褪黑素对慢性间歇性缺氧大鼠肾素-血管紧张素系统的保护作用

《当代医药论丛》 2020 年 第 18 卷 第 11 期　·论　著·9
用降压药控制血压水平的认知。

患者需认识到自身在高血压控制中发挥的重要作用，提高自身的血压控制能力，增强自身的健康意识。

进行健康管理的相关人员在确定青壮年高血压患者病情的危险分级后，应在谨遵医嘱的前提下，根据患者的社会定位为其制定合理的健康干预措施。

指导患者合理地使用降压药物、适当地进行运动、科学有效地戒烟、戒酒，并时常关注其心理状况，利用自身掌握的知识和方法帮助其更好地管理血压、改善生活方式。

3.2　家庭成员在对青壮年高血压患者进行健康管理中发挥的作用
医护人员或健康管理相关人员与患者接触的时间都大大地少于其家庭成员。

因此，笔者认为，应对患者的家庭成员进行积极的健康知识宣教，提高其家庭成员对高血压相关知识的认知水平，增强其对患者的责任意识，使其能有效地帮助和鼓励患者。

3.3　加大培养健康管理相关人才的力度
健康管理相关人才的缺乏是导致青壮年高血压患者血压控制率较低的另一个重要因素。

我国的医疗资源较为稀缺，医护人员的数量相对较少。

要想有效地控制青壮年高血压患者血压的水平，既需要其自身改变固有的不良行为习惯和生活方式，也需要相关人员对其进行指导和帮助。

因此，应加大培养健康管理相关人才的力度，充分地发挥其在血压控制等慢性病管理中的重要作用。

综上所述，要想进一步降低我国青壮年高血压患者血压的水平，改善其生活质量，减轻其家庭负担，就要不断地发挥健康管理的作用，从而不断地提高其对高血压相关知识的知晓率，增强其自我管理意识和能力。

参考文献
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褪黑素对慢性间歇性缺氧大鼠肾素-血管紧张素系统的保护作用
罗胜茂，刘　鹏，栗子芳，陈浪雄，凌月福*
（桂林医学院附属医院耳鼻咽喉头颈外科，广西　桂林　541001）
[摘要]目的：探讨用褪黑素对慢性间歇性缺氧大鼠进行灌胃对其肾素-血管紧张素系统功能的保护作用。

方法：将18只SD大鼠随机分为空白对照组、阴性对照组和实验组。

在正常环境下对空白对照组大鼠进行饲养，对阴性对照组大鼠和实验组大鼠进行慢性间歇性缺氧造模。

完成造模后，定时使用生理盐水对阴性对照组大鼠进行灌胃，定时使用褪黑素对实验组大鼠进行灌胃。

6周后，比较三组大鼠尾动脉血压的变化情况、血清、肾组织匀浆血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、血管紧张素1-7（Ang1-7）的水平、肾小动脉血管紧张素转化酶（ACE）、血管紧张素转化酶2（ACE2）蛋白的表达情况及肾小动脉的重塑情况。

结果：1）实验结束后，实验组大鼠和阴性对照组大鼠的尾动脉血压均高于空白对照组大鼠，P＜0.05；实验组大鼠的尾动脉血压低于阴性对照组大鼠，P＜0.05。

2）实验结束后，阴性对照组大鼠、实验组大鼠血清、肾组织匀浆AngⅡ的水平均高于空白对照组大鼠，P＜0.05；实验组大鼠血清、肾组织匀浆AngⅡ的水平均低于阴性对照组大鼠，P＜0.05；阴性对照组大鼠、实验组大鼠血清、肾组织匀浆Ang1-7的水平均低于空白对照组大鼠，P＜0.05；实验组大鼠血清、肾组织匀浆Ang1-7的水平均高于阴性对照组大鼠，P＜0.05。

3）实验结束后，阴性对照组大鼠、实验组大鼠肾小动脉ACE蛋白的表达水平均高于空白对照组大鼠，P＜0.05；实验组大鼠肾小动脉ACE蛋白的表达水平低于阴性对照组大鼠，P＜0.05；阴性对照组大鼠、实验组大鼠肾小动脉ACE2蛋白的表达水平均低于空白对照组大鼠，P＜0.05；实验组大鼠肾小动脉ACE2蛋白的表达水平高于阴性对照组大鼠，P＜0.05。

4）实验结束后，阴性对照组大鼠、实验组大鼠肾小动脉的管壁厚度、管壁面积均大于空白对照组大鼠，其WT%、WA%均高于空白对照组大鼠，P＜0.05；实验组大鼠肾小动脉的管壁厚度、管壁面积均小于阴性对照组大鼠，其WT%、WA%均低于阴性对照组大鼠，P＜0.05；阴性对照组大鼠、实验组大鼠肾小动脉的外径均小于空白对照组大鼠，P＜0.05；实验组大鼠肾小动脉的外径大于阴性对照组大鼠，P＜0.05。

