IL-17在高危型HPV阳性宫颈癌中的表达

IL-17在高危型HPV阳性宫颈癌中的表达
薛纪森;陈骋;朱华;章圣辉;吕杰强;胡燕
【摘要】目的：通过检测高危型人乳头瘤病毒（HPV）阳性宫颈癌患者体内IL-17的表达水平,探讨IL-17所介导的特异性免疫反应在高危型HPV感染的宫颈癌发生、发展中可能发挥的作用。

方法：选取高危型HPV阳性的宫颈浸润性鳞癌患者（宫颈癌组）28例、宫颈高危型HPV感染者（HPV感染组）25例以及对照组30例。

采用ELISA法检测各组患者外周血清及宫颈局部组织匀浆上清液中IL-17的表达水平。

结果：1宫颈癌组患者外周血清中IL-17水平较对照组明显升高（P 〈0.05）,与HPV感染组比差异无统计学意义（均P〉0.05）,HPV感染组与对照组间差异无统计学意义（P〉0.05）;2各组宫颈局部组织匀浆上清液中IL-17的表达水平均明显高于外周血清表达水平,差异均有统计学意义（均P〈0.05）;3宫颈局部组织匀浆上清液中IL-17表达水平各组间的差异均有统计学意义（均P 〈0.05）,且宫颈癌组局部组织匀浆上清液中IL-17的表达水平高于HPV感染组,HPV感染组高于对照组,差异均有统计学意义（均P〈0.05）。

结论：IL-17所介导的免疫反应可能参与并促进了高危型HPV的持续性感染,与宫颈癌的发生、发展进程相关。

【期刊名称】《温州医科大学学报》
【年(卷),期】2016(046)001
【总页数】5页(P24-27,32)
【关键词】白细胞介素17;宫颈肿瘤;人乳头瘤病毒
【作者】薛纪森;陈骋;朱华;章圣辉;吕杰强;胡燕
【作者单位】[1]温州医科大学附属第一医院妇科,浙江温州325015;[2]温州医科大学附属第二医院妇科,浙江温州325027;[3]温州医科大学附属第一医院血液内科,浙江温州325015
【正文语种】中文
【中图分类】R737.33
宫颈癌是引起女性死亡的第二大癌症[1]，高危型人乳头瘤病毒（human papillomavirus，HPV）的持续性感染已被证实是发生宫颈病变的致病因素[2-3]。

临床上HPV感染多数呈一过性，只有10%～15%的高危型HPV呈慢性持续感染
状态，进而引发宫颈癌变[4]。

近来研究[5-7]发现，一类独特的效应性CD4+T细
胞-辅助性T细胞l7（T helper 17 cells，Thl7）亚群，其分泌的特异性效应因子
白细胞介素17（interleukin-17，IL-17）在多种疾病的发生和发展中均发挥了重
要的作用。

本研究对高危型HPV阳性的宫颈癌患者体内IL-17表达水平进行检测，并与高危型HPV感染以及无HPV感染患者相比较，以探讨IL-17介导的特异性
免疫应答在与高危型HPV感染相关的宫颈癌发生、发展中的作用。

1.1 研究对象选取2010年12月至2011年7月赴温州医学院附属第一医院与
附属第二医院妇科就诊的宫颈鳞状上皮细胞癌（squamous cell carcinoma，SCC）患者共28例作为宫颈癌组，均经病理组织学证实，且高危型HPV均为阳性。

另
选取25例宫颈高危型HPV感染患者为HPV感染组，该组患者宫颈高危型HPV
检测均为阳性，而宫颈液基细胞学筛查结果均提示“未见上皮内病变及恶性病变”。

选择同期因子宫肌瘤在我院收治拟行子宫全切除术的30例患者作为对照组，术前经宫颈液基细胞学及宫颈脱落细胞HPV筛查无异常。

入选标准：①年龄为30～
60岁女性；②非经期；③近3 d无性生活。

排除标准：①糖尿病、高血压、冠心病、妊娠、生殖道及全身其他部位急、慢性感染性疾病、结缔组织病、免疫性疾病
或其他系统恶性肿瘤；②本次患病前曾接受过化疗、放疗或免疫抑制药物治疗；③乙型肝炎标记物检测表面抗原、e抗原、核心抗体三项中任何一项阳性；④梅毒特异性抗体、丙型肝炎特异性抗体及HIV特异性抗体筛查阳性。

