人乳头瘤病毒基因型检测方法的研究进展
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从 而确 定 Ｒ ＮＡ－ ＮＡ 杂合 体 的含 量 。 目前 商 品化 的 Ｄ ＨＣＩ 检 测 １ Ｉ可 ８种 ＨＰ 其 中 １ Ｖ， ３种 高 危 型 ＨＰ Ｖ
（ １ 、１ 、３ 、３ 、３ 一 ９ 一 ５ 一 １ 一 ２、５ 、５ 、５ 、 一 ６ 一 ８ － １ － ３ 一 ５、３ 、４ 、５ 、５ 一 ６ － ８ － ９
存在与多种皮肤 黏膜 的 良、 恶性增生 ， 特别是 宫颈癌 的发 生 、 发展 密 切 相 关 ， 毒 的 各 型 基 因序 列 与 其 生 病 物 学行 为存在 着 高 度 相关 性 。 同基 因 型 的 ＨＰ 具 不 Ｖ 有不 同 的致 病 危 险 性 。ＨＰ Ｖ ＤＮＡ 的 检测 和 分 型 对 了解 相关 病情 、 断 预 后 及 指 导 治 疗 具 有 重 要 价 值 ， 判 特 别是对 女性 生殖 道肿 瘤 的癌 情 预 报 具有 重 要 意 义 。 由于 缺 乏 体 外 培养 系 统 和 可 靠 的 血 清 反 应 物 ， 以 所 ＨＰ 的分类 几 乎 完 全依 赖 于 其 分 子 学 特 性 。而 且 ， Ｖ 不 同 ＨＰ 基 因型之 间 的重 组 非 常 少 ， 以用 病 毒 基 Ｖ 所 因组 的 一部 分 进 行 分 析 作 为基 因 型 分类 是 可 靠 和 稳 定 的 。用于病 毒分 型 的基 因位 嚣 的选 择是 严 格 的 ， 这 个 部位 需要 有 充 分 的区 分 能力 来 区 分 所 有 不 同 的基
床使用的检测方法 ， 由于其存在不 能分型以及其他 不足之处 而要求 发展更好 的分 型检测 方法 。现 但
就人乳头瘤病毒的基因型分型方法的研究进展情况作 一综述 。
【 关键词】 乳头状 瘤病毒 ， ｝ 基因型 ； 核酸杂交 ； 聚合酶链反应 人
人 乳 头瘤 病 毒 （ ｕ ｎ ｐ ｐｌ ｍａ ｉ ｓ ＨＰ 的 ｈ ｍａ ａ ｉｏ ｖｒ ， Ｖ） ｌ ｕ
用 Ｈ Ⅱ Ｐ Ｒ检测 ， ｃ和 Ｃ 显示 Ｒ Ｕ值在 ０ ８ ． Ｌ ． ～１５之间 的 Ｐ Ｒ的 阳性 率较 Ｒ Ｕ 值 大 于 １ ５的低 ， Ｃ Ｌ ． 由此 认 为 临界值附近的结果可信度有所 降低， 可能是处理样本 过 程 中有 时样 本 间 的 交叉 污 染 影 响 了一 些 临界 阳性
－
６ ） ５种 低 危 型 ＨＰ － 、１ 、 ２ －３ －４ 。释放 ８和 Ｖ（６ － １－ 、 、４ ） ４ ４
出来 的荧光 强度 ， 样本 中 目的 Ｄ 与 ＮＡ 的量 呈 比例 ， 所
定 的 ２ １ ｐ有 １ 不 同就 属 于 不 同 的 ＨＰ 型口 。 ９ｂ Ｏ Ｖ ］
