新教材人教版生物选择性课件1-2-2微生物的选择培养和计数

判断对错(正确的打“√”，错误的打“×”) 1．选择分解尿素的细菌的培养基为液体培养基。( ) × 提示：选择分解尿素的细菌的培养基为固体培养基，固 体培养基具有分离、鉴定作用。
2．用平板划线法培养计数，应选择菌落数在 10～100 的平 板。 ( )
× 提示：微生物计数采用稀释涂布平板法，为保证结果准 确，应选择菌落养基的 pH 升 高。
6．在用涂布器涂布平板时，为了操作方便可完全打开培养 皿盖。( )
× 提示：为了防止杂菌污染，不能完全打开皿盖。
课程标准 1.举例说明通过调整培养基的配方可有目的地培养某种微 生物。 2．概述稀释涂布平板法和显微镜计数法是测定微生物数量 的常用方法。
素养达成 1.各类微生物都能适应其生活环境。(生命观念) 2．根据微生物的代谢类型配制选择培养基。(科学思维) 3．讨论土壤中分解尿素的细菌的分离与计数的方法。(科学 探究)
瞧，细菌和小麦多客气！为什么细菌要感谢小麦而小麦也感 谢细菌呢？我们知道，尿素是农业生产中重要的氮肥，农民会经 常给农作物使用尿素，但尿素不能直接被农作物吸收，只有被土 壤中的细菌将尿素分解成氨之后，才能被农作物吸收利用。单个 细菌是看不见的，我们如何将土壤中分解尿素的细菌请出来，以 观尊容呢？
答案：C
2．选择培养基可以从混杂的微生物群体中分离出所需的微 生物，通过不含有机物的培养基、缺氮培养基、含尿素(不含其 他氮源)的培养基，可从土壤中分离出的微生物依次是( )
A．硝化细菌、放线菌、根瘤菌 B．根瘤菌、青霉菌、固氮菌 C．异养细菌、放线菌、硝化细菌 D．自养细菌、固氮菌、分解尿素的细菌
解析：分离土壤中分解尿素的细菌，培养基中要有碳源，且 以尿素作为唯一的氮源，故不能添加硝酸盐。分离微生物要用固 体培养基，所以要加琼脂。
答案：C
探究点二 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 【师问导学】
1．下面是土壤中尿素分解菌的分离与计数的实验流程示意 图，请结合教材提供的资料分析回答问题。
样品的稀释和稀释液的取样培养流程示意图
(1)请完善下列实验流程。 __土__壤____取样：从肥沃、湿润的土壤中，用__无__菌____铁铲铲 去表层土，迅速取土壤并装入___无__菌___纸袋密封
↓
配制_培__养__基___：制备以___尿__素___为唯一氮源的选择培养基 ↓
___样__品___的稀释：在___火__焰___旁称取土壤 10 g，放入盛有 90 mL 无菌水的锥形瓶中，振摇使土样与水充分混合，将菌分散。 制成 101 倍土壤稀释液，从中吸取 1 mL 土壤悬液注入盛有 9 mL 无菌水的试管中，吹吸三次，充分混匀，制成 102 倍土壤稀释液， 以此类推，制成 103,104,105,106 倍土壤稀释液
取样__涂__布____：取 9 个上述选择培养基分成__3__组，并做好 ___标__记___，然后分别从__1_0_4__，__1_0_5__，___1_0_6_倍的三种土壤稀 释液中吸取 0.1 mL 对号放入已做好标记的平板中，用无菌涂布 器在培养基表面轻轻地涂布均匀
↓ 培养观察：将培养基平板倒置于__3_0_～__3_7_℃的恒温培养箱中 培养 1～2 d，每隔 24 h 统计一次菌落数目，选取菌落数目 ___稳__定___时的记录作为结果
3．微生物的培养与观察 (1)培养：不同种类的微生物，往往需要不同的培养__温___度___ 和培养__时__间____。 (2)观察：每隔___2_4_h___统计一次__菌___落___数目，选取菌落 数目___稳__定___时的记录作为结果。
4．操作提示 (1)涂布器的使用：将涂布器从酒精中取出时，要让多余的 酒 精 在 烧 杯 中 ___滴___尽____ ， 然 后 再 放 在 火 焰 上 灼 烧 。 不 要 将 ___过__热___的涂布器放在盛有酒精的烧杯中，以免引燃酒精。 (2)无菌操作：取土样的用具在使用前都需要__灭__菌 ____。操 作完成后，一定要__洗__手____。 (3)做好标记：本实验使用的平板和试管比较多，为避免混 淆，最好使用前就做好__标__记____。 (4)制订计划：本实验耗时较长，需要事先_规__划__时__间_____， 以便提高实验效率。
