免疫亲和柱净化结合高效液相色谱法测定小麦粉中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇
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关键词：免疫亲和柱净化；高效液相色谱法；脱氧雪腐镰刀菌烯醇
脱氧雪腐镰刀菌烯醇是谷物等制 品中的常见的一种污染性真菌毒素， 是日常饮食中常见的污染霉菌毒素之 一；因此灵敏、快速、准确的分析方 法对保护人类健康至关重要 [1]。在检 测工作中小麦粉中的脱氧雪腐镰刀菌 烯醇都是有检出的。如果食用过量的 脱氧雪腐镰刀菌烯醇会对人体的免疫 系统产生影响并会导致厌食、腹泻、 呕吐等中毒表现，故脱氧雪腐镰刀菌 烯醇又称为呕吐毒素。薄层色谱测定 法、免疫亲和柱结合高效液相色谱法、 同位素稀释液相色谱 - 串联质谱法是检 测脱氧雪腐镰刀菌烯醇常用的方法 [2]。 本文使用免疫亲和柱结合高效液相色 谱法检测小麦粉中的呕吐毒素，能很 好地满足实验分析标准。
标 准 工 作 溶 液 配 制： 准 确 移 取 适 量的配制好的储备溶液，用 10% 乙腈 分别稀释成浓度为 0.1、0.2、0.5、1、 2、5 μg/mL 的标准前处理
（1）提取：称约 2 g（准确到 0.001） 的样品，加入 10 mL 水涡旋混匀 1 min， 并超声后离心，取 2 mL 上清液。
回归方程
相关系数
定量限 (mg/kg）
y=6.17236x-0.1021
0.9998
5
4.3 精密度试验及加标回收率
本方法采用检测小麦粉中的 DON，结果显示脱氧雪腐镰刀菌烯醇 有 检 出。 小 麦 粉 中 DON 含 量 为 120 mg/kg，回收率为 90.6%，RSD 为 2.1%。
5 结论
（3）洗脱：准确加入 1 mL 甲醇 洗脱免疫亲和柱，并收集全部洗脱液 至试管中；涡旋 30 s 混匀溶解残留物， 用 0.45 μm 有机滤膜过膜，收集甲醇 洗脱的滤液于进样小瓶中以备进样。 3.2 仪器条件及检测
3.2.1 液相色谱条件 流动相为甲醇∶水（1 ∶ 4）；流 速 0.8 mL/min； 检 测 波 长 218 nm； 柱温 35 ℃；进样量 20 μL；液相色谱
[2] 何伟杰 , 刘易科 , 朱展望 , 等 . 镰 刀菌毒素脱氧雪腐镰刀菌烯醇脱毒菌及 脱毒酶研究进展 [J]. 植物病理学报 ,2019 (1):12-14.
[3] 栾振祥 . 小麦中脱氧雪腐镰刀菌 烯醇的液相色谱检测与胶体金试纸法分 析比较 [J]. 现代食品 ,2018(19):204-206.
使用免疫亲和柱净化结合高效液相 色谱法检测小麦粉中的脱氧雪腐镰刀菌 烯醇，方法灵敏、快速、准确，处理样 品时工作量小，为检测人员检测其他谷 物中脱氧雪腐镰刀菌烯醇提供参考。 参考文献
[1] 王伟 , 刘安法 , 李明奇 , 等 . 免 疫亲和柱净化 - 高效液相色谱法检测小
麦中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇 [J]. 粮食与 饲料工业 ,2018.
免疫亲和柱结合高效液相色谱法 根据色谱条件，得到没有拖尾、分离 度良好的标准色谱图 [4]。 4.2 检出限及线性
相关系数及线性回归方程是根据 5 个色谱标准点峰面积。以 3 倍的检出 限定义为定量限，在该色谱条件下， 脱氧雪腐镰刀菌烯醇的回归方程、相 关系数及定量限见表 1。
化合物 DON
表 1 脱氧雪腐镰刀菌烯醇的回归方程、相关系数及定量限
[4] 沈萍 , 蒋晨 , 汪小平 . 免疫亲和 柱净化 - 高效液相色谱快速测定玉米中 脱氧雪腐镰刀菌烯醇方法初探 [J]. 上海 农业科技 ,2018(2):102-106.
