肉鸽新城疫强毒的分离与鉴定
一株鸽新城疫病毒的分离鉴定
粒抽提试剂盒 、Ｄ Ａ Ｎ 凝胶 纯化试剂盒ＩＴ Ｐ Ｇ、Ｘ ｇｌ Ｎ — ａ、Ｒ Ａ酶 抑 ２ ３ 病毒毒力测定 结果 ． 制剂 、Ｅｏ Ｎ ａ ｅ Ｄ ２０ 、 ｃＲＩ 和Ｄ ＡＭ ｒ ｒ Ｌ ００ 氨苄青霉素和Ｄ Ｐ 均购 ２ ３ １ Ｍ Ｔ ４ 结 果 取 １ 一一１ － 释度分 离 、纯化 的病 ｋ ＥＣ ． ． Ｄ ＇ 定 ￣ ０ ０９ 稀 白上海生工生物工程技术服务有限公司。 １ ２ 方 法 ． １２１ 病毒分 离、噬斑纯化 参照文１ ４ ．． ￣１ Ｊ 方法进行 。 １２２ 血清学鉴定 用 Ｂ一 数微量法测定尿囊液 Ｈ 效价 ， ．． 半 Ａ
用Ｎ Ｖ、Ｈ 、Ｈ 、Ｅ Ｓ ７ 标准 阳性血清进行ＨＩ 。 Ｄ ５ ９ Ｄ 一６ 试验
毒 ，每个稀释度 接种５ ０ 龄Ｓ Ｆ 只１ 只 Ｐ 鸡胚 ，０ ｌ ，照蛋３ ．ｍ／ １ 只 次／
ｄ ，间隔８ｈ ，共观察７ｄ ，记 录鸡 胚死亡时间 ，结果详见表 １ 。 结果 表明 ，引起鸡胚死亡 的最高稀释 度（ Ｄ 在 ｌ ～，计 算得 ＭＬ ） ０
Ｍ Ｔ １９６ 。 Ｄ 为 ２ ．ｈ
２ ３ ２ ＩＰ 测定结果 ． ． Ｃ Ｉ
取１ 日龄雏鸡 １ 只 ，各脑 内注射 １ 。 Ｏ ０。 稀
１２ ３ 病毒毒 力测定 ． Ｄ 和ＩＰ测定 ： 照 《 ．． Ｍ Ｔ ＣＩ 参 中华人 民共 释度 的纯 化尿囊液００ ｌ ． ｍ 。另取２ 以同样方法 注射稀释病毒 ５ 只 和国出入境检验检疫行业 标准 》（ ／１１２０ ２ 规定 的标 准 用 的生理盐水 各００ ｌ Ｓ Ｔ １０ ２０） Ｎ ．５ｍ 。接 种后 ，每天在相应接 种 的时间观 方法进行 。 察 ，记录雏 鸡 的情 况 ，分 正常 （ 动灵 活 ，行动无 共济失 调 活 １ ２ ４ 引物设计 、合 成 和基 因测序 根 据Ｇｅ Ｂ ｎ 上 已发 现象 ）、发 病 （ 括麻痹 、卧地不起 ，但 不包括 只表现迟 钝 ． ． ｎ ａｋ 包 表 的Ｎ Ｖ Ｆ Ｄ 基闪全基 闪序 列 ，利用ｐｉ ｅ ５ 软件 自行设计 了 ｒ ｒ． ｍ ０ 的鸡 ） 和死亡 。观察８ｄ（ 结果见表２），计算正常 、发病 、死 引 物 ，由上 海生 工 生物 工 程技 术 服务 有 限公 司合 成 ，序 列 鸡 的总数 ，根据 不同的权值 （ 常为０ 正 、发病 为 １ ，死 为 ２ ），累计 总分数 ， 计算得ＩＰ为０ ８。 Ｃ Ｉ ． ７ ２
肉鸽新城疫病毒山东分离株的分离鉴定及其F基因的分子特性分析
Ａｂ ｔ ａ ｔ Ａ Ｎｅ ａ ｔ ｓ ａ ｅ Ｖｉ ｓ ｉｏａ ｅ ｎ ｍｅ Ｎ ８ ｗａ ｏｌ ｃｅ ｏ ｐ ｇ ｏ ｎ Ｓ ａ ｄ ｎ ．Ｆ ｇ ｎ ｆｔ ｅ ｓｒ ｃ ： ｗｃ ｓ ｅ Ｄｉ ｓ ｒ ｓ ｌｔ ａ ｄ Ｊ ０ ｓ ｃ ｌ ｔ ｄ ｆ ｍ ｉｅ ｎ ｉ ｈ ｎ ｏ ｇ ｅ ｅ ｏ ｈ ｌ ｅ ｕ ｅ ｒ ｉｏａｅ ｗａ ｌ ｎ ｄ ａ ｄ ｓ ｑ ｅ ｃ ｄ ｔ ｔ ｄ ｔ ｌ ｃ ｌｒ ｃ ａ ａ ｔｒ ａ ｏ ｎ ｅｅ ｉ ｒ ａ ｉｔ ｎ Ｊ ８ ｐ ｒ ｅ ｙ ｓ ｌ ｔ ｓｃ ｏ ｅ ｎ ｅ ｕ ｎ ｅ ｏ ｓｕ ｙ ｉ ｍｏ ｅ ｕａ ｈ ｃｅ ｉ ｔ ｎ ａ ｄ ｈ ｒｄ ｔ ｙ ｖ ｒ ｉ ． Ｎ０ ｕ ｆ ｄ ｂ ｓ ｒ ｚｉ ａ ａｏ ｉ ｉ
离较 远 。
关键词： ； 城疫病毒； 鸽 新 Ｆ基 因 ； 子 特性 分
中图 分类 号 ： ８ ８３ ￥ ５ ．９ 文 献 标识 码 ： Ａ 文 章 编 号 ：０ ４ ５ ４（ ０ ０） — ０ ０ ０ １ ０ —１ ２ ２ １ ０１ ０ ２ — ５
Ｉ ｏ ａ ｉ ｎ，ｄｅ ｔｆｃ ｔｏ ａ ｄ ｏ ｅ ｕ ａ ｈ ｒ ｃ ｅ ｉ ａ ｉ ｎ ｆ ｒＦ ｅ ｆａ Ｎｅ ａｓ ｓ ｌ ｔｏ ｉ ｎ ｉ ａ ｉ ｎ ｎ ｍ ｌｃ ｌ ｒ ｃ ａ ａ ｔ ｒ ｚ ｔｏ ｏ ｇ ｎｅ ｏ ｗｃ － ｉ ｔｅ Ｄｉｅ ｓ ｒ ｓ ｉｏ ａ ｅ ｆ ｏ ｐｉ ｅ ｎ ｎ Ｓｈ ｎ ｎ ｉ ｓ ａ ｅ Ｖｉｕ ｓ ｌ ｔ ｄ ｒ ｍ ｇ ｏ ｉ ａ ｄｏ ｇ
鸽新城疫的识别与防治
实验室诊断
病毒分离
采集病鸽的呼吸道分泌物、消化道排泄物 或血液样本，在实验室进行病毒分离和鉴 定。
血清学检测
采集病鸽的血清样本，检测其中是否存在 新城疫病毒的抗体，以确定是否感染过新 城疫病毒。
03
鸽新城疫的防治
预防措施
定期消毒
对鸽舍、食槽、饮水器等设施进行定期消 毒，以减少病毒的传播。
饲养管理
病程进展
新城疫的病程通常为1-2周，但也可能长达一个月。病鸽通常出现食欲减退、体重下降、羽毛失去光泽 等现象。
病理学诊断
尸体剖检
观察鸽子的内脏器官是否有病变，如口腔 、喉头、气管、食道、嗉囊、腺胃、肌胃 、肝脏、肠道等。
VS
组织学检查
使用显微镜观察患病器官的组织学变化， 如炎症反应、细胞坏死和淋巴细胞浸润等 。
鸽新城疫的识别与防治
2023-11-07
目录
• 鸽新城疫概述 • 鸽新城疫的识别 • 鸽新城疫的防治 • 鸽新城疫的案例分析 • 结论与展望
01
鸽新城疫概述
病原学
01
病原
副黏病毒科，新城疫病毒（ NDV）
02
03
病毒结构
基因型
有囊膜，表面有血凝素（HA） 和神经氨酸酶（NA）
强弱毒株，不同基因型致病性不 同
监测免疫效果
接种后，应定期监测鸽子的免疫效果，以确保免疫效果达到预期水平。
04
鸽新城疫的案例分析
案例一：鸽场疫情的发现和应对
01
02
03
发现病情
在鸽场日常管理中，发现 部分鸽子出现精神沉郁、 食欲减退、腹泻等症状。
初步诊断
根据症状和流行病学调查 ，疑似为鸽新城疫病毒感 染。
鸽子新城疫的诊治
鸽子新城疫的诊治鸽子的新城疫病是一种高度接触性传染病，主要侵害家禽、鸽子以及飞禽。
是危害养殖业也是养鸽业的重大疫病之一。
目前在山东的德州、江苏的徐州等地先后发生了几起鸽子的新城疫病，死亡率在5%-95%不等，给养鸽户造成了很大的经济损失。
一.病原学本病病原属于副粘病毒属，新城疫病毒。
该病毒只有一个血清型，但血凝抑制实验和中和实验证明不同地区病毒的抗原性是有差异的。
其毒力强弱随宿主和外界条件之间的互相关系改变而发生改变。
若在易感鸽群中流行时，可使其毒力增强;若在具有不同程度免疫的鸽群中流行时，可使其毒力减弱，甚至不表现症状。
二.流行病学1.本病主要通过接触传播。
外地引进的种鸽、信鸽外出训练等都可引发此病的传播。
2.家禽的传播。
附近鸡场等的水平传播。
3.如发生大肠杆菌、衣原体等病时，鸽群抵抗力下降，新城疫野毒乘虚而入，导致疫病爆发。
临床症状：体温升高，精神不振，食欲减退、甚至废绝。
喝水量增加，羽毛松乱无光泽，垂头缩颈，翅膀松散或下垂，眼半闭或全闭，眼睛膜或眼球发炎，鼻有分泌物。
