利福霉素钠注射液贮藏条件的研究

利福霉素钠注射液贮藏条件的研究
刘英;赵静;李茜;李振国
【摘要】目的对利福霉素钠注射液的贮藏条件进行研究.方法通过影响因素试验和加速试验对国内企业和原研企业利福霉素钠注射液进行考察,并结合国家评价性抽验中的利福霉素钠注射液,以有关物质为主要检测指标,分析贮藏条件对质量的影响.结果温度是影响利福霉素钠注射液稳定性的主要因素,国产利福霉素钠注射液有关物质较高的原因并非处方和生产工艺不完善,而是贮藏条件不科学导致.结论为了保证利福霉素钠注射液的质量,应将原标准中的贮藏条件“在凉暗处保存”修订为“2～8℃保存”.
【期刊名称】《中国抗生素杂志》
【年(卷),期】2014(039)009
【总页数】4页(P675-678)
【关键词】利福霉素钠注射液;贮藏条件;有关物质
【作者】刘英;赵静;李茜;李振国
【作者单位】河南省食品药品检验所,郑州450003;郑州大学药学院,郑州450003;河南省食品药品检验所,郑州450003;河南省食品药品检验所,郑州450003
【正文语种】中文
【中图分类】R978.1
利福霉素1957年由意大利莱佩蒂(Lepetit)研究所从地中海诺卡菌(Nocardia mediterrranci)中提取得到[1]，1962年用于临床[2]，1978年在美国上市。

原研
为利福霉素钠注射液，我国四川抗菌素工业研究所于1973年试制成了利福霉素注射液(肌注及静注)[3]，现国内有注射液及粉针剂上市。

利福霉素(rifamycin)为半合成的广谱抗生素，又称利福霉素SV、羟基利福霉素，临床用其钠盐，为临床应用的第一个半合成利福霉素类抗生素，口服吸收差，故仅供注射[4]。

利福霉素对细菌、真核生物、病毒均有效，是一高效的抗革兰阳性菌及结核分枝菌的抗生素，主要不良反应为过敏性皮炎，其他不良反应有恶心、食欲不振及眩晕，偶见耳鸣及听力下降等。

英国药典自1980年[5]开始收载利福霉素钠原料，欧洲药典亦收载利福霉素钠原料，利福霉素钠原料和注射液质量标准收载于国家药品标准化学药品地方标准上升国家标准第二册WS-10001-(HD-0137)-2002[6]和WS-10001-(HD-0138)-2002[7]，其他各国药典均未见收载。

利福霉素钠对光、热均较敏感，其水溶液更不稳定[8]，利福霉素钠注射液为高风险品种，目前作为抗结核药物的二线用药，其质量优劣直接影响着人民群众用药的安全性和有效性。

因此，2011年国家食品药品监督管理局开展了利福霉素钠注射剂的国家评价性抽验，结果显示国内利福霉素钠注射液的有关物质含量远高于原研企业的样品[9]。

利福霉素钠原料的主要供应商为郑州民众制药有限公司，小部分为沈阳抗生素厂，其他国家均从中国购买原料再进行制剂生产，因而从原料来源分析，原料的质量已可以保证制剂的产品质量。

而原研企业的样品说明书中规定的贮藏条件为“2～8℃冷藏”[10]，同时英国药典2012年版[11]和欧洲药典7.2[12]对原料的贮藏要求均为“2～8℃冷藏”，但局颁标准中利福霉素钠原料[6]和注射液[7]的贮藏条件为“在凉暗处保存”即“不超过20℃”。

目前未见对利福霉素钠原料和注射液的贮藏条件研究的相关文献，鉴于此，本文对利福霉素钠注射液在光照和不同温度条件下的稳定性进行了考察，并结合国家评价性抽验数据，确定科学合理的贮藏条件。

Waters 2695-2487高效液相色谱仪，Empower色谱工作站，Sartorius
BP211D电子天平，BINDER BD240孵卵箱(德国Binder GmbH)，MJ-I·180霉
菌培养箱(上海跃进医疗器械有限公司)，海尔SC-316冷藏柜(青岛海尔特种电冰柜有限公司)。

利福霉素SV标准品(1300333-200907，834u/mg，中国药品生物制品检定所)、利福霉素S对照品(130539-200402，94.8%，中国药品生物制品检定所)、利福
霉素钠注射液(批号 1101162、1103042，规格：2mL:0.25g，河南辅仁怀庆堂制药有限公司)、利福霉素钠注射液Rifocin(批号A9035，规格：10mL:500mg，美国Gruppo Lepetit for Sanofi-Aven)、利福霉素钠注射液(批号11030201，规格：5mL:250mg，沈阳双鼎制药有限公司)、利福霉素钠(批号201102001，郑州民众制药有限公司)、利福霉素钠(批号YY01-110303，沈阳双鼎制药有限公司)，2011年国家评价性抽验样品利福霉素钠注射液16批。

