弧菌科及检验

霍乱弧菌
是引起烈性肠道传染病霍乱的病原体 包括古典生物型和ElTor生物型 O139是新的流行菌株
形态染色
革兰阴性 弧形或逗点状 单鞭毛，运动呈“穿梭样”或“流星样” 无芽孢，无荚膜 在新鲜粪便中成“鱼群样”排列
霍乱弧菌
革 兰 染 色
鞭 毛 染 色
培养特性
兼性厌氧 营养要求不高 耐碱不耐酸，常用pH8.4～9.2碱性培养 基 在液体培养基中形成菌膜 菌落圆形、较大、扁平
邻单胞菌属－－主要性状
只有一个菌种：类志贺邻单胞菌 革兰阴性杆菌，单鞭毛或丛鞭毛，无芽孢，无 荚膜 兼性厌氧，营养要求不高 在SS平板形成不发酵乳糖菌落 氧化酶＋，葡萄糖发酵＋ O/129：S TCBS：不生长 6.5％NaCl：不生长 赖氨酸、鸟氨酸、精氨酸双水解均＋ 多数菌株产β-内酰胺酶，对青霉素耐药
作用机制示意图
微生物检验－－标本采集
发病早期采集标本 以“米泔水”样便为主，及时送检 卡－布培养基保存 严密包装，专人送检
快速诊断
标本 增菌培养 碱性蛋白胨水
直接涂片 动力、制动试验
分离培养（TCBS、碱性平板） 血清学鉴定 初步报告 生化鉴定分型
检验程序
确诊报告
检验方法－－显微镜检查
涂片染色：标本直接涂片革兰染色，注 意形态、排列 动力观察：压滴法或暗视野镜检，注意 运动方式 制动试验：O1诊断血清与菌体结合，动 力消失
气单胞菌属
形态染色： 革兰阴性杆菌，或球杆状、丝状，极端 鞭毛，无芽孢 生长条件： 兼性厌氧；营养要求不高 生长温度较宽，0℃～45℃ 嗜冷菌37℃以下生长 嗜温菌10～42℃生长
气单胞菌属
生长现象 TCBS上不生长 血平板：灰白、光滑、凸起菌落 肠ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ选择平板：形成不发酵乳糖菌落 生化反应 氧化酶＋、触酶＋ 发酵葡萄糖产酸产气 6.5％NaCl不生长 O129不敏感 多数菌株产β-内酰胺酶，对青霉素耐药
彦岛型（ABC）
+ +
+
+ +
+
+
抵抗力与变异
ElTor型抵抗力较古典型强， 在水中存活时间长 对酸性物质敏感 对庆大霉素耐受 多次传代可失去典型形态而成为杆状
临床意义
致病物质：霍乱肠毒素，导致小肠上皮 细胞分泌功能亢进，分泌大量肠液。 所致疾病： 经肠道传染，引起烈性肠道传染病－－ 霍乱，为甲类传染病。 典型病人粪便呈“米泔水”样 病后可获得牢固免疫，以SIgA为主。 我国霍乱流行菌株以ElTor小川型为主。
邻单胞菌属－－临床意义
腹泻、食物中毒，多见于夏季 败血症、脑膜炎等，多见于免疫力低下 者，感染率低，但死亡率高。
邻单胞菌属－－检验程序
涂片 染色镜检 标本 血标本
分离培养 （血平板、Mac）
增菌
氧化酶 TCBS生长 O/129 耐盐试验
可疑菌落 初步生化反应
全面生化反应
邻单胞菌属－－鉴定
与志贺菌属鉴别：氧化酶、动力、血清 学 与气单胞菌属鉴别：O/129，肌醇试验 与弧菌属鉴别：TCBS、6.5％NaCl生长 试验
Ⅴ组噬菌体裂解
古典生物型 S -
ElTor生物型 + + R +
+
-
+
霍乱弧菌分群、型
O抗原是霍乱弧菌分群和型的基础 根据O抗原不同分为139个血清群 O1群包括古典生物型和ElTor生物型 其他群称为非O1群（非凝集弧菌） O1群血清型（见下表） 血清型 A抗原 B抗原 C抗原
小川型（AB） 稻叶型（AC）