结论：使用褪黑素对慢性间歇性缺氧模型大鼠进行灌胃对其肾素-血管紧张素系统具有良好的保护作用。

[关键词]褪黑素；慢性间歇性缺氧；大鼠；肾素-血管紧张素系统
[中图分类号]R338.63 [文献标识码]A [文章编号]2095-7629-（2020）11-0009-03
阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征（OSAHS）在临床上较为常见。

此病是指睡眠时上气道反复发生塌陷、阻塞引起的呼吸暂停和通气不足。

此病患者常存在打鼾、睡眠结构紊乱、血氧饱和度下降等情况[1]。

有研究发现，持续性缺氧可导致肺血管收缩、重塑，进而可引发肺动脉高压[2]。

相关的研究指出，OSAHS引起的慢性间歇性缺氧可诱发多种心血管疾病[3]。

褪黑素是一种由脑松果体分泌的激素，具有良好的清除自由基作用[4-5]。

本文对18只SD大鼠进行实验研究，旨在探讨用褪黑素对慢性间歇性缺氧大鼠进行灌胃对其肾素-血管紧张素系统功能的保护作用。

1　材料与方法1.1　实验动物
选取18只6～8周龄、体重为180～220 g的SD雄性大鼠（由桂林医学院动物实验中心提供）作为研究对象。

1.2　试剂
本研究中所用的试剂主要包括：褪黑素（由sigma公司提供）；血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、血管紧张素1-7（Ang1-7）ELISA试剂盒（由美国R&D公司提供）；血管紧张素转化酶（ACE）、血管紧张素转化酶2（ACE2）兔抗大鼠多克隆抗体（由abcam公司提供）；山羊抗兔IgG抗体、SP法即用型免疫组织化学染色试剂盒（由武汉博士德生物工程有限公司提供）。

基金项目：桂林市科学研究与技术开发课题（课题号：20150206-1-6）*通讯作者：凌月福
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1.3　实验方法
采用随机数表法将这18只SD大鼠随机分为空白对照组、阴性对照组和实验组。

在正常环境下对空白对照组大鼠进行饲养。

每天8:00至10:00为其灌服1 mg/kg的生理盐水。

每天10:00至18:00将其置于暗室（常压、常氧）内进行禁食水饲养。

对阴性对照组大鼠和实验组大鼠进行慢性间歇性缺氧造模。

进行造模的方法是：将大鼠放入自制的有机玻璃舱内。

在玻璃仓内放置钠石灰、无水氯化钙（用于吸收水及二氧化碳）。

每3 d更换1次玻璃仓内的钠石灰、无水氯化钙及垫料。

向缺氧箱中循环注入氮气，当玻璃仓内的氧浓度降至8.5%时，停止注入氮气。

然后向仓内注入空气，使舱内的氧浓度恢复至20.9%。

每8 min完成1次上述注气循环[6]。

完成造模后，定时使用生理盐水对阴性对照组大鼠进行灌胃。

方法是：每天8:00至10:00为其灌服1 mg/kg的生理盐水。

每天10:00至18:00将其置于低氧舱内（氧体积分数为0.085）进行禁食水饲养。

定时使用褪黑素对实验组大鼠进行灌胃。

方法是：每天8:00至10:00为其灌服1 mg/kg的褪黑素。

每天10:00至18:00将其置于低氧舱内（氧体积分数为0.085）进行禁食水饲养。

对三组大鼠进行为期6周的禁食水饲养后，采集其肾上极组织标本和心脏血标本。

方法是：采用40 mg/kg浓度为3%的戊巴比妥溶液对大鼠进行腹腔麻醉，然后采集其心脏血。

对血样进行离心处理（离心速度为1200 r/min，离心时间为10 min），收集血清待检。

采集大鼠的一侧肾上极组织（约100 mg）置于玻璃匀浆器中碾磨成肾组织匀浆。

用生理盐水对上述肾组织匀浆进行稀释（比例为1 g：10 ml），然后对其进行离心处理（离心速度为1000 r/min，离心时间为10 min），收集上清液待检。

采集大鼠的另一侧肾上极组织，置于4%的多聚甲醛中进行固定。

然后对其进行脱水、石蜡包埋切片、HE染色及免疫组化处理。

完成上述标本采集操作后，采用ELISA法检测大鼠血清、肾组织匀浆AngⅡ、Ang1-7的水平。

采用免疫组织化学法检测大鼠肾小动脉ACE、ACE2蛋白的表达情况。

通过观察大鼠肾上极组织的切片，得出其肾小动脉的重塑指标。

1.4　观察指标
1）观察三组大鼠血清、肾组织匀浆AngⅡ、Ang1-7的水平。

2）观察三组大鼠肾小动脉ACE、ACE2蛋白的表达情况。

3）观察三组大鼠的肾小动脉重塑指标，包括肾小动脉的外径、管壁的厚度、血管总面积、管壁面积、壁厚度占外径的百分比（WT%）、管壁面积占血管壁总面积的百分比（WA%）。

