正交试验法优化土茯苓配方颗粒提取工艺研究
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【关键词】土茯苓配方颗粒；水提工艺；落新妇苷；出膏率 【Abstract】Objective: To optimize the extraction process of Smilacis Glabrae Rhizoma formula granules and to provide theoretical basis for industrial production of Smilacis Glabrae Rhizoma formula granules. Methods: First of all, the single factor test method was used to design the pre-experiment of extracting Smilacis Glabrae Rhizoma Formula Granules, and the paste yield of each decoction was measured, and the content of astilin and the transfer rate were measured. Then, the obtained paste yield and the transfer rate of astilin content were analyzed. Finally, on the basis of single factor test, L9(34) orthogonal test was used to screen out the best water extraction technology for Smilacis Glabrae Rhizoma Formula Granules, with the addition of water, extraction time and extraction times as three factors, and the extraction rate and comprehensive score of astilin as indicators. Results: The influencing factors on the extraction effect of Smilacis Glabrae Rhizoma Formula Granules were the number of extraction, the amount of water added and the extraction time. From the consideration of shortening production cycle and reducing production cost, the optimal water extraction process of Smilacis Glabrae Rhizoma Formula Granules was to add 8-fold water and extract it twice, 1.5 hours for the first time and 1 hour for the second time. After three verification tests, it was found that the average paste yield under this condition was 32.08% (RSD= 0.58%, 3 times), and the average content of astilin was 1.114 6 mg•ml -1 (RSD=1.35%,3 times), which was close to the maximum value of the orthogonal test. Conclusions: The extraction process is scientific, reasonable and stable, which provides a certain reference for the extraction process of Smilacis Glabrae Rhizoma Formula Granules. 【Keywords】Smilacis Glabrae Rhizoma Formula Granules; Water extraction process; Astilbin; Yield of solid extracts
供试品溶液的制备：取提取液适量，滤过，取续滤液，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 10 μL，
