ｄ ２ ８ ｍＡ ｂ ｓ 刺激 的 Ｔ细胞增 和混合 淋 巴细胞反 应， Ｉ Ｃ 分别为（ ３ ． ５±０ ． ７ ）和 （ ３ ． ３±０ ． ９ ） ｍ ０ １ ． Ｌ ～。Ｂ Ｄ ７ ５ ９对人静 息 Ｔ细胞和 外周血单 个核 细胞 无 细胞 毒性 。Ｂ Ｄ ７ ５ ９ 不抑制活化的 Ｔ细胞表 达 Ｃ Ｄ ２ ５和分 泌细胞 因子 白细胞 介素－ ２、 白细胞介 素＿ ４及 白细胞介 素一 １ ０ ， 但 显著抑制 白细胞介 素＿ ６ 、
Ｌ Ｕ Ｏ Ｘ ｉ ｎ ｇ — ｙ ａ ｎ ，Ｚ Ｏ Ｕ Ｑ ｉ ａ ｎ ｇ ，Ｓ Ｕ Ｎ Ｈａ ｌ ，Ｈ Ｕ Ｓ ｏ ｎ ｇ ，Ｔ Ａ Ｎ Ｇ Ｘ ｉ ｎ ． ｗ ｅ ｉ ，Ｈ Ｅ Ｌ ｉ ，Ｘ Ｉ Ａ Ｃ ｈ ａ ｏ ． ｙ ａ ，ＷＡ Ｎ Ｇ Ｍ ａ ｏ ．
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Ｃ ｈ ｅ ｎ ｇ ｄ ｕ ６ １ ０ ５ ０ ０， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
ＡＢＳ ＴＲＡＣＴ： ＯＢ Ｊ ＥＣＴＩ ＶＥ Ｔ ｏ ｄ ｅ ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎ ｅ ｔ ｈ ｅ ｉ ｍｍｕ ｎ ｏ ｓ ｕ ｐ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｖ ｅ ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ ａ ｎ ｏ ｖ ｅ ｌ ｂ ｅ ｎ ｚ ｏ ｔ ｈ ｉ ａ ｚ ｏ ｌ ｅ ｄ ｅ ｉ ｒ ｖ ａ ｔ ｉ ｖ ｅ Ｂ Ｄ ７ ５ ９ ｏ ｎ Ｔ ｃ ｅ ｌ ｌ ｐ ｒ ｏ ｌ ｉ ｆ － ｅ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ ｉ ｔ ｓ ｐ ｏ ｔ ｅ ｎ ｔ ｉ ａ ｌ ｍｏ ｄ ｅ ｏ ｆ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ． Ｍ ＥＴＨＯＤＳ Ｔ ｃ ｅ ｌ ｌ ｐ ｒ ｏ ｌ ｉ ｆ ｅ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ．Ｃ Ｄ ２ ５ ｅ ｘ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ ｃ ｅ ｌ ｌ ｃ ｙ ｃ ｌ ｅ ｄ ｉ ｓ ｔ ｒ ｉ ｂ ｕ ｔ ｉ ｏ ｎ ｗ ｅ ｒ ｅ ｍｅ ａ ｓ ｕ ｒ ｅ ｄ
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因子的分泌 。Ｂ Ｄ ７ ５ ９有望作为先导化合物 ， 开发 用于 自身免疫性疾病与器官移植 的新型药物。
关键词 ： 苯 并噻 唑衍 生 物 ； Ｔ细胞 增 殖 ； 免疫抑制剂 ； 细 胞 周 期
ｄ ｏ ｉ１ ５ ． １ ５ ． Ｏ ｌ １
ｔ ｉ ａ ｎ ，Ｌ Ｉ Ｕ Ｙ ａ ｎ ｇ ，Ｌ ＡＩ Ｙｉ （ ａ ．Ｃ ｅ ｎ ｔ ｅ ｒ ｆ ｏ ｒ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｔ ｆｃ ｉ Ｒ ｅ ｓ ｅ ａ ｒ ｃ ｈ ；ｂ ．Ｓ ｃ ｈ ｏ ｏ ｌ ｏ ｆ Ｌ ａ ｂ 。 ｒ ａ ｔ ｏ ｒ ｙ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ｅ ，Ｃ ｈ ｅ ｎ ｇ ｄ ｕ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ Ｃ ｏ ｌ ｌ ｅ ｇ ｅ ，
中 图分 类 号 ： Ｒ ９ ６ ７
文献标志码 ： Ａ
文章 编 号 ： １ ０ ０ １— ２ ４ ９ ４ （ ２ ０ １ ５ ） １ ５—１ ３ １ ３— ０ ６
Ｓｕ ｐｐｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｖ ｅ Ｅｆ ｆ ｅ ｃ ｔ ｏｆ ａ Ｎｏ ｖ ｅ ｌ Ｂｅ ｎ ｚ ｏ ｔ ｈ ｉ ａ ｚ ｏ ｌ ｅ Ｄｅ ｒ ｉ ｖａ ｔ ｉ ｖ ｅ ＢＤ７ ５９ ｏ ｎ Ｔ Ｃｅ ｌ ｌ Ｐｒ ｏ ｌ ｉ ｆ ｅ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ
白细 胞 介 素 ． １ ７ Ａ和 干 扰 素 一 的产生 ， 并 且 阻滞 细胞 周 期 于 Ｇ ０ ／ Ｇ。 期 。结 论 新 型 苯 并噻 唑 衍 生 物 Ｂ Ｄ ７ ５ ９不 影 响 Ｔ细 胞 的 活 化， 但 通过 阻 滞 细 胞 周 期 于 Ｇ 。 ／ Ｇ ． 期 抑 制 活 化 的 Ｔ细胞 增 殖 ， 并 抑 制 白细 胞 介 素 － ６、 白细 胞 介 素 一 １ ７ Ａ和 干扰素－ 等 促 炎 细 胞