中药复方多糖对鸡IFN-γ、IL-4和L-12质量浓度的影响

中药复方多糖对鸡IFN-γ、IL-4和L-12质量浓度的影响商云霞;朱晓庆;谷新利;李效振;乔海博;贾书红;张东升
【摘要】通过观察和比较盐酸左旋咪唑、黄芪多糖和对鼠免疫增强效果显著的中药复方多糖对雏鸡细胞因子IFN-γ、IL-4和IL-12质量浓度的动态变化,筛选出可显著提高雏鸡细胞因子质量浓度的中药复方多糖的最佳剂量.将300羽雄性良凤青脚麻鸡随机分为6组,即生理盐水组(对照)、黄芪多糖组(APS)、盐酸左旋咪唑组(LM)、高剂量中药复方多糖组(cCHMPSH)、中剂量中药复方多糖组(cCH MPSM)和低剂量中药复方多糖组(cCHMPSL),每组50只.于8日龄时分别皮下注射生理盐水、25 g/L APS、50 g/L LM、50 g/LcCHMPS、25 g/L cCHMPS、12.5 g/L cCHMPS,每只注射0.2 mL,连续注射7d,在免疫后第8、14、21、28、35、42天采血,测定外周血中IFN-γ、IL-4和IL-12的质量浓度.结果表明,黄芪多糖和中药复方多糖均能显著提高外周血中IFN-γ、IL-4和IL-12的质量浓度,调节Th1/Th2免疫平衡,并且中剂量中药复方多糖免疫效果优于黄芪多糖和高、低剂量中药复方多糖,提示中药复方多糖具有开发成疗效确切、稳定、无毒的免疫增强剂的潜力.【期刊名称】《西北农业学报》
【年(卷),期】2015(024)005
【总页数】5页(P24-28)
【关键词】中药复方多糖;黄芪多糖;盐酸左旋咪唑;细胞因子IFN-γ;IL-4和IL-12【作者】商云霞;朱晓庆;谷新利;李效振;乔海博;贾书红;张东升
【作者单位】石河子大学动物科技学院,新疆石河子832000;石河子大学动物科技学院,新疆石河子832000;石河子大学动物科技学院,新疆石河子832000;石河子大
学动物科技学院,新疆石河子832000;石河子大学动物科技学院,新疆石河子832000;石河子大学动物科技学院,新疆石河子832000;石河子大学动物科技学院,
新疆石河子832000
【正文语种】中文
【中图分类】S853.72
现代医学研究表明，有200多种中草药含有多种免疫活性物质，能影响和调节动
物机体免疫功能[1]。

从中药中提取的多糖或糖缀合物，如黄芪多糖[2]、刺五加多
糖[3]等，是许多中药的主要免疫活性物质[4]。

许多单味中药经合理配伍后，可形
成具有免疫增强作用的中药复方制剂，能提高原有单味中药的免疫增强作用，且靶向性更明显[5]。

并且，中药具有作用广泛、副作用少、不易产生耐药、资源丰富
等优点，因而成为开发成疗效确定，无毒副作用的免疫增强剂的理想药物，在畜禽业生产中具有较强的应用潜力。

此外，从中草药提取的粗提物中含有大量杂质，影响其在应用时的稳定性[6]。

由石河子大学中兽医实验室研制出的中药复方制剂中
提取的复方多糖，能显著提高机体免疫力[7-8]，并且该复方多糖经AB-8大孔吸
附树脂纯化后得到的中药复方多糖对小鼠的免疫调节作用优于粗多糖[9-10]，但其是否能有效提高家禽免疫能力以及提高家禽免疫力的最佳使用剂量依然未知，还需进一步验证。

因此，本研究通过观察和比较已被证明具有较强免疫增强力的单味中药多糖(黄芪多糖)和纯化后的不同剂量中药复方多糖对雏鸡细胞因子IFN-γ、IL-4
和IL-12质量浓度的动态变化，筛选出中药复方多糖增强家禽细胞因子水平的最佳使用剂量，为其开发成优质、高效的免疫增强剂提供理论依据。

