淋巴组织H·E染色“发灰”现象的纠正方法

淋巴组织H·E染色“发灰”现象的纠正方
法
第一【期蔡傻杰等.免疫组织化学染色技术EV二步法和LSAB法的应用比较463 应,保证了背景的清晰和干净.从几组实验中证明,LSAB法
和EV法在这方面不相上下
3.2从使用的方便方面设有差别.两种方法所使用的
试剂盒,都为即用型抗体,对于初学者或者是免疫组化技术
专家,都能顺利使用,手续方便,不为配制稀释抗体带来的
麻烦
3.3从时同和步骤上相比较.Ev法比LsAB法可省
时30丹钟,减少两个步骤,可节省^力物力Ev二步法不
需要第二抗体,从计算时间的角度讲.它不仅是第二抗体孵
育的时间.还必须加上其前后PBS的冲洗操作所花费的时
间.保守计算需s0甘钟从步骤上讲,它比LSAR法少了加
^第二抗体和PBs冲洗两十步骤,节省了许多^力和物力,
给免疫组化染色早出结果提供了方便.
3从价格上相比较,EV二步法所用的试剂费用比
LSAB法每倒多15元以某公司销售的试剂为倒,EV二步
法的试剂盒18ml为1560元.而LSAB法中的同等量试剂
盒为999元.相差561元,每项以50l一张切片计算,前
者为4.3元.后者为2.8元.
收稿2001—04侉日2001-09
参考文献
1HsuSM,RaineL,FrangerH,etalUseofavidln—
biminperoxidasecomptex(AE)inimmunperoxldase
techniques:acomparisonbetweenABCandunlabeled
antibady(PAP)procedures.】HistochemCytochem
198】;29():577
2蔡傻杰.邱红明,张盛.真空负压LSAB和ABC法的
应用比较.中国癌症杂志1996;6(1):27—28
淋巴组织H.E染色"发灰''现象的纠正方法
田玉旺李琳丁华野邓永江
(北京军区总医院病理科,北京100700)
在常规病理制片拄术工作中.经常发现淋巴组织(如淋
巴结,鼻咽部组织卫扁桃体等)由于处理不当.造成切片染
色后组织中同出现发灰现象,即镜下核浆染色模糊不清或组织成片不着色.这样将给临库病理诊新带来很大困难为此. 我们经大量实验,对原组绸蜡块再切片后采用下述方法进行处理,收到了较好的染色效果.
材料和方法
1.标本来源:近取25例HE染色切片发灰的淋巴组织
原蜡块再进行切片,切片厚5p.m.
2.切片的处理方法:(1)将原蜡块所制切片程^二甲苯
【,Ⅱ脱蜡各5rain;(2)无水酒精I,I浸洗各2rain;
(2)用无水酒精乙醚等量(1:1)混台液处理5—10min}
(3)用95酒精,80酒精各洗1rain;(j)自来水洗1mln;
(6)用3硫酸铁镀溶液补充媒染5rain,流水冲洗2min;
(7)常规H.E染色=
结果
25捌淋巴组织切片经该法处理后,发灰现象基本消失.
细胞棱和细胞浆染色清晰,对比鲜明(见母1,2)
讨论
在日常病理制片工作中,囡琳巴组织处理不当,切片
HE染色发灰现象时有发生遇到这种情况,我们常规多采
用对该组织重新取材制片的方法来弥补这一过失.此法对还有剩余的组织较为适用,但对已用完的较小组织无法重新
取材.若重新取活检,将给患者带来很大痛苦,并且延误了
临床病理诊断.我们经多次实验,认为淋巴组织切片容易出
现发灰现象的主要原因可能是由于其细胞密集.结构复杂,
导致固定渣较难渗透到组绸深部.从而造成组织中央固定不佳,结果染色不良.而出现切片发灰现象.
实验在染色前,对原蜡块所制切片,经脱蜡至无水碴精,
而后用等量无水酒精己醚混台液进行处理,加强了对细胞膜脂质的溶解作用.增强了细胞膜的通透性,同时也起到了对
组织的追加固定作用,选样有年町于水溶性苏术素和伊红染液进^细胞并着色,从而提高了切片的染色质量.
苏术素染料是一种有色的有机化台物,若无媒染荆存在
时,不能使细胞内的嗜碱性物质着色.所以.一般情况下.我
们在配制苏术素染液时.需加^硫酸铝钾作媒染剂.本法根
据染色理论的媒染原理.对发灰的组织切片,在染色前.采
用3硫酸铁铵溶液进行补充媒染,这样可以加强组织细胞
与苏术素染液的结台力,利于细胞棱的着色.
发灰的淋巴组织切片通过该法的处理后,H.E染色质
量有了明显提高,细胞核及细胞浆染色清晰,对比分明,不
需重新取活检制片,即可做出准确的临床病理诊断.
收稿2001—03修回2001一l0
(1-文围1.2见第470页)。