有的伴发神经症状，头颈扭曲，颈部僵直，头向后仰等。
有的信鸽表面正常，但飞行难以自控。
粪便稀薄，先是黄白色后期转为绿色。
三、剖检症状腺乳头有出血点，肌胃角质层下有出血点或出血斑，嗉囊内充满酸臭液体及气体，小肠前段出血，尤其是十二指肠粘膜和浆膜出血明显，盲肠扁桃体肿大，出血。
有的可见肠道壁有丘疹样病变。
四.实验室诊断病毒的分离鉴定：1.将分离到的病毒作红细胞凝集实验(HA)。
红细胞出现凝集。
2.将可疑鸽的血清做血凝抑制实验，其可抑制新城疫病毒对红细胞的凝集。
由此证明此鸽群发生的为新城疫病。
五.预防治疗1.环境保持清洁，定期消毒。
2.制定合理免疫程序。
定期用疫苗预防，一般常用疫苗为鸽副粘病毒或新城疫IV系苗。
3.可用中药方剂治疗，有一定的疗效，组方为：大黄、胆草、板兰根、连翘10g，苦参、生地、甘草各5g煎水喂鸽，药量视鸽病情而定，一般可喂20只成鸽。
一株信鸽新城疫强毒的分离鉴定和分子特性分析
农业生物技术学报 Journal of Agricultural Biotechnology 2007,15(6):942~946*山东省科技攻关重点支持项目 （No.030317） 和山东省自然基金支持项目 （No.031020101） 资助。
**通讯作者。
Author for correspondence.博士,研究员,主要从事家禽分子生物学的研究。
Email:<qinzm1997@>.收稿日期:20070309 接受日期:20070412·研究论文· 一株信鸽新城疫强毒的分离鉴定和分子特性分析 *袁小远, 王友令, 徐怀英, 欧阳文军,贾 强, 何叶峰, 秦卓明 **（山东省农业科学院家禽研究所，济南250100）摘要： 从发病信鸽的体内分离到1 株新城疫病毒 （ ， NDV ） PB9601， 经病毒蚀斑纯化后动物回归试验可产生典型的 NDV 病变， 其鸡胚平均死亡时间 （MDT ）、 一日龄雏鸡脑内接种的致病指数 （ICPI ）、 六周龄鸡静脉接种的致病指 数 （IVPI ） 分别为50.5h 、 1.65和 2.36， 表明NDV 为强毒。
对其融合蛋白 （ ） 和血凝素神经氨酸酶 （ ） 基因分别进行克隆测序， 发现 F 蛋白多肽裂解位点的氨基酸基序为 112KRQKRF 117，符合鸽源 NDV 强毒序列。
基因分型及同源性比较显示： PB9601 与 YN03、 TW98等鸽源毒株属于Ⅵ型， 其 基因与疫苗株基因域型 LaSota 的氨基酸同源性为 88.6%， 与疫苗株基因 Ⅰ型 V4的氨基酸同源性为91.0%，与传统强毒基因御型 F48E9 的氨基酸同源性为 90.6%； 与国内鸽分离株 GX05、 YN03 和 TW98 的氨基酸同源性分别为 92.1%、 95.5%和 98.6%；与国外鸽分离株 Capital397、 Tigre699、 116600、 IT22782 和 273600 的同源性分别为93.3%、91.9%、 94.6%、 95.1%和93.6%。
一例鸽新城疫病毒分离
一例鸽新城疫病毒分离张敬礼;王双山;苏敬良;黄建华【期刊名称】《河南科技学院学报（自然科学版）》【年(卷),期】2000(028)002【摘要】@@1999年11月安阳某种鸽场饲养美国王鸽陆续出现死亡，为查清病因，我们用病死鸽进行细菌培养呈阴性，取脾脏病料接种SPF鸡胚分离到新城疫病毒，对病毒的部分特性进行测定，结果报告如下：1 材料与方法1.1 SPF鸡胚及SPF鸡山东家禽研究所提供，鸽由某鸽场提供。
NDV、EDS-76病毒，禽流感病毒(AIVH9亚型)PMV-2血清均由中国农大动物医学院提供。
1.2 病料处理取脾脏加适量灭菌PBS剪碎后用玻璃研磨器研磨，4℃8000r／min离心20min，取上清液经220nm针头滤器滤过后，即成脾悬液。
1.3 鸡胚接种接种10日龄SPF鸡胚(尿囊腔途径0．2ml／枚)收集尿囊液进行HA和HI试验。
【总页数】2页(P95-96)【作者】张敬礼;王双山;苏敬良;黄建华【作者单位】安阳农业学校，河南安阳 455000;安阳农业学校，河南安阳 455000;中国农业大学，北京 100094;河南职技师院，河南新乡 453003【正文语种】中文【中图分类】S851.34＋7.2【相关文献】1.肉鸽新城疫病毒山东分离株的分离鉴定及其F基因的分子特性分析 [J], 袁小远;徐绍建;曲新泽;张玉霞;秦卓明2.一例种鸽新城疫的分离鉴定与防治 [J], 王友令;袁小远;徐怀英;张玉霞;李莉3.一例鸽新城疫病毒感染的诊治报告 [J], 乔钢;木梁4.一株鸽新城疫病毒\rPi/YN/CH/0122/2018株的分离鉴定 [J], 李敏;和春林;严红亚;信爱国;常志顺5.乳鸽新城疫病毒的分离和鉴定 [J], 芮艺;徐洲;赵宝华因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
肉鸽新城疫的诊断与防治
总之 ， 随着人们生活水平 的提高 ， 养宠物的越来越 多 广泛宣传有关 知识 ， 提 高人们
的防范意识 ， 做好预防工作 ， 制定合理的防治措施 ， 控制传染 源、 切断传播途径 、 保护易感动物 ， 及时进行诊 断和治疗 ， 是
减 少 该 病 发 生 的有 效 措 施 。
馏 水稀 释 ０ ． ３ ｍＬ／只 ；
４ ． ２ 辅 助 治疗
在饮水中加入支菌沙星， 每瓶 ２ ５ ｋ ｇ 水， 连续 ４ ｄ ， 以防止细 菌性感染 ； 然后再用超强多维补液饮水 ４ ｄ ， 以促进恢复体质 。
皮下广泛淤斑出血 ， 尤 以颈部为甚 ， 呈 紫红或黑红色 ； 肌 肉潮红干燥 ， 肺呈灰色 ， 脾脏 有淤 血斑 ， 肝轻肿 、 淤血 ， 心冠脂 肪有 出血点 。肌 胃内容物干燥 ， 呈果绿色 ， 剥去角质膜 ， 见斑 状充血或 出血 ， 腺 胃呈 黄绿色 ， 部 分腺 胃粘膜 出血 ， 个别乳头 有 出血点 ； 小肠 至直肠 粘膜充血 、 出血 ， 盲肠扁桃 体肿大 、 出 血， 胰脏有出血斑 ， 喉头 、 气 管粘膜充血和出血 。
鸽新城疫是 由 Ｉ 型副粘病毒（ Ｐ Ｍ Ｖ — Ｉ ） 引起 的一种 以腹泻 和神经症状为 主要 特征 的高度接 触性 、 急性 传染病 ， 是 目前 危害养鸽业 的主要疫病之一。
１ 临诊 症状
见细菌 ； 同时将上述病料接种于普通琼脂 ， 均无 细菌生长。
３ ． ２ 动 物 接 种 试验
犬感染附红细胞体 后 ， 多呈隐性经过 ， 在有应激 因素 （ 疲
劳、 饥饿 、 气候突变等 ） 刺激时 ， 犬 的抵 抗 力 下 降 ， 才 会 出 现 一
因病犬食 欲不振 ， 要 少食 多餐 ， 饲喂 营养丰 富 、 易于消
肉鸽新城疫的诊治