所有纳入本研究的患者均行HPV基因分型检测（凯普公司HPV基因分型检测试剂盒）确定感染的高危型HPV型别。

1.2 实验标本采集采集前告知患者标本用途，表示同意并签署知情同意书。

①血清样本采集：采集患者外周血2 mL，分离出血清后置-20 ℃保存待测；②组织标本采集：宫颈涂抹卢戈氏液，在宫颈不着色区以活检钳钳取宫颈病变组织，量约50 mg，标记后置液氮罐中保存。

主要试剂：人IL-17A ELISA检测试剂盒、人
IL-17A 标准品购于杭州联科生物技术有限公司；主要仪器：酶标仪Thermo Multiskan MK3。

1.3 实验方法 ELISA法检测血清及宫颈组织匀浆中IL-17的表达水平：取出组织块，置于冰0.9%氯化钠溶液中漂洗，除去血液，滤纸拭干，称重，放入5 mL的小烧杯内。

以9倍于组织块体积量取预冷的匀浆介质PBS，用移液器取匀浆介质PBS总量的2/3加入烧杯，置于冰水中使用眼科小剪快速将组织块剪碎。

将剪碎的组织倒入1 mL玻璃匀浆管中；用剩余的1/3匀浆介质PBS冲洗残留在烧杯中的碎组织块，一起倒入匀浆管中进行匀浆；左手持匀浆管将下端插入盛有冰水混合物的器皿中，右手将捣杆垂直插入套管中，上下转动研磨数10次（6～8 min），充分研碎，使组织匀浆化。

将制备好的10%组织匀浆在4 ℃，3 000 r/min离心10～15 min，取上清液，根据IL-17A ELISA试剂盒方法进行检测，根据标准曲线查出血清及宫颈组织匀浆样本中IL-17浓度。

1.4 统计学处理方法采用SPSS13.0统计软件分析实验数据。

计量资料均符合正态分布用±s描述；正态性和方差齐性检验后行方差分析，各组间两两比较采用Bonferroni法检验。

P＜0.05为差异有统计学意义。

2.1 3 组临床资料比较各参数在3组间比较差异均无统计学意义（P ＞0.05），见表1。

2.2 2 研究组宫颈高危型HPV感染型别分布情况HPV感染组与宫颈癌组的HPV感染情况，单一型别感染为多数，HPV感染组为72%（18/25），宫颈癌组为78.57%（22/28），2组间差异无统计意义（P＞0.05）；混合型别感染，HPV感染组为28%（7/25），宫颈癌组为21.43%（6/28），2组间差异无统计学意义（P＞0.05）。

全部HPV感染型别的分布中HPV16亚型最多见，占47.17%（25/53），其他较多见依次为HPV58亚型（20.75%，11/53）、HPV52亚型（16.98%，9/53）和HPV18亚型（11.32%，6/53）。

见表2。

2.3 3 组外周血清中IL-17水平比较 3组间外周血清中IL-17水平差异有统计学意义（F=5.206，P＜0.05）。

宫颈癌组患者外周血清中IL-17水平与对照组比较有升高，差异有统计学意义（P＜0.05），但HPV感染组与宫颈癌组及对照组间比较IL-17水平差异无统计学意义（P＞0.05）。

见图1。

2.4 3组宫颈组织匀浆上清液中IL-17水平比较
每组宫颈局部组织匀浆上清液中IL-17的表达水平均明显高于外周血清表达水平，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。