4）观察三组大鼠的尾动脉血压。

分别于实验前、实验第6周，使用MRB-ⅢA型大鼠尾动脉血压检测仪（采用尾套管法）检测大鼠的尾动脉血压。

1.5　统计学分析
采用SPSS 21.0统计软件对本文中的数据进行分析。

计量资料用均数±标准差（s±）表示，两组间比较采用t检验，多组间比较采用F检验。

计数资料用百分比（%）表示，两组间比较采用χ²检验，多组间比较采用F检验。

P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果
2.1　三组大鼠实验前后尾动脉血压变化情况的比较
在实验前，空白对照组大鼠、阴性对照组大鼠、实验组大鼠的尾动脉血压分别为（99±10）mmHg、（98±8）mmHg、（101±7）mmHg，三组大鼠的尾动脉血压相比，P＞0.05。

在实验第6周时，空白对照组大鼠、阴性对照组大鼠、实验组大鼠的尾动脉血压分别为（100±9）mmHg、（125±10）mmHg、（112±12）mmHg；实验组大鼠和阴性对照组大鼠的尾动脉血压均高于空白对照组大鼠，P＜0.05；实验组大鼠的尾动脉血压低于阴性对照组大鼠，P＜0.05。

详见表1。

表1 三组大鼠实验前后尾动脉血压变化情况的比较
（mmHg，s
x±）
组别例数实验前实验第6周
空白对照组699±10100±9
阴性对照组698±8125±10*#
实验组6101±7112±12*#@
F值 1.695 6.120
P值0.0860.006
注：*与实验前相比，P＜0.05；#与空白对照组相比，P＜0.05；@与阴性对照组相比，P＜0.05。

2.2　实验结束后三组大鼠血清、肾组织匀浆AngⅡ、Ang1-7水平的比较
实验结束后，阴性对照组大鼠、实验组大鼠血清、肾组织匀浆AngⅡ的水平均高于空白对照组大鼠，P＜0.05；实验组大鼠血清、肾组织匀浆AngⅡ的水平均低于阴性对照组大鼠，P＜0.05；阴性对照组大鼠、实验组大鼠血清、肾组织匀浆Ang1-7的水平均低于空白对照组大鼠，P＜0.05；实验组大鼠血清、肾组织匀浆Ang1-7的水平均高于阴性对照组大鼠，P＜0.05。

详见表2。

表2 实验结束后三组大鼠血清、肾组织匀浆AngⅡ、Ang1-7水平的比较（ng/L，s
x±）
组别AngⅡAng1-7
血清肾组织匀浆血清肾组织匀浆
空白对照组581.43±84.14658.47±52.16411.87±54.19341.56±35.38阴性对照组746.19±96.42*796.34±73.58*336.72±54.16*263.05±40.52*实验组606.29±93.17*#685.15±86.27*#393.64±46.50*#316.08±43.68*# F值 3.492 3.212 6.758 6.634
P值0.0230.0290.0030.004
注：*与空白对照组相比，P＜0.05；#与阴性对照组相比，P＜0.05。

2.3　实验结束后三组大鼠肾小动脉ACE、ACE2蛋白表达
水平的比较
实验结束后，阴性对照组大鼠、实验组大鼠肾小动脉ACE蛋白的表达水平均高于空白对照组大鼠，P＜0.05；实验组大鼠肾小动脉ACE蛋白的表达水平低于阴性对照组大鼠，P＜0.05；阴性对照组大鼠、实验组大鼠肾小动脉ACE2蛋白的表达水平均低于空白对照组大鼠，P＜0.05；实验组大鼠肾小动脉ACE2蛋白的表达水平高于阴性对照
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组大鼠，P＜0.05。

详见表3。

表3 实验结束后三组大鼠肾小动脉ACE、ACE2蛋白表达
水平的比较（%，s±）
组别ACE ACE2
空白对照组 6.12±0.7110.13±2.43
阴性对照组12.05±2.83*7.06±1.85*
实验组8.35±1.52*#9.17±1.41*#
F值 6.384 6.187
P值0.0050.006
注：*与空白对照组相比，P＜0.05；#与阴性对照组相比，P＜0.05。

2.4　实验结束后三组大鼠肾小动脉重塑指标的比较
实验结束后，阴性对照组大鼠、实验组大鼠肾小动脉的管壁厚度、管壁面积均大于空白对照组大鼠，其WT%、WA%均高于空白对照组大鼠，P＜0.05；实验组大鼠肾小动脉的管壁厚度、管壁面积均小于阴性对照组大鼠，其WT%、WA%均低于阴性对照组大鼠，P＜0.05；阴性对照组大鼠、实验组大鼠肾小动脉的外径均小于空白对照组大鼠，P＜0.05；实验组大鼠肾小动脉的外径大于阴性对照组大鼠，P＜0.05。