５１ 药物治疗 整个 鸽群紧急接种新城疫卵黄抗体 ，接种 ． ４ｈ ， ８ 后 感寒 快克 ２ ０羽 ／０ ｇ ５ １０ 混饲。连用 ３ ， ｄ 并添加速补饮
水 以 减少 应 激 。
５ 消 ． ２
６ 小
毒
结
搞好环境卫生 ， 全场进行彻底 消毒 ， 百毒 杀消
毒 ， 次 ，， １ ｄ 以杀灭病原微生物 。经过治疗一周后 痊愈 。 ６１ 新城疫是 由新城疫病 毒引起的一种急性 、 ． 热性 、 败血性 和高度接触性传染 ， 一旦发病应及时诊断。本次发病主要是
胞而引起溶血。 红细胞溶解后 ， 从尿中排 除血红蛋 白， 使尿液
２ １ 年 第 ２期 ０２
●
４ 细菌的分 离培养 ． １
取 病死鸽的脑 、 、 和肝涂 片镜 检 ， 肺 脾 未能检 出细菌 ； 同 时接种 普通琼脂平板培养基 ，７ ３ ％培养 ｌ ４ ｈ ８ ２ ，未见菌 落
３ 治
疗 Βιβλιοθήκη 变红。 肌 肉注 射速 尿 １ ２ ／ｇ ｂ — ｍｇ ・ｗ；静 脉注 射 ５ ｋ ％葡萄 糖 液 １０ Ｌ Ａ Ｐ ２ ，辅酶 Ａ １０ ０ ｍ ， Ｔ ｍＬ ０ Ｕ，维 生素 Ｃ ２ ，肌苷 ｍＬ ２ Ｌ １次 ，， 疗 ３ ； ｍ ， ｄ治 ｄ 口服维 生素 Ｅ ２０ ｇ １ ，， ５ ｍ ； 次 ｄ 至少 服
病死率 ５． ２１ ％ ２ 临床 症 状
者取其胚 液 ， 检测其 Ｈ Ａ滴度 ， 若能凝集鸡红细胞 ， 则进行 Ｈ Ｉ 试验 ， 如果血凝试验能被 新城疫 阳性 血清所抑制 ， 则表 明分 离到的毒株是新城疫病毒。
５ 防 治措 施
发 病初期 ， 病鸽表现精神沉郁 ， 欲减退 ， 食 羽毛松 乱 、 两 翅下垂 ， 嗜睡。鼻腔分泌物增多 ， 有哕音。频频甩头 ， 下痢 、 排 出黄绿色或淡绿色稀薄 、 带有腥臭 味的粪便 ， 嗉囊积液 ， 嘴 从 角流出 。有些病鸽 出现神经症状 ， 头颈扭 转 、 圈或腿肌麻 转 痹、 运动失调或不能站立 。
一例种鸽新城疫的分离鉴定与防治
家禽科学2016.9科学养禽鸽新城疫，又称鸽瘟或I 型鸽副粘病毒病，是由鸽I 型副粘病毒引起的急性、热性、接触性、败血性传染病，以腹泻和脊髓炎为主要特征[1]。
本病自1981年在苏丹被发现以来，西欧和美国等地相继报道了此病[2]。
1986年在深圳某鸽场发现了该病，该病传播迅速，发病率和死亡率高，乳鸽对该病敏感性最高，病死率高达50%~100%，是当前危害养鸽业的重要疫病之一，常给养鸽户造成很大的经济损失[3]。
2016年3月山东聊城某农户送检一批疑似患有新城疫的种鸽，经临床检查剖检结合实验室诊断，确诊为鸽新城疫，现将诊断结果报道如下：1发病背景2016年3月，山东聊城某农户养殖的不同日龄种鸽陆续发病。
其中产蛋种鸽发病率为27%，死亡率为13%。
后备种鸽发病率为100%，死亡率90%。
发病种鸽精神沉郁，羽毛蓬松，食欲不振，部分产沙壳蛋，后期呈现扭头、伸颈、双脚麻痹、不能站立、双翅下垂等神经症状。
后备鸽首先发生严重的水样下痢，排黄绿色稀粪，渴欲增加，伴有阵发性痉挛、震颤，头颈扭曲，逐步消瘦而死亡。
2剖检病变对送检的10只死亡鸽子进行剖检，剖检时鸽子因脱水皮肤较难剥离，皮下广泛淤斑性出血，有红、紫红、黑红等特征性病变；脑充血，有少量的出血点，脑实质水肿；肝肿大，有出血点及出血斑，部分有针头大小坏死点；脾肿大；肾苍白、肿大；有些病例见小肠、直肠和泄殖腔充血或出血。
3实验室诊断3.1细菌分离根据常规的细菌分离方法，用接种环无菌采集鸽的肝脏并接种于普通培养基、血平板培养基、麦康凯培养基上，置于38℃恒温培养箱中培养48h ，均无细菌生长。
3.2病毒分离以无菌操作取具有典型症状的病鸽的气管、脑、肝脏、肾脏研磨成匀浆，用无菌生理盐水按1：3稀释，反复冻溶2～3次后以3000转∕min 离心10min ，取上清液，用45μm 注射滤器过滤，按2000IV ∕ml 各加入青霉素、链霉素置4℃冰箱过夜作用。
无菌检查合格后，尿囊腔接种10日龄SPF 鸡胚10枚，0.2ml/枚，于37℃温箱培养。
一株鸽新城疫病毒的分离鉴定
３ ・ 试 验研 究 ６
广 东畜牧兽 医科技 ２１ 年 （ ３ 卷） ３ ０１ 第 ６ 第 期
一
株鸽 新城 疫病毒 的分离鉴定
赵 明秋 ，胡永 明 ，许 丽娜 ，易 琳 （华南 农业 大学 兽 医学 院 ，广 东 广 州 ５ ０ ４ １ ６ ２）
摘 要：对 广 东地 区疑似发生鸽新城疫感染 的鸽病料进行病毒分 离，通过血凝试验 （Ａ 、 中和试验 、 Ｈ）
Ｚ ａ ｉｇ ｉ Ｈｕ Ｙｏ ｇ ｎ ， ｎ ， ｉ ｈ ｏＭ ｎ ｑｕ ， ｎ ｍｉ ｇ Ｘｕ ＬｉａＹｉ ｎ Ｌ
（ ｏｌ ｅ ｆ ｔｒ ａ ｄｃ ｅＳ ｕｈＣ ｉａ ｒ ｕｔｒｌ ｎｖｒｉ ， ｕ ｎ ｚｏ １６ ２Ｃ ｉａ Ｃ ｌ ｇ Ｖｅ ｉ ｒ Ｍｅ ｉｎ ， ｏ ｔ ｈｎ ｉ ｌ ａ Ｕ ｉｅｓｙ Ｇ ａ ｇｈ ｕ５０ ４ ， ｈｎ ） ｅ ｏ ｅｎ ｙ ｉ Ａｇ ｃ ｕ ｔ
Ｆ 因扩增及序列测定 。结果分 离到 １ 基 株血凝效价 为 ４ｇ ｌ 能被 ＮＶ ｏ ，且 Ｄ 阳性血 清中和的病毒 ；用针对 ＮＶ Ｄ Ｆ 因设计的特异性鉴定引物对该分 离株进行 Ｐ Ｒ 基 Ｃ 扩增 ，可扩增 出相应 的 目的片段 ；测序及 Ｂ ａ ｔ ｌｓ 分析表
明其与 山东分 离株 ｃ ｉｋ ｎ Ｃ ｉａ Ｓ ５ ２ ０ ｈ ｃ ｅ ／ ｈｎ ／Ｄ ／ ０８相似 性 高达 ９％ 系统进化树 分析表 明该分 离株 属 于基 因Ｖ ５， Ｉ 型。由此 ，该分 离株为鸽新城疫 病毒 ，并命名为 Ｇ ２ １ 。 Ｄ ０ ０ 关键词：新城疫病毒；分 离；鉴定；鸽；广东
Ｉ 引起 的一种 高度接触性 急性传 染病 ， ） 以肠炎 、 严
重 腹 泻和 神 经 症 状 为特 征 。Ｐ Ｍ Ｐ Ｖ是 新城 疫 病 毒 （ｅ ｃ ｓ ｌ ｉ ｅ ｓ ｉ ｕ ，Ｄ ） 的一种 变异株 ， Ｎ ｗ ａ ｔ ｅｄ ｓ ａ ｅｖ ｒ ｓＮ Ｖ 两者 在流 行病 学 、 病症 状 、 检 变化 等 方面有 很 发 剖 大 的相似 性 ， 在发 病率 、 但 死亡 率及 死 亡 时 间等 方 面 有一定 的差异 ＿－ １。该病 于 １ ８ 年首次在 苏丹和 － － ９１ 埃 及的信鸽 中发现 ，现 已广 泛流行 于世 界各地 ［３ ３。 － ４ 近年来， 随着人 民生活水 平 的不 断提 高 ， 国 肉鸽 我 养 殖业迅猛发展 ， 各地 陆续有发生鸽瘟 的报道 ［］ ５。 － ７ ２１ ０ ０年 ｌ 月， 东某 肉鸽养 殖场鸽 群发 生 以 １ 广
一株鸽源新城疫病毒的分离鉴定
