血液标本知识

3. 血液的功能
（1）运输功能 氧气和营养成分
（2）协调功能
（3）维护机体内环境稳定 （4）防御功能
二、血液标本的采集
1. 毛细血管采血法 采血部位： 左手中指或无名指指端内侧为宜，婴幼 儿大趾及足底内外侧缘部采血，严重烧伤的患者选 择皮肤完整处采血。 采血器材：带刃三棱针或一次性使用“专用采血针” 为好 穿刺深度：3mm 采血顺序：血小板计数、红细胞计数、血红蛋白测 定、白细胞计数、血型鉴定。
血细胞组成
2. 血液主要的理化性质
（1）血量 血浆量与血细胞量的总和
成人约4～5升，约占体重的6%～8%
（2）颜色 红色, 血红蛋白
动脉血: 鲜红色。 静脉血: 暗红色。 严重贫血患者的血:红色变浅。 严重CO中毒或氰化物中毒:樱红色 高脂膳食后血浆:呈乳白色 溶血:呈不同程度的红色。
五、血细胞常用的染色方法
（一）瑞氏染色法 1. 瑞氏染粉 由酸性染料伊红和碱性染料美蓝组成的复合染料。 伊红为钠盐，有色部分为阴离子。美蓝为氯盐，有 色部分为阳离子。美蓝和伊红的水溶液混合后，产 生一种不溶于水的伊红化美蓝（ME）中性沉淀，即 瑞氏染料。
将适量的ME溶解于甲醇中，即成为瑞氏染液。 甲醇的作用： 一方面使ME溶解，并解离为M+和E-。这两种 有色离子可以选择性地与细胞内不同成分结 合而着色。 另一方面因其具有强大的脱水作用，可将细 胞固定为一定形态。当细胞发生凝固时，蛋 白质被沉淀为颗粒状或者网状结构，增加细 胞结构的表面积，提高对染料的吸附作用， 增强染色效果。
液体的相对密度、血液比粘度、红细胞沉降 率、红细胞比积等病理变化
3、化学检查
定性和定量检测标本化学成分的病理变化
4、显微镜检查
观察有型成分的数量和形态
5、自动化仪器检查
电子技术、程序控制的发展
四、学习临床检验的目的和要求
1、理论联系实践 2、操作要求 3、检验结果必须和临床表现结合
4、检验人员的医德
3. pH对细胞染色的影响
细胞着色对氢离子浓度十分敏感，蛋白质带正电荷 即在酸性环境中正电荷增多，易与酸性伊红结合， 染色偏红；相反，当环境的pH＞Pi即在碱性环境中 负电荷增多，则易与美蓝结合染色偏蓝。 使用清洁中性的玻片，优质的甲醇配制染液以及常 用缓冲液（pH6.4～6.8）来调节染色时的pH值
3. 草酸钠
与血液中的钙离子形成 草酸钙沉淀阻止血液凝固。 Na2C2O4+Ca2+→CaC2O4↓+2Na+ 4. 双草酸盐抗凝剂 草酸钾可使红细胞 ，草酸铵则可使红细胞 ，按适 当比例混合不影响红细胞形态和体积，可用于血细 胞比容、血细胞计数、网织红细胞计数等项目双草酸盐源自用于RBC形态变化示意图如图
2. 静脉采血法 通常采用肘部静脉
三、血液标本的抗凝
抗凝： 用物理或化学的方法，除掉或抑制血液中某些凝血 因子以阻止血液凝固的方法
抗凝剂： 能阻止血液凝固的化学试剂
常用化学抗凝剂：
1. 枸橼酸钠（trisodium citrate） 也称柠檬酸钠配成109mmol/L或106mmol/L的 溶液。 抗凝原理： 枸橼酸钠与血液中的钙离子形成可溶性螯合 物，阻止血液凝固。 Na3C6H5O7+Ca2+→CaC6H5O7-+3Na+ 枸橼酸钠用于血栓与止血检验（1:9 ）及红细 胞沉降率（ 1:4 ）等的测定，也多用于配制
2. 乙二胺四乙酸（EDTA）盐
EDTA盐有二钠、二钾和三钾盐，与血液中的 钙离子结合形成螯合物，从而阻止血液凝固。 Na2C10H12O8N2+Ca2+→CaC10H12O8N2+2Na+ 对血细胞形态和血小板计数影响较小，适用 于多项血液检查，尤其是血小板计数。但其 影响血小板聚集和白细胞吞噬功能，故不适 于血栓与止血检查及血小板功能检查。
（二）吉姆萨染色法
染色原理与wright染色法大致相同
本法对细胞核和寄生虫着色较好，结构显示更为清 晰，但细胞质和颗粒着色较差，
（3）红细胞在血浆中的悬浮稳 定性
均匀混悬状态: 1.红细胞膜唾液酸根带 有负电荷，形成Zeta电 位
2. 血浆成分、血浆粘度 及血流动力学等
（4）粘滞性
取决于血细胞比容和血浆粘度
健康成人: 全血粘度为生理盐水粘度的4～5倍 血浆粘度为生理盐水粘度的1.6倍左右
（5）比重和渗透浓度
2. 细胞的着色原理
既有化学的亲合作用，又有物理的吸附作用。 不同的细胞由于其所含化学成分不一样，化 学性质各不相同，对染料的亲合力也不一样。 ①细胞中的碱性物质与酸性染料伊红结合染 成红色，称为嗜酸性物质，如血红蛋白及嗜 酸性粒细胞胞质中的嗜酸性颗粒等为碱性物 质，与酸性伊红结合而染成红色。 ②细胞中的酸性物质可与染液中的碱性染料 美蓝结合而染成蓝色，该物质又称嗜碱性物
③中性颗粒呈等电状态与伊红美蓝均可结合， 染淡紫红色为中性物质。 ④原始红细胞和早幼红细胞的胞质和细胞核 的核仁中含有较多的酸性物质，与美蓝亲合 力强，故染成较浓厚的蓝色；随着细胞的发 育，中幼红细胞阶段既含有酸性物质，又含 有碱性物质，既能与碱性染料美蓝结合，又 能与酸性染料伊红结合，故染成红蓝色或灰 红色；当红细胞完全成熟，酸性物质彻底消
第一章 血液学一般检验
第一节
概论
血液学检查 ： 反应造血系统本身、机体全身或局部病变 有助于疾病的诊断及疗效、预后的观察
只能反应疾病某一方面的情况，不能认为是病程的全部反 应；不同个体，对同一影响有不同的反应，或也可对不同 影响产生 相同的反应
一、血液生理概要
1. 血液的组成 血细胞（红细胞、白细胞、血小板）＋血浆组成 血清与血浆的概念和区别 血浆缺少某些凝血因子
4. 瑞氏染液的质量评价
除用血液片实际染色评价外，采用吸光度比 值（RA）作为瑞氏染液的质量评价指标,瑞氏 染液的成熟指数以RA（A650nm/A525nm） =1.3±0.1为宜。 新配制的瑞氏染液往往偏碱，染色效果较差， 需在室温或37℃下存放一定时间，待染液 “成熟”。染液成熟的过程主要是美蓝逐渐 转变为天青B的过程。在密封条件下，贮存 时间愈久，转化的天青B愈多，染色效果愈
草酸钾

