慢病毒介导KSHV vIL-6基因稳定表达的血管内皮细胞株的建立

慢病毒介导KSHV vIL-6基因稳定表达的血管内皮细胞株的
建立
许雨乔;徐建;潘世扬;孙瑞红;黄蕾;彭珊珊
【期刊名称】《临床检验杂志》
【年(卷),期】2012(30)8
【摘要】目的建立慢病毒介导且稳定表达病毒白细胞介素6(viral interleukin-6,vIL-6)蛋白的血管内皮细胞株.方法以质粒pvIL-6-Flag为模板,PCR扩增vIL-6基因,克隆至慢病毒载体p3 DLV,经酶切和测序鉴定后,将重组质粒与慢病毒辅助包装元件质粒共转染293T细胞,构建含vIL-6基因的重组慢病毒.重组慢病毒感染血管内皮细胞EA.hy926,经潮霉素筛选,获得稳定表达细胞株,western blot鉴定vIL-6蛋白的表达.结果酶切鉴定和基因测序证实长度为615 bp的vIL-6基因成功克隆至慢病毒表达载体；重组慢病毒经包装、纯化后测得滴度为1.0×107 TU/mL.重组慢病毒感染EA.hy926细胞,经潮霉素筛选,形成生长形态良好的单克隆细胞株EA.hy926-vIL-6.western blot鉴定该细胞株可稳定表达vIL-6蛋白.结论建立了稳定表达vIL-6的EA.hy926细胞株,为进一步研究vIL-6的生物学功能及致病机制提供了细胞模型.
【总页数】4页(P610-613)
【作者】许雨乔;徐建;潘世扬;孙瑞红;黄蕾;彭珊珊
【作者单位】南京医科大学第一附属医院检验学部,南京210029;南京医科大学医学检验系,南京210029;南京医科大学第一附属医院检验学部,南京210029;南京医科大学医学检验系,南京210029;南京医科大学第一附属医院检验学部,南京
210029;南京医科大学医学检验系,南京210029;南京医科大学第一附属医院检验学部,南京210029;南京医科大学医学检验系,南京210029;南京医科大学第一附属医院检验学部,南京210029;南京医科大学医学检验系,南京210029;南京医科大学医学检验系,南京210029
【正文语种】中文
【中图分类】Q291;Q785
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