32HEV-IgM临床检验标准操作规程

戊型肝炎病毒IgM抗体诊断试剂盒（化学发光法）
临床检验标准操作规程
项目名称：戊型肝炎病毒IgM抗体诊断试剂盒（化学发光法）
操作规程文件号：KM-SOP-CLIA-032
第1版第 1 页共 4 页
2008年1月1日起实施，2010年9月1日修订
起草人：起草日期：2007-12-14
复核人：复核日期：
批准人：批准日期：
分发部门或个人：
1.实验原理：应用捕获法化学发光免疫分析原理，用抗人IgM抗体包被发光微孔板制成固相抗体，加入样本后，待测样本中的HEV-IgM抗体与固相二抗结合形成免疫复合物，再与酶标记的HEV抗原反应，充分洗涤后加入化学发光底物液，然后测定其发光值，根据临界值判断样本中是否含有HEV-IgM抗体。

3.标本采集及处理：
3.1检测标本种类要求：静脉血或动脉血的血清或血浆标本均可作为检测标本；溶血、脂血、黄疸血不宜使用，如需使用，应在报告单上注明“标本溶血/脂血/黄疸”。

3.2受检者准备：受检者无需做特殊准备；
3.3标本采集及处理：宜空腹采集静脉血，无需抗凝，采用离心方法分离血清，分离血清应彻底，不含纤维蛋白；使用抗凝剂（浓度为21.8mmol/L枸橼酸钠，5mmol/L EDTA-Na，15IU/mL肝素，10mmol/L草酸钠）不影响检测结果。

样本中含有0.15mg/mL的胆红素，10.0mg/mL的血红蛋白或1.0mg/mL的甘油三酯的阴性样本均无交叉反应，
3.4标本保存：留取的标本最好在当天检测，不能立即检测的应放置于2-8℃不应超过3天，血清置于-20℃以下可长期保存，但应避免反复冰融
3.5标本容器：盛放标本的容器必须为洁净的一次性真空采血管、玻璃试管、一次性的不同规格的塑料离心管；
3.6标本外送：如涉及到需要外送的标本，必须以规定的容器（0.5ml塑料离心管）存放并密封，并根据邮寄规则和要求进行包装，运送时还要放入冰袋（2-8℃）或干冰（-10℃）由专人运送至指定地点指定接收人。

3.7标本拒收：凡与以上所述内容不符的标本，检验人员应向临床或就诊者说明拒收标本的原因，并提出解决的方案或建议。

4.分析系统
4.1试剂：为北京科美生物技术有限公司提供戊型肝炎病毒IgM抗体诊断试剂盒（化学发光法），规格为96T，2-8℃贮存，有效期12个月；在效期内使用试剂。

4.2仪器：可适用北京科美生物技术有限公司提供的CHEMCLIN100、CDM-I发光分析仪、ECLIA-II发光分析仪、CHEMCLIN600全自动发光仪。

4.3质控品：采用卫生部临床检验中心的质控血清，用于室内质量控制。

5.操作步骤：
5.1自4℃冰箱中取出试剂盒，室温(18～25℃)平衡20分钟。

5.2将发光板从密封袋中取出，设空白对照一孔，不加样本稀释液和样本，设阴性对照3孔，阳性对照2孔，取阴性对照和阳性对照分别加入100μl 于相对应对照孔中。

其余每孔先加样本稀释液100μl，再加入样本10μl。

微量震荡器充分振荡混匀，用不干胶片封盖反应板。

5.3发光板置37℃温育30分钟，小心甩去反应液，用稀释后的洗涤液洗板5次，每孔加满洗涤液，每次浸泡10秒，最后在干净的吸水纸上拍干。

5.4空白孔除外，每孔加入酶结合物100μl，轻轻振荡混匀后，用不干胶片封盖反应板。

5.5发光板置37℃温育30分钟，洗板5次，操作同上，拍干。

5.6将发光底物A液与B液1:1混合后，每孔加入底物工作液100μl。

5.7置室温避光反应5分钟后，须于加化学发光底物液后的第5-30分钟内用发光仪测定各孔RLU值（测量时间1秒/孔）。

6.质量控制：
6.1 质控血清符合规定；
6.2 一旦发现失控，应即时查找和分析原因，并在该结果栏作详细的批注和记录解决的过程；失控情况处理及原因分析按照实验室内失控分析程序进行。