乙腈(MERCK公司，HPLC级) ，磷酸二氢钠(批号2011年5月11日，天津市风
船化学试剂科技有限公司，分析纯)，氢氧化钠(批号2009年10月08日，天津市风船化学试剂科技有限公司，分析纯)，水为去离子水。

2.1 色谱条件
色谱柱：Agilent Zorbax SB C18(4.6mm×250mm, 5μm)；流动相A：0.39%磷酸二氢钠溶液(用8.5%氢氧化钠溶液调节pH值至7.5)-乙腈(90:10)，流动相B：0.39%磷酸二氢钠溶液(用8.5%氢氧化钠溶液调节pH值至7.5)-乙腈(30:70)；流速：1.0 mL/min；柱温：35℃；进样量：20μL；梯度洗脱程序：0至30min流
动相B的比例从20%增加至80%，保持5min后，于2min内流动相B的比例从80%减少至20%并保持8min；检测波长：254nm。

2.2 影响因素试验
将利福霉素钠注射液除去外包装，或将利福霉素钠原料称取约1g，放入敞口的培
养皿中，药粉厚度不超过5mm，将上述样品分别放置在温度为60℃的恒温仪器
中和4000 lx的光源下，连续放置10d，分别于第5天和第10天取样进行测定。

2.3 加速试验
将河南辅仁怀庆堂制药有限公司和Gruppo Lepetit for Sanofi-Aven的利福霉素钠注射液分别放置在温度为5、18、25、30和40℃的恒温仪器中，分别于0个月、1个月、2个月、3个月和6个月末取样进行测定。

2.4 有关物质测定
精密称取利福霉素钠适量或精密量取利福霉素钠注射液适量，以0.39%磷酸二氢
钠溶液(用磷酸调节pH值至3.0)-乙腈(50:50)的混合溶液稀释至每1mL中含1mg 的溶液；另精密称取利福霉素S对照品10mg，以0.39%磷酸二氢钠溶液(用磷酸调节pH值至3.0)-乙腈(50:50)的混合溶液溶解并稀释至50mL，精密量取5.0mL，用上述混合溶液稀释至100mL，作为对照溶液。

以利福霉素S为外标计算各杂质峰面积，小于对照溶液中利福霉素S峰面积0.1倍的色谱峰忽略不计(以上所有溶
液均临用前制备，流动相在室温20℃以上制备和保存)。

3.1 系统适应性
利福霉素钠原料的有关物质代表色谱图见图1。

3.2 影响因素试验
影响因素试验的目的是探讨药物的固有稳定性、了解影响其稳定性的因素及可能的降解途径与降解产物，为制剂生产工艺、包装、贮存条件和建立降解产物的分析方法提供科学的依据。

光照试验中，除了河南辅仁怀庆堂制药有限公司注射液的总杂质由1.1%增加至2.0%外，其他企业的制剂和原料均无太大的变化，结果表明光
照对利福霉素钠及其注射液的稳定性影响较小；高温试验中，原料在第5天时从
红色变为黑色，杂质个数增加，利福霉素S含量增加明显：由低于1%增加至15%，总杂质由约0.5%增加至7%以上，远远超过标准限度，该现象与原料敞口
放置，与氧气接触，在高温下发生氧化和降解所致；高温试验中，注射液杂质个数
增加和总杂质含量均有大幅度增加(表1)。

上述结果表明利福霉素钠原料和注射液对温度敏感，温度对其质量的影响远远大于光照，是影响利福霉素钠及其注射液稳定性的主要因素，在生产和贮藏时应对温度严格控制。

3.3 加速试验(见表2)
5℃贮藏时，3批次的利福霉素钠注射液在6个月内总杂质增加较少，其他温度条件下有关物质均增加较多，随着温度的升高，有关物质增加的速率加快。

虽然在起始点原研企业对照样品的总杂质低于国产样品的总杂质，但除5℃贮藏条件下原研企业对照样品的总杂质仍低于国产样品的总杂质外，其他温度条件下6个月时原研企业对照样品的有关物质均高于国产样品，尤其是在40℃的条件下，放置1个月时，2批次国产样品的总杂质接近限度标准2.0%，原研企业对照样品的总杂质高达2.7%，远超过标准规定，说明原研企业的样品对温度更敏感，其有关物质增加的速度相对较大。

对所有时间点5℃与18℃的有关物质经t检验(α=0.05)，结果为显著性差异。

上述实验结果表明，国产利福霉素钠注射液有关物质较高的原因并非处方和生产工艺的不完善，而是贮藏条件的不科学引起，因此，应该将原法定贮藏条件“在凉暗处保存”修订为“2～8℃保存”。