知识点二 微生物的选择培养 1．取样 铲取土样，将样品装入纸袋中。 2．稀释涂布平板法 (1)系列稀释操作 将 10 g 土样加入盛有 90 mL 无菌水的锥形瓶中，充分摇匀。 取 1 mL 上清液加入盛有 9 mL 无菌水的试管中，依次等比稀释。
(2)涂布平板操作
0.1
涂布器
菌液
酒精
冷却
培养基 转动
(3)三种方法的比较
方法
特点
举例
一
利用营养缺陷进 行的选择培养
通过控制培养基的营养成分，使营 养缺陷的微生物不能正常生长
缺乏氮源时可 以分离固氮微
生物
二
利用某种化学物 质进行的选择培
养
在完全培养基中加入某些化学物 质，利用加入的化学物质对微生物 产生的影响，抑制某些微生物，同
时选择所需的微生物
加入青霉素可 以分离出酵母
3．根据选择培养基的原理，如何筛选出耐酸菌？ 提示：可将培养基的 pH 调至酸性，再接种培养。
4．要把某种微生物从众多微生物中筛选出来，就要利用其 代谢特点选择合适的培养基。下面是分离土壤中分解尿素的细菌
使用的选择培养基配方，请分析回答问题。
KH2PO4 Na2HPO4 MgSO4·7H2O 葡萄糖
【智涂笔记】 [特别提醒] 能在选择培养基上生长的不一定是所需要的目的菌。原则上 选择培养基只允许特定种类的微生物生长，但实际上，微生物的 培养是一个非常复杂的问题，有些微生物可以利用其他微生物的 代谢产物生长繁殖，因此能在选择培养基上生长的微生物不一定 都是所需的微生物，还需进一步的鉴定。
【师说核心】 1．选择培养基的选择作用 (1)原理：根据不同微生物的特殊营养要求或其对某化学、 物理因素的抗性不同而制备培养基。 (2)目的：从众多的微生物中分离所需要的微生物。
范围的样品液进行培养。在同一稀释度下，应至少对____3____ 个平板进行重复计数，然后求出_平__均__值___。
(3) 注 意 问 题 ： 统 计 的 菌 落 数 往 往 比 活 菌 的 实 际 数 目 ____少____。这是因为当__两__个___或__多__个__细__胞__连__在__一__起__时__，_平__板__上__观___ _察__到__的__只__是__一__个__菌__落____________________________________。
解析：为了筛选、获取能利用多环芳烃为碳源的菌种，首先 是取材，应配制来源于被原油污染土壤的土壤稀释液备用，A 正 确；其次配制以多环芳烃为唯一碳源的选择培养基，B 正确；然 后进行接种，在无菌环境下，将土壤稀释液接种到选择培养基上， 在适宜的条件下进行培养，若将土壤稀释液进行灭菌，就不能筛 选出能高效降解原油的菌株，C 错误；在选择培养基上形成的菌 落，若该菌落周围有分解圈，即为所需菌种，D 正确。
如果 pH 升高，指示剂将变红，则可初步说明该种细菌能够分解 尿素。
【检测反馈】 1．原油中含有大量有害的、致癌的多环芳烃。土壤中有些 细菌可以利用原油中的多环芳烃为碳源，在培养基中形成分解 圈。为筛选出能高效降解原油的菌株并投入除污，某小组同学设 计了相关实验。下列有关实验的叙述，不正确的是( ) A．应配制来源于被原油污染土壤的土壤稀释液备用 B．配制以多环芳烃为唯一碳源的选择培养基 C．将土壤稀释液灭菌后接种到选择培养基上 D．在选择培养基上能形成分解圈的即为所需菌种
第2课时 微生物的选择培养和计数
课前自主预习案
知识点一 选择培养基 1．水生栖热菌的筛选：水生栖热菌能在_7_0_～__8_0__ ℃的高温 条件下生存，而绝大多数微生物在此条件下_不__能___生__存____。 2．选择培养基：在微生物学中，允许__特__定__种__类____的微生 物生长，同时抑制或阻止___其__他__种__类___微生物生长的培养基。
3．统计菌落数目时，统计的菌落数就是活菌的实际数目。 ()
× 提示：由于当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察 到的只是一个菌落，所以统计的菌落数往往比活菌的实际数目 少。