可使RBC缩小 可使RBC胀大 RBC形态、体积无变化 适用于测Hct。
草酸铵

草酸钾:草酸铵

5. 肝素
肝素能阻止凝血酶形成 和抑制血小板聚集
肝素具有抗凝能力强，不影响血细胞体积，不引起 溶血 肝素会引起白细胞聚集，使血涂片染色产生蓝色背 景，不能用于白细胞计数和分类计数
四、血涂片的制备
5. 染色结果分析
在正常情况下，血膜外观呈淡紫红色。显 微镜下，红细胞呈粉红色。白细胞胞质中 颗粒清楚，并显示出各种细胞特有的色彩， 细胞核染紫红色，核染色质结构清楚。 染色偏酸则红细胞和嗜酸性粒细胞颗粒偏 红，白细胞核呈淡蓝色或不着色。 染色偏碱则所有细胞呈灰蓝色，颗粒深暗； 嗜酸性粒细胞可染成暗褐色，甚至紫黑色
2. 血涂片的制备 如图
影响因素：
涂片的厚薄与血滴的大小、推片与载片之间 的角度、推片时的速度及血细胞比容有关。 ①血滴大、角度大、速度快则血膜越厚；反 之则血膜越薄。血膜分布不匀主要是推片边 缘不齐、用力不匀和载玻片不清洁所致 ②血细胞比容高于正常时，血液粘度较高， 保持较小的角度，可得满意结果；相反，血 细胞比容低于正常时，血液较稀，则用较大 角度。
肾脏有实质性损伤的依据 问：tumor？
2、为分析病情、观察疗效、判断预后提供依据 在疾病过程中，血液、体液、分泌物和排泄物也 会随之发生相应的变化 3、为预防疾病提供资料 如血象和肿瘤细胞学的普查等
三、临床检验的一般方法 1、目视检查 直接观察标本：颜色、透明度、性状，有无 凝块或寄生虫
2、理学检查
好的血涂片：厚薄适宜、头体尾分 尾 体 头 明、染色良好
良好血涂片
1. 载玻片的清洁
新玻片常用浓度约1mol/L HCl浸泡24h后用清水彻底 冲洗，干燥后备用。 用过的载玻片可放入含适量肥皂或其它洗涤剂的清水 中煮沸20min，趁热将血膜刷洗干净，再用清水反复 冲洗干燥备用。 使用载玻片时，切勿用手触及玻片表面，以保持玻片 清洁、干燥、中性、无油腻
全血比重: 男性约为1.055～1.063 女性约为1.051～1.060； 与红细胞的百分比有关 血浆的比重约在1.025～1.030之间，与蛋白浓度有关。 血浆渗量（渗透压）： 290～310mOsm/kg· H2O。
（6）pH 血液pH值为7.35～7.45
（7）凝固性 与凝血因子激活有关
血液标本知识
内容
1、一般血液学检验概述 2、血液的生理特性 3、血液标本的采集 4、抗凝剂 5、血涂片的制备
二、临床检验在医学中的作用
1、为准确诊断、及时治疗提供依据 临床检验的结果是支持诊断、鉴别诊断、甚至确定诊断的 主要依据。
例：anemia leukemia
依据：血中红细胞和血红蛋白量减少 依据：血象和骨髓象 尿液中出现蛋白、细胞 管型