132 食品安全导刊 2019年6月
柱 为 C18 柱（ 填 料 粒 径 5 μm， 柱 长 150 mm，柱内径 4.6 mm）。
3.2.2 样品的检测 根 据 以 上 液 相 色 谱 条 件 进 样 20 μL，采用峰面积定量，保留时间定性， 求出小麦粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇 （DON）的含量。
4 分析结果
4.1 脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准色谱图
（2）净化：将真空压力泵与玻璃 注射器相连接，先将低温保存的免疫 亲和柱恢复至室温，再插到玻璃注射 器 上， 待 柱 内 原 有 液 体 流 至 柱 体 下 端 1 cm 左右后，将 2 mL 上清液转移至柱 中过柱，直至空气进入柱中 [3]。用离子 色谱水淋洗亲和柱，直至空气进入柱中， 抽干免疫亲和柱，弃去全部流出液。
Technology 科技 分析与检测
免疫亲和柱净化结合高效液相色谱法测定 小麦粉中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇
□ 王 果 郭芳芳 江苏省理化测试服务中心
摘 要：使用小麦粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇（Deoxynivalenol，DON）免疫亲和柱结合高效液相色谱法（HPLC）测定方法。 使用该方法简便、快速、灵敏度高，能准确检测出小麦粉中雪腐镰刀菌烯醇含量。经水提取后，采用免疫亲和柱净化，通 过高效液相色谱 - 紫外检测器测定，检测小麦粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的含量，根据峰面积定量。实践研究显示：小麦粉 中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇经水提取，免疫亲和柱净化后检测线性较好，相关系数大于等于 0.999，定量限为 16 μg/kg， 脱氧雪腐镰刀菌烯醇加标回收率为 90.6%，RSD 为 2.1%。
1 仪器及试剂
脱氧雪腐镰刀菌烯醇免疫亲和 柱、紫外检测器或二极管阵列检测器 （Agilent 高效液相色谱仪）、超声波、 涡旋振荡器、离心机、真空压力泵与 玻璃注射器。
2 标准储备溶液及标准工作溶液
标准储备溶液（25 μg/mL）：移 取 1 mL 标准储备溶液于 10 mL 容量 瓶中，用乙腈定容至刻度线，并存放 于 4 ℃的环境中保存。
脱氧雪腐镰刀菌烯醇是谷物等制 品中的常见的一种污染性真菌毒素， 是日常饮食中常见的污染霉菌毒素之 一；因此灵敏、快速、准确的分析方 法对保护人类健康至关重要 [1]。在检 测工作中小麦粉中的脱氧雪腐镰刀菌 烯醇都是有检出的。如果食用过量的 脱氧雪腐镰刀菌烯醇会对人体的免疫 系统产生影响并会导致厌食、腹泻、 呕吐等中毒表现，故脱氧雪腐镰刀菌 烯醇又称为呕吐毒素。薄层色谱测定 法、免疫亲和柱结合高效液相色谱法、 同位素稀释液相色谱 - 串联质谱法是检 测脱氧雪腐镰刀菌烯醇常用的方法 [2]。 本文使用免疫亲和柱结合高效液相色 谱法检测小麦粉中的呕吐毒素，能很 好地满足实验分析标准。
标 准 工 作 溶 液 配 制： 准 确 移 取 适 量的配制好的储备溶液，用 10% 乙腈 分别稀释成浓度为 0.1、0.2、0.5、1、 2、5 μg/mL 的标准前处理
（1）提取：称约 2 g（准确到 0.001） 的样品，加入 10 mL 水涡旋混匀 1 min， 并超声后离心，取 2 mL 上清液。
回归方程
相关系数
定量限 (mg/kg）
y=6.17236x-0.1021
0.9998
5
4.3 精密度试验及加标回收率
本方法采用检测小麦粉中的 DON，结果显示脱氧雪腐镰刀菌烯醇 有 检 出。 小 麦 粉 中 DON 含 量 为 120 mg/kg，回收率为 90.6%，RSD 为 2.1%。
5 结论
（3）洗脱：准确加入 1 mL 甲醇 洗脱免疫亲和柱，并收集全部洗脱液 至试管中；涡旋 30 s 混匀溶解残留物， 用 0.45 μm 有机滤膜过膜，收集甲醇 洗脱的滤液于进样小瓶中以备进样。 3.2 仪器条件及检测
3.2.1 液相色谱条件 流动相为甲醇∶水（1 ∶ 4）；流 速 0.8 mL/min； 检 测 波 长 218 nm； 柱温 35 ℃；进样量 20 μL；液相色谱
[2] 何伟杰 , 刘易科 , 朱展望 , 等 . 镰 刀菌毒素脱氧雪腐镰刀菌烯醇脱毒菌及 脱毒酶研究进展 [J]. 植物病理学报 ,2019 (1):12-14.
