5-氟尿嘧啶对肝癌细胞株PLC_RAF_5生物学特性及耐药机制的影响 程康文
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临床肝胆病杂志第 ３ １卷第 ９期 ２ ０ １ ５年 ９月㊀ＪＣ ｌ ｉ ｎＨ ｅ ｐ ａ ｔ ｏ ｌ ， Ｖ ｏ ｌ ． ３ １Ｎ ｏ ． ９ ， Ｓ ｅ ｐ ． ２ ０ １ ５
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摘要： 目的㊀研究化疗药物 ５－ 氟尿嘧啶（ ５－ Ｆ ｕ ） 反复作用肝癌细胞株 Ｐ Ｌ Ｃ ／ Ｒ Ａ Ｆ ／ ５后生物学特性的变化， 探讨耐药肝癌细胞 与肝癌干细胞之间的相关性。方法㊀用低浓度的 ５－ Ｆ ｕ （ １μ ｇ ／ ｍ ｌ ） 反复多次作用于人肝癌细胞株 Ｐ Ｌ Ｃ ／ Ｒ Ａ Ｆ ／ ５后建立 Ｐ Ｌ Ｃ ／ Ｒ Ａ Ｆ ／ ５ ／ 细胞株， 观察两种细胞的形态学差异。用 Ｃ Ｃ Ｋ－ ８法检测不同浓度的 ５－ Ｆ ｕ （ ０ 、 ０ ． ２ ５ 、 ０ ． ５ 、 １ 、 １ ． ５ 、 ２μ ｇ ／ ｍ ｌ ） 对两种细胞增殖的 ５－ Ｆ ｕ 抑制作用； 在不同浓度的 ５－ Ｆ ｕ （ ０ ． ５ 、 １ 、 ２μ ｇ ／ ｍ ｌ ） 作用 ４ ８ｈ 后， 流式细胞仪分析不同浓度下两种细胞的凋亡情况； 检测两种细胞中 侧群细胞的比例； 平板克隆集落实验比较两种细胞的克隆形成能力； Ｗｅ ｓ ｔ ｅ ｒ ｎＢ ｌ ｏ ｔ 检测两种细胞中 Ｂ ａ ｘ 、 Ｂ ｃ ｌ － ２ 、 Ａ Ｂ Ｃ Ｇ ２和 Ｆ ｏ ｘ Ｍ １蛋 白的表达情况。计量资料组间比较采用 ｔ 检验。结果 ㊀ 用化疗药物 ５－ Ｆ ｕ 成功建立 Ｐ Ｌ Ｃ ／ Ｒ Ａ Ｆ ／ ５ ／ ５－ Ｆ ｕ 细胞株。 Ｐ Ｌ Ｃ ／ Ｒ Ａ Ｆ ／ ５ ／ ５－ Ｆ ｕ 细胞比 Ｐ Ｌ Ｃ ／ Ｒ Ａ Ｆ ／ ５细胞体积大， 突起减少， 呈长梭形改变， 折光性增强。与亲本细胞相比， Ｐ Ｌ Ｃ ／ Ｒ Ａ Ｆ ／ ５ ／ ５－ Ｆ ｕ细胞对 ５－ Ｆ ｕ增 殖抑制作用的敏感性降低， 细胞周期 Ｇ ０ ／ Ｇ １期比例降低， 而Ｓ 期和 Ｇ ２ ／ Ｍ 期比例上升； 抗凋亡能力增加； 侧群细胞比例增加； 增殖能 Ｐ值均 ＜ ０ ０ ５ ） 。Ｗｅ ｓ ｔ ｅ ｒ ｎＢ ｌ ｏ ｔ 检测表明 Ｐ Ｌ Ｃ ／ Ｒ Ａ Ｆ ／ ５ ／ ５－ Ｆ ｕ细胞 Ｂ ｃ ｌ － ２ 、 Ｆ ｏ ｘ Ｍ １ 、 Ａ Ｂ Ｃ Ｇ ２蛋白 力增强， 上述差异均具有统计学意义（ 表达增强， 而Ｐ Ｌ Ｃ ／ Ｒ Ａ Ｆ ／ ５细胞的 Ｂ ａ ｘ 蛋白表达增强， 差异具有统计学意义（ Ｐ值均 ＜ ０ ０ １ ） 。 结论 ㊀ 细胞株 Ｐ Ｌ Ｃ ／ Ｒ Ａ Ｆ ／ ５ ／ ５－Ｆ ｕ中 肝癌干细胞可能是其耐药的根源； 低浓度的 ５－ Ｆ ｕ （ １ ｇ ／ ｍ ｌ ） 可以富集肝癌干细胞样细胞。 μ 关键词： 氟尿嘧啶； 肝肿瘤； 细胞系， 肿瘤； 肿瘤干细胞； 抗药性， 肿瘤 中图分类号： Ｒ ７ ３ ５ ． ７ ㊀㊀㊀文献标志码： Ａ ㊀㊀㊀文章编号： １ ０ ０ １－ ５ ２ ５ ６ （ ２ ０ １ ５ ） ０ ９－ １ ４ ５ ８－ ０ ６
Ｃ Ｈ Ｅ Ｎ ＧＫ ａ ｎ ｇ ｗ ｅ ｎ ，Ｌ Ｉ Ｑ ，Ｚ Ｈ Ａ ＮＹ ｏ ｎ ｇ ｑ ｉ ａ ｎ ｇ ， ｅ ｔ ａ ｌ ． （ Ｄ ｅ ｐ ａ ｒ ｔ ｍ ｅ ｎ ｔ ｏ ｆ Ｇ ａ ｓ ｔ ｒ ｏ ｅ ｎ ｔ ｅ ｒ ｏ ｌ ｏ ｇ ｉ ｃ ａ ｌ Ｓ ｕ ｒ ｇ ｅ ｒ ｙ ，Ｔ ｏ ｎ ｇ ｌ ｉ ｎ ｇＰ ｅ ｏ ｐ ｌ ｅ ᶄ ｓ Ｈ ｏ ｓ ｐ ｉ ｔ ａ ｌ ， Ｔ ｏ ｎ ｇ ｌ ｉ ｎ ｇ ，Ａ ｎ ｈ ｕ ｉ ，Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ） ２ ４ ４ ０ ０ ０ Ａ ｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ： Ｏ ｂ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ ㊀Ｔ ｏｓ ｔ ｕ ｄ ｙ ｔ ｈ ｅ ｃ ｈ ａ ｎ ｇ ｅ ｓ ｉ ｎｂ ｉ ｏ ｌ ｏ ｇ ｉ ｃ ａ ｌ ｃ ｈ ａ ｒ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ｓ ｔ ｉ ｃ ｓ ｏ ｆ ａ ｌ ｉ ｖ ｅ ｒ ｃ ａ ｎ ｃ ｅ ｒ ｃ ｅ ｌ ｌ ｌ ｉ ｎ ｅ Ｐ Ｌ Ｃ ／ Ｒ Ａ Ｆ ／ ５ａ ｆ ｔ ｅ ｒ ｒ ｅ ｐ ｅ ａ ｔ ｅ ｄｅ ｘ ｐ ｏ ｓ ｕ ｒ ｅ ｔ ｏ ａ ， ５－ ｆ ｌ ｕ ｏ ｒ ｏ ｕ ｒ ａ ｃ ｉ （ ５－ Ｆ Ｕ ） ，ａ ｎ ｄｔ ｏ ｉ ｎ ｖ ｅ ｓ ｔ ｉ ｇ ａ ｔ ｅ ｔ ｈ ｅ ｒ ｅ ｌ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｈ ｉ ｐｂ ｅ ｔ ｗ ｅ ｅ ｎｄ ｒ ｕ ｇ － ｒ ｅ ｓ ｉ ｓ ｔ ａ ｎ ｔ ｌ ｉ ｖ ｅ ｒ ｃ ａ ｎ ｃ ｅ ｒ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ａ ｎ ｄｌ ｉ ｖ ｅ ｒ ｃ ａ ｎ ｃ ｅ ｒ ｃ ｈ ｅ ｍ ｏ ｔ ｈ ｅ ｒ ａ ｐ ｙ ｄ ｒ ｕ ｇ ｓ ｔ ｅ ｍｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ．Ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｓ ㊀Ａｌ ｏ ｗｃ ｏ ｎ ｃ ｅ ｎ ｔ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎｏ ｆ ５－ Ｆ Ｕ（ １μ ｇ ／ ｍ ｌ ）ｗ ａ ｓ ｕ ｓ ｅ ｄｔ ｏ ｔ ｒ ｅ ａ ｔ ｔ ｈ ｅ ｈ ｕ ｍ ａ ｎｌ ｉ ｖ ｅ ｒ ｃ ａ ｎ ｃ ｅ ｒ ｃ ｅ ｌ ｌ ｌ ｉ ｎ ｅ Ｐ Ｌ Ｃ ／ Ｒ Ａ Ｆ ／ ５ｒ ｅ ｐ ｅ ａ ｔ ｅ ｄ ｌ ｙ ｔ ｏ ｅ ｓ ｔ ａ ｂ ｌ ｉ ｓ ｈｔ ｈ ｅ Ｐ Ｌ Ｃ ／ Ｒ Ａ Ｆ ／ ５ ／ ５－ Ｆ Ｕｃ ｅ ｌ ｌ ｌ ｉ ｎ ｅ ．Ｍ ｏ ｒ ｐ ｈ ｏ ｌ ｏ ｇ ｉ ｃ ａ ｌ ｄ ｉ ｆ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｃ ｅ ｓ ｂ ｅ ｔ ｗ ｅ ｅ ｎｔ ｈ ｅ ｔ ｗ ｏ ｔ ｙ ｐ ｅ ｓ ｏ ｆ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ｗ ｅ ｒ ｅ ｏ ｂ ｓ ｅ ｒ ｖ ｅ ｄ ．Ｔ ｈ ｅ ｉ ｎ ｈ ｉ ｂ ｉ ｔ ｏ ｒ ｙ ｅ ｆ ｆ ｅ ｃ ｔ ｓ ｏ ｆ ｄ ｉ ｆ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｔ ｃ ｏ ｎ ｃ ｅ ｎ ｔ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｏ ｆ ５－ Ｆ Ｕ（ ０ ， ０ ． ２ ５ ， ０ ． ５ ， １ ， １ ． ５ ，ａ ｎ ｄ ２μ ｇ ／ ｍ ｌ ）ｏ ｎｔ ｈ ｅ ｐ ｒ ｏ ｌ ｉ ｆ ｅ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎｏ ｆ ｔ ｈ ｅ ｔ ｗ ｏ ｔ ｙ ｐ ｅ ｓ ｏ ｆ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ｗ ｅ ｒ ｅ ｄ ｅ ｔ ｅ ｒ ｍ ｉ ｎ ｅ ｄｕ ｓ ｉ ｎ ｇｔ ｈ ｅ Ｃ Ｃ Ｋ－ ８ａ ｓ ｓ ａ ｙ ． Ａ ｐ ｏ ｐ ｔ ｏ ｓ ｉ ｓ ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ ｔ ｗ ｏ ｔ ｙ ｐ ｅ ｓ ｏ ｆ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ａ ｆ ｔ ｅ ｒ ｅ ｘ ｐ ｏ ｓ ｕ ｒ ｅ ｔ ｏ ｄ ｉ ｆ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｔ ｃ ｏ ｎ ｃ ｅ ｎ ｔ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｏ ｆ ５－ Ｆ Ｕ（ ０ ． ５ ， １ ， ａ ｎ ｄ ２μ ｇ ／ ｍ ｌ ）ｆ ｏ ｒ ４ ８ ｈｗ ａ ｓ ａ ｎ ａ ｌ ｙ ｚ ｅ ｄｕ ｓ ｉ ｎ ｇｆ ｌ ｏ ｗｃ ｙ ｔ ｏ ｍ ｅ ｔ ｒ ｙ ．Ｔ ｈ ｅ ｐ ｒ ｏ ｐ ｏ ｒ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｏ ｆ ｓ ｉ ｄ ｅ ｐ ｏ ｐ ｕ ｌ ａ ｔ ｉ ｏ ｎｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ｉ ｎｂ ｏ ｔ ｈｔ ｙ ｐ ｅ ｓ ｏ ｆ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ｗ ｅ ｒ ｅ ｍ ｅ ａ ｓ ｕ ｒ ｅ ｄｕ ｓ ｉ ｎ ｇ ｆ ｌ ｏ ｗｃ ｙ ｔ ｏ ｍ ｅ ｔ ｒ ｙ ．