抗菌药物敏感试验+细菌耐药性检测
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31
四、联合药物敏感试验
联合药物意义
? 用于病原菌尚未确定的急、重症感染的经验治疗 ,以 扩大病原治疗的覆盖面
? 治疗多种细菌所引起的混合感染 ? 对于某些耐药菌可取得协同抗菌作用 ? 减少或推迟治疗过程中细菌耐药性的产生 ? 避免药物达到毒性剂量。
32
两种药物的联合使用的效果
? 增强作用： 两种抗生素联用的效果 大于它们单独使用时
5
10
15
Diameter（mm）
系列1 20
13
纸片法药敏试验抑菌圈直径与结果解释的标准
抗菌药物与细菌 纸片含量 抑菌圈直径：mm 相应MIC μg/ml 耐药 中介度 敏感 耐药 敏感
丁胺卡那霉素 氨苄青霉素
测肠杆菌 测葡萄球菌 测嗜血杆菌 测肠球菌
30μg ≤14 15-16 ≥ 17 ≥32 ≤16
的效果之和； 20％～25％
? 相加作用：它们联用时的效果 等于单用两种抗生素效果
之和； 60％～70％
? 无关作用： 两种抗生素联用的效果， 仅相当于其中一种 具有较强作用的抗生素的效果；
9
稀释法的特点
? 定量的药敏试验，测定MIC 、MBC 。 ? 方法比较繁琐，手工操作一般不作为常规试验，常
用于调查罕见耐药。 ? 自动微生物鉴定药敏分析系统采用微量稀释法检测
MIC 。
10
二、纸片扩散法（ disc diffusion test)
原理：
（Kirby-Bauer 法）
? 将浸有抗菌药物的纸片贴在涂有测试菌的琼脂平板上。 抗菌药物向琼脂四周扩散形成递减的梯度浓度。
3
血药浓度与 MIC之间的关系
耐药
上限
中介耐药
下限
敏感
4
敏感和耐药的概念
抗菌药物的治疗浓度与MIC 的关系：
? 若MIC 小于治疗浓度， 则为“敏感”（Sensitive , S ），推荐使用。
? 若MIC 大于治疗浓度， 则为“耐药”（ Resistant , R ）；
? 若MIC 介于治疗浓度的上下限之间 ， 则为“中度耐药”（ Intermediate , I ）或中度敏感
预先制备的 浓度呈连续指数增长的抗菌药物 ，另一面有判别的 8 刻度。抗菌药物的梯度可覆盖有 15-- 20个对倍稀释浓度 的宽度
范围。
016
? 将E试条放在细菌接种过的琼脂平板上，经孵育，围绕试条明
显可见椭圆形抑菌圈， 圈的边缘与试条交点的刻度浓度即为抗
菌药物抑制细菌的 MIC 。
? 依照CLSI 标准判断其敏感、耐药、中介。
报告细菌对该抗生素敏感、 耐药、中介。
15
操作方法 ：
1. 将在约56℃恒温的无菌M-H琼脂倾注直径为90mm 的平板，其厚度 4mm。
16
2.无菌挑取孵育 16～24h 的血平板上 4~5个菌落。
17
3. 将菌置于无菌生理盐水中，校正其浊度于 0.5麦氏 比浊管浊度的菌液。
1.5×108CFU /ml
? 药物敏感细菌在纸片周围一定距离内的生长受到抑制， 形成抑菌圈。
? 抑菌圈的大小反映测试菌
对药物的敏感程度。
二者呈正相关。
11
抑菌圈边缘的药物浓度 与 MIC
12
抑菌圈的大小与MIC ： ? 二者呈负相关，即抑菌圈愈大，MIC 愈小。
50
40
lgMIC
30 20
10
0 0
氨苄青霉素对肠杆菌科的抑菌试验
10μg 10μg 10μg 10μg
≤11 12-13 ≤ 28 — ≤19 — ≤16 —
≥ 14 ≥ 29 ≥ 20
≥32
≥4 ≥16
≤8
≤0.25 ≤2
14
操作方法 ： 1. 制备M-H琼脂平板，厚度4mm 。 2 .制备0.5麦氏比浊管浊度的菌液 （培养16～24h，4~5个菌落）。 3. 菌液均匀涂布于平板。（15分钟接种完毕） 4. 无菌贴标准抗生素纸片于M-H 琼脂表面， 5. 经过35℃16～24h孵育。 6. 量取抑菌环直径， 根据CLSI 标准，
18
4.用无菌棉签浸入细菌悬液中， 将拭子在试管上壁轻轻挤压以 挤去过多的菌液。棉签在 三个 方向均匀抹 琼脂表面（每次转 60℃）使菌液均匀分布，最后 沿平板内缘涂抹一周。
19
5.盖上平板的盖子，放置培养箱内孵育，放置 3~10分 钟后贴上标准抗生素纸片。
20
6.用无菌镊子或纸片分配器将抗菌纸片粘贴于 M-H琼脂的表面， 一旦纸片贴上，不能移动；各抗菌纸片中
