HPLC法测定藏药二十五味珊瑚丸中β－细辛醚的含量

HPLC法测定藏药二十五味珊瑚丸中β－细辛醚的含量
兰钧;阿萍
【摘要】Objective To establish a UPLC determination method forβ-asarone in Ershiwuwei Shanhu Pills.Methods The chro-matogram column was Waters Xselect CSH C18 (4.6mm ×250mm,5μm),the mobile phase consisted of methanol-water (20∶80) and the flow rate was 1 mL/min.The detection wavelength was 254nm and the column temperature was
35℃.Results The linear range ofβ-asarone was 0.4963
~2.9778μg,r=0.9999.The average recovery rate was 99.27%,RSD%
=1.1%.Conclusion The method is accurate,reliable,fast,sensitive,and suitable for quality control of Tibet traditional medicine Ershiwuwei Shanhu Pills.%目的：建立藏药二十五味珊瑚丸中β－细辛醚的HPLC含量测定方法。

方法：采用Waters XSELECT CSH C18色谱柱，以甲醇－水（56∶44）为流动相，流速为1.0mL／min，检测波长为254nm，柱温为35℃。

结果：β－细辛
醚在0.9926～2.9778μg范围内线性良好（r＝0.9999），平均回收率为99.27％，RSD为1.1％。

结论：该方法准确、可靠、快速、灵敏，可用于藏药二十五味珊瑚丸的质量控制。

【期刊名称】《中国民族民间医药》
【年(卷),期】2016(025)017
【总页数】3页(P8-10)
【关键词】二十五味珊瑚丸;β-细辛醚;高效液相色谱法;含量测定
【作者】兰钧;阿萍
【作者单位】西藏自治区食品药品检验所，西藏拉萨 850000;西藏自治区食品药
品检验所，西藏拉萨 850000
【正文语种】中文
【中图分类】R291.408
二十五味珊瑚丸是传统藏药，由珊瑚、珍珠、青金石、珍珠母、诃子、木香、红花、丁香、沉香、朱砂、龙骨等二十五味药材制成，具有清热定惊、开窍通络、止痛的功效，用于治疗“白脉病”，即中枢神经系统疾病，如神志不清，身体麻木，头昏目眩，脑部疼痛，血压不调，头痛，癫痫及各种神经性疼痛[1-2]。

首次收载于1995《中国药典》标本版，1997年被国家卫生部批准为国家中药保护品种，目前被《中国药典》2010年版收载。

现行检验标准包含简单的化学反应和西红花、红花主要成分的薄层色谱鉴别以及乌头碱的限量测定。

涉及的药材少，代表性不足，缺乏组方药材的质控指标及定量标准，难以保证产品质量的稳定和用药安全有效。

二十五味珊瑚丸治疗癫痫等神经性疼痛，藏菖蒲中有效成分β-细辛醚起重要作用，采用UPLC-DAD/Q-TOF-MS对二十五味珊瑚丸全方进行了系统的成分分析，鉴
定出6大类61个成分，其中苯丙素类β-细辛醚和α-细辛醚来自藏菖蒲，且二十
五味珊瑚丸成药中β-细辛醚含量较高[3-4]。

研究表明，β-细辛醚能降低小鼠癫痫发作级别，延长癫痫发作潜伏期，减少湿狗样抖动次数[3,5]。

而β-细辛醚是主要
入血入脑的成分，既是有效成分，但在高浓度下又是潜在的毒性成分，因此控制
β-细辛醚的含量关系到全方的安全性和有效性[4]。

本研究拟采用HPLC建立了二
十五味珊瑚丸中β-细辛醚的含量测定方法，为藏药二十五味珊瑚丸的质量控制提
供参考方法。

1.1 仪器Waters高效液相色谱仪(Waters2695泵自动进样器，2998二极管阵列紫外检测器，Waters自带数据处理器)；超声仪；旋转蒸发仪；十万分之一电子天平。

1.2 材料β-细辛醚(批号：C10301000，Dr.Ehrenstorfer GmbH)；二十五味
珊瑚丸(抽自青海金诃、西藏神猴、昌都光于利民、西藏甘露、西藏藏医学院等9
个生产企业，占全国生产企业的73%)。

配制阴性样品的药材由西藏自治区食品药品检验所标本室提供。

甲醇为色谱纯(美国Fisher公司)，水为超纯水。

2.1 色谱条件色谱柱：Waters Xselect CSH C18(4.6mm×250mm，5μm)；
柱温：35℃；流动相：甲醇-水(56∶44)；流速：1mL/min；检测波长：254nm；进样量：10μL。