1.1 材料
1.1.1 试验动物及分组 1日龄雄性良凤青脚麻鸡300羽，由石河子市某养鸡场提供，临床检查健康。

1.1.2 试验药物中药复方由党参、山植、熟地、川芎、何首乌、当归、淫羊藿、麦冬、茯苓、补骨脂和黄芪11味中药组成，各单味药均购自石河子市医药公司。

中药复方多糖(w=77.10%)和黄芪多糖(w=29.42%)均由石河子大学化工学院提供。

用灭菌蒸馏水将中药复方多糖配置成高(50 g/L)、中(25 g/L)和低(12.5 g/L)3个质量浓度，用灭菌蒸馏水配制黄芪多糖质量浓度为25 g/L，经0.22 μm微孔滤膜率过后4℃储存，备用。

盐酸左旋咪唑注射液购自上海申亚动物保健品有限公司；鸡新城疫疫苗(La Sota株和CS2株)购自石河子市八师兽医站；鸡IFN-γ、IL-4和
IL-12 ELISA检测试剂盒均购自上海蓝基生物科技有限公司。

1.1.3 试验仪器Biotek SynergeyTM2多功能酶标仪(上海迭戈生物科技有限公司)，精密电子天平(BS423S，北京赛多利斯仪器系统有限公司)，TDL-5离心机(Z36HK，上海安亭科学仪器厂)。

1.2 试验方法
1.2.1 试验动物分组将试验鸡于7日龄时随机分为6组，即生理盐水组(对照)、黄芪多糖组(APS)、盐酸左旋咪唑组(LM)、高剂量中药复方多糖组(cCHMPSH)、中
剂量中药复方多糖组(cCHMPSM)和低剂量中药复方多糖组(cCHMPSL)，每组50只。

于8日龄时分别皮下注射生理盐水、25 g/L APS，50 g/L LM，50 g/L cCHMPS、25 g/L cCHMPS、12.5 g/L cCHMPS，每只0.2 mL，连续注射7 d。

所有试验鸡于7日龄时用鸡新城疫活疫苗(La Sota株)滴鼻、点眼免疫，27日龄时用鸡新城疫疫苗(CS2株)进行二免。

1.2.2 血清IFN-γ、IL-4、IL-12质量浓度检测每组随机抽取5只试验鸡，于首免
后第8天心脏采血，第14、21、28、35和42天翅静脉采血，常规分离血清。

用鸡IFN-γ、IL-4、IL-12 ELISA检测试剂盒在酶标仪450 nm测定OD值，并绘制
标准曲线，根据标准曲线计算鸡血清中IFN-γ、IL-4、IL-12的质量浓度。

1.3 数据分析
各项免疫指标数据以“平均数±标准差”表示，采用SPSS 13.0对其进行单因素方差分析和多重比较，所有统计分析结果以P<0.05作为差异显著性的判断标准。

2.1 血清中IFN-γ质量浓度的动态变化
不同日龄雏鸡外周血中IFN-γ质量浓度的测定结果见表1。

由表1可知，首免后
第8、14、21、28和35天，各剂量cCHMPS组中IFN-γ质量浓度显著高于对
照组、LM组和APS组(P<0.05)，首免后第42天显著高于对照组；APS组在首免后第28天显著高于对照组和LM组(P<0.05)，第35天和42天显著高于对照组(P<0.05)。

2.2 血清中IL-4质量浓度的动态变化
不同日龄雏鸡外周血中IL-4质量浓度的测定结果见表2。

由表2可知，首免后第28天，APS组和cCHMPSH组中IL-4质量浓度显著高于对照组(P<0.05)，cCHMPSM组显著高于对照组和LM组(P<0.05)；首免后第35天，cCHMPSM
组和cCHMPSL组显著高于对照组和LM组(P<0.05)；首免后第42天，APS组显著高于对照组(P<0.05)，各剂量cCHMPS组极显著高于对照组和LM组(P<0.01)。

