气相色谱法同时测定苍芩鼻炎合剂中桉油精和薄荷脑含量

气相色谱法同时测定苍芩鼻炎合剂中桉油精和薄荷脑含量
邝明;何家;张谨贤
【摘要】目的：建立同时测定苍芩鼻炎合剂中桉油精及薄荷脑含量的气相色谱法。

方法按挥发油测定法提取桉油精、薄荷脑。

采用安捷伦DB-WAX毛细管柱（30
m ×0.320 mm，0.25μm）分离，氮气为载气，FID检测器，柱温为程序升温，
初始温度为75℃，保持8 min，以4℃/min的速率升至150℃，再以20℃/min
速率升至200℃，保持5 min，流速为1.5 mL/min，进样口温度为200℃，分流比为20：1，检测器温度为250℃。

结果桉油精、薄荷脑质量浓度分别在
5.364~53
6.4μg/mL ( r=0.9999，n=6)和5.102~510.2μg/mL （ r=0.9999，
n=6）范围内与峰面积线性关系良好；桉油精平均回收率为94.75%，RSD 为
1.80%（ n=6），薄荷脑平均回收率为95.29%，RSD为1.01%（ n=6）。

结论该方法准确度高，重复性好，满足同时测定桉油精、薄荷脑含量的要
求。

%Objective To establish a method for simultaneous determination of eucalyptol and menthol in Cangqin Biyan Mixture. Methods Eucalyptol and menthol was extracted by steam distillation. The capillary column was Agilent Db-Wax ( 30 m × 0. 320 mm, 0. 25 μm ) . The carrier gas was nitrogen and FID as detector. The initial column temperature was kept at
75 ℃ for 8 min with an in-crease of 4 ℃ /min to 150 ℃, then 20 ℃ /min to 200 ℃( sustained for 5 min ) . The flow rate was 1. 5 mL/min, the injector tempera-ture was 200 ℃, 20:1 of split ratio and the detector temperature was 250 ℃. Results The mass concentration of eucalyptol and men-thol were linear in the range of 5. 364-536. 4 μg/mL ( r=0. 999 9, n=6 ) and 5. 102-510. 2 μg/mL ( r=0. 999 9, n=6 ) . The aver-age recovery rate of
eucalyptol was 94. 75%, RSD was 1. 80% ( n=6 ) . The average recovery rate of menthol was 95. 29%, RSD was 1. 01%( n=6 ) . Conclusion The method
is simple, accurate and well reproducible, which is suitable for the simultaneous content deter-mination of eucalyptol and menthol.
【期刊名称】《中国药业》
【年(卷),期】2017(026)001
【总页数】3页(P25-27)
【关键词】苍芩鼻炎合剂;桉油精;薄荷脑;气相色谱法
【作者】邝明;何家;张谨贤
【作者单位】四川省泸州市食品药品检验所，四川泸州 646000;四川省泸州市食
品药品检验所，四川泸州 646000;四川省泸州市食品药品检验所，四川泸州646000
【正文语种】中文
【中图分类】R284.1;R286.0
苍芩鼻炎合剂由苍耳子、辛夷、川芎、麻黄、黄芩、白芷、栀子、黄芪、防风、甘草、薄荷油等11味中药组方，具有清肺利湿、通窍止痛的功效，临床主要用于急慢性鼻炎、鼻窦炎、过敏性鼻炎、鼻源性头痛。

方中辛夷与薄荷油所含的挥发油成分桉油精及薄荷脑均有抗菌抗炎作用[1－4]。

原质量标准中仅有对黄芩及栀子的鉴别检查，而未收载其他有效成分的含量测定方法。

文献[5－16]中采用气相色谱法
测定挥发油成分桉油精、薄荷脑含量，但尚无文献报道同时测定桉油精、薄荷脑成分含量的方法。

本研究中对已有挥发油提取法进行选择，同时进一步优化色谱条件，
使其满足能同时测定桉油精、薄荷脑的含量。

现报道如下。

1.1 仪器
Agilent 7890A型气相色谱仪，包括Agilent氢火焰离子检测器，Agilent色谱工作站(美国安捷伦科技公司）；Mettler XA205DU型电子天平(0.01 mg，瑞士梅
特勒托利多公司)；挥发油提取装置。

1.2 试药
桉油精对照品（中国食品药品检定研究院，批号为110788－201506）；薄荷脑
对照品（中国食品药品检定研究院，批号为110728－200506）；苍芩鼻炎合剂（泸州医学院附属中医医院自制，批号为20110617，20110711，20110822）；正己烷为分析纯（西陇化工股份有限公司，批号为130105）。

2.1 色谱条件与系统适用性试验
色谱柱：AgilentDB－WAX毛细管柱（30m×0.320mm，0.25 μm）；载气：氮气；流速：1.5 mL／min；柱温：程序升温，初始温度75℃，保持8 min，以4℃／min的速率升至150℃，再以20℃／min的速率升至200℃，保持5 min；进样口温度：200℃；分流比：20∶1；检测器温度：250℃；进样量：1 μL。

理论
板数按桉油精素计算应不低于40 000。

色谱图见图1，结果阴性对照品溶液在桉
油精素峰相应位置无干扰。

2.2 溶液制备
2.2.1 对照品溶液
称取桉油精对照品53.64 mg、薄荷脑对照品51.02 mg，精密称定，分别置50 mL容量瓶中，加入正己烷溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。

