高效液相色谱法同时测定枇芩口服液中黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素含量

高效液相色谱法同时测定枇芩口服液中黄芩苷、黄芩素和汉黄
芩素含量
王庆芬;倪晓霞;李杰;张荣
【摘要】Objective To establisb a metbod for tbe simultaneous determination of baicalin, baicalein and bogonin in Piqin Oral Solution by HPLC. Methods Tbe Kromasil-C18 column ( 250 mm × 4. 6 mm, 5 μm ) witb a column temperature of 35 ℃ was used:tbe mobile pbase consisted of metbanol-0. 2% pbospbate, gradient elution, witb flow rate of 1. 0
mL/min, and tbe detection wavelengtb was set at 280 nm. Results Tbe content of baicalin, baicalein and wogonin acbieved a complete separation, peak area of tbe 3 components bad a good linear relationsbip witb tbe amount of samples. Tbe linear ranges of baicalin, baicalein and wogonin were 34. 20-171. 00 μg/mL ( r=0. 999 8), 1. 44-7. 20 μg/mL( r=0. 999 6), 1. 36-6. 80 μg/mL( r=0. 997 7) respectively;tbe sample-adding recovery were 99. 09%, 99. 56%, 99. 61% for baicalin,98. 46%, 97. 95%, 98. 31% for baicalein,and 98. 44, 98. 51, 98. 10% for wogonin in bigb,middle, low concentrations( n=9). Conclusion Tbe metbod is simple, rapid, accurate and reproducible, and it is suitable for tbe content determination of baicalin, baicalein and wogonin in Piqin Oral Solution.%目的：建立同时测定枇芩口服液中黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素含量的高效液相色谱( HPLC )法。

方法色谱柱为Kromasil－C18柱(250 mm ×4.6 mm，5μm)，流动相为甲醇－0.2%磷酸溶液梯度洗脱，流速为1.0 mL／min，进样量为10μL，检测波长280 nm，柱温35℃。

结果枇芩口服液中的黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素达到了完全分离，黄芩
苷、黄芩素、汉黄芩素的质量浓度线性范围分别为34.20~171.00μg／mL
（ r=0.9998），1.44~7.20μg／mL（ r =0.9996），1.36~6.80μg／mL
（ r=0.9977）；高、中、低浓度样品的平均回收率，黄芩苷分别为99.09%、99.56%和99.61%，黄芩素为98.46%、97.95%、98.31%，汉黄芩素为98.44%、98.51%和98.10%（ n=9)。

结论该法操作简单、准确、重复性好，可用于枇芩口服液的质量控制。

【期刊名称】《中国药业》
【年(卷),期】2015(000)016
【总页数】3页(P93-94,95)
【关键词】枇芩口服液;高效液相色谱法;黄芩苷;黄芩素;汉黄芩素
【作者】王庆芬;倪晓霞;李杰;张荣
【作者单位】中国人民解放军第一七五医院·厦门大学附属东南医院制剂科，福建
漳州 363000;中国人民解放军第一七五医院·厦门大学附属东南医院制剂科，福建
漳州 363000;中国人民解放军第一七五医院·厦门大学附属东南医院制剂科，福建
漳州 363000;中国人民解放军第一七五医院·厦门大学附属东南医院制剂科，福建
漳州 363000
【正文语种】中文
【中图分类】R284.1;R286.0
枇芩口服液是我院皮肤科依据中医辨证理论，结合临床用药经验研制的治疗痤疮的中药复方制剂，由枇杷叶、黄芩、白花蛇舌草等13味中药组方，适用于先天肾阴不足、肾火过旺，加之饮食失节而发病的痤疮患者［1］。

处方中黄芩为君药，黄
芩活性成分主要为黄酮类化合物，其中黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素在医药和很多领域有着广泛的用途，试验证明，黄芩对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌等抑菌活性好［2］。

因此，对黄芩中的主要活性成分进行含量控制，对于该制剂的质量控制具有重要意义。

枇芩口服液在我院使用多年，临床效果较好，由于成分复杂，一直以来缺少质量控制方法。

现建立了同时测定枇芩口服液中君药黄芩所含黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素含量的高效液相色谱（HPLC）法［3］，以多指标综合评价其质量，旨在为该制剂的质量控制提供依据。

Agilent 1200 Series型高效液相色谱仪，QUAT Pump G1311A型二极管阵列检测器，ChemState 320型数据处理系统；AUX220型电子分析天平（日本岛津）；一次性针头过滤器；U-S15型实验室超纯水系统。

甲醇（HPLC/spectro，TEDIA 公司，Lot909910）；磷酸（广东光华化学厂有限公司，批号为20041001）；黄芩苷对照品（批号为110715-201318），黄芩素对照品（批号为111595-200905），汉黄芩素对照品（批号为111514-200403），均由中国药品生物制
品检定研究院提供，枇芩口服液（本院制剂室配制，批号为20140509，20140519，20140521）。

2.1 色谱条件与系统适用性试验
色谱柱：Kromasil-C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇-0.2%磷
酸溶液，梯度洗脱（0～20min，47%甲醇；20～30min，47%～53%甲醇；30～40 min，53%～60%甲醇；40～50 min，60%～53%甲醇；50～55 min，53%～47%甲醇；55～60 min，47%甲醇）；流速：1.0mL/min，柱温：35℃，进样量：10μL，检测波长：280 nm。

在上述色谱条件下，分别取混合对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液，过滤，分别进样10μL，记录色谱图，结果见图1。