Ｔ ｈ ｅ ｃ ｏ ｌ ｏ ｎ ｙ － ｆ ｏ ｒ ｍ ｉ ｎ ｇ ａ ｂ ｉ ｌ ｉ ｔ ｙｗ ａ ｓ ｃ ｏ ｍ ｐ ａ ｒ ｅ ｄｂ ｅ ｔ ｗ ｅ ｅ ｎｔ ｈ ｅｔ ｗ ｏｔ ｙ ｐ ｅ ｓ ｏ ｆ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ｂ ｙｔ ｈ ｅｐ ｌ ａ ｔ ｅｃ ｏ ｌ ｏ ｎ ｙ － ｆ ｏ ｒ ｍ ｉ ｎ ｇａ ｓ ｓ ａ ｙ ．Ｔ ｈ ｅｅ ｘ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎｏ ｆ Ｂ ａ ｘ ，Ｂ ｃ ｌ － ２ ， Ａ Ｂ Ｃ Ｇ ２ ，ａ ｎ ｄＦ ｏ ｘ Ｍ １ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ ｓ ｉ ｎｂ ｏ ｔ ｈｔ ｙ ｐ ｅ ｓ ｏ ｆ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ｗ ａ ｓ ｅ ｘ ａ ｍ ｉ ｎ ｅ ｄｂ ｙ Ｗｅ ｓ ｔ ｅ ｒ ｎｂ ｌ ｏ ｔ ． Ｂ ｅ ｔ ｗ ｅ ｅ ｎ － ｇ ｒ ｏ ｕ ｐｃ ｏ ｍ ｐ ａ ｒ ｉ ｓ ｏ ｎｗ ａ ｓ ｐ ｅ ｒ ｆ ｏ ｒ ｍ ｅ ｄｂ ｙ ｔ ｔ ｅ ｓ ｔ ． Ｒ ｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｓ ㊀Ｔ ｈ ｅＰ Ｌ Ｃ ／ Ｒ Ａ Ｆ ／ ５ ／ ５－ Ｆ Ｕｃ ｅ ｌ ｌ ｌ ｉ ｎ ｅ ｗ ａ ｓ ｓ ｕ ｃ ｃ ｅ ｓ ｓ ｆ ｕ ｌ ｌ ｙ ｅ ｓ ｔ ａ ｂ ｌ ｉ ｓ ｈ ｅ ｄｕ ｓ ｉ ｎ ｇ ｔ ｈ ｅ ｃ ｈ ｅ ｍ ｏ ｔ ｈ ｅ ｒ ａ ｐ ｙ ｄ ｒ ｕ ｇ ５－ Ｆ Ｕ ．Ｃ ｏ ｍ ｐ ａ ｒ ｅ ｄｗ ｉ ｔ ｈｔ ｈ ｅ Ｐ Ｌ Ｃ ／ Ｒ Ａ Ｆ ／ ５ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ，ｔ ｈ ｅ Ｐ Ｌ Ｃ ／ Ｒ Ａ Ｆ ／ ５ ／ ５－ Ｆ Ｕｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ｈ ａ ｄａ ｌ ａ ｒ ｇ ｅ ｒ ｖ ｏ ｌ ｕ ｍ ｅ ，ｆ ｅ ｗ ｅ ｒ ｐ ｒ ｏ ｔ ｒ ｕ ｓ ｉ ｏ ｎ ｓ ，ａ ｃ ｈ ａ ｎ ｇ ｅ ｄｓ ｈ ａ ｐ ｅ ｏ ｆ ａ ｌ ｏ ｎ ｇｓ ｈ ｕ ｔ ｔ ｌ ｅ ，ａ ｎ ｄｅ ｎ ｈ ａ ｎ ｃ ｅ ｄｒ ｅ ｆ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ｉ ｔ ｙ ． Ｍ ｏ ｒ ｅ ｏ ｖ ｅ ｒ ， ｃ ｏ ｍ ｐ ａ ｒ ｅ ｄｗ ｉ ｔ ｈ ｔ ｈ ｅ ｐ ａ ｒ ｅ ｎ ｔ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ， ｔ ｈ ｅ Ｐ Ｌ Ｃ ／ Ｒ Ａ Ｆ ／ ５ ／ ５－ Ｆ Ｕｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ｈ ａ ｄ ａ ｓ ｉ ｇ ｎ ｉ ｆ ｉ ｃ ａ ｎ ｔ ｌ ｙ ｌ ｏ ｗ ｅ ｒ ｓ ｅ ｎ ｓ ｉ ｔ ｉ ｖ ｉ ｔ ｙ ｔ ｏ ｔ ｈ ｅ ｉ ｎ ｈ ｉ ｂ ｉ ｔ ｏ ｒ ｙ ｅ ｆ ｆ ｅ ｃ ｔ ｏ ｆ ５－ Ｆ Ｕ ，ａｓ ｉ ｇ ｎ ｉ ｆ ｉ ｃ ａ ｎ ｔ ｌ ｙｌ ｏ ｗ ｅ ｒ ｐ ｒ ｏ ｐ ｏ ｒ ｔ ｉ ｏ ｎｏ ｆ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ａ ｔ ｔ ｈ ｅ Ｇ ０ ／ Ｇ １ｐ ｈ ａ ｓ ｅ ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ ｃ ｅ ｌ ｌ ｃ ｙ ｃ ｌ ｅ ，ｓ ｉ ｇ ｎ ｉ ｆ ｉ ｃ ａ ｎ ｔ ｌ ｙ ｈ ｉ ｇ ｈ ｅ ｒ ｐ ｒ ｏ ｐ ｏ ｒ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｏ ｆ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ａ ｔ ｔ ｈ ｅ ｏ ｎｐ ｒ ｏ ｌ ｉ ｆ ｅ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ Ｓａ ｎ ｄＧ ２ ／ Ｍｐ ｈ ａ ｓ ｅ ｓ ，ｓ ｉ ｇ ｎ ｉ ｆ ｉ ｃ ａ ｎ ｔ ｌ ｙ ｈ ｉ ｇ ｈ ｅ ｒ ｒ ｅ ｓ ｉ ｓ ｔ ａ ｎ ｃ ｅｔ ｏ ａ ｐ ｏ ｐ ｔ ｏ ｓ ｉ ｓ ，ａ ｓ ｉ ｇ ｎ ｉ ｆ ｉ ｃ ａ ｎ ｔ ｌ ｙｈ ｉ ｇ ｈ ｅ ｒ ｐ ｒ ｏ ｐ ｏ ｒ ｔ ｉ ｏ ｎｏ ｆ ｓ ｉ ｄ ｅｐ ｏ ｐ ｕ ｌ ａ ｔ ｉ ｏ ｎｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ，ａ ｎ ｄｓ ｉ ｇ ｎ ｉ ｆ ｉ ｃ ａ ｎ ｔ ｌ ｙ ｅ ｎ ｈ ａ ｎ ｃ ｅ ｄｐ ｒ ｏ ｌ ｉ ｆ ｅ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ（ Ｐ＜ ０ ． ０ ５ ） ．Ａ ｃ ｃ ｏ ｒ ｄ ｉ ｎ ｇ ｔ ｏ ｔ ｈ ｅ ｒ ｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｓ ｏ ｆ Ｗｅ ｓ ｔ ｅ ｒ ｎｂ ｌ ｏ ｔ ａ ｓ ｓ ａ ｙ ，ｔ ｈ ｅ ｅ ｘ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎｏ ｆ Ｂ ｃ ｌ － ２ ，Ｆ ｏ ｘ Ｍ １ ，ａ ｎ ｄＡ Ｂ Ｃ Ｇ ２ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ ｓ ｉ ｎｔ ｈ ｅＰ Ｌ Ｃ ／ Ｒ Ａ Ｆ ／ ５ ／ ５－ Ｆ Ｕｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ｗ ａ ｓ ｓ ｉ ｇ ｎ ｉ ｆ ｉ ｃ ａ ｎ ｔ ｌ ｙｉ ｎ ｃ ｒ ｅ ａ ｓ ｅ ｄ（ Ｐ＜ ０ ． ０ １ ） ，ｗ ｈ ｉ ｌ ｅｔ ｈ ｅｅ ｘ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎｏ ｆ Ｂ ａ ｘｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎｉ ｎｔ ｈ ｅＰ Ｌ Ｃ ／ Ｒ Ａ Ｆ ／ ５ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ｗ ａ ｓ Ｐ＜ ０ ． ０ １ ） ．Ｃ ｏ ｎ ｃ ｌ ｕ ｓ ｉ ｏ ｎ ㊀Ｌ ｉ ｖ ｅ ｒ ｃ ａ ｎ ｃ ｅ ｒ ｓ ｔ ｅ ｍｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ａ ｒ ｅ ｐ ｒ ｏ ｂ ａ ｂ ｌ ｙ ｒ ｅ ｓ ｐ ｏ ｎ ｓ ｉ ｂ ｌ ｅ ｆ ｏ ｒ ｄ ｒ ｕ ｇ ｒ ｅ ｓ ｉ ｓ ｔ ａ ｎ ｃ ｅ ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ Ｐ Ｌ Ｃ ／ Ｒ Ａ Ｆ ／ ５－ ｓ ｉ ｇ ｎ ｉ ｆ ｉ ｃ ａ ｎ ｔ ｌ ｙｉ ｎ ｃ ｒ ｅ ａ ｓ ｅ ｄ（ Ｆ Ｕｃ ｅ ｌ ｌ ｌ ｉ ｎ ｅ ．Ｅ ｘ ｐ ｏ ｓ ｕ ｒ ｅｔ ｏａｌ ｏ ｗｃ ｏ ｎ ｃ ｅ ｎ ｔ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎｏ ｆ ５－ Ｆ Ｕ（ １μ ｇ ／ ｍ ｌ ）ｃ ａ ｎｅ ｎ ｒ ｉ ｃ ｈｌ ｉ ｖ ｅ ｒ ｃ ａ ｎ ｃ ｅ ｒ ｓ ｔ ｅ ｍｃ ｅ ｌ ｌ － ｌ ｉ ｋ ｅ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ． Ｋ ｅ ｙｗ ｏ ｒ ｄ ｓ ： ｆ ｌ ｕ ｏ ｒ ｏ ｕ ｒ ａ ｃ ｉ ｌ ；ｌ ｉ ｖ ｅ ｒ ｎ ｅ ｏ ｐ ｌ ａ ｓ ｍ ｓ ；ｃ ｅ ｌ ｌ ｌ ｉ ｎ ｅ ，ｔ ｕ ｍ ｏ ｒ ；ｎ ｅ ｏ ｐ ｌ ａ ｓ ｔ ｉ ｃ ｓ ｔ ｅ ｍｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ；ｄ ｒ ｕ ｇ ｒ ｅ ｓ ｉ ｓ ｔ ａ ｎ ｃ ｅ ，ｎ ｅ ｏ ｐ ｌ ａ ｓ ｍ
程康文１，李㊀琪２，詹勇强３，王成友４，王贵和１， 倪㊀勇３，朱宝和３，邓雪松３
（ １铜陵市人民医院 胃肠外科，安徽 铜陵 ２ ４ ４ ０ ０ ０ ； ２深圳市人民医院 肝胆外科，广东 深圳 ５ １ ８ ０ ２ ０ ； ３深圳大学第一附属医院 肝胆外科，广东 深圳 ５ １ ８ ０ ３ ５ ； ４暨南大学附属深圳华侨医院 普外科，广东 深圳 ５ １ ８ １ １ １ ）
临床肝胆病杂志第 ３ １卷第 ９期 ２ ０ １ ５年 ９月㊀ＪＣ ｌ ｉ ｎＨ ｅ ｐ ａ ｔ ｏ ｌ ， Ｖ ｏ ｌ ． ３ １Ｎ ｏ ． ９ ， Ｓ ｅ ｐ ． ２ ０ １ ５
