血清球蛋白的提纯实验报告

1. 了解血清球蛋白的组成及特性。

2. 掌握血清球蛋白的提纯方法，包括盐析法、凝胶层析法和醋酸纤维素薄膜电泳法。

3. 熟悉实验操作步骤，提高实验技能。

二、实验原理
血清中的蛋白质按电泳法可分为五类：清蛋白、1-球蛋白、2-球蛋白、-球蛋白和-球蛋白。

其中，-球蛋白含量约占16%，100 mL血清中约含1.2 g左右。

不同种类的蛋白质具有不同的分子量、溶解度和带电荷情况，因此可以根据这些性质的差异进行分离和提纯。

盐析法：利用清蛋白和球蛋白在高浓度中性盐溶液中溶解度的差异进行沉淀分离。

半饱和硫酸铵溶液可使球蛋白沉淀析出，清蛋白则仍溶解在溶液中，经离心分离，沉淀部分即为含有-球蛋白的粗制品。

凝胶层析法：利用蛋白质与无机盐类之间分子量的差异进行分离。

当溶液通过Sephadex G-25凝胶柱时，分子直径大的蛋白质不能进入凝胶颗粒的网孔，而分子直径小的无机盐能进入凝胶颗粒的网孔之中。

在洗脱过程中，小分子的盐会被阻滞而后洗脱出来，从而达到去盐的目的。

醋酸纤维素薄膜电泳法：利用蛋白质在电场中的迁移速度差异进行分离。

纯化后的-球蛋白可利用醋酸纤维素薄膜电泳法鉴定其纯度。

三、实验材料
1. 血清样品
2. 硫酸铵
3. Sephadex G-25凝胶
4. 醋酸纤维素薄膜
5. 电泳仪
6. 显色剂
7. 实验器材：离心机、移液器、烧杯、玻璃棒等
1. 盐析法提纯
（1）将血清样品与硫酸铵溶液混合，使硫酸铵浓度达到半饱和状态。

（2）室温下静置一段时间，待球蛋白沉淀析出。

（3）用离心机分离沉淀和上清液，收集沉淀。

（4）将沉淀用蒸馏水洗涤，去除中性盐。

2. 凝胶层析法提纯
（1）将Sephadex G-25凝胶柱连接到层析柱上，用蒸馏水平衡凝胶柱。

（2）将提纯后的沉淀溶解于适量蒸馏水中，制成蛋白质溶液。

（3）将蛋白质溶液加入凝胶柱，用蒸馏水进行洗脱。

（4）收集洗脱液，检测蛋白质含量。

3. 醋酸纤维素薄膜电泳法鉴定纯度
（1）将收集到的蛋白质溶液制成醋酸纤维素薄膜电泳样品。

（2）将样品点在醋酸纤维素薄膜上，进行电泳。

（3）用显色剂对电泳后的薄膜进行染色。

（4）观察电泳结果，鉴定蛋白质纯度。

五、实验结果与分析
1. 盐析法提纯
实验结果显示，经过盐析法处理后，血清样品中的球蛋白含量显著降低，说明盐析法可以有效地分离球蛋白。

2. 凝胶层析法提纯
实验结果显示，经过凝胶层析法处理后，蛋白质溶液中的蛋白质含量明显下降，说明凝胶层析法可以有效地去除蛋白质中的杂质。

3. 醋酸纤维素薄膜电泳法鉴定纯度
实验结果显示，纯化后的-球蛋白在醋酸纤维素薄膜上呈现一条明显的电泳带，说明纯化后的-球蛋白具有较好的纯度。

六、实验结论
通过本次实验，我们成功地从血清中提取了球蛋白，并对其进行了纯化。

实验结果表明，盐析法、凝胶层析法和醋酸纤维素薄膜电泳法在血清球蛋白的提纯过程中具有较好的效果。

在今后的实验中，我们可以进一步优化实验条件，提高血清球蛋白的纯度和产率。