凯氏定氮法测定蛋白质的氮含量

凯氏定氮法测定蛋白质的氮含量
秦润梅
【摘要】蛋白质是人体肌肉、血液、内脏、神经、骨骼、韧带、毛发、指甲和皮肤等组织的主要成分,人体许多与生命活动有关的活性物质,如酶、抗体、激素等,都是由蛋白质或蛋白质的衍生物构成。

凯氏定氮法用于测定有机物的含氮量,若蛋白质的含氮量已知时,则可用此法测定样品中蛋白质的含量。

【期刊名称】《内蒙古石油化工》
【年(卷),期】2011(000)017
【总页数】1页(P12-12)
【关键词】凯氏定氮法;蛋白质
【作者】秦润梅
【作者单位】内蒙古化工职业学院材料系,内蒙古呼和浩特010010
【正文语种】中文
【中图分类】O656.32
凯氏定氮法用于测定有机物的含氮量,若蛋白质的含氮量已知时,则可用此法测定样品中蛋白质的含量。

当蛋白质与浓硫酸共热时,其中的碳、氢两元素被氧化成二氧化碳和水,而氮则转变成氨,并进一步与硫酸作用生成硫酸铵。

此过程通常称为“消化”。

但是,这个反应进行得比较缓慢,通常需要加入硫酸钾或硫酸钠以提高反应液的沸点,并加入硫酸铜作为催化剂,以促进反应的进行。

消化完成后,在凯氏定氮仪中加入浓碱,可使消化液中的硫酸铵分解,游离出氨,借助水蒸汽蒸馏法,将产生的氨蒸馏
到一定量、一定浓度的硼酸溶液中,硼酸吸收氨后,氨与溶液中氢离子结合,使溶液中的氢离子浓度降低,指示剂颜色改变,然后用标准无机盐酸滴定,直至恢复溶液中原来的氢离子浓度为止。

根据所用标准盐酸的量可计算出待测物中的总氮量。

蛋白质的含氮量为16%,即1克蛋白质中的氮相当于6.25g蛋白质,用凯氏定氮法测出的含氮量乘以6.25,即得样品中蛋白质的含量。

2.1 实验器材
微量凯氏定氮仪1套;50m l凯氏烧瓶4个;移液管;锥形瓶;试管;小玻璃珠;电子万用炉;容量瓶。

2.2 试验试剂
浓硫酸;30%氢氧化钠溶液;2%硼酸溶液;标准盐酸溶液(0.01m o l/L)。

粉末硫酸钾-硫酸铜混合物:K 2SO 4与CuSO 4·5H 2O以3∶1配比研磨混合。

混合指示剂(田氏指示剂):由50m l0.1%甲烯蓝乙醇溶液与200m l0.1%甲基红乙醇溶液混合配成,贮于棕色瓶中备用。

试剂配制用水为无氨蒸馏水。

2.3 实验操作
2.3.1 安装凯氏定氮仪。

2.3.2 硝化:称取1g三鹿乳粉样品,称准至0. 0001g,置于500m l凯氏烧瓶,加6.0g 硫酸钾,0.2g硫酸铜.再小心移入浓硫酸20m l。

注意加样品时应直接送入瓶底,而不要沾在瓶口和瓶颈上。

开始加热,待内容物质全部炭化。

没有产生泡沫后,加大火力继续加热,直至液体变蓝色透明后,继续加热30m in,冷却,缓慢加入20m l蒸馏水,再放冷到20℃,移入100m l容量瓶并定容至刻度。

2.4 蒸馏
2.4.1 蒸馏器的洗涤:用水洗涤干净微量凯氏定氮仪,在蒸汽发生器中加入用几滴硫酸酸化的蒸馏水和几滴甲基红指示剂,用这样的水蒸汽洗涤凯氏定氮仪。

约15m in 后,在冷凝器下端倾斜放好装有硼酸-指示剂的锥形瓶,继续蒸汽洗涤2m in,观察锥
形瓶内的溶液是否变色,如不变色则证明蒸馏装置内部已洗涤干净。

移走锥形瓶,停
止加热,打开夹子。

2.4.2 蒸馏:取下棒状玻塞,用吸管吸取消化液,细心地插到反应室小玻璃杯的下方,塞
紧棒状玻塞。

将一个含有硼酸和指示剂的锥形瓶放在冷凝器下方,使冷凝器下端浸
没在液体内。

取30%的氢氧化钠溶液10m l放入小玻璃杯中,轻提棒状玻璃塞使之流入反应室(为了防止冷凝管倒吸,液体流入反应室必须缓慢)。

尚未完全流入时,将
玻璃塞盖紧,向玻璃杯中加入蒸馏水约10m l。

再轻提玻璃塞,使一半蒸馏水慢慢流
入反应室,一半留在玻璃杯中作水封。

加热水蒸汽发生器,沸腾后夹紧夹子,开始蒸馏。

氨气进入锥形瓶,瓶中的酸溶液由紫色变成绿色。

变色时起记时,再蒸馏5m in。

移
动锥形瓶,使硼酸液面离开冷凝管约1厘米,并用少量蒸馏水洗涤冷凝管口外面,继续蒸馏1m in,移开锥形瓶,用表面皿覆盖锥形瓶。

蒸馏完毕后,须将反应室洗涤干净,再继续下一个蒸馏操作。

待样品和对照均蒸馏完毕后,同时进行滴定。

2.5 滴定
用0.1018m o l/L的标准盐酸溶液滴定各锥形瓶中收集的氨量,硼酸指示剂溶液由
绿色变淡紫色为滴定终点。

2.6 实验结果样品中氮的含量(g%)
X—样品中蛋白质含量(%);V 1—样品液消耗标准盐酸液体积(m l);V 2—试剂空白
消耗标准盐酸液体积(m l);C—盐酸标准液浓度(m o I/L);0.0 l4～1m o l/L盐的标
准液1m l相当于氮的克数;M—样品的质量;F—氮换算系数(6.38)。

[1] 宁正祥.食品成分分析手册[M].北京:中国轻工业出版社,1998.
[2] 蛋白质测定实验研究[J].实验室研究与探讨, 2005,24(4):58～59.
【相关文献】
[1] 宁正祥.食品成分分析手册[M].北京:中国轻工业出版社,1998.
[2] 蛋白质测定实验研究[J].实验室研究与探讨, 2005,24(4):58～59.
中图分类号:O 656.32 文献标识码:A 文章编号:1006—7981(2011)17—0012—01。