分别精密量取10 mL对照品贮备液，置20 mL容量瓶中，摇匀，即得。

2.2.2 供试品溶液[2]
精密量取供试品250 mL，置500 mL圆底烧瓶中，加玻璃珠数粒，照挥发油测定
法试验，加正己烷3 mL，加热至沸腾并保持微沸5 h，放冷，分取正己烷液，测
定器用正己烷洗涤3次，每次5 mL，合并正己烷液，通过铺有无水硫酸钠的漏斗，转移至20 mL容量瓶中，用正己烷洗涤漏斗，洗液并入同一容量瓶中，加正己烷
稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.3 阴性对照品溶液
按照处方制成苍芩鼻炎合剂方中缺辛夷、薄荷油的阴性对照样品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察
线性关系考察：分别精密量取桉油精对照品贮备液(1 072.8 μg／mL)、薄荷脑对
照品贮备液（1 020.4 μg／mL）0.1，1，2，3，5，10 mL，置20 mL容量瓶中，加正己烷稀释至刻度，摇匀，得系列质量浓度溶液。

精密吸取1 μL上述各质量浓
度溶液，按拟订色谱条件测定，记录峰面积。

以峰面积（Y）为纵坐标、质量浓度（X）为横坐标进行线性回归，结果见表1。

精密度试验：精密吸取同一对照品溶液，按拟订色谱条件连续进样6次，测定，
记录峰面积。

结果桉油精、薄荷脑峰面积的RSD分别为1.10%和0.68%（n＝6），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取同一供试品溶液，置室温下，分别于0，2，4，8，12，24 h时
按拟订色谱条件测定，记录峰面积。

结果桉油精、薄荷脑峰面积的RSD分别为
1.30%和0.74%（n＝6），表明供试品溶液在室温放置24 h内稳定。

重复性试验：精密量取同一批样品，依法制备供试品溶液6份，按拟订色谱条件
测定。

结果桉油精平均含量为0.891 μg／mL，RSD为1.30%（n＝6），薄荷脑
平均含量为38.6 μg／mL，RSD为0.57%（n＝6），表明方法重复性好。

加样回收试验：精密量取已知含量的样品（批号为20110711）6份，分别精密加入桉油精、薄荷脑不同质量浓度混合溶液，按拟订色谱条件测定，计算回收率。

结
果见表2。

2.4 样品含量测定
取3批样品，按拟订色谱条件，测定含量。

结果批号为20110617，20110711，20110822的3批样品中桉油精含量分别为0.891，0.902，0.914 μg／mL，薄荷脑含量分别为38.6，39.2，40.1 μg／mL。

3.1 提取方法选择
苍芩鼻炎合剂采用11味中药材浸泡煎煮，同时收集挥发油，煎液浓缩滤过后，滤液加入上述挥发油及薄荷脑的工艺，制剂中挥发油的成分经过提取后已较单一。

根据现有挥发油的提取方法[17]，选用蒸馏法提取苍芩鼻炎合剂中挥发油成分，能有效提取目标物，可去除大部分杂质干扰。

通过试验表明，提取时间与提取物浓度成线性关系。

提取1，2，3 h的含量均有升高趋势，提取5 h后挥发油成分含量结果稳定。

故本方法确定提取时间为5 h。

3.2 色谱条件优化
据资料显示，桉油精（1，3，3－三甲基－2－氧杂双环[2.2.2]辛烷）为单萜类化合物，其沸点为176～178℃，与薄荷脑（L－1－甲基－4－异丙基环己醇－3）沸点216℃都具有极性基团。

如进样口温度过低，样品会气化不充分，测定结果RSD偏高，而进样口温度过高，样品会分解。

本次试验进样口选用200℃气化温度，衬管带有脱活玻璃棉起到增加样品表面积、加速样品气化的同时过滤不挥发物质的作用。

根据此次试验样品的质量浓度与柱容量综合考虑，过高分流比会使峰响应值降低，而过低分流比使分流气路的比例阀无法精确控制，会影响分析的精度，色谱柱也有超载可能，最终分流比设定为20∶1。

试验中还分别选择高、中、低3种不同极性色谱柱DB－WAX，DB－1701，HP－1对样品进行分离，结果后二者对目标物保留效果不明显，峰形与分离度与使用极性柱DB－WAX比较有较大差距。

而使用DB－WAX毛细管柱对目标物分离，桉油精与薄荷脑理论板数分别达
到46 000与490 000，分离度为100，同时与未知成分分离完全，能满足试验的需要。

柱温起始温度低于沸点温度，使目标成分富集于色谱柱头，桉油精与薄荷脑沸点相差明显，选择程序升温，提高了不同沸点样品的分离度，减少样品分析时间。

桉油精与薄荷脑含有较多的低氧化碳数目，选择FID检测器目标分析物也会响应
充分。

为减少对检测器的污染，温度应高于进样口温度，此次试验采用FID检测器，温度设置为250℃。

本试验中建立了气相色谱同时测定苍芩鼻炎合剂中桉油精、薄荷脑含量的方法，并对方法进行了验证，结果操作简便、准确，提高了分析效率，为该制剂的质量控制研究提供了参考资料。

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