制 试验 （ ） ＨＩ及基 因测序等 对其 进行 鉴 定 。 结果 表 明 ， 分 离株 具 有 血 凝 活性 ， 可 与 新城 疫 病 毒 标 准 阳性 此 且 血 清发 生特 异 性抑 制反 应 ； 用针 对 新城 疫 病毒 的 Ｆ基 因及 Ｐ基 因特异 性 鉴 定 引物 对该 分 离株 进 行 Ｐ Ｒ 扩 Ｃ 增， 可扩 增 出特异性 目的 片段 ； 序及 Ｂ ＡＳ 分析 表 明 ， 与 美 国新 城 疫 病 毒 分 离株 Ｐ ｇ ｏ ／ （ ） ９ 测 Ｌ Ｔ 其 ｉｅ ｎ ＵＳ ＴＸ ／ ８
行无 菌处 理 后 ， 种 １ 接 ０日龄 Ｓ Ｆ鸡 胚 尿囊 腔 ， 胚 Ｐ 每
ＡＰ ＭＶ一 ） １ 可引起 以下痢 和神 经症 状 为 主 的急性 、 败 血 性 、 度接 触性 传染 病 ， 当前养 鸽 业 的 主要疫 病 高 是
之 一ｌ ］ １ 。该病 １ ８ 。 ９ ５年 传 人 中 国香 港 ， 年 进 入 国 同
新 城 疫 病毒 （ ｗｃｓｌ ｄｓ ａｅｖｒｓ ＮＤＶ） Ｎｅ ａｔ ｉ ｓ ｉ ， ｅ ｅ ｕ 旧 称 禽 副 黏 病 毒 １型 （ ｉ ａａ ｘ ｖｒｓｔ ｐ ， Ａｖａ ｐ ｒｍｙ ｏ ｉ ｙ ｅ １ ｎ ｕ
１ ２ 方 法 ．
１ ２ １ 病毒 的分 离鉴 定 将 采集 的鸽 口腔 拭 子 进 ． ．
ｌ 材 料 与 方 法
１ 材 料
１ １ １ 样 本 和 Ｓ Ｆ鸡 胚 鸽 口腔 拭 子样 本 采 自广 ． ． Ｐ
１ ２ ２ ２ 基 因 克 隆 和 测 序 按 照 文 献 １ ３ 法 对 ．．． － 方 ６
１ ２ １获 得 的 尿 囊 液进 行 Ｒ － Ｃ ．． Ｔ Ｐ Ｒ扩 增 ， 异 性 扩 特
疫病 毒 、 产蛋 下降 综合 征病 毒 、 流 感 病毒 的标 准 阳 禽 性血 清进 行血 凝 抑 制 （ ） 验 ， 体 操 作程 序 按 照 ＨＩ试 具
鸽源新城疫病毒的分离与鉴定
鸽源新城疫病毒的分离与鉴定作者：董孝乾孔艳高月花王震刘妮妮史效茹李园来源：《家禽科学》2014年第11期摘要：山西地区某商品信鸽养殖场的信鸽死亡淘汰率突然增加，这些病鸽主要表现为食欲下降、排白绿色稀粪，头颈斜仰扭转于颈后、呈现观星状，表现出一种典型神经症状。
主要剖检症状为内脏器官不同程度的肿胀与出血，结合流行病学、临床症状、病例剖解变化，经实验室细菌分离、病毒分离以及RT-PCR检测，最终被确诊为鸽新城疫。
关键词：鸽；新城疫；细菌分离；病毒分离；RT-PCR中图分类号：S858.39 文献标识码：B 文章编号：1673-1085（2014）11-0011-04鸽新城疫是由副粘病毒科副粘病毒属禽I型副粘病毒[1]感染引起的一种高度接触性、急性败血性传染病[2]。
该病发病急，传播迅速，死亡率高，是养鸽业的最大危害之一[3]。
临床主要表现为体温升高、食欲下降，羽毛失去光泽；排白绿色稀粪；发病2～3d后出现典型的神经症状，头颈震颤，一侧或者两侧翅或腿麻痹，共济失调，头颈歪斜或头扭转置于背上呈特殊的观星状[4]，最终麻痹死亡。
2013年8月山西某养殖场的信鸽出现神经系统、消化系统与呼吸系统混合感染症状的疾病，根据其临床症状疑为鸽新城疫。
经实验室病原分离及RT-PCR方法检测证实为鸽新城疫，现将分离鉴定流程及结果作如下报告：1 材料与方法1.1 材料1.1.1 病料来源病鸽来源于山西地区某信鸽养殖场，病鸽为28～50日龄。
养殖户采取家养方式饲养。
1.1.2 试验用鸡胚 10日龄SPF鸡胚，由山东无特定病原鸡实验种鸡场提供。
1.1.3 试验动物 10日龄SPF雏鸡，由山东无特定病原鸡实验种鸡场提供种蛋，公司SPF实验动物房孵化出雏，实验动物房负压隔离器内饲养至所需日龄。
1.1.4 1%鸡红细胞取SPF公鸡血5ml，加入抗凝剂，生理盐水冲洗、1500rpm/min离心7min，反复操作3次，制备鸡红细胞悬液。
1.1.5 培养基及生化试剂 NDV标准强毒株F48E9及NDV阳性血清，均由山东省农业科学院家禽研究所禽病研究室保存。
新疆信鸽新城疫病的诊断和病毒分离
新疆信鸽新城疫病的诊断和病毒分离薛英成进沙依兰古丽王延新疆畜牧科学院兽医研究所,乌鲁木齐830000关键词：鸽新城疫病毒分离鉴定2003年5~6月，新疆乌鲁木齐市某信鸽协会的信鸽暴发了一种以呼吸困难、流鼻涕、流眼泪、拉黄绿色粪便和神经症状为主要特征的疾病，鸽群发病快，死亡率高。
该群信鸽价格昂贵，为了参加一年一度的国庆信鸽比赛，许多信鸽爱好者的参赛信鸽都被集中在一起，集中饲养1个月后，鸽群陆续开始发病，约在1周内死亡近10%，在以后的1个月内死亡近50%，给鸽主造成严重的经济损失，鸽舍的负责人将病死鸽送到我们实验室诊治，根据病情和症状，我们怀疑是新城疫病或是禽流感病，为了搞清病因并及时对其它信鸽进行防治，我们进行了病原分离和鉴定，结果证实，该群信鸽是由于感染了新城疫病毒而发病。
现将我们的研究报告如下：1 材料和方法1.1 了解发病情况2003年5~6月间，乌鲁木齐市的某信鸽协会鸽舍寄养的近1000余只信鸽发生了瘟病，病鸽精神沉郁，食欲不振，有的病鸽有流鼻涕、流眼泪症状，病鸽口中流出黏液，最突出的症状是呼吸极度困难，张嘴呼吸，呼吸时有明显的啰音。
病程3~7d后，病鸽死亡。
有的鸽子没有明显的症状，突然死亡。
病程较长的信鸽有神经症状，头颈向后扭曲，在饮水或吃食时向后倒退，造成饮食困难，病鸽逐渐消瘦，直至死亡。
用抗菌素、病毒唑等药物治疗无效。
1.2 剖检变化将病死鸽剖检，可见病死鸽全身肌肉出血，肠道有严重的出血性炎症，肠道粘膜出血，盲肠扁桃体肿胀、出血，肝脏、脾脏出血，肾脏严重出血，肺部充血，呈显很鲜艳的红色，心脏肿大、出血，心冠脂肪出血。
腺胃乳头出血，腺胃与肌胃交接处出血，肌胃底部有明显的出血。
卵系膜出血。
气管喉头水肿、充血，气管粘膜增厚、充血，气管内充满大量的粘液，将呼吸道堵塞。
1.3 病毒的分离和鉴定1.3.1 病料的采集和处理分别无菌采集不同时间病死的4只鸽的气管、气管粘液、肝脏、肾、肺等组织8份，将采集的病料组织分别剪碎，按1：5加入hanks液（内含青霉素、链霉素、卡那霉素2000IU）进行研磨，再经过3次冻融之后，以8 000rpm/min离心10min，取上清液,将上清液接种于普通营养琼脂和普通营养肉汤，37℃培养24h，未见细菌生长。
1株鸽源基因Ⅶ型新城疫强毒株的分离鉴定及全基因组分析
