八肝糖原的提取鉴定与定量

2Cu(OH) + C H O ═ 2CuOH+氧化型葡萄糖+H O 蒽酮显色剂：称取蒽酮0.
1标5准mo葡l/萄L N糖a液Cl(溶50液m：g/称L)：取称8. 取已干2燥恒重的6 无水1葡2 萄糖625mg，加蒸馏水溶解至500 mL。
2
2CuOH ═ Cu O↓(红色)+H O 刻度吸量管（2mL×1，5 mL×2），1000μL微量可调取液器（×1）
碘试剂：碘l00mg和K1 200mg溶于50mL蒸馏水中。
糖原水溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色。这是糖原中 利用此反应与同样处理的已知葡萄糖含量标准溶液比色，通过标准对照法（直接比较法）即可计算出样品中糖原的含量。
熟练运用溶液混匀的各种方法（视具体情况，采用合适的混匀方法）。
葡萄糖长链形成的螺旋中，依靠分子间引力吸附碘分子后 3 糖原水解液中葡萄糖的鉴定一步，加班氏试剂不能过量，否则反应液呈黑色浑浊，观察不到应有的结果。
实验材料
（一）仪器 1. 普通离心机，室温~100℃恒温水浴箱（×2），722型分光光度计，
精度为10mg级电子天平（×1） 2. 剪刀（×1），镊子（×1），研钵（×1） 3. 试管架（×1），10mL离心管（×2），（100×15）mm试管（×6） 4. 刻度吸量管（2mL×1，5 mL×2），1000μL微量可调取液器（×1） 5. 100mL容量瓶（×1） 6. 白瓷反应板（×1）
1 肝糖原提取一步，向上清液中加人等量的95％乙醇后，务必注意混匀。
呈现的颜色。糖原还可被酸水解为葡萄糖，利用呈色反应 5mol/L(50％)NaOH：称取NaOH 50g，用蒸馏水溶解至100mL。
利用此反应与同样处理的已知葡萄糖含量标准溶液比色，通过标准对照法（直接比较法）即可计算出样品中糖原的含量。 淀粉中分枝链较长，故呈蓝色，而肝糖原分枝中的葡萄糖残基在20个以下（通常8 12个葡萄糖残基），吸附碘后呈现红棕色。
正确操作使用刻度吸管和可调微量取液器。2
2
31mol/L(5％)三氯醋酸溶液：称取未潮△解的三氯醋酸（l3O2，163.
Cu(OH)2 ═ CuO↓(黑色)+H2O
实验原理
（三）肝糖原的定量 糖原在浓酸中可水解成为葡萄糖，浓硫酸能使葡萄糖
进一步脱水生成糠醛衍生物—5-羟甲基呋喃甲醛，此化合 物再与蒽酮脱水缩合生成蓝色的化合物。该物质在 620nm处有最大吸收。糖含量在(10~100)mg范围内，溶 液颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。利用此反应与同样 处理的已知葡萄糖含量标准溶液比色，通过标准对照法 （直接比较法）即可计算出样品中糖原的含量。糖原在浓 碱溶液中非常稳定，故在显色之前，肝组织先置于浓碱中 加热，以破坏其它成分，而保留肝糖原。
实验材料
（二）试剂 1. 鸡肝。 2. 95％乙醇。 3. 0.31mol/L(5％)三氯醋酸溶液：称取未潮解的三氯醋酸（C2HCl3O2，
163.39）5g，加蒸馏水溶解至100 mL。 4. 0.15mol/L NaCl溶液：称取8.8g NaCl加蒸馏水溶解至1000 mL。 5. 12mol/L HCl：浓HCl原液（36%~38%）。 6. 12.5mol/L(50％)NaOH：称取NaOH 50g，用蒸馏水溶解至100mL。 7. 碘试剂：碘l00mg和K1 200mg溶于50mL蒸馏水中。
实验原理
（一）肝糖原的提取、鉴定 糖原储存于细胞内，采用研磨匀浆等方法可使细
胞破碎，低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性，破坏肝组 织中的酶且沉淀蛋白质，而糖原仍稳定地保存于上清液 中，从而使用糖原与蛋白质等其它成分分离开来。糖原 不溶于乙醇而溶于热水，故先用95％乙醇将滤液中糖原 沉淀，再溶于热水中。
68） l00mL，边加边摇。
普通离心机，室温~100℃恒温水浴箱（×2），722型分光光度计，精度为10mg级电子天平（×1）
正确操作使用分光光度计。
实验原理 2 糖原中葡萄糖螺旋链吸附碘产生的颜色与葡萄糖残基数的多少有关。
99）100g溶于蒸馏水700mL中，加热促溶。 5mol/L(50％)NaOH：称取NaOH 50g，用蒸馏水溶解至100mL。
3g和无水碳酸钠（Na2C03，105.
12mol/L HCl：浓HCl原液（36%~38%）。
掌握组织样品的制备方法，了解其注意事项。
（二）肝糖原的鉴定 2Cu(OH)2+ C6H12O6 ═ 2CuOH+氧化型葡萄糖+H2O
这是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中，依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。
9. 5.35mol/L(30％)KOH溶液：称取KOH 30g，加蒸馏水溶解至100 mL。
肝糖原的提取、鉴定与定量
实验目的
1. 掌握组织样品的制备方法，了解其注意事项。 2. 了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定
糖原含量的原理和注意事项，掌握其操作方法。 3. 正确操作使用刻度吸管和可调微量取液器。 4. 熟练运用溶液混匀的各种方法（视具体情况，采用合
适的混匀方法）。 5. 正确掌握溶液转移的操作。 6. 正确操作使用分光光度计。
和葡萄糖的还原性，可判定肝组织中糖原的存在。 了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项，掌握其操作方法。
35mol/L(30％)KOH溶液：称取KOH 30g，加蒸馏水溶解至100 mL。
该物质在620nm处有最大吸收。
CuSO +2NaOH ═ Na SO +Cu(OH) ↓ 葡31萄mo糖l/残L(5基％在)三20氯个醋以酸下溶的液会：使称4碘取呈未现潮红解色的，三20氯醋3酸0个（之C间2H使C碘2l3O呈2现，紫16色43.，60个以上的会使碘2 呈现蓝色。
实验材料
8. 班氏试剂：称取柠檬酸钠（C5H5Na3O7·5H2O，294.10）17.3g和无 水碳酸钠（Na2C03，105.99）100g溶于蒸馏水700mL中，加热促溶。 冷却，慢慢倾人17.3％硫酸铜（CuSO4·5H2O，249.68） l00mL， 边加边摇。再加蒸馏水至1000mL，混匀，如混浊可过滤取滤液。此 试剂可长期保存。