26
有菌生长区 无菌生长区
27
椭圆形细菌生长 抑制区
256 128
8
判读抑菌浓度
（MIC ug/ml)
016
28
E test 法特点
? 优点
– 连续浓度梯度，与琼脂稀释法相关性好（相关系数 为0.9）.可测MIC 。
– 操作简单，影响因素少，稳定性高。
? 缺点：E试条较昂贵; 不适用于生长缓慢的苛养菌。
? 培养时间 ↗
? 质控菌株
抑菌圈直径？
↗
↘
↗
↘
↗
23
24
纸片扩散法的特点
? 根据抑菌圈的直径，依照CLSI 标准，作出敏感、耐 药、和中介的判断。为‘‘ 定性”结果。
? CLSI 推荐的最简单的药敏试验。
25
三、E试验法（浓度梯度法）
256
原理：
128
? E试条是一条5mm ×50mm 无孔试剂载体，一面固定有一系列
心距离应大于 24mm，纸片距平板内缘应大于 15mm。
21
7.经过35℃16～ 24h孵育。 8.取抑菌环直径， 根据 CLSI 标准，报告细菌对该抗 生素敏感、耐药、中介。
22
纸片扩散法质量控制
? 培养基：M-H 平板厚度，4 mm
? 细菌悬液：0.5麦氏标准的细菌浓度
? 药敏纸片的质量
? 各抗菌纸片中心距离应大于24mm， 纸片距平板内缘应大于15mm 。 ↘ 9cm的平板贴6个
第四章 抗菌药物敏感试验
Biblioteka Baidu临床微生物学教研室 杨维青
1
主要内容
? 抗菌药物敏感性概述 ? 抗菌药物敏感性试验方法 ? 全国“细菌耐药监测网”简介
2
敏感和耐药的概念
? 从本质上讲： 细菌对某种抗菌药物是敏感还是耐药， 常以该 抗菌药物的 治疗浓度 与MIC 的关系而定。
常用剂量的抗菌药物通过常用途径 所能达到的 血药浓度
5
6
CLSI 标准 治疗浓度的上限 即表中的 R
治疗浓度
治疗浓度的下限 即表中的 S
耐药
中介耐药 敏感
MIC
7
第一节、抗菌药物敏感性试验方法
需氧和兼性厌氧菌
8
需氧和兼性厌氧菌药敏试验的方法
? 稀释法 ? 肉汤稀释法（试管稀释法） ? 琼脂稀释法（平板稀释法）
? 纸片扩散法（纸片法） ? E-试验 ? 联合药物敏感试验
四、联合药物敏感试验
联合药物意义
? 用于病原菌尚未确定的急、重症感染的经验治疗 ,以 扩大病原治疗的覆盖面
? 治疗多种细菌所引起的混合感染 ? 对于某些耐药菌可取得协同抗菌作用 ? 减少或推迟治疗过程中细菌耐药性的产生 ? 避免药物达到毒性剂量。
32
两种药物的联合使用的效果
? 增强作用： 两种抗生素联用的效果 大于它们单独使用时
5
10
15
Diameter（mm）
系列1 20
13
纸片法药敏试验抑菌圈直径与结果解释的标准
抗菌药物与细菌 纸片含量 抑菌圈直径：mm 相应MIC μg/ml 耐药 中介度 敏感 耐药 敏感
丁胺卡那霉素 氨苄青霉素
测肠杆菌 测葡萄球菌 测嗜血杆菌 测肠球菌
30μg ≤14 15-16 ≥ 17 ≥32 ≤16
的效果之和； 20％～25％
? 相加作用：它们联用时的效果 等于单用两种抗生素效果
之和； 60％～70％
? 无关作用： 两种抗生素联用的效果， 仅相当于其中一种 具有较强作用的抗生素的效果；
9
稀释法的特点
? 定量的药敏试验，测定MIC 、MBC 。 ? 方法比较繁琐，手工操作一般不作为常规试验，常
用于调查罕见耐药。 ? 自动微生物鉴定药敏分析系统采用微量稀释法检测
MIC 。
10
二、纸片扩散法（ disc diffusion test)
原理：
（Kirby-Bauer 法）
? 将浸有抗菌药物的纸片贴在涂有测试菌的琼脂平板上。 抗菌药物向琼脂四周扩散形成递减的梯度浓度。
3
血药浓度与 MIC之间的关系
耐药
上限
中介耐药
下限
敏感
4
敏感和耐药的概念
抗菌药物的治疗浓度与MIC 的关系：
? 若MIC 小于治疗浓度， 则为“敏感”（Sensitive , S ），推荐使用。
? 若MIC 大于治疗浓度， 则为“耐药”（ Resistant , R ）；
? 若MIC 介于治疗浓度的上下限之间 ， 则为“中度耐药”（ Intermediate , I ）或中度敏感
预先制备的 浓度呈连续指数增长的抗菌药物 ，另一面有判别的 8 刻度。抗菌药物的梯度可覆盖有 15-- 20个对倍稀释浓度 的宽度
范围。
016
? 将E试条放在细菌接种过的琼脂平板上，经孵育，围绕试条明