详见表4。

表4 实验结束后三组大鼠肾小动脉重塑指标的比较（s
x±）
组别管壁厚度（μm）外径（μm）血管总面积（μm）管壁面积（μm）WT%（%）WA%（%）空白对照组12.1±3.2118.3±12.015787.3±2031.43978.4±942.611.2±3.025.3±4.0阴性对照组27.6±4.3*79.2±11.4*17132.6±2113.27186.5±1402.4*35.3±7.4*41.3±6.8*实验组20.1±5.3*#90.2±10.4*#16978.3±1840.95697.0±1244.2*#21.3±4.4*#33.6±4.2*# F值10.325 3.547 1.49816.17910.4387.638
P值＜0.0010.0200.097＜0.001＜0.001＜0.001注：*与空白对照组相比，P＜0.05；#与阴性对照组相比，P＜0.05。

3　讨论
OSAHS是一种发病率较高的复杂性睡眠呼吸疾病。

此病可通过不同机制引起心血管系统的损伤。

有研究发现，心血管系统在慢性间歇性缺氧的环境下，会出现氧化应激反应。

人体长时间处于缺氧状态，可导致循环血液中红细胞的比例增高，进而可引发血液黏稠度、肺动脉压升高，严重时可诱发右心衰竭[7-8]。

肾素-血管紧张素系统是人体内重要的神经内分泌系统之一[9]。

AngⅡ、ACE是肾素-血管紧张素系统调节心血管功能的核心作用物质。

AngⅡ能够介导慢性炎症反应，活化血管内皮细胞细胞膜上的NADP/ NADPH氧化酶，激活核因子-κB，增强炎性因子的表达，引发血管内皮系统功能紊乱，进而引起血管重塑[10]。

ACE 可增强AngⅡ对心血管系统的作用，促进AMC的增殖和基质蛋白的合成。

本研究的结果显示，阴性对照组大鼠、实验组大鼠血清、肾组织匀浆AngⅡ的水平均高于空白对照组大鼠，P＜0.05；阴性对照组大鼠、实验组大鼠肾小动脉ACE蛋白的表达水平均高于空白对照组大鼠，P＜0.05。

这与既往研究的结果一致。

实验组大鼠血清、肾组织匀浆AngⅡ的水平、肾小动脉ACE蛋白的表达水平均低于阴性对照组大鼠，P＜0.05。

这表明，使用褪黑素对慢性间歇性缺氧模型大鼠进行灌胃可有效地保护其肾素-血管紧张素系统，减轻其心血管系统的损伤。

本研究的结果显示，阴性对照组大鼠、实验组大鼠血清、肾组织匀浆Ang1-7的水平均低于空白对照组大鼠，P＜0.05；阴性对照组大鼠、实验组大鼠肾小动脉ACE2蛋白的表达水平均低于空白对照组大鼠，P＜0.05。

这表明，慢性间歇性缺氧可引发血清、肾组织匀浆Ang1-7的水平、ACE2蛋白表达水平的下降。

实验组大鼠血清、肾组织匀浆Ang1-7的水平、肾小动脉ACE2蛋白的表达水平均高于阴性对照组大鼠，P＜0.05。

这表明，使用褪黑素对慢性间歇性缺氧模型大鼠进行灌胃可有效地改善其ACE-AngⅡ、ACE2-Ang(1-7)失衡的情况，保护其心血管系统。

慢性间歇性缺氧可引起血管内皮损伤，进而可引发小动脉血压增高及血管重塑。

血管壁厚度、WT%、WA%是评估血管重塑的重要指标。

本研究的结果显示，阴性对照组大鼠、实验组大鼠肾小动脉的管壁厚度、管壁面积均大于空白对照组大鼠，其WT%、WA%均高于空白对照组大鼠，P＜0.05。

这表明，慢性间歇性缺氧可引发肾小动脉的重塑。

实验组大鼠肾小动脉的管壁厚度、管壁面积均小于阴性对照组大鼠，其WT%、WA%均低于阴性对照组大鼠，P＜0.05。

这表明，使用褪黑素对慢性间歇性缺氧模型大鼠进行灌胃可有效地减轻其肾素-血管紧张素系统的损伤，防止其发生血管重塑。

综上所述，使用褪黑素对慢性间歇性缺氧模型大鼠进行灌胃可有效地改善其ACE-AngⅡ、ACE2-Ang(1-7)失衡的情况，减轻其肾素-血管紧张素系统的损伤，防止其发生心血管并发症。

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