以 Ｈｃ 法是 一 种 测 定 病 毒 负 荷 量 的 半 定 景 方 法 ，用 Ⅱ 实 时荧 光定 量 Ｐ Ｒ测定 其 中的 ＨＰ 一６的值 与 ＨＣ Ｃ Ｖ１ Ⅱ 的值 相 吻合 。 目前美 国食 品药 品管理 局 （ｈ ｏｄ ］ ｔｅＦ ｏ 界 值是 １０Ｒ Ｕ（ ． Ｌ 相对 光单 位 ）相 当于每 ｌ 样 本缓 ， ｍｌ 冲液 中有 ｌｇＨＰ ＮＡ。有研 究对 同一批 标本 分别 ｐ Ｖ Ｄ
测技 术 ， 原 理 是 Ｄ 其 ＮＡ 双 链 裂 解 为 单 链 后 与 ＲＮ Ａ
探针 结 合成 ＩＮＡ ＤＮＡ 杂交体 ， 被特 异性 抗体 固定 — 并
在试管壁或微孔 壁上 ， 结合有碱性磷酸酶 的多个第 ２ 抗体与 Ｒ — Ｎ ＮＡ Ｄ Ａ杂交体结合 ， 其标记物碱性磷酸酶 使 酶底 物发 光 ， 的 强 弱对 应 于 碱 性 磷 酸 酶 的含 量 ， 光
ｂｏ ） 原 位 杂 交 法 （ｎ ｓｔ ｙ ｒ ｉ ｔ ｎ Ｉ Ｈ） 。 ｌｔ 和 ｉ ｉ ｈ ｂ ｉ ｚ ｉ ，Ｓ 等 ｕ ｄａｏ Ｓ ｕｈ ｒ ｌｔ ＨＰ 基 因分析 的金 标 准 ， ｏ ｔ ｅｎｂｏ 是 Ｖ 这项 技术 曾用于 ＨＰ 的早期 研究 ， 此 方 法 敏感 性 低 、 时 、 Ｖ 但 耗
维普资讯
・５ ・ ８
国际检 验 医学杂 志 ２０ ０６年 １月第 ２ ７卷第 ｌ期 Ｉｔ ａ ｄＪｎａｙ２０ 。 １ ７Ｎ ． ｎ ＬｂＭｅ， ｕｒ ６Ｖｏ ２ 。ｏ１ Ｊ ａ Ｏ ．
・
综 述
・
人乳头瘤病毒基 因型检测 方法 的研 究进展
ｔ ｎ Ｐ Ｒ） ｉ ，Ｃ 为基础 的检测方 法 两大 类 。本 文 就 此 两类 ｏ
方 法对 ＨＰ 的基 因型分 型方 法作 一综 述 。 Ｖ
杂 交法
ｊ ０ ｉ ： 芝法 ：ｉ‘ ． Ｉ＼ ＼ ｝ （ １Ｉ（ｌ ， 屯 ＇ 。 ｔ ￣ Ｊ ｆ ）． ｊ ｉ ｌＩ －根 据 定 义 ， 果 Ｌ 如 １开 放 阅读 框 中特
且有 精 确 的定 位 功 能 。该 法 能 检 测 整 个 细 胞 和 组 织 样本 中的 Ｄ ＮＡ 和 ｍＲ ＮＡ， 检测 范 围较窄 ［ 。 但 ３ ］
２ 新 型杂 交 法 ： ． 杂交捕 获 法 ： 交捕 获法Ⅱ ｈ ｂｉ 杂 （ｙ ｒ ｄ ｃｐ ｕｅ 。 Ｉ 是 Ｄ ｇ ｎ 公 司 的一 种 ＨＰ Ｄ ａ ｔｒ￣ ＨＣＩ ） ｉｅ ｅ Ｖ ＮＡ 检
目前 ， 于 人 乳 头 瘤 病 毒 基 因 型 分 型 方 法 的 研 究 很 对
多， 也取 得 了很 大 的 进 展 。 ＨＰ 分 型方 法 主 要 有 杂 Ｖ
交法 和 以 聚 合 酶 链 式 反 应 （ ｏｙ ｒｓ ｈ ｉ ｅｃ ａ ｄＤｒｇＡｄ ｎｓｒｔ ｎ Ｆ ｐ ｌｍｅａｅ ｃ ａｎ ｒａ － ｎ ｕ ｍｉｉ ａｉ ， ＤＡ） ｔ ｏ 推荐 的 阳性结果 的临
洪蝶 陈怀增 综述 谢 幸 吕卫 国 审校
【 要】 人乳头瘤病 毒 （ Ｖ） 不 同基 因型 有不 同 的致病性 ． 因型 的检 测 和分 型对 了解病 摘 ＨＰ 的 基
情、 指导 治疗 和判断预 后有重要 价值 。第 ２ 杂交捕获法（ Ｕ 是 目前惟一通过 Ｆ Ａ批准 的可在 临 代 ＨＣ ） Ｄ