显可见椭圆形抑菌圈， 圈的边缘与试条交点的刻度浓度即为抗
菌药物抑制细菌的 MIC 。
? 依照CLSI 标准判断其敏感、耐药、中介。
报告细菌对该抗生素敏感、 耐药、中介。
15
操作方法 ：
1. 将在约56℃恒温的无菌M-H琼脂倾注直径为90mm 的平板，其厚度 4mm。
16
2.无菌挑取孵育 16～24h 的血平板上 4~5个菌落。
17
3. 将菌置于无菌生理盐水中，校正其浊度于 0.5麦氏 比浊管浊度的菌液。
1.5×108CFU /ml
? 药物敏感细菌在纸片周围一定距离内的生长受到抑制， 形成抑菌圈。
? 抑菌圈的大小反映测试菌
对药物的敏感程度。
二者呈正相关。
11
抑菌圈边缘的药物浓度 与 MIC
12
抑菌圈的大小与MIC ： ? 二者呈负相关，即抑菌圈愈大，MIC 愈小。
50
40
lgMIC
30 20
10
0 0
氨苄青霉素对肠杆菌科的抑菌试验
10μg 10μg 10μg 10μg
≤11 12-13 ≤ 28 — ≤19 — ≤16 —
≥ 14 ≥ 29 ≥ 20
≥32
≥4 ≥16
≤8
≤0.25 ≤2
14
操作方法 ： 1. 制备M-H琼脂平板，厚度4mm 。 2 .制备0.5麦氏比浊管浊度的菌液 （培养16～24h，4~5个菌落）。 3. 菌液均匀涂布于平板。（15分钟接种完毕） 4. 无菌贴标准抗生素纸片于M-H 琼脂表面， 5. 经过35℃16～24h孵育。 6. 量取抑菌环直径， 根据CLSI 标准，
18
4.用无菌棉签浸入细菌悬液中， 将拭子在试管上壁轻轻挤压以 挤去过多的菌液。棉签在 三个 方向均匀抹 琼脂表面（每次转 60℃）使菌液均匀分布，最后 沿平板内缘涂抹一周。
19
5.盖上平板的盖子，放置培养箱内孵育，放置 3~10分 钟后贴上标准抗生素纸片。
20
6.用无菌镊子或纸片分配器将抗菌纸片粘贴于 M-H琼脂的表面， 一旦纸片贴上，不能移动；各抗菌纸片中
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有菌生长区 无菌生长区
27
椭圆形细菌生长 抑制区
256 128
8
判读抑菌浓度
（MIC ug/ml)
016
28
E test 法特点
? 优点
– 连续浓度梯度，与琼脂稀释法相关性好（相关系数 为0.9）.可测MIC 。
– 操作简单，影响因素少，稳定性高。
? 缺点：E试条较昂贵; 不适用于生长缓慢的苛养菌。
? 培养时间 ↗
? 质控菌株
抑菌圈直径？
↗
↘
↗
↘
↗
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24
纸片扩散法的特点
? 根据抑菌圈的直径，依照CLSI 标准，作出敏感、耐 药、和中介的判断。为‘‘ 定性”结果。
? CLSI 推荐的最简单的药敏试验。
25
三、E试验法（浓度梯度法）
256
原理：
128
? E试条是一条5mm ×50mm 无孔试剂载体，一面固定有一系列
心距离应大于 24mm，纸片距平板内缘应大于 15mm。
21
7.经过35℃16～ 24h孵育。 8.取抑菌环直径， 根据 CLSI 标准，报告细菌对该抗 生素敏感、耐药、中介。
22
纸片扩散法质量控制
? 培养基：M-H 平板厚度，4 mm
? 细菌悬液：0.5麦氏标准的细菌浓度
? 药敏纸片的质量
? 各抗菌纸片中心距离应大于24mm， 纸片距平板内缘应大于15mm 。 ↘ 9cm的平板贴6个
第四章 抗菌药物敏感试验
Biblioteka Baidu临床微生物学教研室 杨维青
1
主要内容
? 抗菌药物敏感性概述 ? 抗菌药物敏感性试验方法 ? 全国“细菌耐药监测网”简介
2
敏感和耐药的概念
? 从本质上讲： 细菌对某种抗菌药物是敏感还是耐药， 常以该 抗菌药物的 治疗浓度 与MIC 的关系而定。
常用剂量的抗菌药物通过常用途径 所能达到的 血药浓度
5
6
CLSI 标准 治疗浓度的上限 即表中的 R
治疗浓度
治疗浓度的下限 即表中的 S
耐药
中介耐药 敏感
MIC
7
第一节、抗菌药物敏感性试验方法
需氧和兼性厌氧菌
8
需氧和兼性厌氧菌药敏试验的方法
? 稀释法 ? 肉汤稀释法（试管稀释法） ? 琼脂稀释法（平板稀释法）
? 纸片扩散法（纸片法） ? E-试验 ? 联合药物敏感试验