4．统计菌落数目的理论依据是一个菌落来源于样品稀释液 中的一个活菌。( √ )
5．分解尿素的细菌在分解尿素时，可以将尿素转化为氨， 使得培养基的 pH 降低。( )
探究点一 选择培养基 【师问导学】
1．如何从大豆田土壤中分离出固氮微生物？
提示：从大豆田土壤取土样，利用缺乏氮源的培养基可分离 出固氮微生物。
2．要分离出分解纤维素的微生物，应在什么样的环境中取 土样？应配制什么样的培养基？
提示：应从富含纤维素的培养基中取土样，如树林中多年落 叶形成的腐殖土。应配制以纤维素为唯一碳源的培养基。
1.4 g 2.1 g 0.2 g 10.0 g
尿素
1.0 g
琼脂
15.0 g
将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到 1 000 mL
(1) 在 该 培 养 基 的 配 方 中 ， 为 微 生 物 提 供 碳 源 的 是 ___葡__萄__糖_____，提供氮源的是__尿__素____。
(2)绝大多数微生物都能利用葡萄糖，但是，只有能合成脲 酶的微生物才能利用__尿___素___。
3．培养与观察 待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板___倒__置___，放入 30～ 37 ℃的恒温培养箱中培养 1～2 d。在涂布有合适浓度菌液的平 板上就可以观察到分离的____单____菌落。
知识点三 微生物的数量测定
1．稀释涂布平板法 (1)原理：当样品的_稀__释__度___足够高时，培养基表面生长的 一 个 单 菌 落 ， 来 源 于 样 品 稀 释 液 中 的 _一__个__活__菌 ___ 。 通 过 统__计__平__板__上__的__菌__落__数__，就能推测出样品中大约含有多少活菌。 (2)计数原则：一般选择菌落数为_3_0_～__3_0_0_的平板进行计数。 样品的稀释度将直接影响平板上的菌落数目，通常选用一定稀释
解析：不含有机物的培养基可以选择自养微生物，缺少氮元 素的培养基可以选择固氮微生物，含尿素(不含其他氮源)的培养 基可以选择能分解尿素的微生物。
答案：D
3．分离土壤中分解尿素的细菌，对培养基的要求是( )
选项 尿素 琼脂 葡萄糖 硝酸盐
A ＋＋ ＋
＋
B －－ －
－
C ＋＋ ＋
－
D ＋－ －
＋
注：“＋”表示加入，“－”表示不加
菌和霉菌
将培养基放在
三
利用培养条件进 行的选择培养
改变微生物的培养条件
高温环境中培 养可以得到耐
高温的微生物
2.尿素分解菌的鉴定 在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的脲酶将尿素分解
成了 NH3 和 CO2。NH3 会使培养基的碱性增强，pH 升高。在以 尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养某种细菌后，
(3)分析该培养基的配方，该培养基对微生物是否具有选择 作用？如果具有，又是如何进行选择的？
提示：具有选择作用。以尿素为唯一氮源的培养基可以分离 到能产生脲酶的微生物(即能分解尿素的微生物)。
(4)判断选择培养基是否具有筛选作用，还需同时接种到牛 肉膏蛋白胨固体培养基上进行培养，观察同一稀释度的菌液接种 的_两__种__培__养__基__上__菌__落__的__数__目_，进行对比得出结论。
2．显微镜直接计数法 (1)方法：利用特定的_细__菌__计__数__板___或血__细__胞__计 ___数__板_，在显 微镜下观察、计数。 (2)注意问题：统计的结果一般是__活__菌__数__和_死__菌__数___的总 和。
知识点四 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
1．土壤取样 从酸碱度接近中性的潮湿土壤取样。先铲去表层土，在距地 表约___3_～__8__ cm 的土壤层取样。 2．样品的稀释 (1)选用一定稀释范围的样品液进行培养，保证获得菌落数 为_3_0_～__3_0_0_的平板进行计数。 (2)第一次做实验时，可以将稀释度的范围放宽一点。