1株鸽源基因！型新城疫强毒株的分离鉴定及全基因组分析李梦娇1>2,栗永华2,杨彬2,徐智凯2,王汉青2,仇旭升2,孙英杰2,谭磊2,廖瑛2,宋翠萍2,刘炜炜2,丁铲2,孟春春2,吴艳涛1(1.扬州大学兽医学院，江苏扬州225009；2.中国农业科学院上海兽医研究所，上海闵行200241)摘要:为进一步了解新城疫病毒(NDV)的遗传进化规律,从疑似NDV感染的鸽群中通过鸡胚接种分离出1株新城疫强毒株，将其命名为Pigeon/China/SHJD13/2017,经噬斑纯化后测定其鸡胚平均死亡时间(MDT)为57.2h,1日龄雏鸡脑内致数(ICPI)为2,毒力指标属于强毒NDV%GenBank公的NDV全基因组序列，共设计了11对物，对其进行全基因组测序，序列测定结果显示：分离株属于基因旭型NDV，其基因组全长15192bp，登录号为MK937786,F基因共包含553个aa,裂解位点的氨基酸残基为"2R-R-Q-KR-F"，符合NDV强毒株的分子特征％通过序列同源性比对分析，该分离株与鸡源强毒株Chicken/Ching/SDWF07/20^亲缘关系较近，表明该鸽源分离毒株可能来自于感染的鸡群％关键词:鸽子；基因旭型新城疫病毒；全基因组分析中图分类号：S836文献标志码:A文章编号：0529—6005(2020)07—0005—05Identification and Whole Genome Sequencing of a Genotype VIINewcastle Disease Virus Isolated from PigeonLC Meng-jiao1,2,LC Yong-hua2,YANG Bin2,XU Zhi-kai2,WANG Han-qing2,QIU Xu-sheng2,SUN Ying-jie2,TAN Lei2,LICO Ying2,SONG Cui-ping2,LIU Wei-wei2,DING Chan2,MENG Chun-chun2,WU Yan-tao1(1.Colleae of Veterinary Medicine,Yangzhou University,Yangzhou225009,China；2.Shanghai Veterinary Research Institute,CAAS,Shanghai200241,China)Abstraci:A strain of Newcastle disease virus(NDV)was isolated from pigeon flocks suspected te be infected with NDV and named as Pigeon/Chino/SHJD13/2017.After3rounds of plaque purification,we detected the pathooenicity assessment indices.The mean time of embryo death(MDT)was57.2h,and the intracerebra-pathocenicita index(ICPI)was2,indicating that the isolate was velooenic.With reference te tho NDV genome sequences already published in GenBank,11pairs of primers were designed for full genome amplification.Sequence analysis showed that tho genome size of tho isolate was15192bp(GenBank accession No.MK937786)and phylocenetie analysis indicated thot tho isolate belonged te genotype!.The F gene coded553amic aciOs and the cleavage site was112R-R-Q-K-R-W117,which possesses tho virulent NDV molecular characteristics.Sequencc homology analysis showed that the isolate was closety related te Chicken/China/SDWF07/2011,indicating that tho isolate from pigeon might originate from infected chickens.Key words:pigeon；genotype VII Newcastle disease virus；full genome analysisCouesponding authors：WU Yan-tao,E-mat:ytwu@；MENG Chun-chun,E-mat:mengcc@新城疫(Newcastla disease,ND)是严重危害养收稿日期：2019—06—27基金项目：上海市兽医生物技术重点实验室开放基金(Klab201702)作者简介:李梦娇(1995-)，女，硕士生,研究方向为预防兽医学，E-maii:1243729286@通讯作者:吴艳涛,E-mail：y Wu@；孟春春,E-mail：mengcc@业的病毒性，其主范围非常广泛，可以、水禽和多％新毒(Newcastle disease virus,NDV)属于副黏病毒科，禽Avulavirus-1型,分别编码3'-NP-P-M-F-HN-L-5'六种主要的结构[1]%目前NDV可以分为Classi 和Class II两大分支,ND自1926年以来，共有四次大流行％其中第大流行主要是由新毒引起，大多数鸽源NDV基因VI型,特别是被称为PPMV-1的VIb 亚型[2-1 23]456789011 %1AAGCAATCGAGATCGTACGGGTAGAAGG2 CTGGGGCATCCCAAGACAACGACA3 GATCAGGAAGATCAAACGCCTTGCG4AGTGACCGCTGATCATGAGGTAACC 5 GACCCTCCTGGTATCATATCGCAAAATT 6 TGCAGAGATCACTCACACTCACATCAAT7 CTCCATTGGTCAAGCACAAATTGCTAT 8 ATCATTGGGCAGCTACATGCTGATT9AATGAGTTGCGTGCAGACATACTTTGA 10 GCACCGGAATTAAGGATGGTAACCT 11GGCAGTTGGATATATCACATC分子流行病学结果显示，自20世纪90年代以 来，危害我国家禽的NDV 强毒主要为基因呱型⑷，且该型病毒在鸡、水禽均有大量分离,但从鸽群中分离出基因呱型NDV 却少有报道'5（% 2016年11月- 2017年3月，上海嘉定地区发生了数起鸽感染NDV疑似病例,病鸽表现为精神沉郁，食欲下降,拉稀％随 后从发病的鸽群中采集泄殖腔棉拭子接种SPF 鸡胚 进行病原的分离，通过血凝和血凝抑制试验从中鉴定出1株鸽源新城疫病毒（NDV ），并将其命名为PO-geon/Chins/SHJD13/2017%初步鉴定后该病毒属于基因呱型，为了更好地解析NDV 的跨种间传播规律,本试验对此鸽源基因呱型NDV 进行了 3次噬斑纯化 后测定其全基因组序列,着重比较了毒力基因的点突变规律；还通过鸡胚平均死亡时间！ MDT ）、脑内致病指数（ICPI ）等指标的测定对其毒力进行了系统的 评价,以期为ND 的防控提供更好的理论依据％1材料与方法1.1病毒 鸽源新城疫病毒Pigeon/China/SHJD13/2017,分离自上海嘉定发病鸽群％对发病 的 群采集子 SPF 进行的分 ， 3后 后 毒的 基因组序列测定以及生物学特性分析％1.2 SPF 鸡胚以及SPF 鸡 SPF 鸡胚，购自北京梅里亚动物保健有限公司；1日龄SPF 雏鸡由本实验 室自行孵化％1- 3分子生物学试剂 TRIzol LS Reagent 试剂，购自 Life Technologies Coaoration 公司;反转录酶 AMV 、 5 x AMV Buffer 、dNTPs 、RNA 酶抑制剂（PRC ）, pMD19-T 载体,均购自宝生物工程（大连）有限公司;E g Tag 聚合酶，购自南京诺唯赞生物科技有限 公司；DNA 凝胶回收试剂盒，购自Promega 公司； DH5"感受态细胞，购自天根生化科技（北京）有限公司;绿如蓝核酸染料（UV 型），购自北京天恩泽基 因科技有限公司％1.4病毒RNA 的提取与反转录 参照TRIzoo 法使用说明书进行病毒抽提，按照如下体系进行配制:AMV 1.5 #L ,5 x AMV Buffer 10 #L , dNTPs 2 #L ,PRC 1 #L ,将上述 14- 5 #L 体系与 33- 5 #L RNA 和2 #L6 ni 引物充分混匀后，于42 T 水浴2 h ,75 _水浴5 mio ,将病毒反转录成cDNA 后保存于-20 _ 备用％1.5全基因的扩增与克隆1.5. 1弓|物合成 参考GenBank 公布的NDV 全基因组序列（主要参考ZJ1、SF2等毒株的核昔酸序列），共设计了 11对引物，相邻扩增片段之间有 100 bp 左右的重叠序列，引物覆盖NDV 的整个基因组％所设计的引物送至生工生物工程（上海）股份 有限公司进行合成,引物序列见表1 %表1 NDV 全基因组扩增的PCR 引物表Table 1 PCR primers for NDV whole genome amplification引物对上游引物（5 J3j下游引物（5 J3j长度/bpPrimera Upsieam primeaDownstream primerr LengthCCGAGCTGTGCCTGTGTTGTC 1 726CAGTTGTGCGATCATTCGGGGGATT1 674TCCAGACTCTTCTACCCGTGTTT1 478AAATTCCCCACTGAGCCTCAGAGT 1 560TGTGGGGGCAACTGACTTGTAATCC1 465GTTTTATCATTCTCTCTGTGTCAGGAGTGG1 597GGAGGCGGTTAGTTGAAGTTGCC 1 454GGTCACCAATATTCCTTGTGTAGAGCCTT1 530AAGAATGTTCATTAGCTCCAGCGTG1 632CTCACAGAATGCATGGCAATCAGG1 630TGGTGAATGACATAACTATAATTAG1 2091.5.2 Pioevn^ChinaSHJD13/2017 各基因的扩增 采用50 #L 的PCR 反应体系:10 #moIL 上下游引物各2 #L ,PCR Mio 25 #L,cDNA2 #L ,灭菌超纯水补足至50 #L % PCR 反应程序如下：94 _ 5 min ；94 _ 1 min ,55 ~60 _ 1 min ,72 _ 2 mio ,30 个循环；72 _ 5 min %1. 5.3Pieeon/Ching/SHJD13/2017全基因片段的克隆将上述PCR产物于1%凝进行，按照DNA凝试操明书纯化凝胶%按pMD19-T明书加入连，将述产物转化入DH5a感受态细胞，挑取单克隆菌落,经菌液PCR鉴定阳性者送至生工生物工程(上8)股份有限公司进行测序％1.6测序结果的和比较分析利用DNAS-TAR、MEGA等软件对测序结果进行比对分析，并绘制其进化树。
一株肉鸽新城疫强毒的分离鉴定
一株肉鸽新城疫强毒的分离鉴定杨丽云;阮二垒;陈芳艳;王林川【摘要】用SPF鸡胚从病死鸽的内脏组织中分离到一株新城疫病毒(命名为GD-09株),该病毒能使鸡红细胞发生凝集,且这种凝集能被鸡新城疫标准阳性血清所抑制.经测定.其鸡胚平均死亡时间(MDT)、1日龄雏鸡脑内接种的致病指数(ICPI)分别为57.6 h、1.74,表明该新城疫病毒为强毒.通过分析其融合蛋白(F)发现,F蛋白多肽裂解位点为112RRQRRF117,符合NDV强毒株裂解位点氨基酸序列.F基因分型及氨基酸同源性比较发现,GD-09株属于基因Ⅵ型,与La sota、F48E9、B1、V4等传统毒株同源性较低,与鸽源NDV同源性较高.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2010(037)004【总页数】4页(P201-204)【关键词】鸽;鸽Ⅰ型副黏病毒;F基因【作者】杨丽云;阮二垒;陈芳艳;王林川【作者单位】华南农业大学兽医学院,农业部养禽与禽病防治重点开放实验室,广州,510642;华南农业大学兽医学院,农业部养禽与禽病防治重点开放实验室,广州,510642;华南农业大学动物科学学院,广州,510642;华南农业大学兽医学院,农业部养禽与禽病防治重点开放实验室,广州,510642【正文语种】中文【中图分类】S858.39鸽新城疫俗称鸽瘟,是由鸽Ⅰ型副黏病毒引起的急性传染病。
鸽Ⅰ型副黏病毒(pigeon paramyxovirus typeⅠ,PPMV-1)是新城疫病毒(NDV)的一种变异株。
到目前为止,中国华南、华东、华北地区大部分省份都有该病的报道(游洪等,2001;崔晓萍等,1997;谢青梅等,2000),并随着养鸽业种鸽、乳鸽育肥、集约化肉鸽的3次大发展而愈演愈烈,成为养鸽业的第一杀手。
20 09年3月,广州郊区某肉鸽养殖场鸽群中发生以肠炎、严重腹泻和神经症状为特征的急性传染病。
乳鸽先出现大批死亡,接着老鸽零星发病,并出现死亡。
一株鸽新城疫病毒的分离鉴定及F与HN基因序列分析
一株鸽新城疫病毒的分离鉴定及F与HN基因序列分析钟植文;黎先伟;陈珊;高绮静;刘镇明;杨傲冰【摘要】从广东珠三角地区某鸽场的发病鸽群采样,接种10日龄SPF鸡胚后分离到一株病毒,命名为JP株.系列微量血凝和微量血凝抑制试验结果表明,新城疫病毒(NDV)阳性.测序结果显示,该NDV分离株F蛋白裂解位点的氨基酸序列为112R-R-Q-K-R-F117,具有强毒株序列特点;F基因分型表明,JP株属于基因Ⅵ型.Blast结果显示,JP株F、HN基因序列均与基因Ⅵ型pi/CH/LGD/110208株同源性最高,均达99％.同源性比较发现,F和HN基因、蛋白都与基因Ⅵ型新城疲毒株同源性较高,分别为92.5％～99％、95.5％～99.1％和90.6％～98.7％、91.9％～99％,而与国内常用疫苗株B1、La Sota、Mukteswar等同源性较低,分别为83.2％～85.9％、89.2％～91％和79.3％～83.4％、86％～89.5％.分离的JP株属于基因Ⅵ型,并与国内常用疫苗株存在一定的差异.【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2015(036)005【总页数】5页(P86-90)【关键词】鸽;新城疫病毒;F基因;HN基因;基因Ⅵ型【作者】钟植文;黎先伟;陈珊;高绮静;刘镇明;杨傲冰【作者单位】广东永顺生物制药股份有限公司,广东广州511356;广东永顺生物制药股份有限公司,广东广州511356;广东永顺生物制药股份有限公司,广东广州511356;广东永顺生物制药股份有限公司,广东广州511356;华南农业大学兽医学院,广东广州510642;广东永顺生物制药股份有限公司,广东广州511356【正文语种】中文【中图分类】S852.659.5鸽新城疫俗称鸽瘟，又称鸽Ⅰ型副黏病毒病，是由鸽新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）引起的一种急性、热性、高度接触性传染病，临床发病为肠炎、下痢和神经症状为主要特征，是危害养鸽业的主要疫病之一［1］。
一株肉鸽强毒新城疫的分离鉴定和分子特性分析
一株肉鸽强毒新城疫的分离鉴定和分子特性分析沙明利; 杨宏禹; 林树乾; 姜亦飞; 于可响【期刊名称】《《家禽科学》》【年(卷),期】2009(000)002【摘要】从山东地区发病肉鸽中分离到一株新城疫病毒(SDZ08),经测定,其鸡胚半数致死量(ELD50)、鸡胚平均死亡时间(MDT)、1日龄雏鸡脑内接种的致病指数(ICPI)、6周龄鸡静脉接种的致病指数(IVPI)分别为107.85、52.5h、1.8、2.2,表明该新城疫病毒为强毒。
通过分析其融合蛋白(F)发现,F蛋白多肽裂解位点为112RRQKRF117,符合NDV强毒株裂解位点氨基酸序列。
F基因分型及氨基酸同源性比较发现,SDZ08株属于基因Ⅵ,与LaSota、F48E9、B1、V4等传统毒株同源性较低,与鸽源NDV同源性较高。
【总页数】3页(P10-12)【作者】沙明利; 杨宏禹; 林树乾; 姜亦飞; 于可响【作者单位】山东省农科院家禽研究所济南 250023; 山东省蓬莱市大辛店畜牧兽医工作站【正文语种】中文【中图分类】S858.39【相关文献】1.肉鸽新城疫病毒山东分离株的分离鉴定及其F基因的分子特性分析 [J], 袁小远;徐绍建;曲新泽;张玉霞;秦卓明2.一株信鸽新城疫强毒的分离鉴定和分子特性分析 [J], 袁小远;王友令;徐怀英;欧阳文军;贾强;何叶峰;秦卓明3.一株新城疫重组强毒的分离鉴定与分子特性分析 [J], 谭雷涛;秦卓明;马保臣;徐怀英;崔治中4.一株肉鸽新城疫强毒的分离鉴定 [J], 杨丽云;阮二垒;陈芳艳;王林川5.一株新城疫病毒分离鉴定及分子特性分析 [J], 程荣华;呼延含蓉;李蓉;高原;石霖;徐鹏因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
鸽新城疫病毒分离鉴定及动物感染试验
鸽新城疫病毒分离鉴定及动物感染试验李复煌;李冰心;郑瑞峰;王俊;李占鸿;马富梅;刘再超;张清水【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2016(037)009【摘要】从发病商品肉鸽组织中分离到3株新城疫病毒，对其基因序列和感染力进行测定和分析。
用RT-PCR 对3株病毒 F 基因进行了扩增，测序，3株新城疫病毒的 F 基因同源性比较及进化分析结果表明，3株病毒均属于Ⅵb 亚型，且与2011年比利时分离株亲缘关系较近，F 蛋白裂解位点符合强毒特征；肉鸽攻毒试验进一步证实了3株新城疫病毒的高致病性，肉鸽感染新城疫病毒后通过呼吸道及消化道途径排毒，具有高度接触传染性。
试验结果证明了鸽感染新城疫病毒后的排毒时间及方式，为鸽新城疫的及早发现与防控提供了依据。
%Three Newcastle disease virus strains were isolated from dead pigeons,the molecular identifica-tion was carried out by RT-PCR method and the F gene was sequenced then.The homology comparison and phylogenetic analysis were also implemented base on the F gene.The result showed that three strains be-long to the Ⅵb subtype.F protein cleavage site was consistent with the virulent NDV strains,which was further verified through pigeon challenge assay.The pigeons infected with NDV shed the virus through the respiratory and digestive tracts showing highly contagious property.The challenge assay demonstrated the shedding way of the infected pigeons which is in favour of the prevention of the pigeon ND.【总页数】5页(P53-57)【作者】李复煌;李冰心;郑瑞峰;王俊;李占鸿;马富梅;刘再超;张清水【作者单位】北京市畜牧总站，北京 100107;中国农业大学动物医学院/农业部动物流行病学人畜共患病重点实验室，北京 100193; 北京市大兴区动物疾病控制中心，北京 102629;北京市畜牧总站，北京 100107;中国农业大学动物医学院/农业部动物流行病学人畜共患病重点实验室，北京 100193;中国农业大学动物医学院/农业部动物流行病学人畜共患病重点实验室，北京 100193;中国农业大学动物医学院/农业部动物流行病学人畜共患病重点实验室，北京 100193;北京市顺义区动物卫生监督所，北京 101300;中国农业大学动物医学院/农业部动物流行病学人畜共患病重点实验室，北京 100193【正文语种】中文【中图分类】S852.659.5【相关文献】1.猪细小病毒体外培养适应毒株的培育及动物感染试验 [J], 李胜斌;危艳武;唐青海;吴洪丽;刘建波;郭龙军;王一平;刘丹;刘长明2.禽流感病毒鸭源分离株的动物感染试验 [J], 李芙蓉;王永坤;王建业;庄国宏3.采用布氏田鼠建立动物流感病毒感染模型的试验研究 [J], 刘洪强;吴德峰;陈吉龙4.高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒YA株的分离鉴定及动物回归试验 [J], 王福广;孙彦伟;赵志权;王连想;余小利;苏丹萍;罗满林;贺东生5.小白鼠嗜肺巴氏杆菌的分离鉴定及其动物感染试验 [J], 傅林锋;陈国怀因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