试验弧菌属是引起烈性肠道传染病霍乱的病原体包括古典生物型和eltor生物型o139是新的流行菌株革兰阴性弧形或逗点状单鞭毛运动呈穿梭样或流星样无芽孢无荚膜在新鲜粪便中成鱼群样排列营养要求不高耐碱不耐酸常用ph8492碱性培养在液体培养基中形成菌膜菌落圆形较大扁平碱性蛋白胨水碱性琼脂平板庆大霉素琼脂平板含亚碲酸钾硫代硫酸钠枸櫞酸盐胆盐蔗糖琼脂平板tcbs亚碲酸钾琼脂平板试验名称结果试验名称结果氧化酶710naclo抗原h抗原两种生物型具有相同的抗原结构两种生物型多数生物学性状相似鉴别试验古典生物型eltor生物型vpo抗原是霍乱弧菌分群和型的基础根据o抗原不同分为139个血清群o1群包括古典生物型和eltor生物型其他群称为非o1群非凝集弧菌o1群血清型见下表血清型a抗原b抗原c抗原小川型abeltor型抵抗力较古典型强在水中存活时间长对酸性物质敏感对庆大霉素耐受多次传代可失去典型形态而成为杆状致病物质
分离培养
标本接种碱性蛋白胨水增菌6～8小时， 转种TCBS或庆大霉素琼脂， TCBS：出现黄色菌落 庆大霉素琼脂：出现中心灰褐色的菌落
鉴定
生化反应：粘丝试验、霍乱红反应 确定血清群：O1群诊断血清与可疑菌落作玻片 凝集，以确定是否为O1群 确定血清型：与分型诊断血清作玻片凝集，以 确定血清型别 确定生物型： 第Ⅳ组噬菌体裂解试验 多粘菌素B敏感试验 鸡红细胞凝集试验 溶血试验
弧菌科常规检验
弧菌科种类
弧菌属 气单胞菌属 邻单胞菌属 发光菌属等
弧菌科共同特征
革兰阴性菌 需氧兼性厌氧 营养要求不高 氧化酶＋ 发酵葡萄糖产酸不产气
试验 甘露醇
弧菌属 +/-
气单胞菌 属 +
鸟氨酸
精氨酸 O/129敏感 TCBS生长 嗜盐性
+/+/S + +/-
+/R -
弧 菌 邻单胞菌 科 属 三 个 + 菌 + 属 S 的 - 鉴 - 别
7％、10％ NaCl
+ +
-
V-P 明胶液化
抗原结构和分型
O抗原 H抗原
霍乱弧菌生物型
O1群霍乱弧菌分为古典生物型和ElTor生 物型 两种生物型具有相同的抗原结构 两种生物型多数生物学性状相似
霍乱弧菌两种生物型的鉴别
鉴别试验 V-P 羊红细胞溶解 50U多粘菌素 鸡红细胞凝集
Ⅳ组噬菌体裂解
肠毒素测定
鉴定试验
与肠道杆菌、非发酵菌鉴别 与邻单胞菌属和弧菌属鉴别 气单胞菌属种间鉴别
肠道杆菌、非发酵菌、弧菌科鉴别
鉴定试验
氧化酶
肠杆菌科
－
非发酵菌
＋
弧菌科
＋
葡萄糖氧化/ 发酵（O/F） 鞭毛
F
周鞭毛
O／－
F
单、丛、周 单、丛
鉴定依据
革兰阴性杆菌，丛鞭毛 肠道选择平板上无色透明菌落 氧化酶＋、葡萄糖发酵＋ O/129：R TCBS：－ 6.5％NaCl：－
气单胞菌属－－临床意义
致病物质：溶血毒素、细胞毒素 所致疾病： 肠道感染：是夏季腹泻常见病原菌 肠外感染：败血症、伤口感染等 多数菌株产β-内酰胺酶，对青霉素耐药
检验程序
涂片 染色镜检 标本 血标本
分离培养 （血平板、Mac）
增菌
氧化酶 TCBS生长 O/129 耐盐试验
可疑菌落 初步生化反应
全面生化反应
霍乱弧菌常用培养基
碱性蛋白胨水 碱性琼脂平板 庆大霉素琼脂平板（含亚碲酸钾） 硫代硫酸钠-枸櫞酸盐-胆盐-蔗糖琼脂平 板（TCBS） 亚碲酸钾琼脂平板
生化反应
试验名称
氧化酶 硝酸盐还原 赖氨酸
结果
+ + +
试验名称
吲哚 葡萄糖 蔗糖
结果
+ + +
鸟氨酸
精氨酸双水解
+ d +
甘露醇 0％、1％NaCl
副溶血性弧菌－－生物学性状
革兰阴性杆菌，或微弯，单端鞭毛，无芽孢， 无荚膜 营养要求 不高，嗜盐性，最适盐浓度3.5％ NaCl，无盐培养基不生长 TCBS：形成不发酵蔗糖的绿色菌落 神奈川现象＋：致病性副溶血性弧菌能溶解 人或兔红细胞，不溶解马红细胞
副溶血性弧菌－－临床意义
致病物质：溶血素（耐热直接溶血素和 耐热相关溶血素） 所致疾病： 食入副溶血性弧菌污染的盐腌食品，引 起食物中毒