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Ｅ ｆ ｆ ｅ ｃ ｔ ｓ ｏ ｆ ５ － ｆ ｌ ｕ ｏ ｒ ｏ ｕ ｒ ａ ｃ ｉ ｌ ｏ ｎｂ ｉ ｏ ｌ ｏ ｇ ｉ ｃ ａ ｌ ｃ ｈ ａ ｒ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ｓ ｔ ｉ ｃ ｓ ａ ｎ ｄｄ ｒ ｕ ｇｒ ｅ ｓ ｉ ｓ ｔ ａ ｎ ｃ ｅ ｍ ｅ ｃ ｈ ａ ｎ ｉ ｓ ｍ ｓ ｏ ｆ ｌ ｉ ｖ ｅ ｒ ｃ ａ ｎ ｃ ｅ ｒ ｃ ｅ ｌ ｌ ｌ ｉ ｎ ｅ Ｐ Ｌ Ｃ／ Ｒ Ａ Ｆ ／ ５
摘要： 目的㊀研究化疗药物 ５－ 氟尿嘧啶（ ５－ Ｆ ｕ ） 反复作用肝癌细胞株 Ｐ Ｌ Ｃ ／ Ｒ Ａ Ｆ ／ ５后生物学特性的变化， 探讨耐药肝癌细胞 与肝癌干细胞之间的相关性。方法㊀用低浓度的 ５－ Ｆ ｕ （ １μ ｇ ／ ｍ ｌ ） 反复多次作用于人肝癌细胞株 Ｐ Ｌ Ｃ ／ Ｒ Ａ Ｆ ／ ５后建立 Ｐ Ｌ Ｃ ／ Ｒ Ａ Ｆ ／ ５ ／ 细胞株， 观察两种细胞的形态学差异。用 Ｃ Ｃ Ｋ－ ８法检测不同浓度的 ５－ Ｆ ｕ （ ０ 、 ０ ． ２ ５ 、 ０ ． ５ 、 １ 、 １ ． ５ 、 ２μ ｇ ／ ｍ ｌ ） 对两种细胞增殖的 ５－ Ｆ ｕ 抑制作用； 在不同浓度的 ５－ Ｆ ｕ （ ０ ． ５ 、 １ 、 ２μ ｇ ／ ｍ ｌ ） 作用 ４ ８ｈ 后， 流式细胞仪分析不同浓度下两种细胞的凋亡情况； 检测两种细胞中 侧群细胞的比例； 平板克隆集落实验比较两种细胞的克隆形成能力； Ｗｅ ｓ ｔ ｅ ｒ ｎＢ ｌ ｏ ｔ 检测两种细胞中 Ｂ ａ ｘ 、 Ｂ ｃ ｌ － ２ 、 Ａ Ｂ Ｃ Ｇ ２和 Ｆ ｏ ｘ Ｍ １蛋 白的表达情况。计量资料组间比较采用 ｔ 检验。结果 ㊀ 用化疗药物 ５－ Ｆ ｕ 成功建立 Ｐ Ｌ Ｃ ／ Ｒ Ａ Ｆ ／ ５ ／ ５－ Ｆ ｕ 细胞株。 Ｐ Ｌ Ｃ ／ Ｒ Ａ Ｆ ／ ５ ／ ５－ Ｆ ｕ 细胞比 Ｐ Ｌ Ｃ ／ Ｒ Ａ Ｆ ／ ５细胞体积大， 突起减少， 呈长梭形改变， 折光性增强。与亲本细胞相比， Ｐ Ｌ Ｃ ／ Ｒ Ａ Ｆ ／ ５ ／ ５－ Ｆ ｕ细胞对 ５－ Ｆ ｕ增 殖抑制作用的敏感性降低， 细胞周期 Ｇ ０ ／ Ｇ １期比例降低， 而Ｓ 期和 Ｇ ２ ／ Ｍ 期比例上升； 抗凋亡能力增加； 侧群细胞比例增加； 增殖能 Ｐ值均 ＜ ０ ０ ５ ） 。Ｗｅ ｓ ｔ ｅ ｒ ｎＢ ｌ ｏ ｔ 检测表明 Ｐ Ｌ Ｃ ／ Ｒ Ａ Ｆ ／ ５ ／ ５－ Ｆ ｕ细胞 Ｂ ｃ ｌ － ２ 、 Ｆ ｏ ｘ Ｍ １ 、 Ａ Ｂ Ｃ Ｇ ２蛋白 力增强， 上述差异均具有统计学意义（ 表达增强， 而Ｐ Ｌ Ｃ ／ Ｒ Ａ Ｆ ／ ５细胞的 Ｂ ａ ｘ 蛋白表达增强， 差异具有统计学意义（ Ｐ值均 ＜ ０ ０ １ ） 。 结论 ㊀ 细胞株 Ｐ Ｌ Ｃ ／ Ｒ Ａ Ｆ ／ ５ ／ ５－Ｆ ｕ中 肝癌干细胞可能是其耐药的根源； 低浓度的 ５－ Ｆ ｕ （ １ ｇ ／ ｍ ｌ ） 可以富集肝癌干细胞样细胞。 μ 关键词： 氟尿嘧啶； 肝肿瘤； 细胞系， 肿瘤； 肿瘤干细胞； 抗药性， 肿瘤 中图分类号： Ｒ ７ ３ ５ ． ７ ㊀㊀㊀文献标志码： Ａ ㊀㊀㊀文章编号： １ ０ ０ １－ ５ ２ ５ ６ （ ２ ０ １ ５ ） ０ ９－ １ ４ ５ ８－ ０ ６
Ｃ Ｈ Ｅ Ｎ ＧＫ ａ ｎ ｇ ｗ ｅ ｎ ，Ｌ Ｉ Ｑ ，Ｚ Ｈ Ａ ＮＹ ｏ ｎ ｇ ｑ ｉ ａ ｎ ｇ ， ｅ ｔ ａ ｌ ． （ Ｄ ｅ ｐ ａ ｒ ｔ ｍ ｅ ｎ ｔ ｏ ｆ Ｇ ａ ｓ ｔ ｒ ｏ ｅ ｎ ｔ ｅ ｒ ｏ ｌ ｏ ｇ ｉ ｃ ａ ｌ Ｓ ｕ ｒ ｇ ｅ ｒ ｙ ，Ｔ ｏ ｎ ｇ ｌ ｉ ｎ ｇＰ ｅ ｏ ｐ ｌ ｅ ᶄ ｓ Ｈ ｏ ｓ ｐ ｉ ｔ ａ ｌ ， Ｔ ｏ ｎ ｇ ｌ ｉ ｎ ｇ ，Ａ ｎ ｈ ｕ ｉ ，Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ） ２ ４ ４ ０ ０ ０ Ａ ｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ： Ｏ ｂ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ ㊀Ｔ ｏｓ ｔ ｕ ｄ ｙ ｔ ｈ ｅ ｃ ｈ ａ ｎ ｇ ｅ ｓ ｉ ｎｂ ｉ ｏ ｌ ｏ ｇ ｉ ｃ ａ ｌ ｃ ｈ ａ ｒ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ｓ ｔ ｉ ｃ ｓ ｏ ｆ ａ ｌ ｉ ｖ ｅ ｒ ｃ ａ ｎ ｃ ｅ ｒ ｃ ｅ ｌ ｌ ｌ ｉ ｎ ｅ Ｐ Ｌ Ｃ ／ Ｒ Ａ Ｆ ／ ５ａ ｆ ｔ ｅ ｒ ｒ ｅ ｐ ｅ ａ ｔ ｅ ｄｅ ｘ ｐ ｏ ｓ ｕ ｒ ｅ ｔ ｏ ａ ， ５－ ｆ ｌ ｕ ｏ ｒ ｏ ｕ ｒ ａ ｃ ｉ （ ５－ Ｆ Ｕ ） ，ａ ｎ ｄｔ ｏ ｉ ｎ ｖ ｅ ｓ ｔ ｉ ｇ ａ ｔ ｅ ｔ ｈ ｅ ｒ ｅ ｌ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｈ ｉ ｐｂ ｅ ｔ ｗ ｅ ｅ ｎｄ ｒ ｕ ｇ － ｒ ｅ ｓ ｉ ｓ ｔ ａ ｎ ｔ ｌ ｉ ｖ ｅ ｒ ｃ ａ ｎ ｃ ｅ ｒ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ａ ｎ ｄｌ ｉ ｖ ｅ ｒ ｃ ａ ｎ ｃ ｅ ｒ ｃ ｈ ｅ ｍ ｏ ｔ ｈ ｅ ｒ ａ ｐ ｙ ｄ ｒ ｕ ｇ ｓ ｔ ｅ ｍｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ．Ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｓ ㊀Ａｌ ｏ ｗｃ ｏ ｎ ｃ ｅ ｎ ｔ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎｏ ｆ ５－ Ｆ Ｕ（ １μ ｇ ／ ｍ ｌ ）ｗ ａ ｓ ｕ ｓ ｅ ｄｔ ｏ ｔ ｒ ｅ ａ ｔ ｔ ｈ ｅ ｈ ｕ ｍ ａ ｎｌ ｉ ｖ ｅ ｒ ｃ ａ ｎ ｃ ｅ ｒ ｃ ｅ ｌ ｌ ｌ ｉ ｎ ｅ Ｐ Ｌ Ｃ ／ Ｒ Ａ Ｆ ／ ５ｒ ｅ ｐ ｅ ａ ｔ ｅ ｄ ｌ ｙ ｔ ｏ ｅ ｓ ｔ ａ ｂ ｌ ｉ ｓ ｈｔ ｈ ｅ Ｐ Ｌ Ｃ ／ Ｒ Ａ Ｆ ／ ５ ／ ５－ Ｆ Ｕｃ ｅ ｌ ｌ ｌ ｉ ｎ ｅ ．Ｍ ｏ ｒ ｐ ｈ ｏ ｌ ｏ ｇ ｉ ｃ ａ ｌ ｄ ｉ ｆ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｃ ｅ ｓ ｂ ｅ ｔ ｗ ｅ ｅ ｎｔ ｈ ｅ ｔ ｗ ｏ ｔ ｙ ｐ ｅ ｓ ｏ ｆ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ｗ ｅ ｒ ｅ ｏ ｂ ｓ ｅ ｒ ｖ ｅ ｄ ．Ｔ ｈ ｅ ｉ ｎ ｈ ｉ ｂ ｉ ｔ ｏ ｒ ｙ ｅ ｆ ｆ ｅ ｃ ｔ ｓ ｏ ｆ ｄ ｉ ｆ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｔ ｃ ｏ ｎ ｃ ｅ ｎ ｔ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｏ ｆ ５－ Ｆ Ｕ（ ０ ， ０ ． ２ ５ ， ０ ． ５ ， １ ， １ ． ５ ，ａ ｎ ｄ ２μ ｇ ／ ｍ ｌ ）ｏ ｎｔ ｈ ｅ ｐ ｒ ｏ ｌ ｉ ｆ ｅ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎｏ ｆ ｔ ｈ ｅ ｔ ｗ ｏ ｔ ｙ ｐ ｅ ｓ ｏ ｆ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ｗ ｅ ｒ ｅ ｄ ｅ ｔ ｅ ｒ ｍ ｉ ｎ ｅ ｄｕ ｓ ｉ ｎ ｇｔ ｈ ｅ Ｃ Ｃ Ｋ－ ８ａ ｓ ｓ ａ ｙ ． Ａ ｐ ｏ ｐ ｔ ｏ ｓ ｉ ｓ ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ ｔ ｗ ｏ ｔ ｙ ｐ ｅ ｓ ｏ ｆ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ａ ｆ ｔ ｅ ｒ ｅ ｘ ｐ ｏ ｓ ｕ ｒ ｅ ｔ ｏ ｄ ｉ ｆ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｔ ｃ ｏ ｎ ｃ ｅ ｎ ｔ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｏ ｆ ５－ Ｆ Ｕ（ ０ ． ５ ， １ ， ａ ｎ ｄ ２μ ｇ ／ ｍ ｌ ）ｆ ｏ ｒ ４ ８ ｈｗ ａ ｓ ａ ｎ ａ ｌ ｙ ｚ ｅ ｄｕ ｓ ｉ ｎ ｇｆ ｌ ｏ ｗｃ ｙ ｔ ｏ ｍ ｅ ｔ ｒ ｙ ．Ｔ ｈ ｅ ｐ ｒ ｏ ｐ ｏ ｒ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｏ ｆ ｓ ｉ ｄ ｅ ｐ ｏ ｐ ｕ ｌ ａ ｔ ｉ ｏ ｎｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ｉ ｎｂ ｏ ｔ ｈｔ ｙ ｐ ｅ ｓ ｏ ｆ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ｗ ｅ ｒ ｅ ｍ ｅ ａ ｓ ｕ ｒ ｅ ｄｕ ｓ ｉ ｎ ｇ ｆ ｌ ｏ ｗｃ ｙ ｔ ｏ ｍ ｅ ｔ ｒ ｙ ．