aav生产工艺

aav生产工艺
AAV是一种基因传递载体，被广泛应用于基因治疗、基因转移和基因
工程等领域。

AAV矢量是由AAV基因组DNA加上外壳（VP1、VP2和VP3）组成的，AAV矢量可以将所需的基因或RNA载体输送到细
胞内，确保治疗因子的正常表达。

AAV生产工艺包括以下几个阶段：
构建真核表达载体、AAV矢量生产、AAV精炼和AAV的质量控制。

构建真核表达载体：前期开展构建矢量的工作，需要选取合适的载体
方案，确定特异的AAV基因组，构建成功的真核表达载体，为后面的生产工艺奠定基础。

AAV矢量生产：AAV矢量生产是AAV生产工艺中最重要的环节之一。

目前常用的矢量生产方法包括贝切型原核发酵法和超融合原核发酵法。

贝切法是由贝切和小来显于1970 年提出的。

BB先用过氧化氢或电解等手段，使细胞内的DNA变性，使DNA 能穿过菌壁；然后再利用盐溶性物（ SDS、 NaOH、 Triton X-100等）使细胞膜破裂，提取目
的基因的DNA。

经过PCR扩增后，加入用AB304p AAV重组载体包装后的细胞中，再接种到293 细胞中。

然后利用离心等手段，提取AAV 粒子。

而超融合原核发酵法则在菌落的选择方面比较自由，多个BB可以使用不同的宿主并对同一菌落进行超融合。

随后，采用宿主细胞酶的方法，进行病毒货物的重复造粒，并不断加强宿主关于病毒感
染方式的技术改进，进一步提高了亚细胞和细胞病毒的产出效率。

AAV精炼：AAV精炼主要是利用离心、超滤等多项技术，精确地将目标AAV产物分离出来。

通过离心分离、超滤等多项技术，分离出
AAV精锐分子。

离心分离将病毒离子分离出细胞，离心分离获得的AAV 粒子可视化观察，可用各种手段按需包装。

该环节是确保AAV
治疗因子为99%的纯度的关键步骤，确保AAV产物无异物，对药品
安全性保障至关重要。

质量控制：质量控制是任何生产行业不可或缺的过程，包括AAV生产。

对于AAV生产来说，质量控制包括检测AAV矢量的完整性、AAV矢量的污染物检测、AAV矢量的纯度检测等。

其中完整性检测包括PCR 检测、双脉冲培养、逆转录酶PCR检测等；污染检测包括细菌污染检测、真菌污染检测、大肠杆菌检测等；纯度检测包括SDS-PAGE检测、Western blot检测、内毒素检测等。

质量控制是AAV生产中不容忽
视的一个环节，保证了所得的AAV产品的质量和可重复性。

总结：AAV生产工艺是一个分阶段的系统过程，包括矢量构建、矢量
生产、AAV精炼和质量控制。

每个阶段都需要一系列的技术支持，确
保最终产出的AAV产品价值得到保障。

随着生物学和基因治疗技术的不断进步，AAV生产技术也会不断更新迭代，保证临床应用的顺利展开。