实验4 酵母RNA的分离及组分鉴定

实验4 酵母RNA的分离及组分鉴定
酵母RNA是由酵母细胞合成的核糖核酸，包含了酵母细胞的遗传信息，并参与了细胞的生理代谢过程。

本实验旨在通过离心分离和酸性酚/氯仿法提取，纯化酵母RNA，并通过紫外吸收光谱和琼脂糖凝胶电泳等方法对酵母RNA进行组分鉴定。

一、材料与方法
1.材料
酵母细胞、DTT、Tris、EDTA、NaCl、硝酸、醋酸等。

2.方法
1)制备样品
a.在液氮中将酵母细胞粉磨成细粉；
b.称取10mg酵母细胞粉末加入1ml去离子水中，振荡混匀，制成1mg/ml的酵母细胞悬液。

2)离心分离
a.取1ml稀释后的酵母细胞悬液，离心10000rpm/10min，弃去上清液；
b.用10μl无菌去离子水重悬沉淀，制成1mg/ml的RNA悬液。

3)RNA的提取和纯化
a.取1ml离心沉淀物加入700μl去离子水，混合均匀，加入100μl10%SDS和100μl 酸性酚(pH4.5)混合，振荡15min；
b.加入300μl氯仿，振荡混合，离心12,000g/10min；
c.取上层水相(约600μl)，加入等量异丙醇混合，振荡；
d.离心12,000g/5min，弃去上清液，将胶状RNA沉淀用70%酒精重悬，制成1mg/ml的RNA溶液。

4)鉴定RNA
a.测定RNA含量和纯度
b.通过琼脂糖凝胶电泳检测RNA条带。

c.用紫外吸收光谱测定RNA吸收光谱曲线。

5)结果分析
a.通过鉴定RNA的吸收峰和电泳图谱来分析RNA组分。

二、实验结果
1.酵母RNA提取和纯化效果良好，制得1mg/ml的RNA溶液。

2.根据紫外吸收光谱结果，可以看到RNA在260nm的吸收峰高于280nm，证明纯化后的RNA具有良好的纯度。

3.琼脂糖凝胶电泳显示，RNA溶液中有一个清晰的28S条带和一个模糊的18S条带，证明RNA转录水平较高。

三、讨论和结论
通过离心分离和酸性酚/氯仿法提取纯化酵母RNA，可以得到高质量和高纯度的RNA样品。

此外，琼脂糖凝胶电泳和紫外吸收光谱可以对RNA组分和质量进行鉴定，为后续的RNA研究提供了有价值的基础数据。