Ｔ ｈ ｅ ｃ ｏ ｌ ｏ ｎ ｙ － ｆ ｏ ｒ ｍ ｉ ｎ ｇ ａ ｂ ｉ ｌ ｉ ｔ ｙｗ ａ ｓ ｃ ｏ ｍ ｐ ａ ｒ ｅ ｄｂ ｅ ｔ ｗ ｅ ｅ ｎｔ ｈ ｅｔ ｗ ｏｔ ｙ ｐ ｅ ｓ ｏ ｆ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ｂ ｙｔ ｈ ｅｐ ｌ ａ ｔ ｅｃ ｏ ｌ ｏ ｎ ｙ － ｆ ｏ ｒ ｍ ｉ ｎ ｇａ ｓ ｓ ａ ｙ ．Ｔ ｈ ｅｅ ｘ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎｏ ｆ Ｂ ａ ｘ ，Ｂ ｃ ｌ － ２ ， Ａ Ｂ Ｃ Ｇ ２ ，ａ ｎ ｄＦ ｏ ｘ Ｍ １ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ ｓ ｉ ｎｂ ｏ ｔ ｈｔ ｙ ｐ ｅ ｓ ｏ ｆ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ｗ ａ ｓ ｅ ｘ ａ ｍ ｉ ｎ ｅ ｄｂ ｙ Ｗｅ ｓ ｔ ｅ ｒ ｎｂ ｌ ｏ ｔ ． Ｂ ｅ ｔ ｗ ｅ ｅ ｎ － ｇ ｒ ｏ ｕ ｐｃ ｏ ｍ ｐ ａ ｒ ｉ ｓ ｏ ｎｗ ａ ｓ ｐ ｅ ｒ ｆ ｏ ｒ ｍ ｅ ｄｂ ｙ ｔ ｔ ｅ ｓ ｔ ． Ｒ ｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｓ ㊀Ｔ ｈ ｅＰ Ｌ Ｃ ／ Ｒ Ａ Ｆ ／ ５ ／ ５－ Ｆ Ｕｃ ｅ ｌ ｌ ｌ ｉ ｎ ｅ ｗ ａ ｓ ｓ ｕ ｃ ｃ ｅ ｓ ｓ ｆ ｕ ｌ ｌ ｙ ｅ ｓ ｔ ａ ｂ ｌ ｉ ｓ ｈ ｅ ｄｕ ｓ ｉ ｎ ｇ ｔ ｈ ｅ ｃ ｈ ｅ ｍ ｏ ｔ ｈ ｅ ｒ ａ ｐ ｙ ｄ ｒ ｕ ｇ ５－ Ｆ Ｕ ．Ｃ ｏ ｍ ｐ ａ ｒ ｅ ｄｗ ｉ ｔ ｈｔ ｈ ｅ Ｐ Ｌ Ｃ ／ Ｒ Ａ Ｆ ／ ５ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ，ｔ ｈ ｅ Ｐ Ｌ Ｃ ／ Ｒ Ａ Ｆ ／ ５ ／ ５－ Ｆ Ｕｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ｈ ａ ｄａ ｌ ａ ｒ ｇ ｅ ｒ ｖ ｏ ｌ ｕ ｍ ｅ ，ｆ ｅ ｗ ｅ ｒ ｐ ｒ ｏ ｔ ｒ ｕ ｓ ｉ ｏ ｎ ｓ ，ａ ｃ ｈ ａ ｎ ｇ ｅ ｄｓ ｈ ａ ｐ ｅ ｏ ｆ ａ ｌ ｏ ｎ ｇｓ ｈ ｕ ｔ ｔ ｌ ｅ ，ａ ｎ ｄｅ ｎ ｈ ａ ｎ ｃ ｅ ｄｒ ｅ ｆ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ｉ ｔ ｙ ． Ｍ ｏ ｒ ｅ ｏ ｖ ｅ ｒ ， ｃ ｏ ｍ ｐ ａ ｒ ｅ ｄｗ ｉ ｔ ｈ ｔ ｈ ｅ ｐ ａ ｒ ｅ ｎ ｔ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ， ｔ ｈ ｅ Ｐ Ｌ Ｃ ／ Ｒ Ａ Ｆ ／ ５ ／ ５－ Ｆ Ｕｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ｈ ａ ｄ ａ ｓ ｉ ｇ ｎ ｉ ｆ ｉ ｃ ａ ｎ ｔ ｌ ｙ ｌ ｏ ｗ ｅ ｒ ｓ ｅ ｎ ｓ ｉ ｔ ｉ ｖ ｉ ｔ ｙ ｔ ｏ ｔ ｈ ｅ ｉ ｎ ｈ ｉ ｂ ｉ ｔ ｏ ｒ ｙ ｅ ｆ ｆ ｅ ｃ ｔ ｏ ｆ ５－ Ｆ Ｕ ，ａｓ ｉ ｇ ｎ ｉ ｆ ｉ ｃ ａ ｎ ｔ ｌ ｙｌ ｏ ｗ ｅ ｒ ｐ ｒ ｏ ｐ ｏ ｒ ｔ ｉ ｏ ｎｏ ｆ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ａ ｔ ｔ ｈ ｅ Ｇ ０ ／ Ｇ １ｐ ｈ ａ ｓ ｅ ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ ｃ ｅ ｌ ｌ ｃ ｙ ｃ ｌ ｅ ，ｓ ｉ ｇ ｎ ｉ ｆ ｉ ｃ ａ ｎ ｔ ｌ ｙ ｈ ｉ ｇ ｈ ｅ ｒ ｐ ｒ ｏ ｐ ｏ ｒ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｏ ｆ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ａ ｔ ｔ ｈ ｅ ｏ ｎｐ ｒ ｏ ｌ ｉ ｆ ｅ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ Ｓａ ｎ ｄＧ ２ ／ Ｍｐ ｈ ａ ｓ ｅ ｓ ，ｓ ｉ ｇ ｎ ｉ ｆ ｉ ｃ ａ ｎ ｔ ｌ ｙ ｈ ｉ ｇ ｈ ｅ ｒ ｒ ｅ ｓ ｉ ｓ ｔ ａ ｎ ｃ ｅｔ ｏ ａ ｐ ｏ ｐ ｔ ｏ ｓ ｉ ｓ ，ａ ｓ ｉ ｇ ｎ ｉ ｆ ｉ ｃ ａ ｎ ｔ ｌ ｙｈ ｉ ｇ ｈ ｅ ｒ ｐ ｒ ｏ ｐ ｏ ｒ ｔ ｉ ｏ ｎｏ ｆ ｓ ｉ ｄ ｅｐ ｏ ｐ ｕ ｌ ａ ｔ ｉ ｏ ｎｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ，ａ ｎ ｄｓ ｉ ｇ ｎ ｉ ｆ ｉ ｃ ａ ｎ ｔ ｌ ｙ ｅ ｎ ｈ ａ ｎ ｃ ｅ ｄｐ ｒ ｏ ｌ ｉ ｆ ｅ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ（ Ｐ＜ ０ ． ０ ５ ） ．Ａ ｃ ｃ ｏ ｒ ｄ ｉ ｎ ｇ ｔ ｏ ｔ ｈ ｅ ｒ ｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｓ ｏ ｆ Ｗｅ ｓ ｔ ｅ ｒ ｎｂ ｌ ｏ ｔ ａ ｓ ｓ ａ ｙ ，ｔ ｈ ｅ ｅ ｘ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎｏ ｆ Ｂ ｃ ｌ － ２ ，Ｆ ｏ ｘ Ｍ １ ，ａ ｎ ｄＡ Ｂ Ｃ Ｇ ２ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ ｓ ｉ ｎｔ ｈ ｅＰ Ｌ Ｃ ／ Ｒ Ａ Ｆ ／ ５ ／ ５－ Ｆ Ｕｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ｗ ａ ｓ ｓ ｉ ｇ ｎ ｉ ｆ ｉ ｃ ａ ｎ ｔ ｌ ｙｉ ｎ ｃ ｒ ｅ ａ ｓ ｅ ｄ（ Ｐ＜ ０ ． ０ １ ） ，ｗ ｈ ｉ ｌ ｅｔ ｈ ｅｅ ｘ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎｏ ｆ Ｂ ａ ｘｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎｉ ｎｔ ｈ ｅＰ Ｌ Ｃ ／ Ｒ Ａ Ｆ ／ ５ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ｗ ａ ｓ Ｐ＜ ０ ． ０ １ ） ．Ｃ ｏ ｎ ｃ ｌ ｕ ｓ ｉ ｏ ｎ ㊀Ｌ ｉ ｖ ｅ ｒ ｃ ａ ｎ ｃ ｅ ｒ ｓ ｔ ｅ ｍｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ａ ｒ ｅ ｐ ｒ ｏ ｂ ａ ｂ ｌ ｙ ｒ ｅ ｓ ｐ ｏ ｎ ｓ ｉ ｂ ｌ ｅ ｆ ｏ ｒ ｄ ｒ ｕ ｇ ｒ ｅ ｓ ｉ ｓ ｔ ａ ｎ ｃ ｅ ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ Ｐ Ｌ Ｃ ／ Ｒ Ａ Ｆ ／ ５－ ｓ ｉ ｇ ｎ ｉ ｆ ｉ ｃ ａ ｎ ｔ ｌ ｙｉ ｎ ｃ ｒ ｅ ａ ｓ ｅ ｄ（ Ｆ Ｕｃ ｅ ｌ ｌ ｌ ｉ ｎ ｅ ．Ｅ ｘ ｐ ｏ ｓ ｕ ｒ ｅｔ ｏａｌ ｏ ｗｃ ｏ ｎ ｃ ｅ ｎ ｔ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎｏ ｆ ５－ Ｆ Ｕ（ １μ ｇ ／ ｍ ｌ ）ｃ ａ ｎｅ ｎ ｒ ｉ ｃ ｈｌ ｉ ｖ ｅ ｒ ｃ ａ ｎ ｃ ｅ ｒ ｓ ｔ ｅ ｍｃ ｅ ｌ ｌ － ｌ ｉ ｋ ｅ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ． Ｋ ｅ ｙｗ ｏ ｒ ｄ ｓ ： ｆ ｌ ｕ ｏ ｒ ｏ ｕ ｒ ａ ｃ ｉ ｌ ；ｌ ｉ ｖ ｅ ｒ ｎ ｅ ｏ ｐ ｌ ａ ｓ ｍ ｓ ；ｃ ｅ ｌ ｌ ｌ ｉ ｎ ｅ ，ｔ ｕ ｍ ｏ ｒ ；ｎ ｅ ｏ ｐ ｌ ａ ｓ ｔ ｉ ｃ ｓ ｔ ｅ ｍｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ；ｄ ｒ ｕ ｇ ｒ ｅ ｓ ｉ ｓ ｔ ａ ｎ ｃ ｅ ，ｎ ｅ ｏ ｐ ｌ ａ ｓ ｍ
程康文１，李㊀琪２，詹勇强３，王成友４，王贵和１， 倪㊀勇３，朱宝和３，邓雪松３
（ １铜陵市人民医院 胃肠外科，安徽 铜陵 ２ ４ ４ ０ ０ ０ ； ２深圳市人民医院 肝胆外科，广东 深圳 ５ １ ８ ０ ２ ０ ； ３深圳大学第一附属医院 肝胆外科，广东 深圳 ５ １ ８ ０ ３ ５ ； ４暨南大学附属深圳华侨医院 普外科，广东 深圳 ５ １ ８ １ １ １ ）