注入液相色谱仪，测定，得落新妇苷含量，按照下式计算落新妇
苷的转移率。
落新妇苷的转移率 (%)=[
水提液中落新妇苷的总量 饮片中所含落新妇苷的总量
] ×100%
2.3 提取工艺预实验结果
按照“2.2”评价指标测定方法中出膏率和落新妇苷含量测
中图分类号：R284.2
文献标识码：A
文章编号：1674-7860（2021）09-0137-03
【摘 要】目的：优化土茯苓配方颗粒的提取工艺，为工业化生产土茯苓配方颗粒提供理论依据。方法：首先，通过单因素试验 法设计土茯苓配方颗粒提取的预实验，测定预实验所得每一煎的出膏率，并检测落新妇苷含量与计算转移率。然后，对获得的出膏 率和落新妇苷含量转移率进行分析。最后，在单因素试验的基础上，采用 L（9 34）正交试验法，以加水量、提取时间和提取次数为 3 个 因素，以出膏率和落新妇苷的综合评分为指标，筛选出土茯苓配方颗粒的最佳水提取工艺。结果：对土茯苓提取效果的影响大小依 次是提取次数＞加水量＞提取时间。从出膏率和落新妇苷的综合评分兼顾缩短生产周期、降低生产成本上考虑，筛选出土茯苓配方 颗粒的最佳水提工艺为加 8 倍量水，提取 2 次，第一次 1.5 h，第二次 1 h。经过 3 次验证试验发现该条件下平均出膏率为 32.08% （RSD=0.58%，3 次），落新妇苷含量平均值为 1.114 6 mg•mL（-1 RSD=1.35%，3 次），与正交试验的最大值接近。结论：该提取工艺科 学、合理、稳定，为土茯苓配方颗粒规范化大生产的提取工艺提供一定的参考依据。
1 仪器与试药
1.1 仪器 JJ500Y 百分之一电子分析天平；MS204S 万分之一电子分
析 天 平 ；FTS-10A 分 体 式 养 生 壶 ；DZF-6050 型 真 空 干 燥 箱 ；
-138- 临床医学 • 医药论坛
Clinical Journal of Chinese Medicine 2021 Vol.(13) No.9
姚 娜 1,2 黄燕明 1 陈桂生 1 康志英 1,2 徐 超 3 张立明 4 （1. 广州市香雪制药股份有限公司，广东 广州，510663；2. 宁夏隆德县六盘山中药资源开发有限公司，宁夏 固原，756300；
3. 宁夏职业技术学院，宁夏 银川，750021；4. 宁夏医科大学药学院，宁夏 银川，750004）
2.2 评价指标测定方法
2.2.1 出膏率
取提取液供试品，精密称取约 50 g，置已恒重的蒸发皿中，
水浴蒸干 ，在 105℃干燥 3 h 得土茯苓干膏 ，置干燥器中放冷
30 min，迅速精密称定干膏重量，计算出膏率。
出膏率 (%)
=
[
干膏重量 × 提取液供试品总量 提取液称样量 × 饮片重量
]
×100%
分别按 L（9 34）正交表的方案进行试验，药液合并，称重，减压浓 缩至 500 mL，取样测定出膏率和落新妇苷含量。结果见表 3。
综合评分= 落新妇苷含量 落新妇苷含量max
2 方法与结果
2.1 提取工艺预实验方法
称取土茯苓饮片 100 g，平行 2 份，分别置于 2 L 煎药壶中，
提取 3 次，第一次加 8 倍量水，提取 1.5 h，第二次加 7 倍量水，提
取 1 h，第三次加 7 倍量水，提取 1 h。将每次提取液用 200 目绢
布过滤，得提取液供试品，称重，冷藏备用。
DHG-9070A 电 热 鼓 风 干 燥 箱 ；HWS-26 电 热 恒 温 水 浴 锅 ； Simplicity UV 超纯水器；Agilent1260 高效液相色谱仪。 1.2 药材、对照品与试药
土茯苓饮片（广东香雪医药有限公司 ，批号 ：201901001P ， 经广州市香雪制药股份有限公司总工程师康志英鉴定为百合 科植物光叶菝葜 Smilax glabra Roxb. 的干燥根茎）。落新妇苷 对 照 品（中 国 食 品 药 品 检 定 研 究 所 ，111798-201504，纯 度 ： 93.9%）。 甲 醇（ 上 海 星 可 高 纯 溶 剂 有 限 公 司 ，批 号 ： 0114180706，色谱级）。冰醋酸（美国阿拉丁工业公司 ，批号 ： L1718059，色谱级）。甲醇（西陇科学股份有限公司，180801-1， 分析纯）。
doi:10.3969/j.issn.1674-7860.2021.09.051
土茯苓为百合科植物光叶菝葜 Smilax glabra Roxb. 的干燥 根茎。夏 、秋二季采挖 ，除去须根 ，洗净 ，干燥 ；或趁鲜切成薄 片，干燥。其具有解毒，除湿，通利关节的功效。用于梅毒及汞 中毒所致的肢体拘挛 ，筋骨疼痛 ；湿热淋浊 ，带下 ，痈肿 ，瘰疬 ， 疥癣［1-2］。土茯苓主要含有黄酮类、糖类、有机酸类、苯丙素类、 甾醇类、皂苷类等化学成分［3-5］，其中黄酮类化合物为主要的药 物活性成分，其临床用量范围为 9～240 g，依据疾病和证型的 特点 ，选择土茯苓的不同配伍和用量。其药理研究较多 ，药理 作用主要集中在对心血管系统的作用，脑缺氧及记忆障碍的影 响，另还有免疫抑制，抗炎、镇痛、利尿，抗胃溃疡作用等［6-9］。
2.2.2 落新妇苷含量测定
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为
填充剂；以甲醇-0.1% 冰醋酸溶液（39∶61）为流动相；检测波长
为 291 nm。理论板数按落新妇苷峰计算应不低于 5 000。
对照品溶液的制备取落新妇苷对照品适量 ，精密称定 ，加
60% 甲醇制成每 1 mL 含 0.2 mg 的溶液，即得。
CJCM 中医临床研究 2021 年第 13 卷 第 9 期
临床医学 • 医药论坛 -137-
正交试验法优化土茯苓配方颗粒提取工艺研究
Study on optimizing extraction technology of Smilacis Glabrae Rhizoma Formula Granules with orthogonal experiment
ห้องสมุดไป่ตู้定方法测定每一煎的出膏率 ，并检测落新妇苷含量计算转移
率。结果见表 1。
表 1 预实验结果表（%） 煎液
第一煎 第二煎 第三煎
出膏率 25.25
7.11 2.49
落新妇苷转移率 30.50 47.87 61.66
上表结果可知 ，土茯苓水提液第一煎出膏最多 ，占总出膏
的 72.00%，第二煎开始迅速下降；而指标成分落新妇苷第三煎
较第一煎和第二煎的转移率均有提高，表明有效成分落新妇苷
不易煎出。
2.4 正交试验
根据预实验的结果 ，设计正交试验表 ，以出膏率和落新妇
苷的含量为考察指标，采用综合评分法，考察加水倍数（A）、提
取时间（B）、提取次数（C）3 个影响因素对土茯苓提取效果的影
响，因素水平见表 2。称取 9 份土茯苓，每份 100 g，精密称定，
中药配方颗粒是以水为溶媒 ，经提取 、浓缩 、干燥 、制粒等 工艺制备而得。其具有疗效稳定 ，携带使用方便的特点 ，适合
生活节奏快速的现代人［10-11］。目前 ，中药配方颗粒仍处于试点 生产阶段 ，各试点生产企业采用的工艺 、标准各异［12-13］。经检 索，未见关于土茯苓配方颗粒提取工艺的研究报道。为建立土 茯苓科学合理的提取工艺 ，本实验采用正交实验法 ，以出膏率 和落新妇苷含量的综合评价结果为考察指标，优选土茯苓配方 颗粒的提取工艺，为其生产提供科学依据。
供试品溶液的制备：取提取液适量，滤过，取续滤液，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 10 μL，
注入液相色谱仪，测定，得落新妇苷含量，按照下式计算落新妇
苷的转移率。
落新妇苷的转移率 (%)=[
水提液中落新妇苷的总量 饮片中所含落新妇苷的总量
] ×100%
2.3 提取工艺预实验结果
按照“2.2”评价指标测定方法中出膏率和落新妇苷含量测
中图分类号：R284.2
文献标识码：A
文章编号：1674-7860（2021）09-0137-03
【摘 要】目的：优化土茯苓配方颗粒的提取工艺，为工业化生产土茯苓配方颗粒提供理论依据。方法：首先，通过单因素试验 法设计土茯苓配方颗粒提取的预实验，测定预实验所得每一煎的出膏率，并检测落新妇苷含量与计算转移率。然后，对获得的出膏 率和落新妇苷含量转移率进行分析。最后，在单因素试验的基础上，采用 L（9 34）正交试验法，以加水量、提取时间和提取次数为 3 个 因素，以出膏率和落新妇苷的综合评分为指标，筛选出土茯苓配方颗粒的最佳水提取工艺。结果：对土茯苓提取效果的影响大小依 次是提取次数＞加水量＞提取时间。从出膏率和落新妇苷的综合评分兼顾缩短生产周期、降低生产成本上考虑，筛选出土茯苓配方 颗粒的最佳水提工艺为加 8 倍量水，提取 2 次，第一次 1.5 h，第二次 1 h。经过 3 次验证试验发现该条件下平均出膏率为 32.08% （RSD=0.58%，3 次），落新妇苷含量平均值为 1.114 6 mg•mL（-1 RSD=1.35%，3 次），与正交试验的最大值接近。结论：该提取工艺科 学、合理、稳定，为土茯苓配方颗粒规范化大生产的提取工艺提供一定的参考依据。
1 仪器与试药
1.1 仪器 JJ500Y 百分之一电子分析天平；MS204S 万分之一电子分
析 天 平 ；FTS-10A 分 体 式 养 生 壶 ；DZF-6050 型 真 空 干 燥 箱 ；
-138- 临床医学 • 医药论坛
Clinical Journal of Chinese Medicine 2021 Vol.(13) No.9
姚 娜 1,2 黄燕明 1 陈桂生 1 康志英 1,2 徐 超 3 张立明 4 （1. 广州市香雪制药股份有限公司，广东 广州，510663；2. 宁夏隆德县六盘山中药资源开发有限公司，宁夏 固原，756300；
3. 宁夏职业技术学院，宁夏 银川，750021；4. 宁夏医科大学药学院，宁夏 银川，750004）
2.2 评价指标测定方法
2.2.1 出膏率