３ ， 引物 为 ： Ａ Ｇ Ｃ Ｇ Ｔ Ｃ Ａ Ｇ Ｃ Ａ Ｇ 负链 ５ Ａ Ａ Ｔ ＡＧ Ｃ Ｔ ＣＣ Ｔ
３ ， 片段 大小 ５２ｐ 引物合 成 ｆ生 物工 程 （ 海 ） ９ｂ 。 ｝ １ 上
有 限公 司完 成
１ 病毒 分 离 病 料 来源 于 山东 德 州某 肉鸽 场 ３ ． ２ ０
１ 对 分 离毒毒 力的 测 定 《 ７ 采用 同际 兽 医局 的 标 准诊 断 方 法 和疫 苗 标 准 手册 》 ２０ （００年 ， 四版 ） 第 进行 毒力 检 测 ， 将分 离 毒株 经 鸡胚 复 壮一 代 的 尿囊
液进 行试 验 。１日龄雏 鸡脑 内接 种致病 指数 （ Ｐ） Ｉ Ｉ Ｃ 的
维普资讯
Ｐ ｕ ｔｙ Ｓ ｉ ｎ ￣ ｏ ｌ ｃｖ ｃ ｒ
肉鸽 新城 疫 强毒 的 分 离与鉴 定
ｉ
｛
ｋ一＋ ・＋ 一＋ －＋ －＋ 一＋ 一 ＋ ＊ ＋ －＋ 一＋ ＊＋ 一＋ －＋ ・＋ ＋ ＋ ＊＋ 一＋ ＊ ＋ 一＋ ＊＋ 一 ＋ ＊ ＋ －＋ 一＋ 一＋ “＋ － ＋ 一 ＋ ＊ ＋ ＋ “＋ 一＋ ＊ ＋ ＊
新 城 疫 是 由 新 城 疫 病 毒 （ ｅ ｃｓ ｅ ￣ ａｅ Ｎ ｗ ａｔ ｄ ｅ ｌ ｓ
鸡 胚 ， ２ ～６ 取 ４ ９ ｈ死 亡 的 鸡胚 ， 察 鸡 胚 病 变 ， 获 观 收 有 明显 病变 的鸡 胚 尿囊 液 ， 定尿 囊 液 是否 有 血凝 测
ｖｒｓＮ ｉ ，ＤＶ） ｕ 引起 禽 的一 种 急 性 、 度 传 染 性 疾 病 ， 高
为 １ ， ． ６周龄 幼 鸡静 脉接 种 致病 指数 （ Ｉ为 ２２ 证 明该 Ｎ Ｖ为 强毒 。将 该 病毒 回归 非免 疫 肉 ８ Ｉ ） ．， ＶＰ Ｄ
鸽， 能产 生 典型 的新 城 疫症状 与 病 变 。
关 键词 ： ； 鸽 新城 疫 ； 离； 定 ； 分 鉴 强毒
中图分类 号 ：８ ８ ９ ￥５ ． ３ 文 献标识 码 ： Ｂ 文章编 号 ：６ ３ １８ （ ０ ８ ９ ０ ３ — ２ １７ — ０ ５ ２ ０ ） — ０ ７ ０
物。 正链引物为 ： ５ Ｃ Ｔｒ Ｔ Ａ Ａ Ｃ Ｃ Ｃ ｒ Ａ Ｃ １ Ｃ Ｃ Ｃ Ｃ Ｔ Ｃ Ｃｒ Ｃ 一 ｒ
１１ 材料 ．
试 验 用 Ｓ Ｆ鸡胚 和鸡 ．由 山东 省农 科 Ｐ
院家禽 研 究所 Ｓ Ｆ试 验 场提 供 ， Ｐ 试验 鸡 群饲 养 于 严 格 消毒 和 管理 的环 境 中 。试验 鸽 。 由济 南某 鸽 场 提 供 。抗 新 城疫 阳性 血清 、 禽 流感 阳性 『 清 （ 抗 ｆ Ⅱ ＨＮ 、 ＨＮ ） 抗 减 蛋综 合 征 （ Ｄ ） 性 血 清 由 Ｌ 东 省 农 、 Ｅ Ｓ阳 【 Ｊ 科 院家 禽研 究 所禽 病研 究 中心 保存
日龄 的 肉鸽群 ，鸽 群表 现 为严 重 的 呼 吸道症 状 ， 整 个 鸽群 死 率 已 高达 ３ ％， ５ 剖检 死 亡 肉鸽 可见 喉 头 粘液 增 多 ， 头 、 管 、 出 血 严重 。 、 、 、 喉 气 肺 心 肝 睥 正 常 ； 道有 点状 出血 。 肠 取病 变严 重 的气 管 、 喉头 和 肺 脏 ， 碎 ， ２倍 的 生理 盐水 和 终浓 度 为 ２ ０ Ｉ ／ ｌ 剪 加 ０ ０Ｕ ｍ
测定 ．０日龄鸡 胚平 均致 死 时 间（ Ｔ的 测定 ， １ ＭＤ ） ６周
的双抗 。 磨后 ， ４ 研 经 ℃作用 ２ ， 后 置一 ０ ｈ然 ２℃冰 箱 ，
反复 冻融 ２次 １ 鸡胚接 种与培养 ３ 将 上 述 处 理 后 的 病 料
５０ ｒｍ／ ｎ离心 １ｒｎ取 上 清 ， 别接 种 于 ｌ ００ｐ ｍｉ ５ ｉ； ａ 分 ０枚
十限 亓丽红 于可响， 李霞 ， ， Ｊ ， … ｌ ｊ 艾武 入
（ 东省农 业科 学院 家禽研 究所 ， 南 山 济 ２０ ２ ） ５ ０ ３
摘
要 ：从 山 东地 区发病 的 肉鸽 群 中分 离到 一 株新 城 疫病 毒 ，经测 定 ，其 鸡 胚 半数 致 死量
（ Ｌ 勋 为 ｌ ，０日龄 鸡 胚 平 均 致 死 时 间 （ Ｔ 为 ５ ．ｈ １日龄 雏 鸡 脑 内接 种 致病 指 数 （Ｃ Ｉ ＥＤ ） ０ １ ＭＤ ） ２５ ， ＩＰ）
鸽 新城 疫是 肉鸽所 有疫 病 中 发生 频率 最 高 、 害最 危 大 的一 类 传染病 ， 占临 床病 例 的 ４ ％。该 病 的 发 约 ０ 生 没 有 明 显的 季节 性 。 同 品种 、 不 日龄 的 鸽 均 可 感 染 此病 。 幼 鸽更 易感 。 自然感 染 的鸽 群 发病 率 和 但 死亡 率一 般在 ２ ％～ ０ ｉ 幼 鸽可 达 １０ ０ ９ ％１ ￣， ０ ％。
１ 材料 与方法
性， 检测 有无 细 菌污 染 ， 盲传 ３代 。 并 测其 血 凝 效价
（ Ａ） 价 。 Ｈ 效 １ 血 凝 （ Ａ） 血 凝抑 制 （ Ｉ试 验 ， ４ Ｈ 和 Ｈ） 按 常规 Ｂ 一
微 量法 （ 震 ， 景 华 等 ，９７ 进 行 尿囊 液 血凝 效 殷 刘 １９ ）
价 （ Ａ） 并 以抗 Ｎ Ｖ、 禽 流感 （ 。Ｈ Ｎ ） 抗 减 Ｈ ， Ｄ 抗 ＨＮ 、 、
蛋综 合征 （ Ｄ ） Ｅ Ｓ 阳性 血清 进 行 ＨＩ 反应
１ 分 子 生物 学鉴 定 ． ５ 参 照 Ｇ ｎ ａ ｋ公 布 的 Ｎ Ｖ ｅｂｎ Ｄ 基 因 组 序 列 用 Ｐｉ ｒ ｐｉ ｒ５ ｒ ｒ ｅ ． 件 设 一 对 引 ｍｅ ｍｅ ０软
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
１ 人 工 感 染 肉鸽 试 验 ， ６
用 分 离 的 病 毒 尿 囊 液
０２ ｌ分 别 对 ｌ ，ｍ ， ０只 ３ ０日龄 非 免疫 肉鸽 进 行 点 眼 、 滴 鼻 。观 察 ｌｄ 每 日记 录 死亡 和发 病情 况 ， 对未 Ｏ， 并 死亡 的攻 毒 肉鸽 采 血 ， 并测 其抗 体水 平 。