2.3 血清中IL-12质量浓度的动态变化
不同日龄雏鸡外周血中IL-12质量浓度的测定结果见表3。

由表3可知，首免后第14天，cCHMPSM组中IL-12质量浓度显著高于对照组和LM组(P<0.05)；首免后第21天，APS组和cCHMPSL组显著高于对照组(P<0.05)，cCHMPSM组显
著高于对照组和cCHMPSH组(P<0.05)；首免后第28天，cCHMPSM组、cCHMPSL组和APS组极显著高于对照组(P<0.01)，cCHMPSH组显著高于对照
组(P<0.05)；首免后第35天，cCHMPSM组极显著高于对照组(P<0.01)，cCHMPSL组和APS组显著高于对照组(P<0.05)；首免后第42天，cCHMPSM
组和cCHMPSL组极显著高于对照组(P<0.01)，APS组和cCHMPSH组显著高于对照组(P<0.05)。

细胞因子是由活化的免疫细胞和某些基质细胞分泌的具有高活性、多功能的小分子物质，它们涉及免疫和炎症的每个环节，可以调节和决定免疫应答的性质[11]。

IFN-γ、IL-4和IL-12主要由淋巴细胞产生，在细胞的生长分化和机体免疫调节中发挥着不同作用。

IFN-γ也称免疫干扰素，属于Th1型细胞因子，它在初级免疫
应答中可提高MHCⅡ类分子的表达和细胞抗原递呈能力，导致记忆型T细胞水平增高[12]，主要促进细胞免疫。

IFN-γ在抗病毒感染和抗肿瘤方面发挥着重要作用[13]。

IL-4属于Th2型细胞因子，对B细胞、T细胞、单核细胞、树突状细胞、
内皮细胞、纤维细胞等非免疫细胞具有多种调节功能[14]，是体液免疫应答的重要调节因子。

IFN-γ、IL-4作为重要的Th1/Th2型免疫相关因子，在一定程度上能
反映出机体细胞免疫和体液免疫的基本状况[15]。

有研究[16]表明，中药多糖能通过影响白介素(如IL-1、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10
和IL-12)、干扰素(如IFN-α和IFN-γ)、集落刺激因子(CSF)、肿瘤坏死因子(TNF)等的生成和表达来调节机体免疫力。

伍参荣等[17]的研究表明，七味白术散可通过提高乳鼠IFN-γ、IL-4的表达来增强NK细胞活性，提高机体免疫力。

邱妍等[18]的研究表明，合适剂量的APs、IRPs、ARPs和CYPs均能提高鸡外周血淋巴细胞IFN-γ、IL-4 mRNA表达水平。

本研究表明，中药复方多糖和黄芪多糖均能提高
外周血中IFN-γ和IL-4的质量浓度，并且中药复方多糖在5 mg时效果最好，说
明中药复方多糖和黄芪多糖均有较好的诱生IFN-γ和IL-4的作用。

上述研究提示，提高机体细胞因子水平可能是多糖增强机体抗病力的分子机制之一。

当然，多糖虽然能促进机体IFN-γ和IL-4质量浓度增加，但并非越高越好，两者仍需处于一定
平衡状态，才能维持机体正常的细胞免疫和体液免疫功能。

IL-12又名细胞毒淋巴细胞成熟因子，是触发天然免疫应答的关键因子，在机体早期的非特异性免疫和随后的抗原特异性免疫过程中扮演着极为重要的角色[19]。

IL-12的减少可间接导致IFN-γ质量浓度的降低，同时可使已建立的以Th1型为
主的反应向Th2型转变[20]。

有研究报道，卡介菌多糖核酸能提高尖锐湿疣患者
血清中IL-12的质量浓度，调节和改善机体Thl/Th2免疫平衡，增强细胞免疫作用，帮助机体抵抗病毒[21]。

本研究表明，中药复方多糖和黄芪多糖均能提高外周血中IL-12的质量浓度，并且中药复方多糖在5 g/L时效果最好，黄芪多糖和10
g/L、2.5 g/L的中药复方多糖效果次之。