结果表明，黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素与其他组分均能达到较好的分离，且分离度均大于1.5，理论板数均大于5 000。

2.2 溶液制备
分别精密称取黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素对照品17.1，1.2，3.4mg，置50mL容量瓶中，以甲醇溶解并定容至刻度，制成质量浓度分别为342.00，24.00，
68.00μg/mL的对照品贮备液。

分别精密吸取黄芩苷对照品贮备液5mL、黄芩素
对照品贮备液3mL、汉黄芩素对照品贮备液1mL，分别置25mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，经0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得混合对照品溶液。

取枇芩口服液适量，用水稀释5倍，0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

根据枇芩口服液处方，制备缺黄芩阴性样品，用水稀释5倍，
0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察
线性关系考察：精密吸取黄芩苷对照品贮备液5mL、黄芩素对照品贮备液3mL、汉黄芩素对照品贮备液1mL，分别置10，15，20，25，50mL容量瓶中，用甲
醇稀释至刻度，摇匀，经0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，分别依次注入高效
液相色谱仪，进样量为10μL，记录峰面积。

以对照品溶液质量浓度为横坐标（X）、峰面积值为纵坐标（Y）进行线性回归，结果见表1。

精密度试验：分别精密吸取黄芩苷对照品贮备液5mL、黄芩素对照品贮备液3mL、汉黄芩素对照品贮备液1mL，分别置25mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。

经0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，测定峰面积，连续测定5次。

结果黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素峰面积的RSD分别为1.07%，0.54%，0.29%（n=5），表明
仪器精密度良好。

稳定性试验：取同一供试品溶液（批号为20140509），分别在0，3，6，9，12 h时进样，按拟订色谱条件测定峰面积。

结果黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素峰面积的RSD分别为1.67%，1.18%，1.58%（n=5），表明供试品溶液在12 h内基本稳定。

重复性试验：取样品溶液（批号为20140509）5份，分别依法制备供试品溶液并测定。

结果黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素峰面积的RSD分别为1.34%，1.28%，
1.17%（n=5），表明方法重复性良好。

加样回收试验：精密量取已知含量的供试品溶液（批号为20140509，样品含黄芩苷319.1885μg/mL、黄芩素19.8815μg/mL、汉黄芩素9.901 0μg/mL）2 mL，分别加入黄芩苷对照品液（171.00μg/mL）、黄芩素对照品液（6.00μg/mL）和
汉黄芩素对照品液（6.80μg/mL）1.0，1.5，2.0mL，用水定容至5mL，0.45μm 微孔滤膜滤过，取续滤液，进样测定。

结果见表2。

2.4 样品含量测定
取3批枇芩口服液，依法制备供试品溶液，测定含量。

结果见表3。

进行多种流动相试验，参考2010年版《中国药典（一部）》［4］，以甲醇-0.2%磷酸溶液（47∶53）为流动相，因其中磷酸可作为解离抑制剂，抑制组分解离，
增强保留［5］，进而采用梯度洗脱的方法［6-9］，黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素
和干扰杂质分离良好，且出峰时间比较早。

预试验中曾对比甲醇-0.2%磷酸溶液（47∶53）等度洗脱和梯度洗脱，采用等度洗脱方法时，黄芩素出峰时间约在
47min，汉黄芩素出峰时间在60min后，分离时间长，分离效果不理想。

目前，2010年版《中国药典（一部）》及相关文献仅对黄芩中黄芩苷的含量进行控制，单以黄芩苷来衡量黄芩的质量稍显片面性。

研究证明，黄芩苷口服液不易吸收，须在肠道经酶水解为苷元黄芩素后方可吸收入血，黄芩素是体内重要有效成分［10］。

本试验中建立了同时测定枇芩口服液中3种指标成分的HPLC法，该法
科学、合理，能相对较客观、全面地反映枇芩口服液的内在质量，为客观评价其质量提供了科学依据。

【相关文献】
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［2］张瑜，武斌，许建卫.黄芩药理作用的研究进展［J］.医学综述，2013，19（6）：1 091-1 093.
［3］李堆淑.中药黄芩化学成分的研究进展［J］.江西农业学报，2013，25（8）：51-54.
［4］国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）［M］.北京：中国医药科技出版社，2010：282.
［5］韩宪忠，金蜀蓉，柯昌毅.HPLC法测定复方芩苍鼻喷雾剂中黄芩苷的含量［J］.中国药房，2013，24（7）：644-646.
［6］侯学智，张振秋，尤春雪，等.HPLC法测定黄连、黄芩药对提取物中11个成分的含量［J］.药物分析杂志，2013，33（1）：57-62.
［7］张慧，闫磊，林龙飞，等.HPLC法测定小柴胡颗粒中7种指标成分［J］.现代药物与临床，2014，29（2）：162-165.
［8］杭世艳，何兵，张燕.HPLC同时测定银黄颗粒中7种有机酸及4种黄酮类成分［J］.中草药，2013，44（3）：301-304.
［9］周蓬，宋青，马帅.HPLC法同时测定小儿豉翘清热颗粒中栀子苷、芍药苷、黄芩苷、黄芩素
和汉黄芩素［J］.中成药，2013，35（8）：1 693-1 696.
［10］辛文妤，宋俊科，何国荣，等.黄芩素和黄芩苷的药理作用及机制研究进展［J］.中国新药杂志，2013，22（6）：647-659.。