（ １ 、１ 、３ 、３ 、３ 一 ９ 一 ５ 一 １ 一 ２、５ 、５ 、５ 、 一 ６ 一 ８ － １ － ３ 一 ５、３ 、４ 、５ 、５ 一 ６ － ８ － ９
存在与多种皮肤 黏膜 的 良、 恶性增生 ， 特别是 宫颈癌 的发 生 、 发展 密 切 相 关 ， 毒 的 各 型 基 因序 列 与 其 生 病 物 学行 为存在 着 高 度 相关 性 。 同基 因 型 的 ＨＰ 具 不 Ｖ 有不 同 的致 病 危 险 性 。ＨＰ Ｖ ＤＮＡ 的 检测 和 分 型 对 了解 相关 病情 、 断 预 后 及 指 导 治 疗 具 有 重 要 价 值 ， 判 特 别是对 女性 生殖 道肿 瘤 的癌 情 预 报 具有 重 要 意 义 。 由于 缺 乏 体 外 培养 系 统 和 可 靠 的 血 清 反 应 物 ， 以 所 ＨＰ 的分类 几 乎 完 全依 赖 于 其 分 子 学 特 性 。而 且 ， Ｖ 不 同 ＨＰ 基 因型之 间 的重 组 非 常 少 ， 以用 病 毒 基 Ｖ 所 因组 的 一部 分 进 行 分 析 作 为基 因 型 分类 是 可 靠 和 稳 定 的 。用于病 毒分 型 的基 因位 嚣 的选 择是 严 格 的 ， 这 个 部位 需要 有 充 分 的区 分 能力 来 区 分 所 有 不 同 的基
床使用的检测方法 ， 由于其存在不 能分型以及其他 不足之处 而要求 发展更好 的分 型检测 方法 。现 但
就人乳头瘤病毒的基因型分型方法的研究进展情况作 一综述 。
【 关键词】 乳头状 瘤病毒 ， ｝ 基因型 ； 核酸杂交 ； 聚合酶链反应 人
人 乳 头瘤 病 毒 （ ｕ ｎ ｐ ｐｌ ｍａ ｉ ｓ ＨＰ 的 ｈ ｍａ ａ ｉｏ ｖｒ ， Ｖ） ｌ ｕ
用 Ｈ Ⅱ Ｐ Ｒ检测 ， ｃ和 Ｃ 显示 Ｒ Ｕ值在 ０ ８ ． Ｌ ． ～１５之间 的 Ｐ Ｒ的 阳性 率较 Ｒ Ｕ 值 大 于 １ ５的低 ， Ｃ Ｌ ． 由此 认 为 临界值附近的结果可信度有所 降低， 可能是处理样本 过 程 中有 时样 本 间 的 交叉 污 染 影 响 了一 些 临界 阳性
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６ ） ５种 低 危 型 ＨＰ － 、１ 、 ２ －３ －４ 。释放 ８和 Ｖ（６ － １－ 、 、４ ） ４ ４
出来 的荧光 强度 ， 样本 中 目的 Ｄ 与 ＮＡ 的量 呈 比例 ， 所
定 的 ２ １ ｐ有 １ 不 同就 属 于 不 同 的 ＨＰ 型口 。 ９ｂ Ｏ Ｖ ］
以 Ｈｃ 法是 一 种 测 定 病 毒 负 荷 量 的 半 定 景 方 法 ，用 Ⅱ 实 时荧 光定 量 Ｐ Ｒ测定 其 中的 ＨＰ 一６的值 与 ＨＣ Ｃ Ｖ１ Ⅱ 的值 相 吻合 。 目前美 国食 品药 品管理 局 （ｈ ｏｄ ］ ｔｅＦ ｏ 界 值是 １０Ｒ Ｕ（ ． Ｌ 相对 光单 位 ）相 当于每 ｌ 样 本缓 ， ｍｌ 冲液 中有 ｌｇＨＰ ＮＡ。有研 究对 同一批 标本 分别 ｐ Ｖ Ｄ