见图2。

宫颈局部组织匀浆上清液中IL-17水平在对照组、HPV感染组及宫颈癌组中呈逐渐升高的变化趋势，3组间IL-17表达水平的差异具有统计学意义（P＜0.05）。

宫颈癌组与HPV感染组比较IL-17表达水平明显升高，差异具有统计学意义（P＜0.05）；宫颈癌组与对照组比较
IL-17水平明显升高，差异具有统计学意义（P＜0.05）；HPV感染组与对照组比较IL-17表达水平升高，差异具有统计学意义（P＜0.05）。

见图3。

IL-17是近年来发现的一种促炎症性细胞因子，主要由辅助性T细胞17（T helper 17 cells，Th17）亚群分泌，是机体适应性免疫应答的主要参与者，在免疫调节中发挥关键作用[5-6]。

随着近年来研究的进一步深入，IL-17细胞在许多疾
病中的作用已受到广泛关注。

大量的实验结果显示，IL-17细胞在各种感染性疾病、自身免疫性疾病、肿瘤、移植物抗宿主等疾病的发生和发展中均发挥了重要作用[8-12]。

IL-17具有强大的招募、激活中性粒细胞的功能，是宿主抵御一些特殊病
原体感染的重要细胞因子，参与了针对胞内、外菌、真菌、寄生虫及病毒感染的免疫应答过程。

多数研究[8，13-14]提示，IL-17在病毒感染中发挥致病作用而不是保护性作用。

而IL-17在病毒持续感染中发挥的作用机制，国内外相关研究较少。

在澳大利亚最近的一项实验研究中，研究者们认为IL-17促进了HPV的持续感染
并引起宫颈上皮肉瘤变，IL-17可抑制宿主清除病毒感染细胞，延长其生存时间，从而导致病毒的复制和持续性感染，引起宫颈病变[15]。

宫颈癌作为临床最常见的妇科恶性肿瘤，其发生、发展的过程与生殖道高危型HPV的持续性感染有着密不可分的关系，高危型HPV感染清除的失败将导致病毒的持续性感染和宫颈癌的发生、发展。

HPV感染可激发机体的细胞免疫和体液免
疫应答。

一般认为，对HPV感染的有效免疫应答主要是局部特异性的细胞免疫应答。

目前有关该方面的研究结果尚不统一，且少有涉及IL-17和宫颈癌的相关性研究，IL-17是否参与了宫颈癌的发生、发展进程，其在宫颈高危型HPV持续性感
染中发挥了什么样的作用，值得深入探究。

为明确IL-17介导的免疫反应与宫颈癌发生、发展的关系，本研究采用ELISA法
检测了外周血与宫颈组织匀浆上清液中IL-17的表达水平，结果显示，宫颈癌组患者外周血清中IL-17表达水平与对照组比较有升高，差异有统计学意义（P＜
0.05），宫颈癌组IL-17表达水平虽高于HPV感染组、HPV感染组高于对照组，但差异无统计学意义（P＞0.05）。

各组宫颈组织匀浆上清液中IL-17的表达水平
均明显高于外周血清水平，且宫颈癌组高于HPV感染组，HPV感染组高于对照组，各组间差异有统计学意义（P ＜0.05）。

由此提示，局部组织匀浆上清液中IL-17的表达水平与外周血中IL-17的变化趋势基本一致，证实了IL-17所介导的免疫反
应可能参与并促进了高危型HPV的持续性感染，与宫颈癌的发生、发展进程相关，据本研究结果提示，宫颈局部组织中IL-17表达水平明显高于外周血清，提示IL-17所介导的免疫反应变化可能在宫颈局部微环境中较为明显。

IL-17所介导的免疫反应可能参与并促进了高危型HPV的持续性感染，与宫颈癌
的发生、发展进程相关，为寻找有效阻断宫颈高危型HPV慢性及持续性感染的免疫治疗措施提供了新的理论依据，值得进一步深入研究和探讨。

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