3.4 贮藏条件对有关物质影响
对国家评价性抽验中抽样批数最多的沈阳双鼎制药有限公司的利福霉素钠注射液的贮存期和有关物质进行相关性分析，结果显示随着贮存期的增加，有关物质也相应增加；同时由于企业留样室温度(8～11℃)低于市场抽样温度(8～20℃)，企业留样产品的有关物质低于抽样产品的有关物质。

上述结果表明总杂质与贮藏温度和贮藏期呈显著正相关(图2)。

(1) 四川抗菌素工业研究所[2]对利福霉素钠注射液进行处方研究和稳定性考察时已发现利福霉素钠注射液对热较敏感，宜于冷藏保存；原料生产企业的干燥工艺为温度不超过60℃，超过60℃则有关物质迅速增加；英国药典2012年版[11]和欧洲
药典7.2版[12]对利福霉素钠原料规定的贮藏条件均为：2～8℃、密封、避光贮藏；这些均说明了利福霉素钠对温度和光的不稳定性。

对比原研企业Lepetit产品的贮藏条件为2～8℃冷藏保存[10]，其有关物质远低于国内利福霉素钠注射液，同时
由于原料均产自中国，其质量已经能够保证，因此在有关物质的控制方面，国内生产企业还需进一步积累样品稳定性数据，制定科学的贮藏条件等来达到优化产品质量的目的。

同时从原料贮藏条件分析，利福霉素钠注射液亦应严格贮藏条件，减少有关物质的产生。

(2)药品贮藏条件对药品质量的影响至关重要，按规定条件存储和管理药品是其安全、有效的重要保证，《中国药典》对药品的贮藏与保管有明确的要求，药品贮藏项的标注是药品包装、标签与说明书的重要内容。

药品贮藏不当可能导致效价降低，毒副作用增强，使本来标注的有效期限发生变化(缩短)，直接影响药品质量和患者用药。

因此，制订科学而严格的贮存条件是保证药品质量的前提。

(3)药品的有效期应该是根据药品的稳定性不同，以各个企业的稳定性实验和留样
观察结果为依据来确定。

药品注册时，注册资料中都会标明药品的有效期。

一般要求生产企业提供加速试验至少6个月，长期留样6个月以上的试验资料，药品有
效期通过企业申报资料，国家食品药品监督管理局进行最终审批而确定。

对于仿制药品，由于原研企业对药品有更加详实的数据支持，首先要参照原研样品的贮藏条件和有效期。

不同企业、不同工艺生产的药品，尽管其质量可能有很大不同，但其最短有效期都要满足国家标准。

因此，有效期药品，只有按照规定的贮藏条件，才能在规定的有效期限内保持规定的质量，如果改变贮藏条件，会显著地影响有效期药品的有效期限。

(4) 利福霉素钠及其注射液的仿制均在2005年以前，由于早期我国药品生产企业
在药品研发阶段意识的不到位和投入不够，因此许多质量问题在药品上市前未能及时发现，而在上市后暴露。

我们应该从国家评价性抽验结果中总结分析数据，获取
有用的信息和知识，及时修订完善药品质量标准，确保质量标准对药品质量的可控性，以保证人民用药的安全、有效。

总之，药品贮藏条件关系到人体生命健康，要在药品的注册、生产、储存、销售、使用等各个方面对药品贮藏条件加以注意，制定科学合理的贮藏条件，加强对药品贮藏条件的日常监督检查。

只有从每个环节都对药品进行了足够的控制，才能保证药品质量的安全有效。

【相关文献】
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[3] 四川医学院药理学教研组, 抗菌素研究组. 国产力复霉素注射剂的毒性与药理研究[J]. 抗菌素, 1976, 1(4): 95-103.
[4] 薛梅妍, 王东凯, 纪标, 等. 注射用利福霉素钠的处方优化及稳定性考察[J]. 中国新药杂志, 2006,15(4): 284-287.
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[6] 国家药典委员会. 国家药品标准化学药品地方标准上升国家标准第二册[S]. 2002, 114-115.
[7] 国家药典委员会. 国家药品标准化学药品地方标准上升国家标准第二册[S]. 2002, 116-119.
[8] 陆久华. 利福霉素S的反应性和构效关系[J]. 抗生素, 1985, 10(4): 230-233.
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[11] The British Pharmacopoeia Commission. The British Pharmacopoeia[S]. London: the Stationery office, 2012: 1897-1899.
[12] European Directorate for the Quality of Medicines and Healthcare(EDQM). European Pharmacopoeia 7.2th Edition[S]. Nördlingen(German), 2011: 3704-3705.。