测技 术 ， 原 理 是 Ｄ 其 ＮＡ 双 链 裂 解 为 单 链 后 与 ＲＮ Ａ
探针 结 合成 ＩＮＡ ＤＮＡ 杂交体 ， 被特 异性 抗体 固定 — 并
在试管壁或微孔 壁上 ， 结合有碱性磷酸酶 的多个第 ２ 抗体与 Ｒ — Ｎ ＮＡ Ｄ Ａ杂交体结合 ， 其标记物碱性磷酸酶 使 酶底 物发 光 ， 的 强 弱对 应 于 碱 性 磷 酸 酶 的含 量 ， 光
ｂｏ ） 原 位 杂 交 法 （ｎ ｓｔ ｙ ｒ ｉ ｔ ｎ Ｉ Ｈ） 。 ｌｔ 和 ｉ ｉ ｈ ｂ ｉ ｚ ｉ ，Ｓ 等 ｕ ｄａｏ Ｓ ｕｈ ｒ ｌｔ ＨＰ 基 因分析 的金 标 准 ， ｏ ｔ ｅｎｂｏ 是 Ｖ 这项 技术 曾用于 ＨＰ 的早期 研究 ， 此 方 法 敏感 性 低 、 时 、 Ｖ 但 耗
维普资讯
・５ ・ ８
国际检 验 医学杂 志 ２０ ０６年 １月第 ２ ７卷第 ｌ期 Ｉｔ ａ ｄＪｎａｙ２０ 。 １ ７Ｎ ． ｎ ＬｂＭｅ， ｕｒ ６Ｖｏ ２ 。ｏ１ Ｊ ａ Ｏ ．
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综 述
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人乳头瘤病毒基 因型检测 方法 的研 究进展
ｔ ｎ Ｐ Ｒ） ｉ ，Ｃ 为基础 的检测方 法 两大 类 。本 文 就 此 两类 ｏ
方 法对 ＨＰ 的基 因型分 型方 法作 一综 述 。 Ｖ
杂 交法
ｊ ０ ｉ ： 芝法 ：ｉ‘ ． Ｉ＼ ＼ ｝ （ １Ｉ（ｌ ， 屯 ＇ 。 ｔ ￣ Ｊ ｆ ）． ｊ ｉ ｌＩ －根 据 定 义 ， 果 Ｌ 如 １开 放 阅读 框 中特
且有 精 确 的定 位 功 能 。该 法 能 检 测 整 个 细 胞 和 组 织 样本 中的 Ｄ ＮＡ 和 ｍＲ ＮＡ， 检测 范 围较窄 ［ 。 但 ３ ］
２ 新 型杂 交 法 ： ． 杂交捕 获 法 ： 交捕 获法Ⅱ ｈ ｂｉ 杂 （ｙ ｒ ｄ ｃｐ ｕｅ 。 Ｉ 是 Ｄ ｇ ｎ 公 司 的一 种 ＨＰ Ｄ ａ ｔｒ￣ ＨＣＩ ） ｉｅ ｅ Ｖ ＮＡ 检
目前 ， 于 人 乳 头 瘤 病 毒 基 因 型 分 型 方 法 的 研 究 很 对
多， 也取 得 了很 大 的 进 展 。 ＨＰ 分 型方 法 主 要 有 杂 Ｖ
交法 和 以 聚 合 酶 链 式 反 应 （ ｏｙ ｒｓ ｈ ｉ ｅｃ ａ ｄＤｒｇＡｄ ｎｓｒｔ ｎ Ｆ ｐ ｌｍｅａｅ ｃ ａｎ ｒａ － ｎ ｕ ｍｉｉ ａｉ ， ＤＡ） ｔ ｏ 推荐 的 阳性结果 的临
洪蝶 陈怀增 综述 谢 幸 吕卫 国 审校
【 要】 人乳头瘤病 毒 （ Ｖ） 不 同基 因型 有不 同 的致病性 ． 因型 的检 测 和分 型对 了解病 摘 ＨＰ 的 基
情、 指导 治疗 和判断预 后有重要 价值 。第 ２ 杂交捕获法（ Ｕ 是 目前惟一通过 Ｆ Ａ批准 的可在 临 代 ＨＣ ） Ｄ