取提取液供试品，精密称取约 50 g，置已恒重的蒸发皿中，
水浴蒸干 ，在 105℃干燥 3 h 得土茯苓干膏 ，置干燥器中放冷
30 min，迅速精密称定干膏重量，计算出膏率。
出膏率 (%)
=
[
干膏重量 × 提取液供试品总量 提取液称样量 × 饮片重量
]
×100%
分别按 L（9 34）正交表的方案进行试验，药液合并，称重，减压浓 缩至 500 mL，取样测定出膏率和落新妇苷含量。结果见表 3。
综合评分= 落新妇苷含量 落新妇苷含量max
2 方法与结果
2.1 提取工艺预实验方法
称取土茯苓饮片 100 g，平行 2 份，分别置于 2 L 煎药壶中，
提取 3 次，第一次加 8 倍量水，提取 1.5 h，第二次加 7 倍量水，提
取 1 h，第三次加 7 倍量水，提取 1 h。将每次提取液用 200 目绢
布过滤，得提取液供试品，称重，冷藏备用。
DHG-9070A 电 热 鼓 风 干 燥 箱 ；HWS-26 电 热 恒 温 水 浴 锅 ； Simplicity UV 超纯水器；Agilent1260 高效液相色谱仪。 1.2 药材、对照品与试药
土茯苓饮片（广东香雪医药有限公司 ，批号 ：201901001P ， 经广州市香雪制药股份有限公司总工程师康志英鉴定为百合 科植物光叶菝葜 Smilax glabra Roxb. 的干燥根茎）。落新妇苷 对 照 品（中 国 食 品 药 品 检 定 研 究 所 ，111798-201504，纯 度 ： 93.9%）。 甲 醇（ 上 海 星 可 高 纯 溶 剂 有 限 公 司 ，批 号 ： 0114180706，色谱级）。冰醋酸（美国阿拉丁工业公司 ，批号 ： L1718059，色谱级）。甲醇（西陇科学股份有限公司，180801-1， 分析纯）。
doi:10.3969/j.issn.1674-7860.2021.09.051
土茯苓为百合科植物光叶菝葜 Smilax glabra Roxb. 的干燥 根茎。夏 、秋二季采挖 ，除去须根 ，洗净 ，干燥 ；或趁鲜切成薄 片，干燥。其具有解毒，除湿，通利关节的功效。用于梅毒及汞 中毒所致的肢体拘挛 ，筋骨疼痛 ；湿热淋浊 ，带下 ，痈肿 ，瘰疬 ， 疥癣［1-2］。土茯苓主要含有黄酮类、糖类、有机酸类、苯丙素类、 甾醇类、皂苷类等化学成分［3-5］，其中黄酮类化合物为主要的药 物活性成分，其临床用量范围为 9～240 g，依据疾病和证型的 特点 ，选择土茯苓的不同配伍和用量。其药理研究较多 ，药理 作用主要集中在对心血管系统的作用，脑缺氧及记忆障碍的影 响，另还有免疫抑制，抗炎、镇痛、利尿，抗胃溃疡作用等［6-9］。
2.2.2 落新妇苷含量测定
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为
填充剂；以甲醇-0.1% 冰醋酸溶液（39∶61）为流动相；检测波长
为 291 nm。理论板数按落新妇苷峰计算应不低于 5 000。
对照品溶液的制备取落新妇苷对照品适量 ，精密称定 ，加
60% 甲醇制成每 1 mL 含 0.2 mg 的溶液，即得。
CJCM 中医临床研究 2021 年第 13 卷 第 9 期
临床医学 • 医药论坛 -137-
正交试验法优化土茯苓配方颗粒提取工艺研究
Study on optimizing extraction technology of Smilacis Glabrae Rhizoma Formula Granules with orthogonal experiment
ห้องสมุดไป่ตู้定方法测定每一煎的出膏率 ，并检测落新妇苷含量计算转移
率。结果见表 1。
表 1 预实验结果表（%） 煎液
第一煎 第二煎 第三煎
出膏率 25.25
7.11 2.49
落新妇苷转移率 30.50 47.87 61.66
上表结果可知 ，土茯苓水提液第一煎出膏最多 ，占总出膏
的 72.00%，第二煎开始迅速下降；而指标成分落新妇苷第三煎
较第一煎和第二煎的转移率均有提高，表明有效成分落新妇苷
不易煎出。
2.4 正交试验
根据预实验的结果 ，设计正交试验表 ，以出膏率和落新妇
苷的含量为考察指标，采用综合评分法，考察加水倍数（A）、提
取时间（B）、提取次数（C）3 个影响因素对土茯苓提取效果的影
响，因素水平见表 2。称取 9 份土茯苓，每份 100 g，精密称定，
中药配方颗粒是以水为溶媒 ，经提取 、浓缩 、干燥 、制粒等 工艺制备而得。其具有疗效稳定 ，携带使用方便的特点 ，适合
生活节奏快速的现代人［10-11］。目前 ，中药配方颗粒仍处于试点 生产阶段 ，各试点生产企业采用的工艺 、标准各异［12-13］。经检 索，未见关于土茯苓配方颗粒提取工艺的研究报道。为建立土 茯苓科学合理的提取工艺 ，本实验采用正交实验法 ，以出膏率 和落新妇苷含量的综合评价结果为考察指标，优选土茯苓配方 颗粒的提取工艺，为其生产提供科学依据。