[3] 栾振祥 . 小麦中脱氧雪腐镰刀菌 烯醇的液相色谱检测与胶体金试纸法分 析比较 [J]. 现代食品 ,2018(19):204-206.
使用免疫亲和柱净化结合高效液相 色谱法检测小麦粉中的脱氧雪腐镰刀菌 烯醇，方法灵敏、快速、准确，处理样 品时工作量小，为检测人员检测其他谷 物中脱氧雪腐镰刀菌烯醇提供参考。 参考文献
[1] 王伟 , 刘安法 , 李明奇 , 等 . 免 疫亲和柱净化 - 高效液相色谱法检测小
麦中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇 [J]. 粮食与 饲料工业 ,2018.
免疫亲和柱结合高效液相色谱法 根据色谱条件，得到没有拖尾、分离 度良好的标准色谱图 [4]。 4.2 检出限及线性
相关系数及线性回归方程是根据 5 个色谱标准点峰面积。以 3 倍的检出 限定义为定量限，在该色谱条件下， 脱氧雪腐镰刀菌烯醇的回归方程、相 关系数及定量限见表 1。
化合物 DON
表 1 脱氧雪腐镰刀菌烯醇的回归方程、相关系数及定量限
[4] 沈萍 , 蒋晨 , 汪小平 . 免疫亲和 柱净化 - 高效液相色谱快速测定玉米中 脱氧雪腐镰刀菌烯醇方法初探 [J]. 上海 农业科技 ,2018(2):102-106.
132 食品安全导刊 2019年6月
柱 为 C18 柱（ 填 料 粒 径 5 μm， 柱 长 150 mm，柱内径 4.6 mm）。
3.2.2 样品的检测 根 据 以 上 液 相 色 谱 条 件 进 样 20 μL，采用峰面积定量，保留时间定性， 求出小麦粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇 （DON）的含量。
4 分析结果
4.1 脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准色谱图
（2）净化：将真空压力泵与玻璃 注射器相连接，先将低温保存的免疫 亲和柱恢复至室温，再插到玻璃注射 器 上， 待 柱 内 原 有 液 体 流 至 柱 体 下 端 1 cm 左右后，将 2 mL 上清液转移至柱 中过柱，直至空气进入柱中 [3]。用离子 色谱水淋洗亲和柱，直至空气进入柱中， 抽干免疫亲和柱，弃去全部流出液。
Technology 科技 分析与检测
免疫亲和柱净化结合高效液相色谱法测定 小麦粉中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇
□ 王 果 郭芳芳 江苏省理化测试服务中心
摘 要：使用小麦粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇（Deoxynivalenol，DON）免疫亲和柱结合高效液相色谱法（HPLC）测定方法。 使用该方法简便、快速、灵敏度高，能准确检测出小麦粉中雪腐镰刀菌烯醇含量。经水提取后，采用免疫亲和柱净化，通 过高效液相色谱 - 紫外检测器测定，检测小麦粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的含量，根据峰面积定量。实践研究显示：小麦粉 中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇经水提取，免疫亲和柱净化后检测线性较好，相关系数大于等于 0.999，定量限为 16 μg/kg， 脱氧雪腐镰刀菌烯醇加标回收率为 90.6%，RSD 为 2.1%。
1 仪器及试剂
脱氧雪腐镰刀菌烯醇免疫亲和 柱、紫外检测器或二极管阵列检测器 （Agilent 高效液相色谱仪）、超声波、 涡旋振荡器、离心机、真空压力泵与 玻璃注射器。
2 标准储备溶液及标准工作溶液
标准储备溶液（25 μg/mL）：移 取 1 mL 标准储备溶液于 10 mL 容量 瓶中，用乙腈定容至刻度线，并存放 于 4 ℃的环境中保存。