推测中药复方多糖和黄芪多糖也能够通
过调节IL-12的水平影响Thl/Th2免疫平衡，从而达到免疫调节的作用。

有报道[22]认为，左旋咪唑具有诱导机体产生各种细胞因子的作用。

但在本次试验中，LM组中IFN-γ、IL-4和IL-12的质量浓度较对照组略有提高，但无显著性差异。

究其原因，一方面可能是本次试验中使用的LM的剂量不合适，使其不能显著调节机体细胞因子的分泌量；另一方面可能是左旋咪唑对分泌机体细胞因子的影响确实较小。

中药复方多糖，尤其是中剂量的中药复方多糖能显著提高外周血中细胞因子IFN-γ、IL-4和IL-12的质量浓度，调节Thl/Th2免疫平衡，具有开发形成高效、稳定、
无毒的免疫增强剂的潜力。

而中药复方的化学成分复杂，高剂量时，其中的某些活性成分可与中药的蛋白质和鞣质等成分结合，致使药液中的一些有效成分凝固变性，一定程度上影响药效。

所以，采用中药复方多糖进行免疫时，应选择适当剂量。

Reference (参考文献)：
[1] ZHAO Xianmin(赵现敏),ZHANG Hongying(张红英),CUI Bao’an(崔保安),et al.Research overview of Chinese herbal medicine immunopotentiator and
its mechanism [J].China Animal Husbandry & Veterinary Medicine(中国畜牧兽医),2006,33(11):50-52(in Chinese).
[2] WANG Xuebin(王学斌),CHEN Gongyi(陈功义),WEI Zhanyong(魏战勇),et parison on Effect of Astragalus Polysaccnaride Powders and Injects on Immune Function and Growth of Chickens [J].China Poultry (中国家
禽),2007,29(3):21-23(in Chinese with English abstract).
[3] CHEN Ruizhan(陈瑞战),MENG Fanlei(孟繁磊),LIU Zhiqiang(刘志
强).Isolation,purification,antioxidant and immunological activities in vitro of polysaccharide from Acanthopanacis senticosi[C]// Proceedings of 2010 First International Conference on Cellular,Molecular Biology,Biophysics and Bioengineering.Hubei:Intelligent Information Technology Application Association(湖北:智能信息技术应用协会),2010:578-581(in Chinese with English abstract).
[4] MA Qianhuan(马骞寰).Application and prospect of Chinese herbal medicine immunostimulants[J].Journal of Animal Science and Veterinary Medicine(畜牧兽医杂志),2007,26(6):29-31(in Chinese).
[5] DENG Xiaohong(邓小红).Research progress in Chinese traditional immunopoteniators[J].Journal of Chongqing Technology and Business University:Natural Science Edition (重庆工商大学学报:自然科学
版),2006,23(6):556-559(in Chinese with English abstract).
[6] Kong X F,Hu Y L,Rui R,et al.Effects of Chinese herbal medicinal ingredients on peripheral lymphocyte proliferation and serum antibody titer after vaccination in chicken[J].International Immunopharmacology,2004,4:975-982.
[7] GU Xinli(谷新利),LI Hongquan(李宏权),WANG Jundong(王俊东),et
al.Effects of Compound Polysaccharide Extracted from Traditional Chinese Medical Herbs on the Immunity Function in Chickens[J].Scientia Agricultura Sinica(中国农业科学),2005,38(4):813-820(in Chinese with English abstract).
[8] LI Xingyan(李星艳),LUO Yan(罗燕),GU Xinli(谷新利).Effects of compound
Chinese Herbal Medicine Polysaccharides on immune function in chickens[J].Chinese Journal of Veterinary Medicine(中国兽医杂志) 2009,45(6):45-46(in Chinese).
[9] LI Zanyang(李赞阳),LIU Hong(刘红),LI Bingqi(李炳奇),et al.Effects of compound Chinese Herbal Medicine Polysaccharides with different component and purity on the proliferation of splenic lymphocytes in mice[J].Journal of Traditional Chinese Veterinary Medicine(中兽医医药杂志),2011,2:5-7(in Chinese).