7.结果计算：
7.1临界值（CUT OFF）＝0.016×阳性对照RLU的平均值+阴性对照RLU的平均值。

7.2待测样品RLU值≥临界值为阳性，但是还需要进行复孔测试，仍然阳性则判定为阳性，必要时可以用其他厂家或其他类型产品复检。

7.3待测样品RLU值＜临界值为阴性。

7.4当样品的RUL值在临界值±10％的范围，则属于可疑范围，可疑样品应重复实验，以便最后判定。

8.性能指标：
8.1精密性：批内精密度CV ≤15%（n=10）
8.2有效期：在2- 8℃贮存，有效期12个月。

8.3交叉反应：本品对HBsAg、HCV抗体、HA V抗体、RF、EBV、CMV、HSV、Rubella 抗体、Tox抗体阳性标本无交叉反应。

9.方法局限性：本试剂盒仅用于血清或血浆样本的测定，对其它体液样本测定的可靠性尚未得到充分的实验确认。

10.临床意义：
戊型肝炎病毒抗体包括HEV-IgG抗体和HEV-IgM抗体。

HEV感染后，发病初期HEV-IgG为阴性，后期转阳。

HEV-IgG是机体免疫的指标，成年人多数为阳性，对戊型肝炎的早期诊断无价值，但对流行病学调查有一定意义。

患者体内检测到Anti-HEV IgM，表明有急性戊型肝炎病毒的感染。

疾病发作时可检测到Anti-HEV IgM，通常在3-4月后消失。

Anti-HEV IgM检测用于急性戊型肝炎感染的鉴别诊断。

11.注意事项：
11.1 84消毒液等强氧化剂能引起发光底物液发生反应，导致结果误判，故发光操作实验室应禁止使用此类消毒剂。

11.2 检测必须符合实验室管理规范的规定，严格防止交叉污染。

所有样品、洗弃液和各种废弃物都应当按传染物处理。

11.3 操作前应仔细阅读使用说明书，严格按照说明书的操作程序进行，不同批号的试剂和包被板不能混用。

包被板要干燥保存，用完后立刻放回密封袋中封严后保存。

11.4 各试剂必须摇匀后使用，用前应平衡到室温，严格控制每步反应的时间和温度。

11.5 加样操作应快速准确手法一致，慢吸快打，不要使溶液粘到孔壁上，尽量缩短整个加样时间。

11.6 每次加样完毕后，应用微量震荡器充分振荡混匀，并避免产生气泡防止溶液溅出。

11.7 以洗板机洗板时，每孔注液量不应少于400μl，洗板次数不少于5次，浸泡时间不短于10秒，并注意检查加液头是否堵塞。

洗板完后还应在干净的吸水纸上扣干。

11.8 以手工洗板时，每次洗液都应加满微孔，最后应在干净的无纸屑吸水纸上扣干以防止外源性过氧化物酶类似物或氧化还原物质与底物发生反应，影响检测结果的准确性。

11.9 加发光底物液的加样器应专用，加样吸头应确保干净无污染，在加发光底物液的过程中应避免加样吸头与板孔或手指接触，以防底物受到污染而造成本底升高。

11.10 为防止样品蒸发及避免污染，温育时应将反应板放于密闭干净的塑料袋内或用不干胶覆盖。

11.11血样品应充分离心，3000转/分钟离心6分钟以上，使血清（浆）不含纤维蛋白及红、白细胞，否则会引起假阳性结果。

12. 参考文献：
12.1 WS/T227-2002 临床检验操作规程编写要求
12.2 Boscato LM,Stuart MC. Heterophilic antibodies; a problem for all immunoassays.Clin Chem 1988:34:27-33。