2.2 空白试验按处方中药味比例，配制不含藏菖蒲的群药，按其工艺制成阴性
样品，再按供试品溶液的制备方法制备并测定，色谱图见图1。

表明阴性样品溶液在与β-细辛醚对照品相同保留时间处未现色谱峰，故认为无干扰。

2.3 对照品溶液的制备精密称取β-细辛醚对照品适量，加甲醇制成1mL含
0.25mg的溶液，作为对照品溶液。

2.4 供试品溶液的制备[4，6，7] 取本品2g，研细，精密称定，加甲醇20mL，加热回流提取1h，过滤后，药渣再用20mL甲醇加热回流提取1h。

合并两次提
取液，用旋转蒸发仪在30℃下减压干燥完全，加入少量甲醇洗涤，用甲醇定容至10mL量瓶中，摇匀，用0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液即得。

2.5 线性关系的考察精密称取β-细辛醚对照品适量，制得浓度溶液为
0.24815mg/mL，分别进样2、4、6、8、10、12μl，按上述色谱条件，测定峰
面积。

以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，并进行线性回归，回归方程：Y=2.23e+006X-8.85e+004(r=0.9999)，结果表明，β-细辛醚在0.4963～2.9778μg范围内线性关系良好。

2.6 精密度试验取同一供试品溶液，连续进样6次，RSD值为 0.5%。

表明仪
器的精密度良好。

2.7 稳定性试验取同一供试品溶液，按上述色谱条件，分别在室温下放置0、2、4、8、12h进样测定，结果峰面积基本不变，RSD值为0.73%，表明供试品溶液在12h内基本稳定。

2.8 重复性试验取本品1批，按照上述方法制备成6份供试品溶液，测得β-细辛醚平均含量为2.04mg/g，RSD值为1.1%。

2.9 回收率试验精密称取来自7个不同生产企业已知含量的样品约1g，分别精密加入浓度的β-细辛醚对照品，进样测定，平均回收率及RSD值见表1。

2.10 样品的测定取7个生产企业样品，按上述方法制备供试品溶液，在上述
色谱条件下，进行含量测定。

计算样品中β-细辛醚的含量，结果见表2。

3.1 用甲醇、水超声提取，结果杂质峰干扰严重，分离度较差。

而采用甲醇加热
回流提取后用旋转蒸发仪回收溶剂，可除去较多杂质峰，各组分能够良好分离。

3.2 采用不同流动相进行考察，乙腈和0.05%磷酸溶液梯度洗脱，结果出峰时间推迟且峰拖尾，甲醇和水比例为(65∶35)，结果峰分离差。

用甲醇和水比例(46∶44)结果峰形对称，分离好且分析时间缩短。

3.3 二十五味珊瑚丸中同时含β-细辛醚和α-细辛醚，是藏菖蒲发挥药效的重要
指标成分。

目前国内无β-细辛醚和α-细辛醚标准品，国外购进的纯度较低[8]，β-细辛醚对照品色谱图显示含β-细辛醚和α-细辛醚两种成分，但是样品中α-细辛醚的含量低，故未建立α-细辛醚的含量测定方法。

3.4 由于藏菖蒲药材产地、年限、采收季节等因素不同，β-细辛醚含量明显不同。

同时结合78批次样品含量测定结果，考虑该药品存放时间、生产工艺稳定对β-细辛醚含量影响等因素，暂订本品每1g含藏菖蒲以β-细辛醚计，应为0.40～
2.20mg。

3.5 对全国8家生产企业涉及的78批次的二十五味珊瑚丸进行了β-细辛醚的含
量测定，范围在0.30～2.20 mg/g之间，表2可以看出西藏甘露生产(批号：14125A)的二十五味珊瑚丸中β-细辛醚的含量最高，比由西藏藏医学院生产(140701)的高6倍，说明不同生产企业的该药品β-细辛醚含量差异较大，含量较低难以保证药效，故建议现行标准增加β-细辛醚的含量测定以便控制该药品质量。

综上，本实验采用HPLC法对藏药二十五味珊瑚丸的质量进行了评价，并对建立
的方法进行了详尽的方法学考察，为二十五味珊瑚丸质量标准的提高提供了实验依据，可作为二十五味珊瑚丸的质量控制方法。

【相关文献】
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