[10] LI Zanyang(李赞阳),LIU Hong(刘红),LUO Yan(罗燕),et al.Influence of Compound Chinese Herbal Medicine Polysaccharides with Different Component and Purity on Mice Immune Function[J].Acta Agriculture Boreali-occidentalis Sinica(西北农业学报),2012,21(9):15-18(in Chinese with English abstract).
[11] LI Lili(李丽立),ZHANG Bin(张彬),ZHU Nanshan(朱南山),et al.Effects of Polysaccharides on Immunologic Function in Early-weaned
Piglets[J].Research of Agriculture Modernization(农业现代化研
究),2009,30(4):495-497(in Chinese with English abstract).
[12] Zhou H,Buitenhuis A J,Weigend S,et al.Candiate Gene Promoter Polymorphisms and Antibody Respense Kinetics in Chickens:Interferon-γ,Interleukin-2,and Immunoglobulin Light Chain[J].Poultry Science,2001; 80:1679-1689.
[13] Howard A Y,Kenneth J H.Role of interferon-γ in immune cell regulation[J].Journal of Leukocyte Biology,1995,58(4):373-381.
[14] WANG Ning(王宁),SHEN Guoshun(沈国顺),BAI Hongguang(白红
光).Research progress of Interleukin-4 Gene[J].Chinese Journal of Animal Husbandry and Veterinary Medicine(畜牧兽医科技信息),2005,1:23-25(in Chinese with English abstract).
[15] Mosmann T R,Subash S.The expanding universe of T-cell
subsets:Th1,Th2 and more[J].Immunol Today,1996,17:139-146.
[16] XUE Aizhen(薛爱珍).The research progress in traditional Chinese medicine polysaccharide promoting and inducing cytokines[J].Zhejiang Journal of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine(浙江中西医结合杂志),2007,17(1):64-66(in Chinese).
[17] WU Canrong(伍参荣),XIE Chaohui(谢朝辉),HE Shuangteng(贺双腾),et al.Effects of Qiweibaizhu Powder on NK,IFN-γ and IL-4 of Suckling Mice Infected with Human Rota Virus [J].Chinese Journal of Information on Traditional Chinese Medicine(中国中医药信息杂志),2002,4(9):23-24(in Chinese with English abstract).
[18] QIU Yan(邱妍),CUI Bao’an(崔保安),HU Yuanliang(胡元亮),et al.Effects of four polysaccharides on IFN-γ,IL-4 mRNA expression in chicken peripheral T lymphocyte [J].Jiangsu Agricultural Sciences(江苏农业科学),2009 (2):32-35(in Chinese).
[19] SUN Jing(孙敬),HONG Jiehua(洪杰华),ZHENG Shimin(郑世
民).Relationship between IL-12 and Lysis of Immunocyte[J].Progress in Veterinary Medicine(动物医学进展),2010,31(20):111-114(in Chinese with English abstract).
[20] JI Fengwei(吉冯伟).The study of the serum levels of IL-12,IFN-γ,iNOS and NO in tinea pedis patients[D].Shijiazhuang:Hebei Medical University(河
北医科大学),2008(in Chinese with English abstract).
[21] ZUO Chengxin(左成忻),HUANG Jinhua(黄进华),LIAO Chaohui(廖朝辉),et al.Effects of BCG-PSN on serum levels of IL-4 and IL-12 in patients with condyloma acuminatum[J].Journal of Central South University:Medical Science(中南大学学报:医学版),2004,29(6):690-692(in Chinese with English abstract).
[22] LI Zhen(李振),XU Guibao(许贵宝).The immunoregulatory effects and application in animal production of levamisole[J].Veterinary Pharmaceuticals & Feed Additives(兽药与饲料添加剂),2006,11(1):13-15(in Chinese).。